Analiza sastava Cistanche Tubulosa: Odvajanje i struktura feniletanoidnog glikozida i neolignanskog glikozida

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Sastavni dijelovi cistanche tubulosa (Schrenk) kuka. F. II.1) Izolacija i strukture novog feniletanoidnog glikozida i novog neolignanskog glikozida

Fumio Yoshizawa,* a Takeshi Deyama/ Nobuo Takizawa/ Khan UsmanghaniJ i Mansoor Ahmad6

Central Research Laboratories, Yomeishu Seizo Co., Ltd., 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Japan i Odjel za farmakognosiju, Farmaceutski fakultet Sveučilišta u Karachiju? Karachi-32, Pakistan. Primljeno 9. studenog 1989.

Novifeniletanoidni glikozidnazvan tubuloside E (I) i novineolignan glikozid, dehidridoniferil alkohol y-O-0-D-glukopranozid (II), izolirani su iz cijelih biljakaCistanche tubulosa(Schrenk) Kuka. f. (Orobanchaceae), zajedno s dehidrozodiferilnim alkoholom 4-O-^-D-glukopiranozidom (III), siringalidom A 3'-a-L- rhamnopyranoside (IV), izosiringalidom S'-a-L-rhamnopyranoside (V), (+ )-syringaresinol O-^-D-glucopyranoside (VI), ( + )-pinoresinol O-^-D-glucopyranoside (VII), liriodendron (VIII), 6-deoksikatalpol (IX), 8-epiIoganska kiselina (X), 20-hidroksiegoksizon (XI), 8-hidroksigeraniol l-j?-D-glukopyranoside (XII) i syringin (XIII). Struktura tubulozida E (I) uspostavljena je kao 2-(3,4-dihydroxy fenil)etil O-a-L-Rhamnopyranosyl-(l ->3)-2-O-acetil-4-O-p- coumaroyl-^-D-glukopiranozid na temelju kemijskih dokaza i spektralnih podataka.

Ključne riječi Cistanche tubulosa-, Orobanchaceae;feniletanoidni glikozid;iridoid; tubuloside E; dehidrodiconiferil alkoholni glikozid; syringalide rhamnoside;neolignan glikozid; 13C-NMRMOE

feniletanoidni glikozid u cistancheu

Sud je u prethodnom radu izvijestio o izolaciji i strukturnom određivanju novihfeniletanoidni glikozidi, tubulosides A一D iz cijelih biljakaCistanche tubulosa(Schrenk) Kuka. f. (Orobanchaceae) u Pakistanu.

Ovaj rad se bavi izolacijom i strukturnim razjašnjavanjem novogfeniletanoidni glikozid, nazvan tubuloside E (I) i novineolignan glikozid, dehidridoniferil alkohol ■/-Q-g-D-glukopiranozid (II), kao i izolacija 11 poznatih spojeva, dehidridoniferil alkohol 4-O-g-D-glukopiranozid (III), syringalide A 3'-a-L-rhamnopyranoside (IV), izosiringalid 3'-a-L-rhamnopyranoside (V), (+ )-syringaresinol O-g-D- glucopyranoside(VI), (+ )-pinoresinol O-g-D-glucopyrano- strana (VII), liriodendron (VIII), 6-deoksikatalpol (IX), 8- epiloganska kiselina (X), 20-hidroksieksison (XI), 8-hidroksigeraniol 1-gD-glukopiranozid (XII) i syringin (XIII.). Spojevi VI, VIII一X, XII i XIII prethodno su izolirani iz cistanche salse?"

Tubuloside E (I) izoliran je kao amorfni prah, C31H38O15 -3/2H2O, [a】D -134,0° (MeOH). Infracrveni (IR) spektar sugerirao je prisutnost hidroksilnih skupina (3430cm-1), konjugiranog estera (1734 cm-x), dvostruke veze (1634 cm-1) i aromatičnih prstenova (1608 i 1518cm-1). Protonska nuklearna magnetska rezonancija 0H-NMR) spektar I pokazao je signale zbog metilne skupine rhamnoze 0 1.07 (3H, d, J = 6 Hz)], acetoksilne skupine 0 1.98 (3H, s)], benzylnih metilenskih protona 0 2.72 (2H, t, J– 1 Hz)], glukozanomernog protona 0 4.54 (1H, d, J= 8 Hz)], rhamnoseanomerični proton 0 5.00 (1H, br s)], dva olefinska protona [<5 6.34,="" 7.66="" (1h="" each,="" d,="" j="16" hz)]="" and="" aromatic="" protons="" 0="" 6.50—7.46="">

Na acetilaciji, spoj sam si priuštio oktacetat (la), čiji je 】H-NMR spektar pokazao pet alifatskih acetoksilnih skupina 0 1,87, 1,95, 2,02 (po 3H, s), 2,10x2 (6H, s)] i tri aromatične acetoksilne skupine [<5 2.27,="" 2.28,="" 2.31="" (3h="" each,="" s)].="" as="" shown="" in="" table="" i,="" the="" carbon="" nuclear="" magnetic="" resonance="" (13c-nmr)="" spectrum="" of="" i="" was="" almost="" identical="" with="" that="" of="" 2'-acetylacteoside="" (ib)「)except="" for="" the="" signals="" due="" to="" the="" ^-coumaric="" acid="">

Na metanolizi I s acetil kloridom u metanolu na tankoslojnoj kromatografiji (TLC) i tekućoj kromatografiji visokih performansi (HPLC) otkriveni su metil p-koumarat i 3,4-dihidroksifnetilni alkohol.

Kisela hidroliza I s 10% sumporne kiseline priuštila je glukozu i rhamnozu u omjeru od 1 do 1.

Iz gore navedenih rezultata, struktura tubuloside E (I) uspostavljena je kao 2-(3,4-dihydroxy fenil)etija 1 O-a-L- rhamnopyranosyl-( 1 -^3)-2-(?-acetil-4-O-/>-coumaroyl-^- D-glukopiranozid.

Spoj III izoliran je kao amorfni prah, [a]D – 56,4° (MeOH). Enzimska hidroliza III priuštila je aglikon (Illb) kao amorfni prah, [0]270 -11300, [a]D –31,6° (MeOH) i glukozu. Spojevi ILLB i III identificirani su kao dehidrodiconiferil alkohol3,4) i njegov 4-O-#-D-glukopiranozid,3,4), u usporedbi s autentičnim uzorcima (TR,】H- i 13C-NMR spektri).

Spoj II izoliran je kao amorfni prah, [a]D 一 7,4° (MeOH), čiji je IR spektar sugerirao prisutnost hidroksilne skupine (3430 cm-1) i aromatičnog prstena (1614,1522,1502 cm T). 〔H-NMR II pokazao je signale zbog dvije aromatične metoksilne skupine 0 3,74, 3,80 (po 3H, s)], benzyličnog protona 0 5,45 (1H, d, J=6Hz)], dva trans olefinska protona 0 6,17 (1H, dt, J= 16, 7 Hz), d 6,58 (1H, d, J = 16 Hz)] i pet aromatičnih protona 0 6,7一7,1 (5H, m)]. Na acetilaciji, spoj II omogućio je heksaacetat (Ila), čiji je "H-NMR spektar pokazao pet alifatskih acetilnih signala 0 2.01, 2.03, 2.09, 2.06 (3H, 3H, 3H, 6H)]. Enzimska hidroliza II priuštila je aglikon (lib) i glukozu. Složeni lib izoliran je kao amorfni prah, [a]D + 34,8 ° (MeOH), čiji su IR, iH- i 13C-NMR spektri bili gotovo identični onima Illb-a, osim [a]D vrijednosti i spektra kružnog dikromizma (CD).

Apsolutna konfiguracija liba razjašnjena je usporedbom njegovog CD spektra s onim Illba i III-a, čija je stereokemija potvrđena u objavljenim podacima.4) CD spektar liba pokazao je A & +14100 (270) i +15200 (283) kao pozitivnu maksimu, s druge strane, onaj Illb pokazao je A & -11300 (270) i -10990 (283) kao negativnu maksimu. Ove činjenice sugeriraju da su Lib i Illb enantiomeri jedni drugih. Stereokemija lib mora biti prikazana na Grafikonu 1.

Tako je utvrđeno da je spoj II dehidridoniferil monoglukozid. Položaj glukoze

odnosno. Pomaci odgovarajućih ugljika u odlasku na II iz liba bili su – 4,4 i +7,3 ppm, što je ukazivalo na to da je glukozilna moiety u II. bila povezana s hidroksilnom skupinom na C-y' atomu.5)

Iz gore navedenih rezultata, spoj II je ustanovljen kao dehidrodiconiferil alkohol y'-O-^-D-glukopiranozid.

Spojevi IV i V izolirani su kao amorfni prah (IV, C29H36O14 • 5/2H2O; V, C29H36O14- 1/2H2O). IR spektri sugerirali su prisutnost hidroksilnih skupina (3400cm7), dvostruke veze (1634cm-1) i aromatičnih prstenova (1606 i 1518cm-1). Na acetilaciji su spojevi IV i V priuštili oktaacetate (IVa, Va), čiji su spektri 1H-NMR pokazali pet alifatskih acetoksila i tri aromatična acetoksilna signala. Spojevi IVa i Va identificirani su kao syringalide A 3'-a-L-rhamnopyranoside oktaaketat i izosiringalid 3'-a-L-rhamnopyranozid oktaaketat, odnosno usporedbom (以 IR i 】H-NMR) s autentičnim uzorcima.6) "H- i 13C-NMR spektar IV i V podržava te strukture (vidi Eksperimentalno). Spojevi VI – XIII identificirani su kao (+ )-šprice- esinol O-少-D-glukopiranozid (VI),2c) (+ )-pinoresinol O- jS-D-glukopiranozidid (VII),7) liriodendrin (VIII),2Z,) 6-de- oksikatalpol (IX),2c) 8-epiloganska kiselina (X),2fl) 20-hidro- ksieksizon (XI),8) 8-hidroksigeraniol 1-0-D-D-copyrano- strana (XII)i štrcaljka (XIII),2d), u usporedbi s autentičnim uzorcima uzoraka

Eksperimentalnim

Točke taljenja određene su na mikro-talištu Mitamura i neispravljene su. Optičke rotacije izmjerene su digitalnim polarimetrom JASCO DIP-140. IR spektri zabilježeni su s Hitachijevim spektrofotometrom 279-30 IR i ultraljubičastim (UV) spektrima s Hitachijevim spektrofotometrom 200-20. CD spektri snimljeni su JASCO J-20A CD spektrofotometrom i masenim spektrima (MS) s JEOL JMS-100. "H-NMR i 13C-NMR spektri zabilježeni su STROJEM JEOL FX-90Q (89,55 odnosno 22,5 MHz).

Kemijski pomaci daju se na d (ppm) ljestvici s tetrametilsilanom (TMS) kao unutarnjim standardom. Kratice koje se koriste za podatke o nuklearnoj magnetskoj rezonanciji (NMR) su sljedeće; s, potkošulja; d, doublet; t, triplet; q, kvartet; br, široka. Plinska kromatografija (GC) provedena je na Shimadzu GC-4CM aparatu s detektorom ionizacije plamena. HPLC je izveden na Hitachi 655A-11 stroju. Silikagel (Wako gel C-300) korišten je za kromatografiju stupca. Silikagel 60 F254 (Merck) prekuhane ploče korištene su za TLC, a detekcija je provedena prskanjem 10% H2SO4 nakon čega je uslijedilo zagrijavanje.

Izolacija

Cijele biljkecistanche tubulosa(7 kg), prikupljenih u prosincu 1986. u Karachiju u Pakistanu, izvađeno je MeOH -om (20 1 x 2) pod refluksom. Ekstrakt je koncentriran pod smanjenim tlakom i ostatak je suspendiran u vodi. Ova suspenzija je ekstrahirana EtOAc-om zasićenim vodom. Sloj vode bio je podvrgnut stupcu Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.) i opran H2O-om, a zatim izmakao MeOH-om. MeOH eluat (140 g) kromatografiran je na poliamidnom stupcu C-200 (Wako Pure Chemical) pomoću H2O, a zatim MeOH-a za davanje dvije frakcije (frakcija 1, H2O eluat; frakcija 2, MeOH eluat). Frakcija 1 je bila koncentrirana da da ostatak. Ostatak je kromatografiran na stupcu silikagela pomoću CHCl3-MeOH-H2O više puta. Nakon ponovljene kromatografije HPLC-a (stupac, Develosil ODS-10, 20 x 250 mm; otapalo; H2O-CH3CN ili H2O-MeOH), izolirano je 10 spojeva [II (45 mg), III (40 mg), VI (35 mg), VII (43 mg), VIII (12 mg), IX (8 mg), X (10 mg), XI (20 mg), XII (10 mg) i XIII (3,6 mg)]. Frakcija 2 tretirana je na isti način kao i frakcija 1 i dala je spojeve I (150 mg), IV (10 mg) i V (lOmg).

Tubuloside E (I)

Amorfni prah, [a]p3 –134,0° (c= 1,5, MeOH). Calcd. za C31H38O15 -3/2H2O: C, 54,98; H, 6:10. Pronađeno: C, 55.01; H, 5.98. IR cm-1: 3430,1732, 1634, 1608,1518. ]H・NMR (MeOH-4) 3: 1,07 (3H, d, J =6Hz, CH3 of rhamnose), 1,98 (3H, s, OAc), 2,72 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH2~), 4,54 (1H, d, J=8Hz, H-l glukoze), 5,00 (1H, brs, H-l of rhamnose), 6,34 (1H, d, J= 16Hz, Ar-CH = CH-), 6,5一6,8 (3H, aromatični H), 6,80 (2H, d, D, J-9Hz, H-3; H-5'), 7.46 (2H, d, J=9Hz, H-2; H-6Z), 7,66 (1H, d, J= 16 Hz, Ar–CH = CH—). 13C-NMR: Tablica L

Dehidrodiconiferil alkohol y^-O-^-D-GIucopyranoside (II)

Amorfni prah, [a]^5 –7,4° (c= 1,6, MeOH). IR cm"1: 3430, 1614, 1522, 1502. UV h nm: 227 (sh), 280. H・NMR (DMSO-rf6) J: 3.74, 3.80 (3H svaki, s, OCH3), 5.45 (1H, d,丿=6Hz, H-a), 6.17 (1H, dt,丿=16, 7Hz, H-#), 6.58 (1H, d〃= 16Hz; H-az), 6,7–7,1 (5H, m, aromatični H). 13C-NMR: Tablica I.

Dehidridoniferil alkohol 4-O-j8-D-Glukopiranozid (III)

Amorfni prah, [a]^5 -56.4。 (c= 1.1, MeOH). IR cm-1: 3400, 1604, 1566, 1502. UV 11 nm; 222, 277. XH-NMR (DMSO-(76) 6: 3,76, 3,82 (po 3H, s, s, OCH3), 5,52 (1H, d, J-7 Hz, H-a), 6,18 (1H, dt, J =16, 7 Hz, H-^), 6,49 (1H, d,<7=16 hz,="" h-"),="" 6.7—7.2="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="">

Syringalide A 3'-(x-L-Rhamnopyranoside (IV)

Kalcd za C29H36O14 • 5/2H2O: C, 56,11; H, 5.94. Pronađeno: C, 56.40; H, 6.04. IR cm –% 3400, 1606, 1518. 】H・NMR (MeOH-J4) d: 1,15 (3H, d, J-6 Hz, CH3 rhamnoze), 2,90 (2H, t, J-7 Hz, Ar-CH2-), 4,46 (1H, d, J =8Hz, H-l glukoze), 5,27 (1H, brs, H-l rhamnoze), 6,35 (1H, d, J-16Hz, Ar–CH = CH—CH—), 6,6–7,3 (3H, aromatični H), 7,68 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH = CH-). 13C-NMR (CD3OD) 8: 130.6 (C-l), 116.1 (C-2), 130.8 (C-3, 156.6 (C-4), 116.1 (C-6), 72.1 (C-a, rham-2, 3), 36.2 (C-8), 127.6 (C-r), 114.6 (C2), 149.6 (C・3'),146.6 (C-4'),116.4 (C-5'), 123.1 (C-6'),168.2 (C・a'),115.2 (C书),147.0 104.0 (glu-1), 76.0

(glu-2), 81,5(glu-3), 70,3 (glum-4), 75,9 (glu-5), 62,3 (glu-6), 102,8 (rham-1), 73,7 (rham-4), 70,5 (rham-5), 18,3 (rham-6).

Izosyringalide S^a-L-Rhamnopyranoside (V)

Kalcd za C29H36O14-1/2H2O: C, 56,31; H, 5.96. Pronađeno; C, 56,40; H, 6.04. IR 唸cm-1: 3420, 1608, 1518. XH-NMR (MeOH-J4) d: 1.09 (3H, d,丿=6Hz, CH3 of rhamnose), 2,80 (2H, t, J-6 Hz, Ar-CH2-), 4,40 (1H, d, J=8Hz, H-l glukoze), 5,23 (1H, br s, H-l rhamnose), 6,37 (1H, d, J-18Hz, AsCH = C旦'一),6,6–7,2 (3H, aromatični H), 7,71 (1H, d, 丿=18Hz, Ar-CH = CH-y 13C-N (CD3OD)MR S: 131.4 (C-l), 116.3 (C-2), 144.5 (C-3X 146.0 (C-4), 117.0 (C-5), 121.2 (C-6), 72.2 (C-a), 36.5 (C/), 127.1 (C-r), 116.8 (C-2\ 69, 131.2 (C-3\ 5'), 161.2 (C-4'), 168.2 (CH), 114.7 (C-^), 147.5 (C-y), 104.1 (glu-1), 76.1 (glu-2), 81.5 (glu-3), 147.5 (C-y), 104.1 (glu-1), 76.1 (glu-2), 81.5 (glu-3), 147.5 (C-y), 104.1 (glu-1), 76.1 (glu-2), 81.5 (glu-3), 147.5 (C-y), 104.1 (glu-1), 76.1 (glu-2), 81.5 (glu-3), 147.5 (glu-3), 147.5 (C-y), 104.1 (glu-1), 76.1 (glu-2), 81.5 (glu-3), 147.5 (glu-3), 147.5 (C-y), 104.1 (glu-1), 76.1 (glu-2), 81.5 (glu-3), 147.5 (glu-3), 147.5 (C-y), 104.1 (glu-1), 76.1 (glu-2), 81.5 (glu-3), 147.5 (glu-3), 147.5 (C-y), 104.1 (glu-1), 76.1 (glu-2), 81.5 (glu-3), 147.5 (glu-

70.2 (glu-4), 75.9 (glu-5), 62.3 (glu-6), 102.8 (rham-1), 72.1 (rham-2, 3), 73.7 (rham-4), 70.6 (rham-5), 18.4 (rham-6).

(+ )-Syringaresinol O-j?-D-Glucopyranoside (VI)

Amorfni prah, [a]g5 —14.4。 (c = 0,1, MeOH). Kalcd za C28H36O13: C, 57.93; H, 6:25. Pronađeno: C, 58.01; H, 6.26. IRv^cm-1: 3430, 1600, 1518. 】H・NMR (DMSO"6)。 : 3.78 (12H, s? OCH3 x 4), 6,60,6,66 (po 2 K, s, aromatični H).

(+ )-Pinoresinol O-^-D-Glucopyranoside (VII)

Amorfni prah, [a]^5 +38,9° (c = 0,6, MeOH). Kalcd za C26H32O11 T/2H2O: C, 58,97; H, 6.28. Pronađeno: 58.94; H, 6.29. IR cm-1: 3425, 1606, 1516. 】H-NMR (C5D5N) W 3.77, 3.80 (po 3H, s, OCH3), 6.9– 7.7 (6H, m, aromatični H).

Liriodendron (VIII)

Bezbojne igle (MeOH), mp 255一257 °C, [a]p5 -9,2° (c=L3, piridin). IR cm-1: 3400, 1598, 1510. XH-NMR (DMSO/6)<5: 3.78="" (12h,="" s,="" och3x4),="" 6.67="" (4h,="" s,="" aromatic="">

6-Deoksikatalpol (IX)

Bezbojne igle (MeOH), mp 204–206 °C, [a]p5 -50,1° (c = 0,7, MeOH). Analni, Calcd za C15H22O9: C, 52.02; H, 6:40. Pronađeno: C, 52.12; H, 6.41. IR 唸cm-1: 3400, 1658. 】H・NMR (D2O) 3:

l. 3–1,9 (1H, m, H-6), 2,1 –2,7 (3H, m, H-5, H-6, H-9), 3,65 (1H, s-like, H-7), 3,90, 4,35 (2H, ABsystem, J=13Hz, H-10), 4,92 (1H, d, J=7 Hz, aromererni H), 5,10 (1H, dd, J=6, 4Hz, H-4), 5,12 (1H, d, d, J-10Hz, H-l), 6,38 (1H, dd, 1Hz, H-3).

8-epiloganska kiselina (X) Bezbojne igle (MeOH), mp 147一149 °C, [a]p5 — 135,0° (c= 1,0, piridin). Kalcd za C16H24O10 H2O: C, 48.73; H, 6:65. Pronađeno: C, 48.60; H, 6:70. IR v;cm-1: 3400, 1680, 1640, 1430. 】H・NMR (C5D5N)<5: 1.18="" (3h,="" d,="" j="7Hz," ch3),="" 2.2—2.5="">

m, H-6), 2,60 (1H, m, H-8), 3,08 (1H, dt, J=3, 8,5Hz, H-9), 3,58 (1H, m, H-5), 5,40 (1H, d, J=7,5Hz, anomerični H), 5,91 (1H, d〃=3Hz, H-l), 7,92 (1H, s, H-3).

20-hidroksiegdizon (XI)

Kristalno krutina, mp 241一242 °C, [a]p5 + 70,0° (c= LI, MeOH). Kalcd za C27H44O7: C, 67.47; H, 9.23. Pronađeno: C, 67.28; H, 9.18. IR cm-1: 3440, 1646. XH-NMR (C5D5N) 1.06 (3H, s, H-19), 1.20 (3H, s, H-18), 1.36 (6H, s, H-26, H-27)? 1,58 (3H, s, H-21), 6,24 (lH,d, J =2Hz, H-7). 13C-NMR (C5D5N): 38,0 (C-l),

68.2 (C-2, C-3), 32.5 (C・4), 51.5 (C-5), 203.7 (C-6), 121.8 (C-7), 166.3 (C-8), 34.6 (C-9), 38.8 (C-10), 21.3 (C-ll), 31.9 (C-12), 48.2 (C-13), 84.4 (C-14), 32.1 ( C-15), 21.6 (C-16), 50.2 (C-17), 18.0 (C-18), 24.6 (C-19), 77.0 (C-20), 21.8 (C-21), 77.7 (C-22), 27.6 (C-23), 42.7 (C-24), 69.8 (C-25), 30.1 (C-26, 27).

8-Hidroksigeraniol 1-^-D-GIucopyranoside (XII)

Bezbojne igle (MeOH), mp 58–60°C, [a]^5 —40.1。 (c=L2, MeOH). Kalcd za C16H28O71/2H2O: C, 56.29; H, 8.56. Pronađeno: C, 56.40; H, 8:50. IR cm"1: 3350, 1670, 1446. XH-NMR (C5D5N)<5: 1.72,="" 1.59="" (3h="" each,="" s,="" ch3),="" 2.04="" (4h,="" brm,="" h-4,="" h-5),="" 4.80="" (1h,="" d,="" j="7.5Hz," anomeric="" h),="" 5.56="" (2h,="" brt,="" j="7Hz,">

Štrcaljka (XIII)

Bezbojne igle (MeOH), mp 188一189 °C, [a]^5 — 15,3° (c = 0,4, MeOH). Kalcd za C17H24O9: C, 55.13; H, 6.53. Pronađeno: C, 54.83; H, 6:50. IR cm-1: 3400, 1592, 1514. "H-NMR (DMSO/6)W 3,78 (6H, s, OCH3 x 2), 6,3–6,5 (2H, m, —CH = CH—), 6,72 (2H, s, aromatični H).

Acetilacija I spoja I (50 mg) otopljena je u piridinu (l ml) i octenom anhidridu (1 ml) i ostavljena na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcijska smjesa izlivena je u ledenu vodu, a zatim ekstrahirana EtOAc-om. Ekstrakt EtOAc bio je koncentriran u vakuo, a ostatak je kromatografiran na stupcu silikagela pomoću benzen-acetona (5:1) kako bi se dobio oktataketat (la) (35 mg). IR cm"1: 1760, 1638, 1604, 1508. iH-NMR(CDC13)(5: 1,02 (3H, d, J = 6Hz, CH3 rhamnoze), 1,87, 1,95, 2,02 (po 3H, s, OAc), 2,10 (6H, s, OAc x 2), 2,27, 2,28, 2,31 (po 3H, s, Ar-OAc), 2,90 (2H, t, J = 7Hz, Ar-CH2-), 6,38 (1H, d, J=16Hz, AR~CH = CH-), 6,80—7,15 (3H, m, aromatični H), 7,24 (2H, d, J-9 Hz, J-9 Hz, H-3\ H・5'), 7,55 (2H, d,丿=9Hz, H-2, H-6), 7,72 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH = CH-).

Acetilacija II. i III.

Spojevi II i III (po 20 mg) acetilirani su na isti način kao što je opisano za spoj I i dali su heksaacetate [Ila (12 mg), Illa (15 mg)]. Ila: IR 唸顋 cm-1: 1754, 1608, 1506. 】H・NMR (CDC13) 5: 2.01, 2.03, 2.09 (3H svaki, s, OAc), 2.06 (6H, s, OAc x 2), 2.30 (3H, s, OAc), 3.84 (3.95 (3H svaki, s, OCH3), 5.54 (1H, d,丿=6Hz, H-a), 6.05 (1H5 dt, J=16, 7Hz, H-^), 6.53 (1H, d, «/= 16Hz, H-a'), 6.8一7.1 (5H, m, aromatični H). Illa: IR v^cm 1: 1760, 1604, 1516. 】H-NMR (CDC13)<5: 2.05="" (9h,="" s,="" oac="" x="" 3),="" 2.08="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.11="" (3h,="" s,="" oac),="" 3.80,="" 3.92="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 5.51="" (1h,="" d,="" j="7Hz," h-a),="" 6.14="" (1h,="" dt,="" j="16," 7hz,="" h-#),="" 6.62="" (1h,="" d,丿="16Hz,">

(5H, m, aromatični H).

Acetilacija IV i V

Spojevi IV i V acetilirani su na isti način kao što je opisano za spoj I i dani su oktaacetati [IVa, Va]. IVa: IR 唸児 cmT: 1754, 1636, 1514. 】H・NMR (CDC,) W 1.03 (3H? d, J =6Hz, CH3 od rhamnose), 1,87, 1,94, 1,99 (po 3H, s, OAc), 2,09 (6H, s, OAcx2), 2,28 (6H, s, OAcx2), 2,30 (3H, s, OAc), 2,86 (2H, t, J =6,6Hz, Ar■-CH?—), 3,67 (2H, t, J =7,2Hz Ar-CH2~CH2-), 6,35 (1H, d, J=16Hz, AsCH = CU—), 6,87–7,35 (3H, m, Ar–7,09 (4H, q, J=8,6Hz, A2/B2/tip), 7,65 (1H, d, J=16Hz, Ar CH = CH ). Va: IR cm-1: 1750, 1636, 1608, 1514. ^-NMR (CDC13) 1.03 (3H, d,<7= 6="" hz,="" ch3="" for="" rhamnose),="" 1.87,="" 1.94,="" 2.02="" (3h="" each,="" s,="" oac),="" 2.09="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.28="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.31="" (3h,="" s,="" oac),="" 2.86="" (2h,="" t,="" j="6.6" hz,="" ar-ch2-),="" 3.73="" (2h,="" t,=""><7=6.6 hz,="" ar="" ch2-ch2-),="" 6.34="" (lh,d,="" j="16" hz,="" ar—ch="" —="" ch—),="" 6.78—7.20="" (3h,="" m,="" ar—h),="" 7.31="" (4h,="" q,=""><7=8.5>

A2zB/tip), 7,71 (1H, d, «/=16Hz, Ar-CH = CH ).

Metanoliza I.

Spoj I (oko 1 mg) refluksiran je metanolnim 5% CH3COC1 (2 ml) tijekom 30 min, a zatim je reagens isparen u vakuu. Prisutnost metil p-kumarata i 3,4-dihidroksifenetilnog alkohola u ostatku otkrili su TLC [CHCl3-MeOH (10:1)] i HPLC [stupac, Develosil ODS-7 (4,6 x 250 mm); otapalo, 55% MeOH; detektor (UV), 220 nm; brzina protoka, 1,0 ml / min]. Metil p-coumarat; Rf 0,82, ; R (min) 8.8, 3,4-dihidroksifenetil alkohol;母0.31, tR (min) 3.2.

Hidroliza kiseline I A

otopina spoja I (2 mg) u 10% H2SO4 (1 ml) zagrijana je u kipućoj vodenoj kupelji 30 minuta. Otopina je prošla kroz stupac Amberlit IR-45 i koncentrirana da daje ostatak, koji je smanjen natrijevim borohidridom (oko 3 mg) za 1 h. Reakcijska smjesa prošla je kroz stupac Amberlit IR-120 i koncentrirana na suhoću. Borna kiselina uklonjena je destilacijom s MeOH-om, a ostatak je acetiliran octenim anhidridom (1 kap) i piridinom (1 kap) na 100 °C za 1 h. Reagensi su isparili u vakuou. Glucitol acetat i rhamnitol acetat otkriveni su u omjeru 1 prema 1 iz spoja I od strane GC-a. Stanje: stup, 1,5% OV-17, 3 mm x 1,5 m; temperatura stupca, 180 °C; plin nosač, N2 (30 ml/min). tR (min): 2.0 (rhamnitol acetat), 5.5 (glucitol acetat).

Enzimska hidroliza II i III spoja II

(13 mg) ili III (40 mg) hidrolizirana je celulazom (40 mg) u vodi (1 ml) za 2h na 37 °C. Reakcijska smjesa je izvađena s EtOAc-om. Ekstrakt EtOAc koncentriran je u vacuo kako bi se dobio ostatak, koji je kromatografiran na HPLC -u [stupac, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm); otapalo. II: H2O-CH3CN (77.5:22.5); III: H2O-CH3CN (80:20); detektor (UV), 205 nm; protok, 6,0 ml /min] dati lib (3,3 mg), Illb (5,7 mg). lib: [a]^5 + 34,8° (c = 0,3, MeOH). CD (c = 3,3 mg/10ml, MeOH) [0]25 (nm): 1740 (330), 15200 (283), 14100 (270), 0 (247), - 16700 (232). IR 唸E; cm"1: 3380, 1606, 1520, 1500. UV nm: 276. MS m/ž (%): 358 (M + , 53), 340 (M+ -H2O, 100), 338 (58), 325 (47), 310 (23), 162 (41), 151 (36), 137 (59). XH-NMR (aceton-J6)<5: 3.55="" (1h,="" brt,=""><7=6hz, h-g),="" 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 4.19="" (2h,="" brd,="" j-5hz,="" h-yz),="" 5.56="" (1h,="" d,="" j="6," 5="" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,=""><7=16, 5="" hz,="" h-#),="" 6.56="" (1h,="" brd,="" j="16Hz," hh),="" 6.7—7.1="" (5h,="" m,="" aromatich).="" 13c-nmr:="" tablel.iiib:="" [a]-31.6°="" (c="0.6," meoh).="" cd="" (c="2.28mg/lOml," meoh)="" [0]25="" (nm):="" 2200="" (330),="" 0="" (310),="" -10990="" (283),="" -11300="" (270),="" 0="" (242),="" 5650="" (232).="" 0-nmr="" (acetone-j6)=""><5: 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3="" x="" 2),="" 4.19="" (2h;="" brd,="" j="5Hz," h”')，5.56="" (1h,="" d,丿="6.5" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,丿="16," 5="" hz,="" h・#),="" 6.52="" (1h,="" d,="" j="16" hz,="" h-az),="" 6.7一7.1="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="" i.="" the="" ir="" and="" uv="" spectra="" were="" similar="" with="" that="" of="">

PriznanjeZahvalni smo prof. A. Uenu i dr. T. Miyaseu, Sveučilištu Shizuoka, na mjerenjima NMR i CD spektra, te na njihovim vrijednim prijedlozima, te dr. M. Kikuchiju, Farmaceutskom fakultetu Tohoku, na pružanju autentičnih uzoraka.

Reference i bilješke

1) H. Kobayashi, H. Oguchi, N. Takizawa, T. Miyase, A. Ueno, K. Usmanghani iM. Ahmad, Chem. Pharm. Bull., 35,3309 (1987).

2) a) H. Kobayashi i J. Komatsu, Yakugaku Zasshi, 103, 508 (1983.); b) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase i S. Fukushima, Chem. Pharm, Bull., 33, 1452 (1985.); c) Idem, isto, 33, 3645 (1985.); d) H. Karasawa, H. Kobayashi, N. Takizawa, T. Miyase i S. Fukushima, Yakugaku Zasshi. 106, 721 (1986).

3) H. D. Ludemann i H. Nimz, Die Makromolekulare Chemie., 175, 2393 (1974).

4) a) H. Achenbach, J. Grob, X. A. Dominguez, G. Cano, J. V. Star, L. C. Brussolo, G. Munoz, F. Salgado i L. Lopez, Fitokemija. 26, 1159 (1987); b) A. N. Binns, R. N. Chen, H. N. Wood i D. G. Lynn, proc. c) D. G. Lynn, R. H. Chen, K. S. Manning i H. N. Wood, isto, 84, 615 (1987).

5) T. Deyama, T. Ikawa, S. Kitagawa i S. Nishibe, Chem. Pharm. Bull., 35, 1803 (1987).

6) M. Kikuchi, Y. Yamauchi i F. Tanabe, Yakugaku Zasshi, 107, 350 (1987).

7) M. Chiba, S. Hisada, S. Nishibe i H. Thieme, Fitokemija, 19, 335 (1980).

8) a) H. Hikino, Y. Hikino, Fortschritted. Naturst., 28, 256 (1970);); b) R. W. Miller, J. Clardy, J. Kozlowski, K. L. Mikolajczak, R. D. Plattner, R. G. Powell, C. R. Smith, D. Weisleder i Q.-T. Zheng, Planta Medica, 1985, 40.