Čitač RNA M6 A YTHDF2 kontrolira antitumorski i antivirusni imunitet NK stanica 6. dio
Feb 22, 2024
Model metastatskog melanoma i MCMV izazov
B16F10 stanice (105) ubrizgane su iv miševima. 14 dana nakon injekcije, miševi su eutanazirani za postmortem analizu. Metastatski noduli u plućima analizirani su makroskopski i izbrojani. Staničnu liniju B16F10 osigurao je Hua Yu (City ofHope, Los Angeles, CA). Ythdf2ΔNK i Ythdf2WT miševi zaraženi su ip injekcijom Smith soja MCMV (2,5 × 104 PFU), koji je kupljen od American Type Culture Collection (VR-1399). Uzorci periferne krvi dobiveni su submandibularnom punkcijom 0, 4 i 7 dana nakon infekcije.
Noduli plućnih metastaza odnose se na čvorove formirane od malignih tumorskih stanica s drugih mjesta koje migriraju u pluća putem krvi ili limfnog sustava. Za mnoge pacijente ovo je uobičajena manifestacija raka pluća.
Međutim, iako čvorići s metastazama u plućima predstavljaju prijetnju fizičkom zdravlju pacijenata, ne postoji izravna povezanost između njih i pamćenja. Stoga se trebamo aktivno suočiti s izazovima raka pluća i plućnih metastaznih nodula te ne dopustiti da negativne emocije i tjeskoba utječu na naše fizičko i psihičko zdravlje.
Istovremeno, nekim pozitivnim metodama možemo održati i poboljšati pamćenje. Na primjer, vježbajte pamćenje, kao što su matematički izračuni, čitanje, slušanje glazbe, igranje igrica itd. Osim toga, pridržavanje dobrih životnih navika, poput redovite tjelovježbe, dovoljno sna, zdrave prehrane itd., također može poboljšati naše pamćenje.
Najvažnije je zadržati pozitivan stav. Bez obzira na sve poteškoće koje imate, morate vjerovati u svoju snagu i fleksibilnost svog živčanog sustava te ćete pozitivnim prilagodbama i odgovorima na kraju uspješno prevladati poteškoće.
Ukratko, iako metastatski čvorovi u plućima predstavljaju prijetnju fizičkom zdravlju, oni nisu izravno povezani s pamćenjem. Trebali bismo se s tim suočiti pozitivno i održavati i poboljšavati svoje pamćenje prilagodbom načina života i održavanjem dobrog stava. Vidi se da moramo poboljšati pamćenje, a Cistanche deserticola može značajno poboljšati pamćenje, jer Cistanche deserticola također može regulirati ravnotežu neurotransmitera, poput povećanja razine acetilkolina i faktora rasta. Ove tvari su vrlo važne za pamćenje i učenje. Osim toga, Cistanche deserticola također može poboljšati protok krvi i pospješiti opskrbu kisikom, što može osigurati da mozak dobije dovoljno hranjivih tvari i energije, čime se poboljšava vitalnost i izdržljivost mozga. Vidi se da moramo poboljšati pamćenje, a Cistanche deserticola može značajno poboljšati pamćenje, jer Cistanche deserticola također može regulirati ravnotežu neurotransmitera, poput povećanja razine acetilkolina i faktora rasta. Ove tvari su vrlo važne za pamćenje i učenje. Osim toga, Cistanche deserticola također može poboljšati protok krvi i pospješiti opskrbu kisikom, što može osigurati da mozak dobije dovoljno hranjivih tvari i energije, čime se poboljšava vitalnost i izdržljivost mozga.
Kliknite znajte dodatke za jačanje pamćenja
Za mjerenje količine virusa u perifernoj krvi, slezeni i jetri, DNK je izolirana pomoću QIAGEN DNeasy Blood and Tissue Kit za qPCR analizu. Korišteni su sljedeći primeri: MCMV-IE1,59-AGCCACCAACATTGACCACGCAC-39 (naprijed) i MCMVIE1, 59-GCCCCAACCAGGACACACAACTC-39 (obrnuto).
In vivo liječenje miševa s IL-15
Za in vivo liječenje miševa s IL-15, Ythdf2ΔNK i Ythdf2WT miševima ubrizgano je 2 µg ip rekombinantnog ljudskog IL-15 (kat. br. 745101; Nacionalni institut za rak) tijekom 5 dana. Tretirani i kontrolni miševi zatim su eutanazirani za protočnu citometrijsku analizu.
Protočna citometrija
Jednostanične suspenzije pripremljene su iz BM-a, krvi, slezene, jetre i pluća Ythdf2ΔNK i Ythdf2WT miševa kao što je prethodno opisano (Wang et al., 2018b). Analiza protočnom citometrijom i sortiranje stanica provedeni su na LSRFortessa X-20 i FACSAriaFusion Flow Cytometer (BD Biosciences).
Podaci su analizirani pomoću softvera NovoExpress (Agilent Technologies).
Korištena su sljedeća antitijela označena fluorescentnom bojom BD Biosciences, BioLegend, Invitrogen ili Cell Signaling Technology: CD3ε (145-2C11), CD19 (1D3), Gr-1 (RB6-8C5 ),TER-119 (TER-119), CD11c (N418), CD4 (GK1.5), CD8 (53-6.7),CD122 (5H4), CD132 (TUGm2), NK1.1 (PK136), CD11b (M1/70), CD27 (LG.3A10), CD117 (2B8), CD127 (SB/199), CD135 (A2F10.1), KLRG1 (2F1), CD45 ({{46 }}F11), CD45.1 (A20), CD45.2 (104), IFN- (XMG1.2), 2B4 (m2B4), granzim B (QA16A02), perforin (S16009A), Ly49H (3D10), Ly49D ( 4e5), CD69 (H1.2F3), CD226(TX42.1), NKG2D (CX5), NKG2A (16A11), NKp46 (29A1.4), TIGIT(1G9), PD-1 (J43), aneksin V, Ki67 (b56), Tbet (4b10) i Eomes (WD1928), fosfo-p44/42 Erk1/2 (Thr202/Tyr204, #9101), fosfo-Akt (Ser473, #5315), fosfo-S6 ribosomalni protein fosfo-Stat3 (Tyr705, #9145) i fosfo-Stat5 (Tyr694, #9539).
Za procjenu proliferacije NK stanica, stanice su obilježene s 5 µM CTV (Invitrogen) u skladu s protokolom proizvođača prije prijenosa u miševe primatelje. Intracelularno bojenje Ki67, Tbet i Eomes provedeno je fiksiranjem i permeabilizacijom s Foxp3/Transcription Factor Staining Kit (eBioscience).
Za detekciju fosforiliranih proteina, pročišćene NK stanice slezene prethodno su tretirane rekombinantnim humanim IL-15 (50 ng/ml) tijekom 1 h, a zatim fiksirane s Phosflow Fix puferom I nakon čega je uslijedila permeabilizacija s Phosflow Perm puferom III (BD Biosciences) i bojenje s protutijela.
Adoptivni prijenos stanica
Za procjenu učinka nedostatka Ythdf2 na sazrijevanje NK stanica, mješavina 5 × 106 BM stanica u omjeru 1:1 iz CD45.1 ili Ythdf2ΔNK CD45.2 miševa kotransferirana je u Rag2-/-Il2rg-/-miševe. Rekonstitucija primatelja procijenjena je protočnom citometrijom 8 tjedana nakon transplantacije.
Za pokuse homeostatske proliferacije izazvane limfopenijom, jednak broj pročišćenih slezenskih NK stanica iz CD45.1 ili Ythdf2ΔNK CD45.2 miševa kotransferiran je u Rag2−/−Il2rg−/− miševe nakon čega je uslijedila procjena relativnih postotaka prenesenih WT i Ythdf2ΔNK NK stanica u slezeni primatelja Rag2−/−Il2rg−/− protočnom citometrijom u naznačenim vremenskim točkama.
Za metastatski model melanoma, 106 IL-2-proširenih NK stanica iz Ythdf2ΔNK ili Ythdf2WT miševa ubrizgano je iv u Rag2−/−Il2rg−/− miševe. 1 dan kasnije, B16F10 stanice (105) ubrizgane su iv u miševe. 14 dana nakon injekcije, miševi su eutanazirani za postmortem analizu. U nekim eksperimentima, stanice su obilježene s CTV (5 µM, Invitrogen) kako bi se pratila stanična proliferacija prije prijenosa.
In vivo ispitivanje prometa
Za otkrivanje prometa NK stanicama iz BM u perifernu krv, 1 µg iv APC-obilježenog anti-CD45 antitijela ubrizgano je u miševe C57BL/6. Dvije minute nakon injekcije antitijela, miševi su odmah eutanazirani, a BM stanice su sakupljene za protočnu citometriju nakon što su stanice obojene antitijelima CD3 i NK1.1. Parenhimske NK stanice identificirane su nedostatkom CD45 bojenja, dok su sinusoidalne NK stanice identificirane prisustvom CD45 obilježavanja. Stoga, omjer NK stanica u sinusoidima (CD45+) prema onim u parenhimskim regijama (CD45−) ukazuje na promet NK stanica iz BM u perifernu krv u stabilnom stanju.
RT-qPCR u stvarnom vremenu i imunobloting
RNA je izolirana korištenjem RNeasy Mini Kit (QIAGEN) i zatim obrnuto transkribirana u cDNA s PrimeScript RT Reagent Kit with gDNA Eraser (Takara Bio) prema uputama proizvođača. Razine ekspresije mRNA analizirane su pomoću SYBRGreen PCR Master Mix i QuantStudio 12K Flex Real-TimePCR System (oba od Thermo Fisher Scientific). Slijedovi primera navedeni su u tablici S1.
Imunoblotiranje je provedeno prema standardnim postupcima, kao što je prethodno opisano (Denget sur., 2015; Yu i sur., 2006). Korištena su sljedeća protutijela: METTL3 (kat. br. 15073-1-AP; Proteintech), METTL14 (kat. br. 26158-1-AP; Proteintech), YTHDF1 (kat. br. 17479-1-AP ; Proteintech), YTHDF2 (kat. br. RN123PW; MBL), YTHDF3 (kat. br. 25537-1-AP; Proteintech), ALKBH5 (kat. br. ab195377; Abcam),FTO (kat. br. ab124892; Abcam), MDM2 (kat. br. 33-7100; Invitrogen), TDP-43 (kat. br. PA5-29949; Invitrogen) i -aktin (kat. br. {{20 }}Ig; Proteintech).
siRNA knockdown test
IL-2–expanded NK cells were transfected with Accell mouse Tardbp siRNA (cat. no. E-040078-00-0005; Dharmacon) or Mdm2 siRNA (cat. no. E-041098-00-0005; Dharmacon) using Accell delivery media (Dharmacon) according to the manufacturer's instructions in the presence of IL-15 (50 ng/ml). The Accell eGFP control pool was used as siRNA control. The transfection efficiency was >90% mjereno protočnom citometrijom. Geneknockdown učinkovitost određena je qPCR-om i imunoblotingom. 3 dana nakon transfekcije, stanična apoptoza i proliferacija analizirani su protočnom citometrijom kako je gore opisano.
Luciferaza reporter test
Regija promotora Ythdf2 u rasponu od –2,000 bp do +100 bpof TSS-a umnožena je iz mišjih NK stanica i klonirana u apGL4-Basic Luciferase Reporter Vector (Promega) za generiranje apGL{ {5}}Ythdf2 reporter plazmid. HEK293T stanice kupljene od ATCC bile su kotransficirane s pGL4-Ythdf2 reporterskim plazmidama kao i STAT5a ili STAT5b prekomjerno ekspresijskim plazmidima ili praznim vektorom, zajedno s pRL-TK Renilla reporterskim plazmidom (Promega) za normalizaciju učinkovitosti transfekcije. Stanice su sakupljene za lizu 24 sata nakon transfekcije, a aktivnost luciferaze je kvantificirana fluorimetrijski s Dual-Luciferase System (Promega). Prajmer sekvence za kloniranje Ythdf2 promotora i STAT5a i STAT5b plazmida prekomjerne ekspresije navedeni su u tablici S1.
ChIP testovi
ChIP testovi su izvedeni korištenjem Pierce Magnetic ChIP kompleta (kat. br. 26157; Thermo Fisher Scientific) prema uputama proizvođača. Ukratko, jednaka količina ananti-anti-fosfo-Stat5 (Tyr694, kat. br. 9351; Cell Signaling Technologies) ili odgovarajućeg kontrolnog normalnog zečjeg IgG odvojeno je korištena za taloženje umreženih DNA-proteinskih kompleksa izvedenih iz 5 × 106 pročišćenih mišjih primarnih NK stanica koje su prethodno tretirane s IL-15 (50 ng/ml) tijekom 1 sata. Nakon preokreta unakrsnog povezivanja, DNA imunoprecipitirana navedenim protutijelom testirana je qPCR-om. Nizovi svih početnica navedeni su u tablici S1.
Ex vivo ispitivanje citotoksičnosti
Ex vivo citotoksičnost NK stanica procijenjena je standardnim testovima 51Crrelease. Stanične linije mišjeg limfoma RMA-S (MHC klase Ideficient) i RMA (MHC klase I dovoljne) stanice, dar Andre´Veillette (Sveučilište McGill, Montreal, Kanada), korištene su kao starget stanice. Miševi su tretirani ip injekcijom poliinozinske:policitidilne kiseline [poli (I:C); 200 ug/miševu] tijekom 18 h. Poli(I:C)-aktivirane NK stanice izolirane su iz slezene pomoću EasySepMouse NK Cell Isolation Kit (STEMCELL Technologies). Pročišćene NK stanice su kultivirane s ciljnim stanicama u omjeru 5:1, 2,5:1 i 1,25:1 u prisutnosti IL-2 (50 U/ml).
m6A-posljed
Pročišćene NK stanice slezene ekspandirane su IL-2 (1,000 U/ml, kat. br. Bulk Ro 23-6019; Nacionalni institut za rak) in vitro tijekom 7 dana. Ukupna RNA izolirana je TRIzol reagensom (Thermo FisherScientific) iz 50 milijuna IL-2-proširenih NK stanica. Poliadenilirana RNA dodatno je obogaćena iz ukupne RNA upotrebom Dynabeads kompleta za pročišćavanje mRNA (Invitrogen). Uzorci mRNA fragmentirani su u 100-nt-duge fragmente s reagensima za fragmentaciju RNA (Invitrogen).
Fragmentirana mRNA (5 µgmRNA) korištena je za imunoprecipitaciju m6A upotrebom m6A protutijela (202003; Synaptic) prema standardnom protokolu Magna MeRIP m6A kompleta (Merck Millipore). RNA je obogaćena pomoću RNA Clean & Concentrator-5 (Zymo Research) za generiranje biblioteke s KAPA RNA HyperPrep Kitom (Roche). Sekvenciranje je obavljeno u genomičkoj ustanovi City of Hope na stroju Illumina HiSeq 2500 s načinom pojedinačnog čitanja 50-bp. Očitavanja sekvenciranja mapirana su na mišji genom pomoću softvera HISAT2 v101 (Kim et al., 2015.).
Mapirana čitanja imunoprecipitacije i ulazne biblioteke osigurana su korištenjem R paketa exomePeak (Meng i sur., 2014.). m6Apeakovi su vizualizirani pomoću softvera Integrative Genomics Viewer (http://www.igv.org). m6A-vezujući motiv analizirali su MEME (https://meme-suite.org) i HOMER (http://homer.ucsd.edu/homer/motif). Prozvani vrhovi označeni su presjekom s arhitekturom gena pomoću Rpackage ChIPseekera (Yu et al., 2015.).
StringTie was used to assess expression levels for mRNAs from input libraries by calculating the total exon fragments/mapped reads in millions × exon length in kb (Pertea et al., 2015). The differentially expressed mRNAs were selected with log2(fold change) >1 orlog2 (promjena preklapanja)<−1 and P < 0.05 using the R package edgeR (Robinson et al., 2010).
YTHDF2 RIP-seq
50 milijuna IL-2-proširenih NK stanica sakupljeno je i dvaput isprano hladnim PBS-om, a stanični talog je liziran s 2 vol pufera za lizu (10 mM Hepes, pH 7,6, 150 mM KCl, 2 mM EDTA, 0,5% NP-40, 0,5 mM ditiotreitol, 1:100 koktel inhibitora proteaze [Thermo Fisher Scientific] i 400 U/ml SUPERase-In inhibitora RNaze [Thermo Fisher Scientific]).
Lizat je inkubiran na ledu 5 minuta i centrifugiran 15 minuta da bi se razbistrio lizat. Jedna desetina volumena staničnog lizata spremljena je kao ulaz. Ostatak staničnog lizata je inkubiran s 5 µg anti-YTHDF2 (kat. br. RN123PW; MBL) koji je povezan s magnetskim zrncima proteina A (kat. br. 10001D; Invitrogen) na 4 stupnja 2 h uz laganu rotaciju. Nakon toga, kuglice su isprane pet puta s 1 ml ledeno hladnog pufera za pranje (50 mM HEPES, pH 7,6, 200 mM NaCl, 2 mM EDTA, 0,05% NP-40, 0,5 mM ditiotreitol i 200 U/ml RNaze inhibitor).
Imunoprecipitirani uzorci podvrgnuti su digestiji proteinazom K u puferima za ispiranje dopunjenim s 1% SDS i 2 mg/ml proteinaze K (ThermoFisher Scientific) inkubirani uz mućkanje pri 1200 okretaja u minuti pri 55 stupnjeva tijekom 1 sata. Ukupna RNA ekstrahirana je iz ulazne i imunoprecipitirane RNA dodavanjem 5 vol TRIzol reagensa nakon čega je uslijedio Direct-zol RNA Miniprep (Zymo Research).
Knjižnica cDNA je generirana pomoću KAPA RNA HyperPrep Kita (Roche) i sekvencirana je na Illumina HiSeq 2500 platformi. Vršni rezultati pozivanja s imunoprecipitacijom i ulaznim bibliotekama generirani su pomoću R paketa RIPSeeker (Li et al., 2013.). HOMER je korišten za pronalaženje motiva distribucije podataka u područjima vrha. Nazvani vrhovi su označeni presjekom s arhitekturom gena i transkripta pomoću ChIPpeakAnno (Zhu et al., 2010.).
analiza stabilnosti mRNA
Pročišćene NK stanice slezene iz Ythdf2ΔNK i Ythdf2WT miševa uzgojene su s IL-15 (50 ng/ml). 3 dana nakon kulture, stanice su tretirane s aktinomicinom D (5 µg/ml, kat. br. A9415; Sigma) kroz navedeno vrijeme. Stanice bez tretmana korištene su na 0 h. Stanice su sakupljene u navedeno vrijeme, a ukupna RNA ekstrahirana je iz stanica za qPCR. Poluživot mRNA izračunat je metodom koju su prethodno opisali Weng i sur. (2018). Slijedovi primera navedeni su u tablici S1.
Online analiza baze podataka
Koristili smo mrežni izvor BioGPS (http://biogps.org) za analizu ekspresije Ythdf2 specifične za tkivo. Skupovi RNA-seqpodataka bili su iz GEO pod pristupnim br. GSE106138, GSE113214 i GSE25672. Izvezeni su normalizirani podaci iz RNA-seq analiza, a z-rezultat ekspresije gena vizualiziran je funkcijom Heatmap.2 unutar gplots Rlibrary
Statistika
Nespareni Studentov t-test (dvosmjerni) izveden je pomoću softvera GraphPad Prism. Jednosmjerna ili dvosmjerna ANOVA provedena je kada su se uspoređivale tri ili više neovisnih skupina. P vrijednosti prilagođene su za višestruke usporedbe korištenjem Holm-Sˇ´ıdak postupka. P < 0.05 smatralo se značajnim. *, P < {{10}}.05; **, P < 0,01; i ***, P < 0,001.
Online dodatni materijal
Slika S1 prikazuje razine proteina YTHDF2 u imunološkim stanicama, uključujući NK stanice kao odgovor na IL-15 stimulaciju, MCMV infekciju i progresiju tumora; generacija miševa s delecijom Ythdf2 specifičnom za NK-stanicu. Slika S2 prikazuje virusne titre u slezeni i jetri miševa zaraženih MCMV-om te postotak i apsolutni broj Ly49H+ i/ili Ly49D+ NK stanica kod miševa zaraženih MCMV-om. Slika S3 prikazuje proliferaciju, preživljavanje, sazrijevanje i ekspresiju aktivacijskih i inhibicijskih receptora NK stanica iz Ythdf2WT i Ythdf2ΔNK miševa. Slika S4 prikazuje regulaciju ekspresije YTHDF2 IL-15-STAT5 signalizacijom i ekspresiju komponenti IL-15 receptora, puta PI3K–AKT i puta MEK–ERK u stanicama NK iz Ythdf2WT i Ythdf2ΔNK miševi. Slika S5 prikazuje analize RNA-seq, m6A-seq i RIP-seq na cijelom transkriptomu u NK stanicama. Tablica S1 navodi početnice korištene u studiji.
Dostupnost podataka
Podaci o RNA-seq, m6A-seq i RIP-seq pohranjeni su u Nacionalnom centru za biotehnološke informacije GEO pod pristupnim br. GSE174027. Preostali podaci koji podupiru nalaze ove studije dostupni su od odgovarajućih autora na zahtjev.
Priznanja
Ovaj rad podržali su Nacionalni instituti za zdravlje (NS106170, AI129582, CA247550, CA163205, CA223400, CA068458 i CA210087), Društvo leukemije i limfoma (1364-19), Kalifornijski institut za regenerativnu medicinu (DISC2COVID{{ 9}}) i nagradu za izniman projekt Saveza za borbu protiv raka dojke 2021. Ovaj je rad također djelomično poduprla nagrada USDA (USDA/NIFA 2020-67017-30843).
Doprinosi autora: S. Ma, J. Yu i MA Caligiuri osmislili su i dizajnirali projekt. S. Ma, J. Yan, J. Zhang i J. Yu je izvodio eksperimente i/ili analize podataka. Z. Chen, L.-S.Wang, JC Sun i J. Chen pridonijeli su reagensima i materijalnoj podršci. S. Ma, J. Yu, J. Chen i MA Caligiuri napisali su, pregledali i/ili revidirali rad. Svi su autori raspravljali o rezultatima i komentirali rukopis.
Otkrića: J. Chen je prijavio "ostalo" od Genovel BiotechCorp. izvan dostavljenog rada i znanstveni je osnivač Genovel Biotech Corp. i znanstveni savjetnik rasne onkologije. Nisu prijavljena nikakva druga otkrića.
Reference
1. Arase, H., ES Mocarski, AE Campbell, AB Hill i LL Lanier. 2002. Izravno prepoznavanje citomegalovirusa aktivacijom i inhibicijom NK-staničnih receptora. Znanost. 296:1323-1326.
2. Ayala, YM, T. Misteli i FE Baralle. 2008. TDP-43 regulira fosforilaciju proteina retinoblastoma putem potiskivanja ekspresije kinaze 6 ovisne o ciklinu. Proc. Natl. Akad. Sci. SAD. 105:3785-3789.
3. Barbieri, I., K. Tzelepis, L. Pandolfini, J. Shi, G. Millan-Zambrano, SC Robson, ´D. Aspris, V. Migliori, AJ Bannister, N. Han, et al. 2017. METTL3 vezan za promotor održava mijeloičnu leukemiju kontrolom translacije ovisnom o m6A. Priroda. 552:126-131.
4. Becknell, B. i MA Caligiuri. 2005. Interleukin-2, interleukin-15 i njihove uloge u ljudskim prirodnim stanicama ubojicama. Adv. Immunol. 86:209–239.
5. Bertoli, C., JM Skotheim i RA de Bruin. 2013. Kontrola transkripcije staničnog ciklusa tijekom G1 i S faze. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 14: 518-528.
6. Bezman, NA, CC Kim, JC Sun, G. Min-Oo, DW Hendricks, Y. Kamimura, JA Best, AW Goldrath i LL Lanier. Konzorcij projekta imunološkog genoma. 2012. Molekularna definicija identiteta i aktivacije prirodnih stanica ubojica. Nat. Immunol. 13:1000-1009.
7. Carson, WE, JG Giri, MJ Lindemann, ML Linett, M. Ahdieh, R. Paxton, D. Anderson, J. Eisenmann, K. Grabstein i MA Caligiuri. 1994. Interleukin (IL) 15 je novi citokin koji aktivira ljudske prirodne stanice ubojice putem komponenti IL-2 receptora. J. Exp. Med. 180:1395-1403.
8. Carson, WE, TA Fehniger, S. Haldar, K. Eckhert, MJ Lindemann, CF Lai, CM Croce, H. Baumann i MA Caligiuri. 1997. Potencijalna uloga interleukina-15 u regulaciji preživljavanja ljudskih stanica prirodnih ubojica.J. Clin. Investirati. 99:937-943.
9. Chan, CJ, MJ Smyth i L. Martinet. 2014. Molekularni mehanizmi aktivacije stanica prirodnih ubojica kao odgovor na stanični stres. Stanična smrt Differ. 21:5–14.
10.Chen, X., J. Han, J. Chu, L. Zhang, J. Zhang, C. Chen, L. Chen, Y. Wang, H. Wang, L. Yi, et al. 2016. Kombinacijska terapija EGFR-CAR NK stanica i onkolitičkog herpes simplex virusa 1 za metastaze raka dojke u mozgu. Oncotarget. 7: 27764-27777.
For more information:1950477648nn@gmail.com
