RNA M6 A čitač YTHDF2 kontrolira antitumorski i antivirusni imunitet NK stanica 2. dio

YTHDF2 je potreban za antivirusnu funkciju NK stanica

Kako bismo utvrdili utječe li nedostatak Ythdf2 na antivirusnu aktivnost NK stanica, ubrizgali smo 2,5 × 104 PFU MCMV u Ythdf2WT miševe i Ythdf2ΔNK miševe.

Antivirusno djelovanje i imunitet su neodvojivi i blisko povezani. Virusi su vrlo mali mikroorganizmi, ali mogu uzrokovati mnoge bolesti, pa čak i smrt u teškim slučajevima.

Antivirusno djelovanje odnosi se na sposobnost tijela da se bori protiv virusa. Ljudi s visokom razinom antivirusnog djelovanja mogu brže očistiti viruse i učinkovitije se oduprijeti pojavi bolesti. Imunitet se odnosi na obrambene tvari koje proizvodi tijelo nakon razdoblja prilagodbe, a koje mogu ukloniti štetne tvari iz tijela.

Dovoljno sna, zdrava prehrana i tjelovježba iznimno su važni za održavanje dobrog zdravlja. Ovi čimbenici mogu poboljšati ljudski imunitet i time pojačati antivirusnu aktivnost tijela. Posebno u ovo vrijeme pandemije COVID-19, važno je ostati zdrav.

Osim toga, stabilno raspoloženje ima veliki utjecaj i na imunitet. Optimističan stav može učiniti da se ljudi osjećaju fizički i mentalno ugodno, čime se poboljšava imunitet i antivirusno djelovanje. Naprotiv, pesimistične emocije će smanjiti imunitet organizma i učiniti ga ranjivijim na napade virusa.

Ukratko, antivirusno djelovanje i imunitet međusobno su povezani, te bismo trebali posvetiti pozornost poboljšanju tjelesnog imuniteta i antivirusnog djelovanja na različite načine kako bismo osigurali fizičko zdravlje i zdrav način života. Vidi se da moramo poboljšati pamćenje, a Cistanche deserticola može značajno poboljšati pamćenje, jer Cistanche deserticola ima antioksidativno, protuupalno i anti-age djelovanje, što može pomoći u smanjenju oksidacije i upalnih reakcija u mozgu, čime štiti zdravlje živčanog sustava. Osim toga, Cistanche deserticola također može potaknuti rast i popravak živčanih stanica, čime se poboljšava povezanost i funkcija neuronskih mreža. Ovi učinci mogu poboljšati pamćenje, učenje i brzinu razmišljanja, a također mogu spriječiti razvoj kognitivne disfunkcije i neurodegenerativnih bolesti.

Kliknite znajte dodatke za jačanje pamćenja

Rezultati su pokazali da su Ythdf2ΔNK miševi bili osjetljiviji na MCMV infekciju, kao što je prikazano značajnim gubitkom težine i povećanim titrima virusa u krvi, slezeni i jetri u usporedbi s Ythdf2WT miševima (Slika 3,A i B; i Slika S2, A i B) .

Također smo primijetili značajno smanjenje u postotku i apsolutnom broju ukupnih NK stanica u slezeni i krvi Ythdf2ΔNK miševa u usporedbi s onima u Ythdf2WT miševa nakon infekcije (Slika 3, C i D; i Slika S2, C i D). Daljnja analiza je pokazala da su NK stanice iz Ythdf2ΔNK miševa imale znatno nižu ekspresiju Ki67 od Ythdf2WT miševa (Slika 3, E–G).

Međutim, vitalnost NK stanica bila je slična između Ythdf2WT miševa i Ythdf2ΔNK miševa, kao što je prikazano bojanjem aneksinom V (slika S2 E). Ovi podaci pokazuju da manjak YTHDF2 u NK stanicama rezultira defektom u staničnoj proliferaciji, a ne preživljavanjem stanica tijekom virusne infekcije.

NK stanice inhibiraju MCMV infekciju putem aktivirajućih receptora Ly49H i Ly49D, a proces je karakteriziran antivirusnim odgovorom posredovanim perforinom ili IFN-om (Arase et al., 2002; Lee et al., 2009; Loh et al., 2005; Orr et al. sur., 2010.; Sumaria i sur., 2009.). Otkrili smo da Ythdf2ΔNK miševi imaju značajno smanjene Ly49H+ i Ly49D+ NK stanice u slezeni i krvi u usporedbi s Ythdf2WT miševima nakon infekcije (Slika 3, H–J; i Slika S2, F–K).

Daljnja analiza je pokazala da, iako po postotku, samo Ly49D+Ly49H+ stanice pokazuju razliku u Ythdf2ΔNK miševima u usporedbi s Ythdf2WT miševima, apsolutni broj stanica Ly49D−Ly49H+ NK stanica, Ly49D+Ly49H− NK stanica i Ly49D+Ly49H+ NK stanica u slezene i krvi bili su značajno smanjeni kod Ythdf2ΔNK miševa u usporedbi s Ythdf2WT miševima nakon infekcije (Sl. S2, L–W).

Naši podaci sugeriraju da je kontrola MCMV infekcije pomoću YTHDF2 uglavnom posredovana Ly49D+Ly49H+ NK stanicama. Proizvodnja granzima B i IFN-a od strane NK stanica u Ythdf2ΔNK miševa bila je usporediva s onom Ythdf2WT miševa (Sl. S2, X i Y).

Pronašli smo značajno smanjenu proizvodnju perforina kod Ythdf2ΔNK miševa u usporedbi s onom Ythdf2WT miševa u slezeni i krvi 7 dana nakon infekcije (Slika 3, K–M), što ukazuje da YTHDF2 uglavnom utječe na antivirusnu aktivnost posredovanu sperforinom protiv MCMV u NK stanicama. Ovi podaci sugeriraju da je YTHDF2 kritičan za ekspanziju NK stanica i efektorsku funkciju tijekom MCMV infekcije.

YTHDF2 kontrolira homeostazu NK stanica i terminalno sazrijevanje u stabilnom stanju

Gore navedeni nalazi da nedostatak Ythdf2 u NK stanicama pojačava metastaze tumora i oslabljenu sposobnost NK stanica za kontrolu MCMV infekcije potaknuli su nas da istražimo je li YTHDF2 potreban za održavanje NK stanica u stabilnom stanju.

Kao što je prikazano na slici 4 A, učestalost i apsolutni broj NK stanica bili su značajno smanjeni u perifernoj krvi, slezeni, jetri i plućima, ali ne i u koštanoj srži (BM) Ythdf2ΔNK miševa u usporedbi s Ythdf2WT miševima.

Međutim, nije bilo značajnih promjena među uobičajenim limfoidnim progenitorom, pre-NK staničnim progenitorom i rafiniranim NK staničnim progenitorom (NKP) u BM (Fathman et al., 2011.) između Ythdf2WT i Ythdf2ΔNK miševa (Sl. S3 A), što ukazuje da YTHDF2 možda neće utjecati na rani razvoj NK stanica u našem modelu. Kako bismo istražili potencijalne mehanizme odgovorne za smanjenje NK stanica u Ythdf2ΔNK miševa, istražili smo staničnu proliferaciju, održivost i sposobnost trgovine NK stanicama nakon brisanja Ythdf2 u stabilnom stanju.

Postotak proliferirajućih NK stanica bio je usporediv između Ythdf2WT i Ythdf2ΔNK miševa, što je dokazano Ki67 bojenjem (Sl. S3 B). Preživljavanje NK stanica također je bilo jednako između Ythdf2WT i Ythdf2ΔNK miševa, kao što je prikazano bojanjem aneksinom V (slika S3 C).

Kako bi se provjerilo utječe li YTHDF2 na izlazak NK stanica iz BM-a na periferiju, Ythdf2WT i Ythdf2ΔNK miševima ubrizgano je iv antiCD45 protutijelo za označavanje imunoloških stanica i žrtvovano je nakon 2 minute, a njihove BM stanice su analizirane. To nam je omogućilo kvantificiranje broja NK stanica u sinusoidnim naspram parenhimskih regija BM-a, pokazatelja prometa NK stanica iz BM-a u perifernu krv u stabilnom stanju (Leong et al., 2015.).

Rezultati su pokazali značajno smanjenje učestalosti CD45+ NK stanica u Ythdf2ΔNK miševa u usporedbi s Ythdf2WT miševima u sinusoidima (Slika 4 B), što ukazuje da nedostatak Ythdf2 otežava izlazak NK stanica iz BM u cirkulacijski sustav in vivo .Imunološke stanice prolaze kroz homeostatsku proliferaciju tijekom limfopenije izazvane određenim virusnim infekcijama ili uzrokovane kemoterapijom (Sun et al., 2011.).

Iako smo otkrili da je YTHDF2 nepotreban za proliferaciju NK stanica u stabilnom stanju, uočili smo značajno smanjenje stanične proliferacije tijekom MCMV infekcije (Slika 3, E–G). Stoga smo istražili ulogu YTHDF2 u regulaciji homeostatske proliferacije NK stanica u limfopeničnom okruženju in vivo. Kotransferirali smo jednak broj NK stanica slezene iz CD45.2 Ythdf2ΔNK miševa ili kongenih miševa CD45.1 u Rag2-/-Il2rg-/- miševe s nedostatkom limfocita.

Rezultati su pokazali da je veći udio NK stanica izveden iz CD45.1WT kontrolnih miševa nego iz CD45.2 Ythdf2ΔNK miševa na dan 3 nakon prijenosa stanica (Sl. S3 D). Daljnja analiza je pokazala da je smanjenje NK stanica iz Ythdf2ΔNK miševa bilo zbog oslabljene stanične proliferacije (Slika S3 E), ali ne i stanične apoptoze (Slika S3 F), što sugerira da YTHDF2 pokreće homeostatsku proliferaciju NK stanica in vivo u limfopenijskim uvjetima.

Daljnja diferencijacija mišjih NK stanica može se klasificirati u nezrele (CD11b−CD27+), srednje zrele (CD11b+CD27+) i terminalne zrele (CD11b+CD27−) faze na temelju razina CD11b i CD27 ( Chiossone i sur., 2009.; Geiger i Sun, 2016.).

Otkrili smo da se ekspresija Ythdf2 povećala sa sazrijevanjem i da CD11b−CD27+, CD11b+CD27+ i CD11b+CD27− pokazuju najnižu, srednju i najvišu razinu ekspresije Ythdf2, redom (Slika S3 G ), što ukazuje da YTHDF2 može biti uključen u sazrijevanje NK stanica. Stoga smo istražili ulogu YTHDF2 u sazrijevanju NK stanica definiranu markerima stanične površine CD11b i CD27.

Otkrili smo da je gubitak Ythdf2 u NK stanicama rezultirao značajnim smanjenjem učestalosti terminalnih zrelih NK stanica i/ili povećanjem nezrelih i srednje zrelih NK stanica u slezeni, jetri, plućima i krvi, ali ne i u BM (Slika 4 C i Slika S3 H), što ukazuje da YTHDF2 pozitivno regulira terminalno sazrijevanje NK stanica. U skladu s ovim podacima, razine KLRG1, koji je aterminalni marker sazrijevanja NK stanica, bile su značajno niže u Ythdf2ΔNK miševa u slezeni, jetri i plućima, ali ne i BM u usporedbi s Ythdf2WT miševa u odgovarajućim odjeljcima organa ili tkiva (slika 4 D).

Kako bismo odredili je li smanjeni broj zrelih NK stanica zbog nedostatka Ythdf2 intrinzičan za stanice, stvorili smo himere u Rag2−/−Il2rg−/− miševa ubrizgavanjem BM stanica iz CD45.1 WT i CD45.2 Ythdf2ΔNK miševa, pomiješanih u omjeru 1:1 omjer.

Kao što je pokazano protočnom citometrijom 8 tjedana nakon transplantacije, smanjeni udio terminalnih zrelih NK stanica izveden je iz CD45.2 Ythdf2ΔNK BM stanica nego onih iz CD45.1 WT kontrolnih stanica (Slika 4 E), što sugerira da je terminalno sazrijevanje NK stanica kontrolirano YTHDF2 transkripcijski faktori T-boxa Eomes i Tbet ključni su za sazrijevanje NK stanica (Daussy i sur., 2014.; Gordon i sur., 2012.).

Intracelularno bojenje otkrilo je značajno smanjenje razine proteina Eomes u NK stanicama Ythdf2ΔNK miševa u usporedbi s Ythdf2WT miševima (Sl. S3 I). Osim toga, otkrili smo da se smanjenje razine proteina i mRNA Eomes specifično dogodilo u terminalnim zrelim (CD11b+CD27−) NK stanicama (Sl. S3,J–L).

Međutim, za razliku od Eomesa, ekspresija Tbet bila je ekvivalentna u NK stanicama između Ythdf2ΔNK i Ythdf2WT miševa (Sl. S3, I i K), što ukazuje da YTHDF2 možda regulira terminalno sazrijevanje NKstanica ciljanjem na Eomes.

YTHDF2 potiče efektorsku funkciju NK stanica

Naše otkriće da nedostatak Ythdf2 ometa homeostazu i sazrijevanje NK stanica motiviralo nas je da utvrdimo je li YTHDF2 također potisnuo efektorsku funkciju NK stanica. Glavni mehanizam koji regulira funkciju NK stanica je relativni doprinos inhibitornih i aktivirajućih receptora (Chan et al., 2014).

Zatim smo provjerili razine ekspresije molekula povezanih s aktivacijom ili inhibicijom NK stanica. Otkrili smo da su razine ekspresije aktivacijskih receptora CD226 i NKG2D, ali ne i CD69, smanjene u NK stanicama slezene Ythdf2ΔNK miševa u usporedbi s onima iz Ythdf2WT miševa (Slika 5 A), dok su inhibicijski receptori NKG2A, TIGIT i PD{{ 7}} bili su slični između Ythdf2ΔNK miševa i Ythdf2WT miševa (Slika 5 A i Slika S3 M).

Osim toga, Ythdf2ΔNK NK stanice proizvele su značajno manje IFN- nego Ythdf2WT NK stanice kada su stimulirane s IL-12plus IL-18 ili YAC-1 stanicama mišjeg limfoma (Sl. 5, B i C ).

Zatim smo testirali citotoksičnu sposobnost Ythdf2ΔNK NK stanica. Otkrili smo da su Ythdf2ΔNK NK stanice imale značajno smanjenu citotoksičnost protiv RMA-S stanica mišjeg limfoma RMA-S s nedostatkom MHC klase I (Slika 5 D), ali su pokazale sličnu citotoksičnost protiv RMA stanica s dovoljno MHC klase I (Slika S3 N) kao što je prikazano pomoću 51Crassaya . Uzeti zajedno, ovi nalazi pokazuju da je YTHDF2 bitan za funkciju efektora NK stanica.

For more information:1950477648nn@gmail.com