Učinkoviti sastojci Cistanche: Metoda odvajanja i pročišćavanja feniletanoidnih glikozida

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Izolacija i pročišćavanje feniletanoidnih glikozida iz Cistanche Deserticola brzom protustrujnom kromatografijom

Li a,b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a,

J. Christopher Young b., Honghui Zhu b

Odsjek za kemiju, Changchun Normal University, Changchun 130032, Kina

b Guelph Food Research Centre, Agriculture and Agri-Food Canada, 93 Stone Road West, Guelph, Ontario, Kanada N1G 5C9

Primljeno 31. svibnja 2007.; primljeno u revidiranom obliku 16. listopada 2007.; prihvaćen 29. listopada 2007

Sažetak:

Petfeniletanoidni glikozidi(PhGs),ehinakozid, cistanozid A, akteozid, izoakteozid i 20-acetilakteozid, izolirani su i pročišćeni izCistanche deserticolapo prvi put brzom protustrujnom kromatografijom (HSCCC) koristeći dva bifazna sustava, jedan koji se sastoji od etil acetat-etanol-voda (5:0.5:4.5, v/v/v) i drugi etil acetat–n-butanol–etanol-voda ({{10}}.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v). Ukupno 28,5 mg ehinakozida, 18,4 mgcistanozid A, 14,6 mgakteozid, 30,1 mg izoakteozida i 25,2 mg 20-acetilakteozida pročišćeno je iz 1412 mg n-butanol ekstraktaCistanche deserticola, svaki s preko 92,5 posto čistoće kako je određeno HPLC-om. Strukture su identificirane prema retencijskom vremenu, UV, LC–ESI-MS u modu negativnih iona i potvrđene NMR eksperimentima. Raspravlja se o karakterističnom uzorku fragmentacije LC-ESI-MSn pet spojeva, koji je vrlo specifičan i koristan alat za strukturnu identifikaciju PhG iz ove važne ljekovite biljke.

Crown Copyright © 2007 Izdavač Elsevier Ltd. Sva prava pridržana.

Ključne riječi:Cistanche deserticola; Phenylethanoid;Ehinakozid; cistanozid A;Akteozid; izoakteozid; 20-Acetilakteozid; HSCCC; LC-ESI-MS; NMR

1. Uvod

Cistanche deserticolaYC Ma je ​​dobro poznati kineski biljni lijek i naširoko se koristi u tradicionalnim pripravcima sličnim današnjim funkcionalnim sastojcima hrane ili dodacima prehrani (Wong, Li, Cheng i Chen, 2006.). Glavni bioaktivni sastojci u C. deserticola sufeniletanoidglikozidi (PhGs), uključujućiehinakozid, akteozid, izoakteozid, 20-acetilakteozid icistanozid A(Kobayashi, Karasawa i Miyase, 1984; Kobayashi i dr., 1987). PhG su široko rasprostranjeni u biljnom carstvu i opsežno su proučavani zbog svojih različitih bioloških funkcija kao što su hepatoprotektivna (Xiong i sur., 1998), protuupalna, antinociceptivna aktivnost (Schapoval i sur., 1998) i antioksidativna aktivnost (Cheng , Wei, Guo, Ni i Liu, 2005; He, Lau, Xu, Li i But, 2000; Li, Wang i Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu i Jia, 1993; Wang, Jiang , Wu i Wang, 2001.; Xiong, Kadota, Tani i Namba, 1996.), poboljšanje seksualne funkcije (Xie i Wu, 1993.; Zong, He, Wu i Chen, 1996.) i sedativni učinak (Lu, 1998.) .

Zbog gore navedenih značajnih bioaktivnosti, hitno su potrebne velike količine čistih spojeva kao referentni standardi i za razne in vitro i in vivo studije povezane s upotrebom tradicionalnih kineskih lijekova. Stoga postaju potrebne učinkovite metode za izolaciju, pročišćavanje i strukturnu karakterizaciju PhG-a. Međutim, takav rad obično zahtijeva upotrebu višestrukih kromatografskih koraka za čišćenje i izolaciju uzorka (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten i Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin i Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara, & Li, 1990.; Shoyama, Matsumoto i Nishioka, 1987.), što obično rezultira niskim stopama oporavka zbog ireverzibilne adsorpcije PhG na čvrstu podlogu tijekom odvajanja (Lei et al., 2001.). Nasuprot tome, protustrujna kromatografija velike brzine (HSCCC) postala je učinkovita alternativa konvencionalnim kromatografskim tehnikama za odvajanje nekih PhG iz biljnih ekstrakata (Lei i sur., 2001.; Li i sur., 2005.). Lei i sur. uspješno razdvojeniakteozidi 20-acetilakteozid iz Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck korištenjem HSCCC (Lei et al., 2001.). Autori ovog rada već su izvijestili o razdvajanjuakteozidi izoakteozid iz Plantago psyllium L. od HSCCC (Li et al., 2005). Međutim, nije objavljeno izvješće o odvajanju i pročišćavanju višestrukih PhG izCistanche deserticolakoristeći HSCCC. Zbog nedostatka standarda, LC-MS metode su razvijene i korištene kao snažan analitički alat za brzu karakterizaciju i identifikaciju nekih PhG u biljnom ekstraktu (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).

U ovom radu prikazujemo HSCCC metodu razvijenu za pripremu ehinakozida,cistanozid A, akteozid, izoakteozid i 20-acetilakteozid izCistanche deserticola. Karakterizacija i analiza pet odvojenih PhG-ova postignuta je upotrebom LC-a zajedno s in-line ESI masenom spektrometrijom i NMR eksperimentima. Vrijeme zadržavanja, molekularna težina i karakteristični fragmenti iona pet PhG-ova prikazani su i raspravljeni u ovom radu. Strukture pet PhG-ova identificiranih u ovom istraživanju prikazane su na slici 1.

ehinakozidu cistanche

2. Eksperimentalni

2.1. Kemikalije i reagensi

Akteozidje kupljen od Sigma-Aldrich (Oak-Ville, ON), ehinakozid je kupljen od ChromaDex (Santa Ana, CA). Izoakteozid je izoliran iz P. psyllium L. (Li i sur., 2005.).Cistanche deserticolaje kupljen od Beijing TongRenTang Medicinal Store (Kina). Sva otapala su bila HPLC kvalitete i kupljena od Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).

2.2. Priprema uzorka

Cistanche deserticola(20 g) je ekstrahiran pet puta na sobnoj temperaturi tijekom 12 h svaki put sa 100 mL 80 postotnog vodenog etanola. Svaki put ekstrakcijska smjesa je filtrirana kroz Whatman No.1 filter papir (Whatman International Ltd., Maidstone, Engleska). Kombinirani filtrat je koncentriran do 100 mL u vakuumu na <40 stupnjeva.="" rezultirajuća="" vodena="" otopina="" dvaput="" je="" odmašćena,="" svaki="" sa="" 100="" ml="" heksana,="" a="" zatim="" ekstrahirana="" uzastopno="" pet="" puta,="" svaki="" sa="" 100="" ml="" n-butanola.="" slojevi="" n-butanola="" su="" spojeni="" i="" koncentrirani="" do="" suhog="" u="" vakuumu="" na=""><40 stupnjeva,="" što="" je="" dalo="" 2,2="" g="" ekstrakta="" n-butanola.="" ekstrakt="" je="" pohranjen="" na="" -20="" stupnjeva="" prije="" odvajanja="">

2.3. HSCCC postupak odvajanja

Preparativni HSCCC je proveden u model CCC{{0}} kromatografiji velike brzine s protustrujom (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland USA). Ovaj aparat je imao tri preparativne zavojnice, spojene u seriju (ukupni volumen, 325 mL). Brzina okretaja aparata mogla se regulirati između 0 i 2000 okretaja u minuti. Sustav HSCCC bio je opremljen HPLC pumpom (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, SAD), UV detektorom Model 450 (Alltech, SAD), ravnim snimačem Model L 120 E (Linseis Inc., Princeton Jct, SAD), sakupljač frakcija (Advantec MFS Inc., SAD) i ventil za ubrizgavanje uzorka s 10-mL petljom uzorka.

Smjesa etil acetat–etanol-voda (5:0.5:4,5, v/v/v) je snažno protresena u lijevku za odjeljivanje i ostavljena da odstoji i razdvoji se na sobnoj temperaturi. Dvije su faze korištene u HSCCC nakon što su postigle ravnotežu. Cijeli smotani stup najprije je ispunjen gornjim slojem, koji služi kao stacionarna faza. Donji sloj (mobilna faza) je zatim pumpan u gornji kraj kolone pri brzini protoka od 1,5 mL/min. Brzina rotacije postavljena je na 1050 o/min. Uzorak (ca. 230 mg svaki put) otopljen u 8 ml smjese etil acetat-etanol-voda (5:0,5:4,5, v/v/v) napunjen je u injekcijski ventil nakon što je sustav dosegao hidrodinamičku ravnoteža. Ovaj bifazni sustav otapala odabran je na temelju koefficijenta raspodjele (K), koji je bio 0,87, 1,11 i 1,32 zaakteozid, izoakteozid, odnosno 20 acetilakteozid. Vrijednost K bila je omjer koncentracija u gornjem i donjem sloju istog spoja kako je određeno HPLC-om (slika 2). Efluent iz izlaza kolone kontinuirano je praćen UV detektorom na 254 nm i sakupljen u epruvete s frakcijskim kolektorom postavljenim na 4 minute za svaku epruvetu.

2.4. LC uvjeti

statički auto-uzorkivač i fotodiodni niz detektora (DAD) korišteni su za analizu PhG-a u n-butanol ekstraktuCistanche deserticolai frakcije sakupljene od HSCCC separacije. Odvajanje je provedeno u Phenomenex ODS-C18 koloni (250 × 4,6 mm, 5 lm) sa C18 zaštitnom kolonom. Binarna mobilna faza sastojala se od acetonitrila (otapalo A) i vode koja je sadržavala 2 posto octene kiseline (otapalo B). Sva otapala su filtrirana kroz a

{{0}}.45 lm filtrirajte prije upotrebe. Brzina protoka je održavana konstantnom na 1.0 mL/min za ukupno vrijeme rada od 25 min. Sustav je pokrenut s programom gradijenta: 0–20 min: 90 posto B do 60 posto B; 20–22 min: 60 posto B do 0 posto B; i 22-25 min, 0 posto B do 90 posto B. Volumen injekcije uzorka bio je 10 lL. Vrhovi od interesa su praćeni na 320 nm pomoću DAD detektora.

2.5. LC–ESI-MS pokusi

LC-MS eksperimenti su provedeni korištenjem Finnigan LCQ DECA masenog spektrometra s ionskom zamkom (Thermo Finnigan, San Jose, CA, SAD) opremljenog izvorom elektrosprejne ionizacije (ESI). Uzorci su analizirani u istim kromatografskim uvjetima. Za prikupljanje podataka korišten je negativni model. Brzine protoka plaštnog plina i pomoćnog protoka postavljene su na 96 odnosno 7 (proizvoljna jedinica). Kapilarni napon postavljen je na 29 V, a njegova temperatura je kontrolirana na 350 stupnjeva. Napon ulazne leće bio je fiksiran na 40 V, a multipolna RF amplituda postavljena je na 540 V. Napon ESI igle je kontroliran na 4,5 kV. Odmak tubusne leće bio je 16 V, odmak višepolne leće 1 bio je 8,20 V, a odmak višepolne leće 2 bio je 10,5 V. Napon multiplikatora elektrona postavljen je na 980 V za detekciju iona.

2.6. NMR za identifikaciju

NMR spektri su snimljeni na spektrometru Bruker Avance-600 (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Kanada). Samo spojevi 2 i 5 (bez dostupnih standarda) podvrgnuti su NMR eksperimentima. Uzorci su otopljeni u CD3OD.

3. Rezultati i rasprava

3.1. HSCCC odvajanje

Ekstrakt n-butanolaCistanche deserticolaa frakcije koje odgovaraju svakom piku izoliranom HSCCC-om analizirane su HPLC-om, a rezultati su prikazani na slici 2. Pet glavnih spojeva (pikovi 1-5) su razdvojeni i detektirani s retencijskim vremenima od 9,2 min, 10,7 min, 12,3 min ,

13,3 min odnosno 16,2 min.

Uspješno HSCCC odvajanje uvelike ovisi o prikladnom dvofaznom sustavu otapala koji osigurava idealan koeficijent raspodjele (K) oko 1 za željeni spoj. Takav dvofazni sustav također bi trebao dati razumno kratko vrijeme taloženja (Chen, Games i Jones, 2003; Foucault i Chevolot, 1998; Oka, Oka i Ito, 1991). U našem eksperimentu odabrali smo četiri serije sustava otapala prema topljivosti ciljnih spojeva uCistanche deserticola. HPLC je korišten za mjerenje koncentracije u svakoj fazi, iz koje su izračunate K vrijednosti ciljanih spojeva. Dva sustava, etil acetat–n-butanol–etanol-voda (4:0.6:0.6:5, v/v/v/v) i etil acetat–voda (1: 1, v/v), prethodno su korišteni u HSCCC za odvajanjeakteozidi 20-acetilakteozid iz C. salsa,akteozid, odnosno izoakteozid iz P. Psyllium (Lei i sur., 2001.; Li i sur., 2005.). Iako je prvi sustav imao relativno kratko vrijeme taloženja, imao je slabu izvedbu u odvajanju PhG-ovaCistanche deserticola, zbog niske vrijednosti K za spojeve 1 i 2, te visoke vrijednosti K za spojeve 3–5. Vrijednosti K bile su vrlo niske za spojeve 1-4 u drugom sustavu, ali vrlo visoke za spoj 5 (Tablica 1). Modificirani sustav koji sadrži etil acetat-etanol-vodu (5:{{10}}.5:4.5, v/v/v), dao je idealnu K vrijednost za spojeve 3-5 na 0,87, 1,11, odnosno 1,32, što je rezultiralo dobrim odvajanjem ova tri spoja (Slika 3A i B). Ovaj je sustav ipak proizveo

premala vrijednost K za spojeve 1 i 2, uzrokujući ko-eluiranje dvaju spojeva blizu fronte otapala (frakcija 1 na slici 3A). Daljnja modifikacija sustava (etil acetat–n-butanol–etanol-voda (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/ v) povisio je vrijednosti K za spoj 1 i 2 na 0.52 odnosno 0.92 i doveo do potpunog odvajanja (Slika 3C). Slika 3A prikazuje HSCCC odvajanje a uzorak koji sadrži 230 mg ekstrakta n-butanolaCistanche deserticolakoristeći etil acetat–etanol-vodu (5:0.5:4.5, v/v/v). Frakcije za koje je HPLC potvrdio da sadrže samo spojeve 3, 4 ili 5 odvojeno su spojene, a one koje sadrže spojeve 3 i 4 skupljene su, osušene smrzavanjem i ponovno podvrgnute HSCCC-u za daljnje odvajanje (Slika 3B). Gore opisano odvajanje HSCCC-a u dva koraka dalo je ukupno 14,6 mg, 30.1 mg i 25,2 mg spojeva 3–5 iz 1412 mg ekstrakta n-butanola. Slika 3C prikazuje HSCCC odvajanje uzorka koji sadrži spojeve 1 i 2 (frakcija 1 u prvom odvajanju) korištenjem etil acetat–n-butanol–etanol-voda (0.5:0.5 :0,1:1, v/v/ v/v). Ukupno je dobiveno 28,5 i 18,4 mg spojeva 1 i 2. Kromatografska čistoća zamrzavanjem osušenih spojeva 1-5 bila je preko 92,5 posto, koji su izravno korišteni za LC-ESI-MS i NMR analize.

3.2. Strukturna identifikacija pomoću LC–ESI-MS i NMR

Probna identifikacija spojeva 1, 3 i 4 postignuta je podudarnim retencijskim vremenima i podacima UV spektra s onima autentičnog ehinakozida,akteozidi izoakteozid (slika 2). Spojevi 2 i 5 bili su nepoznati, međutim, UV spektri svih pet spojeva bili su vrlo slični, što ukazuje na slične strukturne značajke.

Kako bi se dalje istražile strukture ovih pet spojeva, pokušali su LC-ESI-MSn eksperimenti i rezultati su prikazani na slici 4 i tablici 2. Spojevi povezani s vrhovima (1-5) na slici 2 pokazali su intenzivne deprotonirane molekularne ione [MH]— na m/z 785, 799, 623, 623, odnosno 665, u negativnom načinu. Dimerni [2M H]- ioni također su primijećeni za pikove 1-4 na slici 2. Oni su potvrdili da su molekularne težine pikova 1-5 786, 800, 624, 624, odnosno 666. LC-MSN podaci (Tablica 2) pružili su vrlo korisne strukturne informacije za pet PhG-ova, kao što je neutralni gubitak

Eksperimentalni postupak: približno 1 mg svakog uzorka izvagano je u epruvetu od 10 mL u koju je dodan 1 mL svake faze prethodno uravnoteženog dvofaznog sustava otapala. Epruveta je zatvorena i snažno protresana 1 minutu, te ostavljena da stoji dok se potpuno ne odvoji. Alikvot od 100 lL svakog sloja je izvađen i odvojeno uparen do suhoće u vakuumu na<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

kafeoilni dio (162), glukozni dio (162), ramnozni dio (146), CH2 radikal (14) i COCH2 skupina (42).

LC–ESI-MS vrha 1 prikazan je na slici 4A. Deprotonirani molekularni ion [MH]— na m/z 785 s velikom zastupljenošću i dimernom deprotoniranom molekularnom

ion [2M H]— pri m/z 1571 opažen je u negativnom modu, što ukazuje na molekularnu težinu od 786, što je bilo isto kao i kod ehinakozida. Daljnje istraživanje u LC-MS2 eksperimentu iona m/z 785 dalo je jedan glavni ion kćer na m/z 623 (Slika 4B) proizveden izravno iz m/z 785 gubitkom kaffeoilnog ostatka ili heksoznog ostatka kao [M 162 H]—. LC-MS3 spektar m/z 623 pokazao je dva glavna iona na m/z 477 i 461 i dva sporedna iona na m/z 315 i 179 (Slika 3C, Tablica 2). Masene razlike između m/z 623 i iona fragmenta m/z 477 i 461 bile su 146 odnosno 162, što odgovara gubitku jedinice ramnoze i ostatka glukoze ili ostatka caf-feel [M 162 H]—. Ioni m/z 623 također su izgubili kafeoilni dio i ostatak ramnoze da bi proizveli ione m/z 315. Ion na m/z 179 proizveden je cijepanjem kaffeoilnog ostatka, pri čemu je negativni naboj ostao na dijelu kaffeoilnog ostatka. LC–ESI-MSN eksperiment na autentičnom ehinakozidu pokazao je isti uzorak fragmentacije. Stoga je za vrh 1 potvrđeno da je ehinakozid.

Za vrh 2, LC-ESI-MS pokazao je m/z 799 kao deprotonirani molekularni ion [MH]— i m/z 1599 kao njegov dimerni ion, što ukazuje na molekularnu masu od 800. Tijekom MS2 eksperimenata, m/z 799 iona tvori tri kćeri

iona na m/z 637, 623 i 475 (tablica 1). Ion na m/z 637 proizveden je izravno iz matičnog iona m/z 799 opet zbog neutralnog gubitka kaffeoila [M—162—H]— ili ostatka glukoze [M—162—H]—. Ion na m/z 623 rezultat je gubitka CH2 radikala. Ion na m/z 475 nastao je neutralnim gubitkom kaffeoilnog ostatka [M 162 H]— i glukoznog ostatka iz matičnog iona. Eksperiment MS3 na m/z 637 proizveo je tri iona na m/z 619, 491 i 475, što odgovara gubicima jedne jedinice vode, ramnoze i glukoznog dijela. Ion kćer m/z 623 proizveo je m/z 461 i 315 u studiji MS3, koja je slijedila iste puteve fragmentacije kao ehinakozid kao što je gore navedeno. LC–ESI-MSN podaci podržavaju privremenu identifikaciju za vrh 2 kaocistanozid A.

LC-ESI-MS eksperimenti također su provedeni za vršne vrijednosti

3 i 4 (tR 12,49 i 13,46 min na slici 2). Oba vrha pokazala su isti [MH]- ion na m/z 623 i dimer na m/z 1247 u negativnom modu (tablica 1), što ukazuje da su mogući izomeri s istom molekularnom težinom od

624, isto kaoakteozidi izoakteozid. MS2 spektri iona [MH]— također pokazuju jedan isti ion kćer od m/z 461, što ukazuje na gubitak kaffeoilnog ostatka iz matičnog iona m/z 623 (Tablica 1). Slični MS3 spektri dobiveni su za dva spoja. Za vrh 3, MS3 spektar iona na m/z 461 formirao je tri iona na m/z 315, 161 i 135. m/z 315 nastaje nakon gubitka ramnoze kao što je ranije raspravljeno. Ion m/z 161 proizveden je cijepanjem kafeoilnog ostatka, nakon čega je uslijedio daljnji gubitak jedne vode; naboj je ostao na dijelu kaffeoilnog dijela. Ion na m/z 135 [aglikon 18 H]— nastao je cijepanjem glikozidne veze na položaju C1 uz dodatni gubitak jedne vode, ostavljajući naboj na dijelu aglikonskog dijela. MS3 spektar vrha 4 slijedio je isti put fragmentacije kao i vrh 3 osim nedostajućeg iona na m/z 135. Molekularni ion i obrasci fragmentacije ova dva spoja u skladu su s literaturnim podacima oakteozidi izoakteozid (Wang et al., 2000), iako je nađen dodatni ion m/z 153 i

dodijeljen kao [aglikon H]— Wang et al. (Wang i sur., 2000.). Ovaj je ion možda bio nestabilan i izgubio je vodu da bi dao m/z 135 u našem eksperimentu. Na temelju MS podataka i kongruentnih vremena zadržavanja pikova 3 i 4 sa standardima, oni su stoga identificirani kaoakteozidodnosno izoakteozid.

LC–ESI-MS podaci za vrh 5 prikazani su u tablici 2. Deprotonirani molekularni ion [MH]— (m/z 665) bio je jedini ion pronađen u negativnom modu, što implicira molekulsku masu od 666. Tri iona kćeri opaženi su na m/z 623, 503 i 461 u MS2 eksperimentu (Tablica 2). Ioni kćeri na m/z 623 i 503 nastali su izravno iz matičnog iona gubitkom COCH2 skupine odnosno kafeoilnog dijela. Ion na m/z 461 nastao je gubitkom kaffeoilnog i COCH2 ostatka [M 162 42 H]— iz matičnog iona. U MS eksperimentu, m/z 623 je proizveo m/z 461, a m/z 503 je dao tri iona na m/z 485, 461 i 315. MS3 spektar iona kćeri m/z 461 dao je dva iona na 443 i 315. Usporedbom uzorka LC–MSN fragmentacije vrha 5 s drugim spojevima prijavljenim u ovoj studiji i s drugim prijavljenim spojevima (Li i sur., 2005.; Wang i sur., 2000.), zaključili smo da je vrh 5 strukturno vrlo povezan na akteozid s jedinom razlikom što je COCH3 jedinica na poziciji R3. Stoga je vrhuncu 5 dodijeljen privremeni identitet kao 20-acetilakteozid (slika 1).

Strukture dva provizorno identificirana spoja, vrh 2 (kao cistanozid A) i vrh 5 (kao 20-acetil-akteozid) potvrđene su njihovim strukturama pomoću 1H NMR. Kemijski pomaci i konstante spajanja svih protona u spojevima 2 i 5, kao što je prikazano u tablici 3., podudaraju se s prijavljenim NMR podacima zacistanozid Aodnosno 20-acetilakteozid (Kobayashi et al., 1984, 1987). 2D NMR eksperimenti (korelacija COSY, ROESY i CH dugog dometa) također su provedeni u ovoj studiji i dodatno su potvrdili identifikaciju (podaci nisu prikazani).

feniletanoidglikozidi u cistanči

4. Zaključci

U ovom radu, HSCCC je uspješno korišten za izolaciju i pročišćavanje ehinakozida,cistanozid A, akteozid, izoakteozid i 20-acetilakteozid iz n-butanol ekstrakta C. deserticola. Stoga je dokazano sredstvo za polupreparativno odvajanje bioaktiva. U međuvremenu, strukture pet PhG-ova u Cistanche deserticola istražene su pomoću LC–ESI-MSN; pronađene su neke karakteristične značajke PhG-a, što nam je omogućilo određivanje funkcionalnih skupina u strukturama. LC–ESI-MSN metoda stoga je moćan alat za brzu identifikacijufeniletanoidii njihovi glikozidi uCistanche deserticolaekstrakata, posebno kada su potkrijepljeni NMR podacima.

Priznanje

Autori bi željeli zahvaliti Jun Gu iz Centra za nuklearnu magnetsku rezonanciju, Sveučilište Guelph, Ontario, Kanada, za njezinu pomoć u NMR eksperimentima. Ovaj projekt je djelomično podržan sredstvima iz provincije Jilin, Kina (br. 20060904).

Reference

Chen, LJ, Games, DE i Jones, J. (2003.). Izolacija i identifikacija četiri flavonoidna sastojka iz sjemenki Oroxylum Indicum brzom protustrujnom kromatografijom. Journal of Chromatography A, 988, 95–105.

Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W. i Liu, CZ (2005.).Cistanche deserticolakulture stanične suspenzije:Feniletanoidbiosinteza glikozida i antioksidativno djelovanje. Procesna biokemija, 40, 3119–3124.

Foucault, AP i Chevolot, L. (1998). Protustrujna kromatografija: instrumentacija, izbor otapala i neke novije primjene u pročišćavanju prirodnih proizvoda. Journal of Chromatography A, 808, 3–22.

Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R., & Sticher, O. (1988). Teukriozid, fenilpropanoidni glikozid iz Teucrium Chamaedrys. Fitokemija, 27, 1459–1463.

He, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC i But, PPH (2000).

Antioksidativno djelovanjefeniletanoidglikozidi iz Brandisia prilika. Časopis za etnofarmakologiju, 71, 483–486.

Kobayashi, H., Karasawa, H. i Miyase, T. (1984). Studije o sastojcima Cistanchis Herba. III. Izolacija i strukture novih fenilpropanoidnih glikozida,cistanozid Ai B. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 32, 3009–3014.

Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K., et al. (1987). Novifeniletanoidglikozidi izCistanchetubulosa (Schrenk) Kuka. FI Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 35, 3309–3314.

Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ i Ito, Y. (2001.).

Preparativna izolacija i pročišćavanjeakteozidi 2'-acetil akteozid iz Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck protustrujnom kromatografijom. Journal of Chromatography A, 912, 181–185.

Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC, et al. (2005). Izolacija i pročišćavanjeakteozidi izoakteozid iz Plantago psyllium L. brzom protustrujnom kromatografijom. Journal of Chromatography A, 1063, 161–169.

Li, LL, Wang, XW, i Wang, XF (1997). Antilipidna peroksidacija i antiradikalsko djelovanje glikozida u herba Cistanches. China Journal of Chinese Materia Medica, 22, 364–367.

Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM, i Jia, ZJ (1993.). Zaštita fenilpropanoidnih glikozida iz Pedicularis protiv oksidativne hemolize in vitro. Planta Medica, 59, 315–317.

Lu, MC (1998). Studije o sedativnom učinkuCistanche deserticola.Časopis za etnofarmakologiju, 59, 161–165.

Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M. i Mitsuhashi, H. (1991.). Devet glikozida fenetilnog alkohola iz Stachys szeboldzz. Fitokemija, 30, 965–969.

Oka, F., Oka, H. i Ito, Y. (1991). Sustavna potraga za prikladnim dvofaznim sustavima otapala za brzu protustrujnu kromatografiju. Journal of Chromatography, 538, 99–108.

Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M. i Li, X. (1990.). Fenolni spojevi iz Plantago Asiatica. Fitokemija, 29, 3627–3631.

Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA, i Henriques, AT (1998). Protuupalna i antinociceptivna djelovanja ekstrakata i izoliranih spojeva iz Stachytarpheta cayennensis. Časopis za etnofarmakologiju, 60, 53–59. Shoyama, Y., Matsumoto, M. i Nishioka, I. (1987). Fenolni glikozidi iz oboljelog korijena Rehmannia glutinosa Var. Purpurea. Fitokemija, 26, 983–986.

Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY i Wang, XF (2001). Učinak čišćenja glikozidaCistanche deserticolana slobodne radikale i njegovu zaštitu od oštećenja DNA izazvanih OH in vitro. Časopis kineske farmakologije, 36, 29–31.

Wang, YM, Zhang, SJ, Luo, GA, Hu, YN, Hu, JP, Liu, L., Zhu,

Y. i Wang, HJ (2000). Analiza odfeniletanoidglikozidi u ekstraktu biljke Cistanchis pomoću LC/ESI-MS/MS. Acta Pharmaceutica Sinica, 35, 839–842.

Wong, C.-C., Li, H.-B., Cheng, K.-W., i Chen, F. (2006.). Sustavno istraživanje antioksidativne aktivnosti 30 kineskih ljekovitih biljaka korištenjem testa antioksidativne snage redukcije željeza. Kemija hrane, 97, 705–711. Xie, JH i Wu, CF (1993). Učinak etanolnog ekstraktaCistanche deserticolana sadržaj monoaminskih neurotransmitera u štakora

mozak. Kineski tradicionalni i biljni lijekovi, 24, 417–419.

Xiong, Q., Hase, K., Tezuka, Y., Tani, T., Namba, T. i Kadota, S. (1998.). Hepatoprotektivno djelovanjefeniletanoidiizCistanche deserticola. Planta Medica, 64, 120–125.

Xiong, QB, Kadota, S., Tani, T. i Namba, T. (1996.). Antioksidativni učinci feniletanoida izCistanche deserticola. Biological & Pharmaceutical Bulletin, 19, 1580–1585.

Zong, G., He, W., Wu, GL i Chen, LH (1996). Usporedbe izmeđuCistanche deserticolaYC Ma iCistanchecjevasti (Schenk) Wight na neke farmakološke aktivnosti. Časopis tradicionalne kineske medicine, 21, 436–438.