1. DIO Feniletanol glikozidni liposom inhibira PDGF-induciranu HSC aktivaciju putem regulacije FAK/PI3K/Akt signalnog puta
Mar 06, 2022
Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye i Tao Liu 1,*
1 Odjel za toksikologiju, Škola javnog zdravstva, Medicinsko sveučilište Xinjiang, Autonomna regija Xinjiang Uyghur, Xinyi Road No.393, Urumqi 830011, Kina
2. Ključni laboratorij za ujgursku medicinu, Institut Materia Medica Xinjianga, Xinjiang Uyghur Autonomous Region, Tianshan District, Xinhua South Road No. 140, Urumqi 830004, Kina
Za više informacija kontaktirajte:Joanna.jia@wecistanche.com
Cistanche deserticola ima mnoge učinke, kliknite ovdje da biste saznali više
Sažetak: Cistanche tubulosaje tradicionalni kineski biljni lijek koji se naširoko koristi za regulaciju imuniteta ifeniletanoidni glikozidi(CPhGs) su među primarnim komponentama odgovornim za ovu aktivnost. Međutim, na primjenu CPhG negativno utječe njihova slaba apsorpcija i niska oralna iskorištenost. Ciljana isporuka lijekova važan je smjer razvoja farmaceutike. Prethodne studije pokazale su da CPhG mogu blokirati provođenje signalnih putova u TGF-p1/smad i inhibirati aktivaciju jetrenih zvjezdastih stanica (HSC). Cilj ove studije bio je procijeniti učinak CPhG liposoma na fibrozu jetre inhibicijom aktivacije HSC, poticanjem apoptoze, blokiranjem staničnog ciklusa, supresijom provođenja signalnih putova u fokalnoj adhezijskoj kinazi (FAK)/fosfatidilinozitolu-3- kinaza (PI3K)/protein kinaza B (Akt), te utvrđivanje njihove in vitro hepatoprotektivne aktivnosti. Studije otpuštanja in vitro pokazale su da CPhG liposomi imaju učinak produženog otpuštanja u usporedbi s lijekovima CPhG. Proliferacija HSC je inhibirana nakon tretmana s CPhG liposomima (29,45, 14,72, 7,36 ^g/mL), s IC50 vrijednostima od 42,54 Rg/mL u MTT testu. Različite koncentracije CPhG liposoma mogu inhibirati proliferaciju HSC-a, pospješiti apoptozu i blokirati stanični ciklus. Metoda MTT pokazala je očitu inhibiciju proliferacije HSC nakon tretmana CPhG liposomom i rekombinantnim faktorom rasta BB(rrPDGF-BB) izvedenim iz trombocita štakora. Razine kolagena-1, inhibitora metalopeptidaze 1 (TIMP-1), aktina glatkih mišića (a-SMA) i fosforiliranog PI3K/Akt bile su smanjene, a matriks metaloproteinaze-1 (MMP{ {23}}) je reguliran prema gore, prethodnom obradom različitim koncentracijama CPhG liposoma. Štoviše, 29,45 Rg/mL CPhG liposoma moglo bi smanjiti ekspresiju FAK proteina i fosforiliranog PI3K i Akt proteina nizvodno od FAK prekomjernom ekspresijom FAK gena. Ovaj eksperiment sugerira da CPhG liposomi mogu inhibirati aktivaciju HSC-a inhibiranjem FAK-a i zatim smanjenjem ekspresije fosforiliranog Akt/PI3K, čime se dobivaju novi uvidi u primjenu CPhG-a za fibrozu jetre.
Ključne riječi: feniletanoidni glikozidiliposom; zvjezdaste stanice jetre; proliferacija; apoptoza; staničnog ciklusa; FAK/PI3K/Akt,
čimbenici, kao što su TGF-p1, alkohol, toksini i steatoza, mogu rezultirati aktivacijom HSC-a. PDGF također može dovesti do aktivacije HSC [4]. Trenutno, terapijske strategije usmjerene na HSC za sprječavanje fibroze jetre uključuju inhibiciju aktivacije HSC, proliferacije i staničnog ciklusa, kao i stimulaciju apoptoze HSC [5].
Cistanche tubulosa(obitelj Orobanchaceae), parazitska biljka, široko se uzgaja u južnoj regiji Xinjiang u Kini.C. tubulosapokazalo se da predstavlja različite aktivnosti, uključujući jačanje imuniteta organizma, poboljšanje izdržljivosti organizma, prehranu bubrega, liječenje impotencije i povećanje inteligencije;
1. Uvod
također ima svojstva protiv oksidacije i starenja [6]. Ova biljka sadrži feniletanoidne glikozide (CPhG), iridoide i polisaharide, od kojih su CPhG neke od glavnih aktivnih bioaktivnih vrsta [7]. U prethodnoj studiji otkrili smo da CPhG mogu blokirati provođenje signalnih putova u TGF-p1/smad, inhibirati aktivaciju HSC-a i imati preventivne učinke na fibrozu jetre izazvanu goveđim albuminom u štakora [7,8]. Međutim, CPhG imaju dobru topljivost u vodi i lošu topljivost u lipidima te na njih utječu vanjski čimbenici kao što su kiselost i enzimi razgradnje, koji smanjuju stabilnost i učinkovitost CPhG [9]. Nakon intragastrične primjene, CPhG su nestabilni u gastrointestinalnom traktu štakora i lako bi moglo doći do hidrolize glikozidnih veza. Oralna bioraspoloživost štakora bila je samo 0.83 posto, pa je teško odrediti njegovu terapijsku ulogu [10]. Stoga moramo pronaći siguran, učinkovit, dugotrajan i ciljani antifibrotički lijek za HSC kako bismo poboljšali njihovu terapijsku učinkovitost. Sustavi za isporuku lijeka nanočesticama pružaju alternativnu strategiju za prevladavanje ovih nedostataka zbog svojih prednosti, uključujući visoku sposobnost punjenja lijeka i dugu cirkulaciju krvi [11]. Imaju snažan afinitet prema jetri i mogu izravno dostaviti lijekove u stanice kroz endocitozu i fuziju. Nemodificirani liposomi uglavnom su raspoređeni u tkivima ili organima koje razvija retikuloendotelni sustav (RES) i imaju funkciju pasivnog ciljanja jetre [12]. Stoga su CPhG liposomi pripremljeni membranskom disperzijom i sekundarnom enkapsulacijom kako bi se osigurao učinak protiv fibroze. U ovom istraživanju, cilj nam je bio istražiti učinke CPhG liposoma na proliferaciju HSC, apoptozu i stanični ciklus, kao i njegove mehanizme.
2. Rezultati
2.1. Fizička svojstva CPhG liposoma
Fizička svojstva pripremljenih CPhG liposoma bila su sljedeća: Veličina čestice bila je (216,7 ± 3,47) nm, Zeta potencijal bio je (-55,6 ± 1,3) mV. Kao što je prikazano na slici 1, čestice su bile okrugle, obložene ujednačenom debljinom na površini, a raspodjela veličine čestica bila je ujednačena. Punjenje lijekom i učinkovitost enkapsulacije CPhG liposoma bili su (3,71 ± 0.32) posto i (38,46 士 7,85) posto.
2.2. In vitro otpuštanje iz CPhG liposoma i CPhG
Procijenjena kumulativna brzina otpuštanja izračunata je i nacrtana kao funkcija vremena za CPhG liposome i CPhG (Slika 2). U ovoj studiji; brzina otpuštanja CPhG-ova nakon 12 h normalizirana je na 100 posto, dok je ona CPhG liposoma bila blizu 100 posto nakon 24 sata, a brzina otpuštanja CPhG-ova povećavala se s vremenom. Podaci su analizirani korištenjem različitih modela prilagodbe za mehanizme kontroliranog otpuštanja, uključujući jednadžbe nultog reda, prvog reda i Higuchijeve jednadžbe. Uklopljene jednadžbe i korelacijski koeficijenti za tri modela izdanja prikazani su u tablici 1.
Najbolji model za CPhG i CPhG liposome su Higuchijeva i jednadžba prvog reda. Studija otpuštanja CPhG liposoma in vitro nije pokazala nikakav učinak pucanja. Funkcija distribucije koja najbolje odgovara je odabrana za izračunavanje parametara otapanja T50 (otapanje 50 posto). Rezultati pokazuju da je prosječno vrijeme zadržavanja CPhG liposoma dulje od onog za CPhG, a T50 CPhG liposoma iznosi 9,39 h. U usporedbi s 1,69 h za CPhG, liposomi CPhG pokazuju očigledan učinak produljenog otpuštanja (Tablica 2).
Prvo smo istražili citotoksične učinke CPhG liposoma na HSC s MTT testom in vitro. HSC su bile izložene različitim koncentracijama CPhG liposoma, u rasponu od 0 do 117,79 卩g/mL tijekom 24 sata. CPhG liposomi smanjili su održivost HSC-a na način ovisan o dozi, a njihova vrijednost IC50 bila je 42,535 (eg/mL. Učinak CPhG liposoma (29,45, 14,72 i 7,36 ^g/mL) na stanice na 24, 48 i 72 h prikazano je na slici 3. Nakon tretmana s CPhG liposomima, proliferacija HSC-a bila je značajno inhibirana u različitim vremenskim točkama (slika 3).
Otpuštanje laktat dehidrogenaze (LDH) iz HSC otkriveno je nakon 24 sata tretmana različitim koncentracijama CPhG liposoma. Rezultati su prikazani u tablici 3. HSC tretirani CPhG liposomima nisu imali značajan učinak na oslobađanje LDH.
2.4. CPhG liposomi induciraju apoptozu HSC-a i zaustavljaju stanični ciklus
HSC su izloženi CPhG liposomima (29,45, 14,72, 7,36 卩g/mL) tijekom 24 sata, a aneksin-V-FITC/PE dvostruko bojanje je provedeno da se otkrije apoptoza protočnom citometrijom, kao što je prikazano na slici 4a. Ukupna apoptoza stanica statistički se povećala u usporedbi s kontrolnom skupinom (p < 0.05).="" nakon="" 24="" h="" tretmana="" hsc-ima="" za="" svaku="" doznu="" skupinu,="" cphg="" liposomi="" (29,45="" ^g/ml)="" mogli="" su="" inducirati="" kasnu="" apoptozu="" hsc-a,="" a="" postotak="" kasnih="" apoptotskih="" stanica="" bio="" je="" viši="" od="" onog="" ranih="" apoptotskih="" stanica.="" udio="" ranih="" apoptotskih="" stanica="" bio="" je="" mnogo="" veći="" od="" kasnih="" apoptotskih="" stanica="" u="" skupinama="" koje="" su="" tretirane="" cphg="" liposomom="" (14,72="" i="" 7,36="" |^g/ml).="" ovi="" rezultati="" jasno="" pokazuju="" da="" cphg="" liposomi="" induciraju="" apoptozu="" hepatocita,="" posebno="" u="" kasnim="" stadijima="" hsc.="" uz="" to,="" ukupna="" apoptoza="" se="" povećala="" s="" dozom="" cphg="" liposoma.="" ovi="" rezultati="" sugeriraju="" da="" cphg="" liposomi="" mogu="" inhibirati="" aktivaciju="" hsc-a="" i="" fibrozu="" jetre="" induciranjem="" apoptoze="">
Kako bi se odredio učinak CPhG liposoma na stanični ciklus HSC-a, HSC-i su tretirani s CPhG liposomima u koncentracijama od 29,45, 14,72 i 7,36 昭/mL tijekom 24 sata i analizirani protočnom citometrijom (Slika 4b). Rezultati su pokazali da je udio stanica u G0/G1 fazi značajno povećan (p < {{10}}.05),="" dok="" je="" postotak="" stanica="" u="" s="" fazi="" bio="" značajno="" povećan.="" smanjen="" (p="">< 0,05).="" štoviše,="" udio="" stanica="" u="" g2/m="" fazi="" značajno="" je="" smanjen="" u="" usporedbi="" s="" kontrolnom="" skupinom=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">
2.5. Studija o mehanizmu(ima) djelovanja C PhG liposoma in vitro
2.5.1. CPhG liposomi inhibiraju proliferaciju HSCs stimulacijom rrPDGF-BB
Kako bi se dodatno istražili učinci CPhG liposoma na proliferaciju stimuliranu rrPDGF-BB HSC-a, proveden je MTT test za mjerenje održivosti HSC-a koji su bili tretirani unaprijed postavljenim koncentracijama CPhG liposoma tijekom 24, 48 i 72 sata ( slika 5).
Nakon 24 h tretmana s HSC-ima stimuliranim s rrPDGF-BB i 29,45, 14,721 i 7,36 昭/mL CPhG liposoma, stope preživljavanja stanica u svakoj doznoj skupini bile su 67,5 posto, 75,3 posto, odnosno 89,2 posto. Nakon 48 sati, stopa preživljavanja bila je 49,2 posto, 58,6 posto, odnosno 73,5 posto u stanicama
svake skupine doza. Nakon 72 sata tretmana, stope preživljavanja stanica u svakoj doznoj skupini bile su 45,3 posto, 59,2 posto, odnosno 79,2 posto. Rezultati su pokazali da CPhG liposomi imaju značajan inhibicijski učinak na HSC stimuliran s rrPDGF-BB, a taj inhibicijski učinak postajao je očitiji kako se doza povećavala. Pretpostavlja se da inhibitorni učinak CPhG liposoma na HSC doprinosi antiproliferacijskoj aktivnosti CPhGliposoma.
2.5.2. CPhG liposomi inhibiraju aktivaciju HSC in vitro
HSC u Disseovom prostoru proizvode komponente ECM-a poput kolagena -1, (s-SMA i kolagena III. Druge čimbenike koji reguliraju razvoj ECM-a, kao što su MMP i TIMP, također proizvode HSC [5]. Kako bismo dodatno istražili mehanizme izazvane rrPDGF-BB u HSC-ima, procijenili smo ekspresiju proteina povezanih s ECM-om, uključujući kolagen-1, Cosma, kolagen III, MMP-1 i TIMP{{8} }. Slika 6a pokazuje da skupine CPhG liposoma (29,45, 14,72, 7.36 4g/mL) mogu smanjiti razine ekspresije mRNA kolagena-1, a-SMA i TIMP{{18} } i povećati razinu ekspresije mRNA za MMP-1 više nego rrPDGF-BB skupina.
Slika 6. Učinci CPhG liposoma na ekspresiju kolagena-1, a-SMA, TIMP-1 i MMP-1 u HSC-ima. (a ) Ekspresija mRNA kolagena-1, a-SMA, TIMP-1 i MMP-1 u HSC-ima (RT-PCR analiza). (b) Ekspresija proteina kolagena{{10}} i a-SMA. A, kontrolna skupina; B, grupa tretirana rrPDGF-BB; C, grupa tretirana s rrPDGF-BB plus CPhG liposomom 29,45 g/mL; D, rrPDGF-BB plus CPhG liposom 14,72(_ig/mL tretirana skupina; E, rrPDGF-BB plus CPhG liposom 7.3 6 卩g/m L tretirana skupina d; Podaci su izraženi kao srednja vrijednost 土 SD. ** p < 0.01,="" značajno="" različito="" u="" usporedbi="" sa="" grupom="" hsc-a="" aktiviranih="" rrpdgf-bb.="" #="" p="">< 0.05,="" značajno="" različito="" u="" usporedbi="" s="" kontrolnom="" skupinom.="" 6-aktin="" korištena="" je="" kao="" interna="">
CPhG liposomi također su povisili razine mRNA MMP-1. Razine a-SMA i kolagena -1 bile su visoko izražene u HSC-ima aktiviranim rrPDGF-BB. Nasuprot tome, liposomi CPhG smanjili su razine a-SMA i kolagena -1 (Slika 6b). Osobito pri visokoj koncentraciji (29,45 ^g/mL), liposom CPhG smanjio je povećanu ekspresiju kolagena-1 i a-SMA putem rrPDGF-BB.
2.53 CPhG liposomi inhibiraju PI3K/Akt signalni put
PI3K/Akt je važan put prijenosa signala posredovan receptorima tirozin kinaze. PI3K/Akt signalni put djeluje kao senzor u odgovoru na izvanstanične podražaje i posreduje stanične signale, čime igra ključnu ulogu u staničnoj apoptozi i proliferaciji utječući na aktivnost nizvodno efektorskih molekula [13]. Kako bi se provjerilo sudjeluje li put PI3K/Akt u antiproliferacijskim učincima CPhG liposoma na HSC, ekspresija i razine fosforilacije PI3K/Akt ispitane su Western blot analizom. Rezultati su pokazali da su se razine p-PI3K i p-Akt dosljedno smanjivale u HSC nakon 24 h tretmana s CPhG liposomima, što ukazuje da su antiproliferacijski učinci CPhG liposoma protiv HSC povezani s deaktivacijom puta PI3K/Akt , kao što je prikazano na slici 7.
2.5.4. Liiposomi CPhG mogu naniže regulirati ekspresiju proteina puta PI3K/Akt u HSC plazmida FAK prekomjerne ekspresije posredovanog rrPDGF-BB
FAK je ključni gen koji regulira signalni put PI3K/Akt. Aktivirani FAK može fosforilirati PI3K, što dalje dovodi do fosforilacije Akt. FAK posreduje u prijenosu signala receptora tirozin-protein kinaze, integrina i drugih putova do stanica, koje su spoj i čvorište nekoliko unutarstaničnih putova tijekom aktivacije HSC. Stoga smo nagađali
da CPhG liposomi mogu potisnuti aktivnost PI3K/Akt signalnog puta ometanjem aktivacije FAK. Naknadno smo potvrdili ovu hipotezu demonstrirajući prekomjernu ekspresiju FAK gena.
(pEX{{0}}NC) plus CPhG liposom 29,45 Lg/mL skupina značajno se smanjila (p < 0,01).
estern blotting sa specifičnim primarnim antitijelima. ** p < 0.01,="" značajno="" različito="" u="" usporedbi="">
rrPDGF-BB stimulacija plus pEX-3-FAK skupina. plus p < 0.05,="" značajno="" različito="" u="" usporedbi="" sa="" grupom="" liječenom="" rrpdgf-bb.="" &="" p="">< 0,01,="" značajno="" različito="" u="" usporedbi="" sa="" stimulacijom="">
plus pEX-3-NC grupa. -aktin je korišten kao interna kontrola.
cistanche može protiv raka
3. Rasprava
Pokazalo se da CPhG imaju različite biološke aktivnosti, uključujući protuupalnu aktivnost [14,15], aktivnost protiv osteoporoze [16,17], sedativni učinak [18], aktivnost protiv umora [19], neuroprotektivni učinak [ 20], i hepatoprotektivno djelovanje [21,22]. Yang i sur. utvrdio da je ekstrakt odC. tubulosamogao značajno odgoditi napredak eksperimentalne kemijske fibroze jetre inhibicijom sinteze kolagena i smanjenjem oksidativnog stresa [22]. Međutim, učinkovitost CPhG-a kao
sredstva za zaštitu od topline ograničena su njihovom slabom propusnošću i niskom bioraspoloživošću [23]. Stoga je potrebno proširiti primjenu CPhG-ova razvojem učinkovitog sustava isporuke kako bi se prevladali ovi nedostaci.
Posljednjih godina, i istraživanje lijekova i klinička istraživanja potvrdila su da uporaba nanočestica kao nosača lijekova može poboljšati učinkovitost lijekova in vivo. Liposomi su neke od najvažnijih nanočestica [24].
Liposomi se mogu koristiti kao nosači lijekova za uspješnu dostavu protuupalnih lijekova, lijekova protiv raka, antibiotika, lijekova protiv gljivica i drugih različitih kategorija lijekova [25]. Liposomi također mogu poboljšati stabilnost lijeka, povećati topljivost lijeka i promicati biokompatibilnost [26]. S druge strane, studije su pokazale da sustav isporuke lijeka čvrstih nanočestica (u rasponu od 10-1000 nm) može koncentrirati 80 posto doze lijeka u jetri, omogućujući lijeku da uđe stanice jetre [27]. Jing Zhu i sur. otkrili su da galanin-liposomi imaju dobre učinke usmjerene na jetru [28]. Stoga se učinak pasivnog ciljanja nano-kineskih lijekova može koristiti za liječenje bolesti jetre ili drugih bolesti. Veličina čestica CPhG liposoma pripremljenih u ovoj studiji, koja ima određeni stupanj ciljanja jetre, je (216,7 ± 3,47) nm. Ponašanje otpuštanja lijeka važno je svojstvo sustava za isporuku nano-lijekova. Budući da CPhG imaju dobru topljivost u vodi, kao medij za oslobađanje koristi se PBS puferska otopina (pH=6.0). Iz krivulje otpuštanja može se vidjeti da je prije 2 sata postotak otpuštanja CPhG liposoma bio manji od 40 posto, nije došlo do naglog otpuštanja i postojao je određeni učinak produljenog otpuštanja u usporedbi s otpuštanjem CPhG-ova. Iz prilagođene jednadžbe krivulje otpuštanja, otpuštanje CPhG liposoma u otopini fosfatnog pufera pri pH=6.0 je u skladu s Higuchijevom jednadžbom.
cistanchelimenkaanti-apoptoza
U kroničnim bolestima jetre kontinuirana aktivacija HSC dovodi do fibroze jetre [29]. Stoga, inhibicija aktivacije, proliferacije i staničnog ciklusa HSC-a ili induciranje apoptoze HSC-a može biti nova početna točka za ciljanu terapiju fibroze jetre [30-33]. Mnoga su istraživanja otkrila da je apoptoza ključ za poništavanje fibroze jetre promicanjem apoptoze [34]. Razvoj fibroze jetre ovisi o aktivaciji HSC-a, koji mogu ponuditi potencijal inhibicije aktivacije HSC-a i induciranja apoptoze za prevenciju ili liječenje fibroze jetre [35,36]. LDH je enzim u staničnom citosolu koji se oslobađa u mediju kulture kada je stanična membrana oštećena. Iz tih smo razloga proveli in vitro studije o stopama stanične održivosti, sadržaju LDH u stanicama te apoptozi i staničnom ciklusu HSC-a izloženih CPhG liposomima. Rezultati su pokazali da CPhG liposomi snažno inhibiraju vitalnost i proliferaciju HSC-a i povećavaju postotak apoptotskih stanica na način ovisan o koncentraciji. Štoviše, rezultati staničnog ciklusa pokazuju da bi CPhG liposomi mogli inducirati zaustavljanje staničnog ciklusa u G1 fazi. Rezultati pokazuju da je ključ za CPhG liposome u prevenciji i liječenju fibroze jetre reguliranje stanične proliferacije, apoptoze i staničnog ciklusa. U usporedbi sa slijepom kontrolnom skupinom, sadržaj LDH između svake skupine ima postupni trend povećanja. Međutim, nije bilo značajne razlike (p > 0.05), što ukazuje da, iako se aktivnost smanjuje za HSCs na koje utječu CPhG liposomi, većina staničnih membrana ostaje netaknuta. Inhibicija proliferacije HSC-a pomoću CPhG liposoma nije posljedica toksičnosti lijekova za stanice.
PDGF je najkritičniji čimbenik koji utječe na proliferaciju HSC-a. PDGF-receptori (PDGF-Ra i -p) pripadaju obitelji receptora tirozin kinaze. PDGF-AA se veže isključivo na PDGF-Ra, dok se lanci PDGF-B vežu i dimeriziraju i s PDGF-Ra i s -p [37]. Nakon vezanja liganda na PDGF-R, receptori se dimeriziraju, što zatim dovodi do fosforilacije unutarnjeg tirozinskog ostatka i do aktivacije nekoliko nizvodnih signalnih putova, u konačnici inducirajući proliferaciju i migraciju aktiviranih HSC. Ovaj proces rezultira prekomjernom proizvodnjom i taloženjem kolagena i drugih ECM-a, čime se potiče razvoj i progresija fibroze jetre [38]. Breitkopf i dr. pokazalo je da prekomjerna ekspresija PDGF-BB u jetri rezultira proliferacijom HSC i fibrozom jetre [39]. U našoj smo studiji koristili rrPDGF-BB kao stimulator za aktiviranje HSC-a, a svaka dozirana skupina CPhG liposoma mogla je inhibirati proliferaciju HSC-a i prikazati očit odnos doza-učinak. Pretpostavlja se da inhibitorni učinak CPhG liposoma na HSC doprinosi antiproliferacijskoj aktivnosti CPhG liposoma.
Aktivacija HSC-a povezana je s mnogim promjenama u obrascima ekspresije gena u stanicama. Konkretno, promjene u ekspresiji gena kolagena-1 i a-SMA najviše su povezane sa svojstvima fibroze aktiviranih HSC [40]. MMP su endopeptidaze ovisne o cinku koje igraju važnu ulogu u razgradnji svih komponenti proteina ECM u fiziološkim i patološkim uvjetima. MMP i TIMP posreduju u sintezi i degradaciji ECM-a. MMP mogu pospješiti degradaciju ECM-a. Osjetljiva ravnoteža između MMP-a i TIMP-a određuje pojavu fibroze jetre [29]. U usporedbi sa skupinom rrPDGF-BB, ekspresija TIMP-1, a-SMA i kolagena-1 u grupama liposoma CPhG značajno se povećala, dok se ekspresija MMP-9 smanjila. Liječenje CPhG liposomima značajno je poništilo abnormalne ekspresije inducirane rrPDGF-BB u HSC-ima. Ovi podaci pokazuju da CPhG liposomi vjerojatno inhibiraju stvaranje ECM-a vraćanjem ravnoteže između MMP-a i TIMP-a, čime se povećavaju razine MMP-1 i smanjuju ekspresija TIMP-1, a-SMA i kolagen-1 i potencijalno poticanje razgradnje izvanstaničnog matriksa.
FAK je vrsta fokalnog adhezijskog kompleksa. PDGF također može aktivirati FAK interakcijom s ECM proteinom preko integrina [41]. Fokalni adhezijski kompleks pruža izravan senzor za integritet izvanstaničnog okoliša. Aktivacija FAK rezultira aktivacijom PI3K. Pokazalo se da je PI3K uključen u proliferaciju nekoliko vrsta stanica [42]. Njegova ključna uloga u HSC-ima pokazala se upotrebom PI3K-specifičnih inhibitora LY294002 i wortmanina za blokiranje mitogeneze i kemotaksije izazvane PDGF-om bez utjecaja na autofosforilaciju PDGF receptora [43]. PI3K se regrutira u dimerizirane fosforilirane PDGF receptore, koji aktiviraju protein kinazu C (PKC), Akt i p70S6 kinazu (p70S6K) [44]. Zabilježeno je da je dominantno negativni FAK (Ad-FAKCD) korišten za blokiranje aktivnosti FAK i inhibiciju aktivacije PI3K izazvane proliferacijom PDGF i HSC nakon liječenja PDGF [45]. Stoga smo pretpostavili da je put FAK/PI3K/Akt moguća meta za CPhG liposome.
Naši rezultati pokazuju da su u usporedbi s rrPDGF-BB stimulacijom plus X-3-FAK skupinom, razine ekspresije proteina FAK, fosforiliranog PI3K i fosforiliranog Akt bile smanjene u rrPDGF-BB stimulaciji plus X-3-FAK plus CPhG liposom 29,45 Lg/mL skupina. Ovi rezultati pokazuju da tretman CPhG liposoma 29,45 Lg/mL može smanjiti ekspresiju FAK proteina i fosforiliranih PI3K i Akt proteina nizvodno od FAK.
S produbljivanjem istraživanja kemije i farmakologije tradicionalnih kineskih lijekova, pronađeno je i potvrđeno sve više aktivnih sastojaka tradicionalnih kineskih lijekova. Paclitaxel, artemisinin i drugi lijekovi naširoko su prepoznati kao lijekovi prve linije za liječenje povezanih bolesti diljem svijeta. Međutim, u isto vrijeme, utvrđeno je da iako je in vitro farmakološki učinak mnogih kineskih medicinskih sastojaka vrlo jak, oni imaju slabu topljivost u vodi, kratak poluživot, slabu stabilnost, nisku bioraspoloživost, toksične nuspojave i mnoge drugi problemi koji ozbiljno ograničavaju njihovu medicinsku i kliničku primjenu. Sustav za isporuku nano-lijekova novi je sustav za isporuku lijekova s velikim potencijalom za razvoj i žarište je modernih farmaceutskih istraživanja. Njegovom primjenom u istraživanju i razvoju novih oblika tradicionalnih kineskih lijekova ne samo da se poboljšavaju tradicionalni oblici kineskih lijekova, već se u određenoj mjeri poboljšava ljekoviti učinak tradicionalnih kineskih lijekova i povećava stabilnost lijekova in vivo. Štoviše, nemodificirane liposome uglavnom apsorbira RES, ovisno o veličini njihove čestice, svojstvima površine i drugim čimbenicima. Također su pasivno usmjereni na jetru. Kako bi se poboljšala učinkovitost običnih liposoma u ciljanju jetre, koncentracija ciljnog tkiva može se povećati povezivanjem specifičnih liganada ili specifičnih funkcionalnih skupina.
Stoga bismo u budućim istraživanjima trebali pridati važnost fizikalnim i kemijskim svojstvima ekstrakcije i pročišćavanja CPhG, kao što su topljivost, stabilnost, kiselost i lužnatost, kao i proučavanju biofarmaceutike i farmakokinetike. Trebali bismo uspostaviti jedinstvenu teoriju dizajna formulacije, tehnološku platformu za pripremu i metodu evaluacije kvalitete za CPhG-ove te također razviti različite sustave punjenja nano-lijekovima za CPhG-ove, kako bismo osigurali da se CPhG-ovi koriste što je temeljitije moguće. Puno iskorištavanje ovih prednosti bit će smjer našeg budućeg istraživanja.
