Spontana granulocitna leukemija kod NOD/Shi-scid IL-2R null miša

Sažetak:Ovdje izvješćujemo o slučaju spontane granulocitne leukemije kod 51-tjednog starog mužjaka NOD/Shi-SCIDIL-2R null (NOG) miš. Miš se pokazaoprogresivna anemijaigrubi respiratorni pokreti. Makroskopski, slezena je bila obezbojena i povećana. Histološki, koštana srž nasternuma bedrena kost bila je vrlo stanična i gotovo isključivo ispunjenaneoplastične stanice. Jezgre neoplastičnih stanica bile su velike, ovalnog do blago nepravilnog oblika, a mali broj stanica imao jebubreg- ili prstenaste jezgre.Neoplastične staniceopsežno infiltrirao organe, a slezena i jetra bile su značajno zahvaćene. Imunohistokemijski, velika populacija neoplastičnih stanica u crvenoj pulpi slezene i sinusoidu jetre bila je pozitivna namijeloperoksidaza. Na temelju histoloških karakteristika dijagnosticiran je ovaj slučajgranulocitna leukemija. Ovaj roman informacije ospontani tumorimože biti od pomoći za odgovarajuću upotrebu ovog soja miševa u daljnjim istraživanjima. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Ključne riječi: granulocitna leukemija, NOG miš, spontani tumor

KLIKNITE OVDJE DA DOBIJETE PRIRODNI ORGANSKI EKSTRAKT CISTANCHE S 25% EHINAKOSIDA I 9% AKTEOZIDA ZA FUNKCIJU BUBREGA

Usluga podrške Wecistanche-najvećeg izvoznika cistanche u Kini:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/telefon:+86 15292862950

Kupite za više pojedinosti o specifikacijama:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Spontana granulocitna leukemijarijetko se prijavljuje u nekoliko sojeva miševa, iako kemijski agensi i ionizirajuće zračenje mogu povećati incidenciju kod nekih sojeva miševa1, 2. NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG) miševi su ozbiljnoživotinje s nedostatkom imuniteta, i prisutni defekti u T-, B- i prirodnim stanicama ubojicama te loše funkcionirajućim makrofagima i dendritskim stanicama izbacivanjem IL-2 receptorskog lanca (IL2R c) u NOD-scid soj3. Ovaj soj miša koristi se za nekliničke testove, kao što je test tumorigenosti, za procjenu kvalitete i sigurnosti bioloških proizvoda za regenerativnu medicinu korištenjem stanica/tkiva ljudskog podrijetla, zbog izrazito boljeg usađivanja ksenogenskih stanica4-6. Iako su stanje imunodeficijencije i njegove implikacije na ksenografte dobro proučene, dostupno je malo informacija o spontanim tumorima koji se javljaju u ovoj vrsti miševa, kao što je limfom timusa,mliječnižlijezda adenom/adenokarcinom, bronhioloalveolarni karcinom, rabdomiosarkom, i teratom7. Ovdje izvješćujemo o slučaju granulocitne leukemije kod 51-tjednog starog mužjaka NOG miša.

Životinja je dobivena od In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Japan) u dobi od 6 tjedana i držana je netretirana. Životinja je pojedinačno smještena u plastičnom kavezu s individualno ventiliranim kaveznim sustavom (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokio, Japan) u prostoriji sa sustavom barijera s kontroliranim okolišem, koja je održavana na temperaturi od 22 ± 2 stupnja s vlažnost od 50 ± 20% i 12-h ciklus svjetlo/tama. Miš je hranjen autoklaviranom peletiranom hranom (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokio, Japan) s autoklaviranom vodom iz slavine i libitumom. Sa životinjom se postupalo u skladu s protokolom koji je odobrio Institucionalni odbor za skrb i korištenje životinja CMIC Pharma Science Co., Ltd., koji je akreditiran od strane AAALAC International.

Ovaj miš pokazao je kliničke znakove slabljenja, poput anemije, grubih respiratornih pokreta i smanjenja tjelesne težine između 49. i 51. tjedna starosti. Životinja je eutanazirana u dobi od 51 tjedna. Prilikom obdukcije, slezena je bila obezbojena i povećana. U drugim organima nisu primijećeni očiti abnormalni grubi nalazi. Timus i limfni čvor bili su atrofični, slični onima normalnih NOG miševa.

Svi uzorci organa i tkiva rutinski su prikupljeni, fiksirani u 10% neutralnom puferiranom formalinu, uklopljeni u parafin i presječeni na otprilike 3 μm. Za njegovu patološku pretragu rezovi su obojeni hematoksilinom i eozinom (HE). Dijelovi slezene i jetre imunohistokemijski su obojeni na zečja poliklonska protutijela protiv ljudske mijeloperoksidaze (MPO) (Dako Japan, Tokio, Japan) kao marker mijeloidnih stanica, zečja anti-humana CD3 monoklonska protutijela (Nichirei Biosciences Inc., Tokio, Japan ) kao marker T stanica i zečje anti-humano Pax-5 monoklonsko protutijelo (Abcam Inc., Cambridge, UK) kao marker B stanica8. Sekcije su inkubirane s protutijelima na sobnoj temperaturi 1 h, a imunodetekcija je provedena pomoću Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) s 3,3'-diaminobenzidinom/H2O2 kao kromogenom. Zatim su imunološki obojeni rezovikontrabojano hematoksilinom.

Histopatološki, koštana srž sternuma i bedrene kosti bila je visokostanična i gotovo isključivo ispunjena neoplastičnim stanicama (slika 1A). Masno tkivo je potpuno pomaknuto. Bilo je povremenih staničnih žarišta koja su se sastojala od eritroidnih i megakariocitnih elemenata u srži, za koje se smatralo da su ostacinormalna hematopoeza. Većina neoplastičnih stanica pokazala je blastičan izgled, karakteriziran velikim jezgrama ovalnog do blago nepravilnog oblika, te s retikularnim kromatinom koji sadrži jednu ili više istaknutih jezgrica. Postojao je mali broj stanica s bubrežastim ili prstenastim jezgrama, a također je bilo prisutno nekoliko stanica s režnjevitim jezgrama (slika 1B). Granule u citoplazmi neoplastičnih stanica nisu bile vidljive u rezovima obojenim HE. Brojne mitotičke figure pronađene su u srži, a uočena su i povremena apoptotička tijela. Neoplastične stanice značajno su prodrle u periost i okolne skeletne mišiće. Došlo je do opsežne infiltracije neoplastičnih stanica u druge organe i tkiva, a slezena i jetra bile su značajno zahvaćene. U slezeni su uočene neoplastične stanice u cijeloj crvenoj pulpi (slika 2). Kapsularna infiltracija neoplastičnih stanica bila je evidentna. Uočeno je nekoliko eritroidnih serija i megakariocita u razvoju. Povremeno su uočeni megakariociti koji sadrže jednu ili nekoliko mijeloidnih stanica u citoplazmi, što ukazuje na emperipolezu. U jetri su neoplastične stanice difuzno infiltrirale Glissonovu čahuru i jetrene sinusoide (slika 3). Neoplastične stanice s jezgrama u obliku bubrega ili prstena također su bile vidljive u nekim krvnim žilama. Neki hepatociti u periportalnom području, s izraženom neoplastičnom staničnom infiltracijom, pokazali su degeneraciju ili nekrozu, dok je normalna struktura jetrenog lobula ostala netaknuta. Infiltracija neoplastičnih stanica također je nađena u drugim organima, uključujući alveolarnu stijenku i perivaskularnu regiju pluća, interstadium u bubregu, sinusoid u nadbubrežnim žlijezdama te sluznicu i submukozu u želučanom traktu (želudac i crijevo). Imunohistokemijski, velika populacija neoplastičnih stanica u crvenoj pulpi slezene (slika 4) i sinusoidu jetre bila je pozitivna na MPO. CD3 i Pax-5 pozitivne stanice nisu otkrivene. Rezultati CD3 i Pax-5 imunološkog bojenja bili su slični onima slezene normalnih NOG miševa, koji su bili histološki hipoplastični i nisu pokazivali CD3 ili Pax-5 pozitivne stanice.

Imunohistokemijsko istraživanje pokazalo je da neoplastične stanice potječu iz mijeloičnih staničnih linija. U nekim od zahvaćenih područja, posebno u slezeni i jetri, mali broj stanica imao je bubrežaste, prstenaste ili režnjeve oblike koji ukazuju na diferencijaciju mijeloidnih serija. Ovi nalazi sugeriraju da neoplastične stanice potječu od nezrelih granulocita. Slučaj teške mijelopoeze može se očitovati prisutnošću svih vrsta mijeloidnih serija u razvoju, za razliku od dominacije nezrelih stanica u leukemiji. Osim toga, progresivna anemija čest je klinički znak granulocitne leukemije, a porast eritroidnih i megakariocitnih stanica je slab1. Manja populacija granulocita s režnjastim jezgrama u zahvaćenom području bez očite upale ukazuje da se nalazi u ovom slučaju radi o neoplastičnoj, a ne reaktivnoj mijelopoezi.

Kod granulocitne leukemije, koštana srž može biti zamijenjena nezrelim i zrelim mijeloidnim stanicama. U prethodnom izvješću o drugim sojevima miševa, ove su neoplastične stanice potpuno infiltrirale jetru, slezenu, limfne čvorove itd.2, a te su stanice u slezeni i jetri uglavnom bile smještene u crvenoj pulpi i oko Glissonove kapsule1. Dakle, distribucija leukemijskih stanica u ovom slučaju bila je identična onoj u prethodnom slučaju. Na temelju morfologije stanica, granulocitna leukemija u miševa klasificira se u dva tipa: juvenilni tip, koji je usporediv s akutnom mijeloičnom leukemijom kod ljudi, i zreli tip s kroničnom mijeloičnom leukemijom kod ljudi1. U juvenilnom slučaju, neoplastičnim stanicama u koštanoj srži, slezeni i jetri dominirale su slabo diferencirane stanice, dok se mogu vidjeti mijeloidni elementi koji predstavljaju različite stupnjeve sazrijevanja, a postotak mijeloblasta bio je nizak u nekim zrelim slučajevima2, 9. U U ovom slučaju, leukemijskim stanicama dominirao je nezreli oblik s velikim jezgrama ovalnog do blago nepravilnog oblika. Osim toga, uzimajući u obzir kliničke nalaze da se opće pogoršanje zdravlja, uključujući progresivnu anemiju i grubo disanje, razvilo akutno; stoga se pretpostavlja da je ovaj slučaj maloljetničkog tipa.

Slika 1. Histološke slike koštane srži femura. O: Neoplastične stanice difuzno proliferiraju, zamjenjujući tako koštanu srž. B: Jezgre su velike, ovalnog do blago nepravilnog oblika. Mali broj stanica ima jezgre u obliku bubrega (žuta strelica), prstenaste (zelena strelica) ili režnja (bijela strelica). Mitotička brojka označena je bijelom strelicom. ON mrlje. Crna traka =50 μm (A), 10 μm (B).

U prethodnoj publikaciji o NOG miševima, neoplastične lezije općenito su bile neuobičajene; međutim, limfom timusa prijavljen je kod 0.82% u dobnoj skupini od 16 do 40 tjedana7, 10. Koliko znamo, spontana granulocitna leukemija nije ranije prijavljena u NOG miševa. U nekoliko sojeva miševa, uključujući B6C3F1 i BALB/c, rijetko se javljala granulocitna leukemija2, 11, a nije zabilježena u slučaju ovih miševa u dobi od 12 mjeseci ili mlađih. Ovaj slučaj je razvio granulocitnu leukemiju u 51. tjednu starosti, što je bila relativno mlada dob. Ove nove informacije o spontanim tumorima mogu biti korisne za odgovarajuću upotrebu ovog soja miševa u daljnjim istraživanjima.