Zašto se Herba Cistanches može koristiti za liječenje sindroma nedostatka bubrega?

Metaboličko profiliranje otkriva terapeutske učinke Herba Cistanches u životinjskom modelu 'sindroma nedostatka bubrega' izazvanog hidrokortizonom

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Yunping Qiu, Minjun Chen, Mingming Su, Guoxiang Xie, Xin Li, Mingmei Zhou, Aihua Zhao, Jian Jiang & Wei Jia

Sažetak

Pozadina

Herba Cistanches(Roucongrong) je učinkovit u liječenju Shenxu Zhenga ('sindrom nedostatka bubrega'). Međutim, mehanizmi i sustavni metabolički odgovori na biljnu intervenciju nisu jasni.

metode

Koristeći metaboličko profiliranje temeljeno na GC-MS, istražili smo metaboličke odgovore naHerba Cistanchesintervencija u štakorskom modelu hidrokortizonom izazvanogsindrom nedostatka bubrega'.

Rezultati

Metabolički profili štakora nakon injekcije hidrokortizona odstupali su od metaboličkog stanja prije doziranja u različitim vremenskim točkama, u rasponu od 1. do 10. dana, dok su metabolički profili štakora liječenih i hidrokortizonom i vodenim ekstraktomHerba Cistanchesvratio se u stanje prije doziranja 10. dana.

Zaključak

Intervencija odHerba Cistanchesizazvao sustavni oporavak od hidrokortizonom izazvane metaboličke perturbacije u štakora. Ova studija također pokazuje da je metaboličko profiliranje korisno u proučavanju terapijskih mehanizama biljnih lijekova.

Pozadina

Kroz modulaciju biokemijskih reakcija, kontrolnih mehanizama i aktivnosti enzima, mnogi lijekovi ili kemikalije uzrokuju fluktuacije metabolita prisutnih u pojedinačnim stanicama, tkivima ili tjelesnim tekućinama [1]. Metaboličko profiliranje, tj. ispitivanje metabolita niske molekulske težine (MW < 1000="" da)="" pomoću="" naprednog="" analitičkog="" instrumenta="" u="" kombinaciji="" s="" multivarijatnom="" statistikom,="" može="" pokazati="" sustavne="" odgovore="" živih="" sustava="" na="" ksenobiotike.="" također="" je="" tehnički="" izvedivo="" katalogizirati="" sve="" multifaktorijalne="" nasljedne="" i="" metaboličke="" profile="" organizma="" pod="" utjecajem="" okoliša,="" uključujući="" fiziopatološke="" posljedice="" toksina="" i/ili="" bolešću="" izazvanih="" poremećaja="" ili="" neravnoteže="" u="" metaboličkoj="" regulatornoj="" mreži="" na="" sistemskoj="" razini.="" do="" danas="" je="" uspostavljeno="" metaboličko="" profiliranje="" u="" probiru,="" dijagnozi,="" prognozi="" bolesti="" [2-4]="" i="" procjeni="" sigurnosti="" određenih="" lijekova="" i="" kemikalija="">

Nuklearna magnetska rezonancija (NMR) [12] i masena spektrometrija (MS) [13], primijenjene same ili u kombinaciji, korištene su u profiliranju i karakterizaciji metaboličkih posljedica poremećaja izazvanih toksinima i/ili bolešću. NMR, koji ne zahtijeva zamornu prethodnu obradu uzorka, brza je i jednostavna metoda za dobivanje intrinzičnih informacija iz složenih i netaknutih bioloških uzoraka. S druge strane, široka primjena MS-a s crticom u metaboličkom profiliranju posljedica je njegove visoke osjetljivosti i dostupnosti [14, 15]. Značajno, metaboličko profiliranje temeljeno na GC-MS korišteno je u otkrivanju mehanizama lijekova i herbicida in vivo, biomarkera bolesti [16] i učinaka promijenjene ekspresije gena na metabolizam, te praćenja učinkovitosti organizama u biotehnološkim primjenama [17-20] .

Herba Cistanches(Roucongrong), uobičajena kineska tonična biljka koja raste u pustinji, pokazuje značajne aktivnosti za poboljšanje pamćenja [21] i/ili seksualne potencije [22], uklanjanje slobodnih radikala, usporavanje starenja [23-26] i neuroprotekciju [27]. , 28]. Stoljećima,Herba Cistanchesse učinkovito koristi u liječenju Shenxu Zhenga ('sindrom nedostatka bubrega') [29]. NedavnoHerba Cistanchesdokazano je da je poboljšao poremećaje bubrega izazvane hidrokortizonom [30]; međutim, njegove metaboličke posljedice nisu jasne. Naša prethodna studija [31] otkrila je da su metabolički profili štakora izloženih hidrokortizonu u visokim dozama (tj. životinjski model za 'sindrom nedostatka bubrega') [32], pokazao je jedinstven biokemijski obrazac endogenih metabolita u urinu. Ovi su nas rezultati nadahnuli da proučimo mehanizme dosljednih biokemijskih promjena nakon modifikacije hidrokortizona, koristeći GC-MS-bazirano metaboličko profiliranje kako bismo istražili može li Herba Cistanches poništiti ili neutralizirati nenormalne metaboličke učinke hidrokortizona.

Cistanche može poboljšati rad bubrega

metode

Materijali i instrument

Herba Cistanchesje kupljen od Shanghai Leiyunshang Pharmaceutical Co Ltd (Kina) i identificiran kao Cistanche deserticola YC Ma od strane dr. Mengyue Wang (Laboratorij za farmakognostiku, Farmaceutski fakultet, Sveučilište Jiao Tong u Šangaju) prema standardnom protokolu [33]. Otopina hidrokortizona za injekciju (0.5 posto) kupljena je od Shanghai Xinyi Pharmaceutical Co (Kina). Reagensi za derivatizaciju bili su N-metil-N-trimetilsilil tri fluoroacetamid (MSTFA) (Sigma-Aldrich Inc, SAD) i trimetiljodosilan (TMSI) (Sigma-Aldrich Inc, SAD) pomiješani u omjeru 1000:1. Svi reagensi korišteni u eksperimentu bili su analitičke čistoće. Ultra čista voda pripremljena je Millipore sustavom za pročišćavanje (18,2 MΩ, SAD). Metabolički kavezi kupljeni su od Suzhou Fengshi Laboratory Animal Experiment Co Ltd (Kina).

Priprema ekstrakta Herba Cistanches

Pet stotina grama grubo usitnjenog biljnog materijala refluksirano je s 2 L ultra-čiste vode 2 sata. Nakon filtracije, ekstrakt je isparen do otprilike jedne desetine izvornog volumena na Buchi rotacijskom isparivaču i razrijeđen do 250 mL u volumetrijskoj tikvici s ultra čistom vodom. Konačna koncentracija siroveHerba Cistanchesekstrakt je bio 2 g/mL.

Doziranje i uzorkovanje

Rukovanje svim životinjama u ovoj studiji bilo je u skladu s nacionalnim smjernicama i obavljeno je u Centru za laboratorijske životinje, Šangajsko sveučilište tradicionalne kineske medicine, Šangaj, Kina. Ukupno 19 mužjaka Wistar štakora starih devet tjedana kupljeno je od Shanghai Laboratory Animal Co Ltd (Kina). Sve su životinje držane u barijernom sustavu s reguliranom temperaturom (20-22 stupnja) i vlagom (60 ± 10 posto), te u 12-satnom ciklusu tama/svjetlo sa svjetlima uključenim u 8:00 ujutro. Štakori su dobivali ad libitum hranu i vodu. Nakon dva tjedna privikavanja, životinje su prebačene u pojedinačne metaboličke kaveze i nasumično podijeljene u tri skupine: (1) skupina za liječenje (n=7) u kojoj je hidrokortizon (5 posto) ubrizgan ip u dozi od 1,5 mg/100 g tjelesne težine nakon čega slijedi oralna primjenaHerba Cistanchesekstrakt za 10 dana; (2) modelna skupina (n=7) u kojoj je hidrokortizon (5 posto) injiciran ip u dozi od 1,5 mg/100 g jednom dnevno tijekom 10 dana; i (3) kontrolna skupina (n=5) u kojoj je vehikulum ubrizgavan ip u dozi od oko 0,6 mL tijekom 10 dana [31].Herba Cistanchesprimijenjen je terapijskoj skupini u dozi od 20 g/kg prema preporuci Shen et al. [30]. Uzorci dvadesetčetverosatnog urina prikupljeni su u određenim vremenskim intervalima: prije doziranja (-24 – 0 h), 1. dan (0 – 24 h), 3. dan, 7. dan i 10. dan. Sav urin uzorci su centrifugirani (6383 × g, LG 16-W, Beijing Jingli Centrifuge Co Ltd, Kina) 10 minuta kako bi se uklonili suspendirani ostaci i odmah pohranjeni na -80 stupnjeva za naknadnu GC-MS analizu.

Priprema uzorka i GC-MS

GC-MS je izveden prema našoj prethodnoj studiji uz manje izmjene [31]. Ukratko, svaki 0.5 μL alikvot trimetilsilil (TMS) derivatiziranog analita ubrizgan je u kapilarnu kolonu od fuzijskog silicijevog dioksida (17 m × 220 μm unutarnjeg promjera, 0,11 μm debljine filma; HP Ultra{ {9}}, Agilent J&W Scientific, SAD). GC-MS je provedena na PerkinElmer plinskoj kromatografiji i TurboMass-Auto sustav XL masenom spektrometru (PerkinElmer Inc, SAD).

Obrada podataka i multivarijatna analiza

GC-MS podaci su pretvoreni u NetCDF format preko DataBridge (PerkinElmer Inc, SAD). Prilagođene skripte pokrenute su u MATLAB-u 7.0 (The MathWorks Inc, SAD) kako bi se izvršila korekcija osnovne linije, dekonvolucija vrha i poravnanje, isključivanje internog standarda i normalizacija ukupnog zbroja kromatograma. Rezultirajuća 3-dimenzionalna matrica koja obuhvaća proizvoljni indeks vrha (upareno vrijeme zadržavanja-m/z), uzorke (opažanja) i normalizirana područja vrha (varijable) uvezeni su u softver SIMCA-P 11.0 paket (Umetrics, Švedska) za multivarijantnu analizu.

Centriranje srednje vrijednosti izvedeno je po stupcima kako bi se uklonili pomaci. Svi izmjereni metaboliti tretirani su na jednakoj razini s automatskim skaliranjem (skalirano na jediničnu varijancu) prije multivarijantne analize. Analiza glavnih komponenti (PCA) provedena je pomoću softvera SIMCA-P 11.0 kako bi se otkrilo opće klasteriranje, grupiranje i trendovi među subjektima bez prethodnog znanja. Prva glavna komponenta (PC1) predstavlja najveću varijaciju u podacima. Druga glavna komponenta (PC2) je ortogonalna na PC1 i predstavlja maksimalnu količinu varijance koju PC1 ne objašnjava. Preostale glavne komponente konstruirane su na isti način. U međuvremenu, srednje trajektorije PCA rezultata korištene su za pružanje dinamičke indikacije za početak, napredovanje i/ili oporavak sindroma kroz vrijeme. Korelacijski koeficijenti iz parcijalnih najmanjih kvadrata – diskriminantne analize (PLS-DA) korišteni su za rangiranje važnosti svake varijable kako bi se dodatno uhvatili različito izraženi metaboliti odgovorni za odvajanje između skupina. PLS-DA je izvedena iz metode parcijalnih najmanjih kvadrata (PLS), koja je generalizirana metoda višestruke regresije koja se bavi višestrukim kolinearnim prediktorima i varijablama odgovora [34]. PLS-DA je proveden pomoću softvera SIMCA-P 11.0 [35]. Izvedena je tipična 7-kružna unakrsna provjera valjanosti. Jedna sedmina uzoraka isključena je iz modela u svakom krugu kako bi se validirao model. Ovaj je postupak ponovljen na iterativni način za unakrsnu provjeru valjanosti sve dok svaki uzorak jednom nije isključen.

Herba Cistanches se može koristiti za liječenje sindroma nedostatka bubrega

Univarijantna analiza

Diferencijalno izraženi metaboliti identificirani iz multivarijantne analize također su verificirani u softveru MATLAB 7.0 (The MathWorks Inc, SAD) neparametrijskim Kruskal-Wallisovim testom s razinom značajnosti na P < 0.05 .

Rezultati i rasprava

Interpretacija GC-MS spektara

Tipični GC-MS kromatogrami ukupne ionske struje (TIC) urina štakora 10. dana iz tretirane skupine, modelne skupine i kontrolne skupine prikazani su na slici 1. Upotrebom našeg optimiziranog GC-MS protokola analize u kombinaciji s vrhom temeljenim na softveru postupkom dekonvolucije, ukupno 117 pojedinačnih metabolita dosljedno je otkriveno u najmanje 90 posto uzoraka urina. Identifikacija spojeva od interesa provedena je usporedbom fragmenta masenog spektra s referentnim bibliotekama NIST-a (Nacionalni institut za standarde i tehnologiju), Wiley bibliotekama i referentnim standardima. Uspjeli smo provjeriti 23 od 117 metabolita (20 posto), od kojih su većina bili aminokiseline, poliamini, masne kiseline, purini i hormoni nadbubrežne žlijezde koji su uglavnom uključeni u energetski metabolizam, metabolizam lipida i metabolizam aminokiselina.

Slika 1 Tipični GC-MS kromatogrami ukupne ionske struje (TIC) urina 10. dana iz liječene skupine (A), modelne skupine (B) i kontrolne skupine (C).

Vremenski ovisne promjene u uzorcima urina

Srednje putanje PCA rezultata izvedene iz skupine modela i skupine za liječenje ilustrirane su na slici 2. Prolazni pomak u dijagramu putanje otkrio je dinamički napredak 'sindrom nedostatka bubrega' izazvan samo hidrokortizonom ili u kombinaciji sHerba Cistanchesliječenje. U modelnoj skupini, metabolički obrasci 1. i 3. dana bili su različiti od onih 7. i 10. dana, što sugerira da je metabolička regulatorna mreža 1. i 3. dana možda prošla prolazno razdoblje s velikim fluktuacijama i da je poremećena mreža mogao biti obnovljen 7. i 10. dana, što je u konačnici dovelo do stabilnog obrasca bliskog stanju prije doziranja. Analogno tome, činjenica da je metabolički obrazac 1. i 3. dana očito odstupao od onog prije doziranja u terapijskoj skupini ukazuje na dominantnu 'sindrom nedostatka bubrega' država. U tom su razdoblju učinci hidrokortizona vjerojatno bili dominantniji nad onima hidrokortizonaHerba Cistanchesekstrakt. Ovi su nalazi bili u skladu s općim opažanjem da su štakori iz obje skupine pokazali manje aktivnosti 1. i 3. dana. Zanimljivo je da su se metabolički obrasci 7. i 10. dana postupno i značajno približili stanju prije doziranja, što sugerira daHerba Cistanchesimalo je neke protuupalne ili terapeutske učinke na štakore izložene hidrokortizonu. Ovi rezultati podupiru kliničke nalaze daHerba Cistanchesje učinkovit u liječenju 'sindrom nedostatka bubrega'. Općenito, obje putanje daju vizualnu, cjelokupnu i dinamičku sliku početka, napredovanja i oporavkasindrom nedostatka bubrega'.

Slika 2. Srednja putanja PC1 u odnosu na PC2 rezultate za uzorke urina iz modelne skupine (-●-) i terapijske skupine (--●--). Svaka točka označava srednji rezultat u različitim vremenskim točkama, tj. prije doziranja, 1., 3., 7. i 10. dan. Traka pogreške predstavlja standardnu ​​devijaciju za svaku vremensku točku dobivenu prvom glavnom komponentom.

Usporedna metabolička analiza uzoraka urina

Kako bismo bolje razumjeli metaboličke učinke hidrokortizona, usporedili smo metaboličke profile dobivene od kontrolne, modelne i terapijske skupine. Opće grupiranje triju skupina može se lako uočiti u različitim vremenskim točkama, tj. prije doze, 3. dan i 10. dan (Slika 3). Iako ne postoji tendencija razdvajanja u profilima urina prije doziranja, metabolički profili odstupaju od onih kontrolne skupine 3. dan nakon izlaganja hidrokortizonu. Metabolička perturbacija hidrokortizonom pojavila se i u modelnoj i u terapijskoj skupini. Međutim, nakon uzastopnog 7-dnevnog tretmana sHerba Cistanches, metabolički profili liječene skupine ponovno su postali usporedivi s onima kontrolne skupine, što ukazuje na toHerba Cistanchesučinkovito obnovio poremećeni metabolizam.

Slika 3. Usporedba metaboličkih profila kontrolne skupine (crni dijamant), modelne skupine (crveni dijamant) i terapijske skupine (plavi dijamant) u različitim vremenskim točkama: prije doze (A), 3. dan (B) i 10. dan (C). Svaka točka u dijagramu PCA rezultata predstavlja podatke dobivene od štakora.

Diferencijalna identifikacija metaboličkih profila

Unakrsno validirani PLS-DA model korišten je za identifikaciju ključnih metabolita u različitim metaboličkim profilima radi lakšeg razlikovanja između kontrolne skupine štakora i modelne skupine (tj. hidrokortizonom inducirane) štakora sa ili bezHerba Cistanchestretman 3. dan (Tablica 1). Određene su višestruke promjene u relativnoj koncentraciji svakog ključnog metabolita između skupina i proizvedena je odgovarajuća vizualizacija promjena između skupina prije doziranja, dan 3 i dan 10 (Slika 4). Kao što je prikazano na slici 4 i tablici 1, dok se većina endogenih metabolita značajno povećala ili smanjila u modelnoj skupini, oni u liječenoj skupini prošli su prolazno razdoblje kao što je uočeno 1. i 3. dana i postupno su se približili kontrolnoj (normalnoj) razini . Na primjer, u usporedbi s malom varijacijom (1,1-1,5 puta) metabolita u terapijskoj skupini 10. dana, uočene su znatno povećane razine (1,7-3,0 puta) tirozina, tiramina, dopamina i noradrenalina u urinu. grupa modela tijekom eksperimenta. Naša prethodna studija pokazala je da je pojačani metabolizam kateholamina izazvan glukokortikoidima rezultirao prekomjernom potrošnjom imunoloških funkcija, što je dovelo dosindrom nedostatka bubrega' [31]. Herba Cistanches, tonik koji poboljšava imunološki sustav [36], može neutralizirati neke učinke hidrokortizona.Herba Cistanchestakođer može obnoviti normalnu metaboličku regulatornu mrežu. Daljnji eksperimenti s različitim pristupima kao što su molekularna biologija, stanična biologija i biljna kemija potrebni su za ocrtavanje djelovanjaHerba Cistanches(i njegove sastavnice) u 'sindrom nedostatka bubrega'.

Tablica 1 Popis metabolita uključenih u metaboličko profiliranje ove studije

Od: Metaboličko profiliranje otkriva terapijske učinkeHerba Cistanchesu životinjskom modelu hidrokortizonom izazvanogsindrom nedostatka bubrega'

Napomena: Koeficijenti korelacije (corr coeffs) svih spojeva izračunati su iz unakrsno validiranog PLS-DA modela (Q2Ycum=0.899, zadovoljavajući model koji koristi dvije komponente) 3. dana između kontrolne skupine i modelne skupine sa ili bezHerba Cistanchesliječenje. Dodatno, promjene nabora ispitane su neparametarskim Kruskal-Wallisovim testom. Kw (P) označava P vrijednosti testa. H=kontrolna skupina, M=modelna skupina, D=terapijska skupina. Na primjer, H/M/0 predstavlja promjene relativnog puta (model za kontrolu) u stanju prije doziranja.

Slika 4. Višestruke promjene ključnih metabolita. Crvena boja označava relativno povišene koncentracije (promjene puta > 1,5), dok zelena boja označava relativno smanjene koncentracije (promjene puta < -1,5).="" promjene="" nabora="" u="" rasponu="" od="" -1.5="" do="" 1.5="" smatraju="" se="" fiziološkim="" varijacijama.="" višestruka="" promjena="" (m/h,="" d/h)="" je="" omjer="" koncentracije="" modelne="" skupine="" ili="" tretirane="" skupine="" prema="" kontrolnoj="">

Zaključak

Sadašnja studija metaboličkog profila korištenjem GC-MS to je pokazalaHerba Cistanchesuzrokovao sustavni oporavak od metaboličkih poremećaja izazvanih hidrokortizonom kod štakora, životinjskog modela za 'sindrom nedostatka bubrega'. Ova studija također pokazuje da je metaboličko profiliranje korisna metoda za proučavanje terapijskih učinaka biljnih lijekova.

Kratice

MS: masena spektrometrija

GC-MS: plinska kromatografija-spektrometrija mase

NMR: nuklearna magnetska rezonancija

PCA: analiza glavnih komponenti

PLS-DA: djelomični najmanji kvadrati – diskriminativna analiza

Reference

1. Nicholson JK, Lindon JC, Holmes E: 'Metabonomika': Razumijevanje metaboličkih odgovora živih sustava na patofiziološke podražaje putem multivarijatne statističke analize bioloških NMR spektroskopskih podataka. Xenobiotica. 1999, 29 (11): 1181-1189. 10.1080/004982599238047.

2. Brindle JT, Antti H, Holmes E, Tranter G, Nicholson JK, Bethell HWL, Clarke S, Schofield PM, McKilligin E, Mosedale DE, Grainger DJ: Brza i neinvazivna dijagnoza prisutnosti i ozbiljnosti koronarne bolesti srca pomoću 1H -Metabonomika zasnovana na NMR. Nat Med. 2002, 8 (12): 1439-1444. 10.1038/nm802.

3. Constantinou MA, Papakonstantinou E, Benaki D, Spraul M, Shulpis K, Koupparis MA, Mikros E: Primjena spektroskopije nuklearne magnetske rezonancije u kombinaciji s analizom glavnih komponenti u otkrivanju urođenih grešaka metabolizma pomoću krvnih mrlja: metabonomski pristup. Anal Chim Acta. 2004, 511 (2): 303-312. 10.1016/j.aca.2004.02.012.

4. Beckonert O, Monnerjahn J, Bonk U, Leibfritz D: Vizualiziranje metaboličkih promjena u tkivu raka dojke pomoću 1H-NMR spektroskopije i samoorganizirajućih mapa. NMR Biomed. 2003, 16 (1): 1-11. 10.1002/nbm.797.

5. Mortishire-Smith RJ, Skiles GL, Lawrence JW, Spence S, Nicholls AW, Johnson BA, Nicholson JK: Upotreba metabonomike za prepoznavanje poremećenog metabolizma masnih kiselina kao mehanizma toksičnosti izazvane lijekovima. Chem Res Toxicol. 2004, 17 (2): 165-173. 10.1021/tx034123j.

6. Waters NJ, Holmes E, Williams A, Waterfield CJ, Duncan Farrant R, Nicholson JK: NMR i studije prepoznavanja uzoraka o vremenskim metaboličkim učincima -naftilizotiocijanata na jetru, urin i plazmu kod štakora: integrativna metabonomska analiza pristup. Chem Res Toxicol. 2001, 14 (10): 1401-1412. 10.1021/tx010067f.

7. Coen M, Lenz EM, Nicholson JK, Wilson ID, Pognan F, Lindon JC: Integrirano metabonomsko istraživanje toksičnosti acetaminofena kod miševa pomoću NMR spektroskopije. Chem Res Toxicol. 2003, 16 (3): 295-303. 10.1021/tx0256127.

8. Small-Howard A, Turner H: Izlaganje materijalima dobivenim od duhana izaziva prekomjernu proizvodnju izlučenih proteinaza u mastocitima. Toxicol Appl Pharmacol. 2005, 204 (2): 152-163. 10.1016/j.taap.2004.09.003.

9. Waters NJ, Waterfield CJ, Farrant RD, Holmes E, Nicholson JK: Metabonomska dekonvolucija ugrađene toksičnosti: Primjena na hepato- i nefrotoksičnost tioacetamida. Chem Res Toxicol. 2005, 18 (4): 639-654. 10.1021/tx049869b.

10. Robertson DG: Metabonomika u toksikologiji: Prikaz. Toxicol Sci. 2005, 85 (2): 809-822. 10.1093/toksično/kfi102.

11. Robertson DG, Bulera SJ: Visokopropusna toksikologija: Praktična razmatranja. Curr Opin Drug Discovery Dev. 2000, 3 (1): 42-47.

12. Nicholson JK, Connelly J, Lindon JC, Holmes E: Metabonomika: Platforma za proučavanje toksičnosti lijekova i funkcije gena. Nat Rev Drug Discov. 2002, 1 (2): 153-161. 10.1038/nrd728.

13. Taylor J, King RD, Altmann T, Fiehn O: Primjena metabolomike na diskriminaciju genotipa biljaka korištenjem statistike i strojnog učenja. Bioinformatika. 2002, 18 (SUPPL 2): S241-S248.

14. Wilson ID, Nicholson JK, Castro-Perez J, Granger JH, Johnson KA, Smith BW, Plumb RS: Tekuća kromatografija visoke razlučivosti "ultra-performance" povezana s oa-TOF masenom spektrometrijom kao alat za profiliranje diferencijalnog metaboličkog puta u funkcionalne genomske studije. J Proteome Res. 2005, 4 (2): 591-598. 10.1021/pr049769r.

15. Jonsson P, Gullberg J, Nordstrom A, Kusano M, Kowalczyk M, Sjostrom M, Moritz T: Strategija za identificiranje razlika u velikim serijama metabolomičkih uzoraka analiziranih pomoću GC/MS. Analna kemija. 2004, 76 (6): 1738-1745. 10.1021/ac0352427.

16. Ohdoi C, Nyhan WL, Kuhara T: Kemijska dijagnoza Lesch-Nyhanovog sindroma pomoću detekcije plinskom kromatografijom-masenom spektrometrijom. J Chromatogr, B: Anal Technol Biomed Life Sci. 2003, 792 (1): 123-130. 10.1016/S1570-0232(03)00277-0.

17. Fiehn O, Kopka J, Dormann P, Altmann T, Trethewey RN, Willmitzer L: Profiliranje metabolita za funkcionalnu genomiku biljaka. Nat Biotechnol. 2000, 18 (11): 1157-1161. 10.1038/81137.

18. Lafaye A, Junot C, Pereira Y, Daniel G, Tabet JC, Ezan E, Labarre J: Kombinirane analize profila proteoma i metabolita otkrivaju iznenađujuće uvide u metabolizam sumpora kvasca. J Biol Chem. 2005, 280 (26): 24723-24730. 10.1074/jbc.M502285200.

19. Schauer N, Steinhauser D, Strelkov S, Schomburg D, Allison G, Moritz T, Lundgren K, Roessner-Tunali U, Forbes MG, Willmitzer L, Fernie AR, Kopka J: GC-MS biblioteke za brzu identifikaciju metabolita u složenim biološkim uzorcima. FEBS Lett. 2005, 579 (6): 1332-1337. 10.1016/j.febslet.2005.01.029.

20. Willse A, Belcher AM, Preti G, Wahl JH, Thresher M, Yang P, Yamazaki K, Beauchamp GK: Identifikacija glavnih tjelesnih mirisa reguliranih histokompatibilnim kompleksom statističkom analizom komparativnog eksperimenta plinske kromatografije/spektrometrije mase. Analna kemija. 2005, 77 (8): 2348-2361. 10.1021/ac048711t.

21. Wang XW, Wang XF, Wu LY: Poboljšanje pamćenja miševa feniletanoidnih glikozida Cistanche deserticola. Rep Chin Pharm. 2002, 19: 41-42.

22. Xie JH, Wu CF: Učinak etanolnog ekstrakta Cistanche deserticola na sadržaj monoaminskih neurotransmitera u mozgu štakora. Zhongcaoyao. 1993, 24: 417-419.

23. Li LL, Wang XW, Wang XF: Antilipidna peroksidacija i antiradijacijsko djelovanje glikozida uherba Cistanches.Chin J Chin Mater Med. 1997, 22 (6): 364-367.

24. Shahat AA, Nazif NM, Abousetta LM, Ibrahim NA, Cos P, Van Miert S, Pieters L, Vlietinck AJ: Fitokemijsko istraživanje i antioksidativna aktivnost Duranta repens. Phytother Res. 2005, 19 (12): 1071-1073. 10.1002/ptr.1766.

25. Gao J, Igarashi K, Nukina M: Tri nova feniletanoidna glikozida iz Caryopteris incana i njihovo antioksidativno djelovanje. Chem Pharm Bull. 2000, 48 (7): 1075-1078.

26. Kyriakopoulou I, Magiatis P, Skaltsounis AL, Aligiannis N, Harvala C: Samioside, novi feniletanoidni glikozid s hvatanjem slobodnih radikala i antimikrobnim djelovanjem iz Phlomis samia. J Nat Prod. 2001, 64 (8): 1095-1097. 10.1021/np010128 plus .

27. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB: Zaštitni učinak tubulozida B na TNF alfa-induciranu apoptozu u neuronskim stanicama. Acta Pharmacol Sin. 2004, 25: 1276-1284.

28. Geng XC, Song LW, Pu XP, Tu PF: Neuroprotektivni učinci feniletanoidnih glikozida iz Cistanches salsa protiv 1-metil-4-fenil-1, 2, 3, 6- dopaminergička toksičnost izazvana tetrahidropiridinom (MPTP) kod C57 miševa. Biol Pharm Bull. 2004, 27: 797-801. 10.1248/bpb.27.797.

29. He W, Shu X, Zong G, Shi M, Xiong Y, Chen M: Jačanje bubrega i potpora jangu djelovanja cistanche deserticola YC Ma prije i poslije pripreme. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1996, 21 (9): 534-537. 575

30. Shen LZ, Zhong XY, Wang SX: Učinak Cistanche deserticola na normalne i deficitarne Shen-yang štakore. Zhongyao Yaoli Yu Linchuang. 2001, 17 (1): 17-18.

31. Chen M, Zhao L, Jia W: Metabonomska studija o biokemijskim profilima životinjskog modela izazvanog hidrokortizonom. J Proteome Res. 2005, 4 (6): 2391-2396. 10.1021/pr050158o.

32. Chen Q, Yi NY: Životinjski modeli i lijekovi za manjak Yin i Yang. Eksperimentalna metodologija farmakoloških istraživanja u tradicionalnoj kineskoj medicini. Uredio: Chen Q. 1993., Peking: People's Health Publishing House, 982-984.

33. Nacionalni odbor za farmakopeju: Farmakopeja Narodne Republike Kine. 2005, Peking: Press of Chemical Industry, 1: 90-

34. Analiza višestrukih i megavarijatnih podataka I. dio: Osnovna načela i primjene, Drugo revidirano i prošireno izdanje. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/training_literature/c/5]

35. SIMCA-P i SIMCA-P plus 11 korisnički priručnik. [http://www.umetrics.com/default.asp/pagename/downloads_userguide/c/3]

36. Chin HL, Su YC: Studija o farmakološkim učincima Cistanche deserticola Ma. Zhongguo Zhong Yao Zazhi. 1993, 19: 143-146.

Iz: Kineska medicina svezak 3, broj članka: 3 (2008)