Zaštitni učinak ukupnih glikozida Cistanche na toksičnost miokarda miševa izazvanu adriamicinom

Za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Yulia Yiming'

[Projekt podržan od strane Zaklade za prirodne znanosti Komisije za znanost i tehnologiju autonomne regije Xinjiang Uygur (96814)]

[Profil autora, Eliya Yiming (1964-), žena (Ujgur), majstor. Nositelj znanstvenog smjera: Kardiovaskularna farmakologija. ],

Wang Xiaowen', Wang Xuefei', Heiliman Yilahong 2, Xie Yaoyun 2, Du Niansheng 3

(Xinjiang Medical University|Odjel za farmakologiju, Farmaceutski fakultet, Odjel za elektronsku mikroskopiju, Fakultet temeljnih medicinskih znanosti, Odjel za kemiju prirodnih lijekova, Farmaceutski fakultet, Urumqi 830054, Xinjiang)

Sažetak:Istražiti zaštitni učinak i mehanizamCistanche glikozidi(GC) na oštećenje miokarda izazvano doksorubicinom (Dox) u miševa. Fang Xie: Model akutne ozljede miokarda uzrokovane intraperitonealnom injekcijom Doxa (17,5 mg/kg) u NIH miševa korišten je za određivanje aktivnosti miokardijalne superoksid dismutaze (SOD); aktivnost selen-glutation peroksidaze (Se-GSH-Px); malondialdehid (MDA) sadrži aktivnost serumske kreatin fosfokinaze (CPK). Elektronskom mikroskopom ispituju se ultrastrukturne promjene kardiomiocita. Rezultati: 48 sati nakon intraperitonealne injekcije Dox može uzrokovati značajna oštećenja miokarda miševa. Aktivnost SOD i Se-GSH-Px miokarda se smanjila, sadržaj MDA porastao, aktivnost CPK u serumu porasla, a došlo je do oštećenja ultrastrukture miokardijalnog tkiva. Cistanche glikozidi(62,5, 125.0, 250.0 mg/kg)može povećati aktivnost miokarda SOD, Se-GSH-Px. Smanjite sadržaj MDA i smanjite oslobađanje CPK. Smanjite oštećenje ultrastrukture miokarda.Jie Leng: Cistanche ukupni glikozidiimaju određeni zaštitni učinak na oštećenje miokarda uzrokovano doksorubicinom. Njegov mehanizam može biti povezan sa zaštitom miokardijalne aktivnosti SOD i Se-GSH-Px, uklanjanjem slobodnih radikala i sprječavanjem peroksidacije lipida.

Ključne riječi: doksorubicin; ukupni glikozid cistanhe; kardiotoksičnost; peroksidacija lipida; kreatin kinaza; ultrastruktura

Doksorubicin (Dox) je vrsta antibiotika iz luka, koji ima dobar učinak na niz malignih tumora, ali zbog svoje akutne i kronične miokardijalne toksičnosti ograničava široku primjenu Doxa u kliničkoj praksi. Poznato je da antitumorski učinak Doxa utječe na replikaciju DNA i sintezu RNA, a njegova kardiotoksičnost povezana je s oštećenjem peroksidacijom lipida izazvanim semi-adriamicinom. Stoga je važno pronaći hvatače slobodnih radikala i antioksidanse koji će antagonizirati kardiotoksičnost Doxa dok će zadržati njegovu antitumorsku aktivnost. Ukupnoekstrakti od Cistanchesu aktivni sastojci ekstrahirani izCistanche. Relevantne studije su to otkrile Cistanche glikozidi imaju antioksidativne učinke na mišja tkiva, Cistanche glikozidimože značajno smanjiti sadržaj lipofuscina (3), Cistanche glikozidiimaju zaštitne učinke na ishemiju miokarda štakora(3), i Cistanche glikozididjeluju protiv lipidne peroksidacije i radijacije. Istražiti zaštitni učinak i mehanizam Cistanche glikozidina Dox-induciranu ozljedu miokarda kod miševa.

Kliknite za Cistanche tubulosa prednosti i nuspojave proizvoda

1 Materijal i metode

1.1 Lijekovi i reagensi

Cistanche glikozidiizvađeni su izCistanche biljkau sjevernom Xinjiangu, a glavni sastojci su ehinacea, ergot etoksilati, itd. (osigurano od strane Odsjeka za kemiju prirodne medicine, Farmaceutskog fakulteta, Medicinskog sveučilišta u Xinjiangu); tetra metoksi propan (TMP Sigma Company); Adriamycin (Dox, Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd.); Vitamin E (Vit E, Shanghai Yan'an Pharmaceutical Factory); ostali reagensi su domaće proizvodnje.

1.2 Eksperimentalna oprema

Spektrofotometar tipa 721 (Šangajska tvornica analitičkih instrumenata br. 3); mikroskop OLYMPUS (proizveden u Japanu); JEM-100CXII prijenosni elektronski mikroskop (proizveden u Japanu)? Mjerač kiselosti tipa PHS-250 (Shanghai Lei Magnetic Instrument Factory).

1.3 Grupiranje i administracija životinja

NIH miševe osigurava Eksperimentalni centar za životinje Instituta za endemske bolesti Xinjiang. Broj potvrde o medicinskim laboratorijskim životinjama je br. {{0}}. Odabrano je 138 NIH miševa, težine (24±2) g, pola mužjaci i pola ženke. Nasumično podijeljeno u 6 skupina (23 u svakoj skupini): (1) kontrolna skupina: fiziološka otopina (NS) 20 ml/kg; (2) Dox skupina ozljeda: NS 20 ml/kg; (3) Vit E skupina: Vit E 100 mg/kg; (4) GK i skupina: GK 62,5 mg/kg; (5) GC i skupina: GC 125,0 mg/kg; (6) GCS1 skupina: GCs 25,0 mg/kg, svaka od gornjih skupina Sve su davane intragastričnom primjenom, jednom dnevno. Dox skupina ozljeda, skupina Vit E, GC|skupina, GC I skupina, GC I skupina intraperitonealno je injiciran Dox 17. 5 mg/kg 4. dan nakon injiciranja NS i GC tijekom 48 sati, uzete su očne jabučice i uzeta krv, pripremljen serum i odmah životinje su žrtvovane kako bi se izvadilo srce, isprale s NS, osušile filter papirom i izvagale. U uvjetima vodene kupelji, homogenat miokarda je pripremljen s NS, centrifugiran na 3 500 o/min, 30 min, a supernatant je uzet za mjerenje biokemijskih pokazatelja. U svakoj skupini su bila 3 miša, a srca su uzeta za izradu uzoraka pod elektronskim mikroskopom.

1.4 Određivanje biokemijskih pokazatelja

Za određivanje aktivnosti miokardijalne superoksid dismutaze (SOD) korištena je metoda pirogalolne autooksidacije; DTNB metoda korištena je za određivanje aktivnosti miokardijalne selen-glutation peroksidaze (Se-GSH-Px) Koristiti TBA metodu za određivanje sadržaja produkta lipidne peroksidacije miokarda malondialdehida (MDA); kvantifikacija proteina koristi CBB-SDS metodu koja se naziva CPK metoda za određivanje aktivnosti serumske kreatin fosfokinaze (CPK).

1.5 Elektronska mikroskopija tkiva miokarda

Vrh srca fiksiran je s 4 posto glutaraldehida i 1 posto kiseline, dehidriran acetonom, ugrađen u Epon 812 i promatran pod transmisijskim elektronskim mikroskopom s olovno-uranovim elektronskim bojanjem JEM-100CX I.

1.6 Statistička obrada

Sve podatke predstavlja Wang Shi s. Nakon što je eksperimentalni podatak testiran na homogenost varijance, F test i q test se koriste za statističku obradu. Razina inspekcije a=0.05.

2 rezultata

2.1 UčinakCistanche glikozidina biokemijske indekse miokarda ozlijeđenog Doxom prikazan je u tablici 1.

2. 1- 1 UčinakCistanche glikozidina SOD aktivnost Dox ozlijeđenog miokarda.

U usporedbi s kontrolnom skupinom, skupina s Dox ozljedama smanjila je SOD aktivnost miokarda za 41,1 posto (PV0.01). U usporedbi s Dox grupom ozljeda, povećao se za 30,9 posto, 33,2 posto, 36,5 posto i 34,9 posto (svi P<0.01), the="" gcs1="" group="" was="" close="" to="" the="" control="" group="" (p="">0.05), a sve preostale skupine bile su niže od kontrolne skupine.

2.1.2 Učinak GC-a na Se-GSH-Px aktivnost miokarda oštećenog Doxom.

U usporedbi s kontrolnom skupinom, skupina s Dox ozljedom ima smanjenje aktivnosti miokarda Se-GSH-Px za 26,2 posto (P<0.01), gcs,="" gcs,="" compared="" with="" the="" dox="" injury="" group,="" the="" gcs,="" group,="" and="" vit="" e="" group="" increased="" by="" 19.2%,="" 21.1%,="" 25.0%,="" and="" 26.1%="" respectively=""><0.01), which="" were="" all="" close="" to="" the="" control="" group="" (p="">0 . 05).

2.1.3 UčinakCistanche glikozidi on the MDA content of the Dox-injured myocardium was reduced by 16.7%, 17.3%, 18.6%, and 17.3% respectively compared with the Dox-injured group (Fall V0.01), which were all close to the Control group (P>0.05).

2.1.4 Učinak GC-a na aktivnost CPK u serumu kod miševa ozlijeđenih Doxom.

Aktivnost CPK u serumu u skupini s Dox ozljedom povećala se za 87,3 posto (<0.01),>Cistanche glikozidi I, Cistanche glikozidii Vit. U usporedbi s Dox skupinom ozljeda, skupina E smanjila se za 26,6 posto, 33,1 posto, 37,4 posto i 36,7 posto (svi F<0.01), which="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" control="">

2.2 Elektronska mikroskopija miokarda miša

2.2.1 U kontrolnoj skupini, sarkom miokardijalnih vlakana bio je intaktan, miofibrile su bile raspoređene na uredan način, trake sarkomera bile su jasno strukturirane, mitohondriji su bili uredno raspoređeni, struktura je bila normalna, a nuklearna struktura bila je normalna.

2.2.2 Dox skupina ozljeda

Može se vidjeti da postoje očite promjene u ultrastrukturi miokardnih vlakana, miokardijalne stanice su natečene, intracitoplazmatski sarkomer raste, svijetla traka se širi, abnormalne kontrakcijske trake se pojavljuju u nekim područjima, a materijal Z-linije se povećava. Mitohondriji su bili difuzno nabubreni, hiperplastični, rijetko raspoređeni, izlomljeni i vakuolizirani. Sarkoplazmatski retikulum se širi, sekundarni lizosomi se povećavaju i može se vidjeti žarišna degeneracija. Povećava se volumen jezgre i širi perinuklearni prostor.

2. 2.3 Otok miokardnih vlakana u Cistanche glikozidiI grupa je smanjena.

Struktura sarkomera je u osnovi normalna, ali je sarkomer još uvijek širi od kontrolne skupine. Smanjeno je bubrenje mitohondrija, povećana je gustoća matriksa, povećana je gustoća mitohondrija, a pojedini mitohondriji su još uvijek promijenjeni. Povećani sekundarni lizosomi u citoplazmi.

2.2.4 Struktura vlakana miokarda Cistanche glikozidiI, I grupa se u osnovi oporavila u normalu.

Miofibrile su uredno raspoređene, struktura sarkomera je normalna, a struktura mitohondrija vraća se u normalu.

3 Rasprava

Dox je vrsta antibiotika luka, koji ima karakteristike širokog antitumorskog spektra i snažnog djelovanja. Međutim, Dox može izazvati tešku toksičnost miokarda, kao što su razne aritmije u ranoj fazi uzimanja lijekova, ovisne o dozi i kongestivno zatajenje srca u kasnoj fazi, što ograničava njegovu kliničku primjenu. Glavni mehanizam Doxa koji uzrokuje toksičnost miokarda je proizvodnja prekomjernih reaktivnih slobodnih radikala kisika koji uzrokuju oštećenje miokarda. Afinitet Doxa s tkivom miokarda znatno je veći nego s drugim tkivima. Nakon ulaska u stanice miokarda, Dox se transformira u polu-dox, koji djeluje na molekule kisika pretvarajući ih u slobodne radikale superoksidnog aniona (Oxid), uz stvaranje vodikovog peroksida (H2O2). Sadržaj MDA Ol i H2O2 u Haber-Weiss Dox skupini ozljeda povećao se za 25,8 posto u usporedbi s kontrolnom skupinom (P<0.01), and="" the="">Cistanche glikozidi |, Cistanche glikozidi 1, Cistanche glikozidi group, and Vit E group were reduced by 16.7% compared with the Dox injury group. , 17. 3%, 18. 6% and 17. 3% (Fall V0.01), which are all close to the control group (P>{{0}}.05). Reakcija ili Fentonova reakcija proizvodi hidroksilne radikale (OH •). 0$ i OH • Velika količina nakupljanja može uzrokovati peroksidaciju lipida u tkivima i staničnoj membrani te uzrokovati oštećenje bioloških makromolekula.

U pokusu je uočeno da su nakon 48 sati intraperitonealne injekcije Doxa (17,5 mg/kg) miševima, aktivnosti SOD i Se-GSH-Px u mišjem miokardu značajno smanjene, a sadržaj proizvoda lipidne peroksidacije značajno smanjen. MDA je značajno povećan. Visoka, aktivnost CPK u serumu raste. Pod elektronskim mikroskopom uočeno je oštećenje ultrastrukture srčanog mišića, što se očituje očitim bubrenjem mitohondrija, rupturom mitohondrija, degeneracijom vakuole, smanjenjem gustoće matriksa i širenjem sarkoplazmatskog retikuluma.

Sve skupine doza GC mogu značajno povećati aktivnosti enzima za hvatanje slobodnih radikala SOD i Se-GSH-Px u srčanom mišiću miševa ozlijeđenih Doxom, smanjiti sadržaj MDA i smanjiti otpuštanje CPK. Predlaže se daCistanche glikozidi može smanjiti oštećenje peroksidacijom lipida izazvano Doxom povećanjem aktivnosti enzima za hvatanje slobodnih radikala u tijelu. Cistanche glikozidi, skupine značajno štite ultrastrukturu miokardijalnih vlakana od Dox oštećenja.Otkriven in vitro modernom tehnologijom analize kemiluminiscencije i otkrio daCistanche glikozidimože učinkovito eliminirati. Točni su samo radikali aktivnog kisika kao što su OH • i H2O2. Učinak čišćenja ganglija je posebno značajan "⑵. Pretpostavlja se da glikozidi Cistanche mogu očistiti OR induciran semi-doxom u miokardu, prekidajući tako lančanu reakciju slobodnih radikala i djelujući kao blokator lanca lipidne peroksidacije.

U ovom eksperimentu, Vit E je korišten kao pozitivna kontrola. Rezultati su pokazali da Vit E ima određeni zaštitni učinak na akutno oštećenje miokarda izazvano Doxom kod miševa. Može smanjiti sadržaj MDA u miokardu i povećati aktivnosti SOD i Se-GSH-Px. Prema literaturi [13], izvješća su dosljedna.

Glavna komponenta od Cistanche glikozidije fenetilamin, a struktura mu je slična Vit E, odnosno ima fenolnu hidroksilnu skupinu i hidroksilnu skupinu. Stoga se nagađa da Cistanche glikozidimože osigurati atome vodika na fenolnoj hidroksilnoj skupini svoje molekularne strukture lipidnom radikalu (LOO -), koji ga pretvara u lipo hidroperoksid (LOOH), koji se zatim razgrađuje u netoksični hidroksil pomoću GSH-Px. Sprječava peroksidaciju nezasićenih masnih kiselina u biofilmu slobodnim radikalima, čime se smanjuje oštećenje Doxa na kardiomiocite. Mehanizam ostaje za dubinsko proučavanje.

Reference:

[1] Baser RL, Green MD. Komplikacija liječenja: strategije prevencije kardiotoksičnosti antraciklina [J]. Rak gazi Rer, 1993,19; 57.

[2] Doroshow JH. Učinak antraciklinskih antibiotika na stvaranje kisikovih radikala kod štakora [J] Cancer Res, 1983, 43; 460.

[3] Wang Xiaowen, Li Linlin, Mu Hu Yati, et al. Antioksidativni učinak Roxuanronga na tkiva miša]·Chinese Journal of Chinese Materia Medica, 1998,23(9):554-556.

[4] Mao Xinming, Wang Xiaowen, Li Linlin, et al. Zaštitni učinak Rou Nu Rong Xija na ishemiju miokarda kod štakora □], Kineska biljna medicina, 1999., 30(2): 118-120.

[5] Li Linlin, Wang Xiaowen, Wang Xuefei, et al. Antilipidni peroksidacijski i antiradijacijski učinak paste od ukupnog mesnog pepela [J]. Kineski časopis za kinesku materiju Medica, 1997., 22(6): 364-367.

[6] Zou Guolin, Gui Xingfen, Zhong Xiaoling, itd. Metoda određivanja SOD-poboljšanje metode samooksidacije pirogalola [J]. Progress in Biochemistry and Biophysics, 1986, 4:17,

[7] Xia Yiming, Zhu Lianzhen. Određivanje aktivnosti glutation peroksidaze u krvi i tkivima. Metoda jedan DTNB izravna metoda [J], Hygiene Research, 1987, 16(4): 29-32.

[8] Chen Shunzhi, Jin Youyu. Usporedba tri metode razvoja boje lipidnog peroksida TBA. Časopis kliničke laboratorijske znanosti. 1984, 2(4); 8-10.

[9] Macart M♦ Gerbaut L. Poboljšanje metode vezanja coomassie plave boje koja omogućuje dobru osjetljivost na varas proteine: primjena na cerebrospinalnu tekućinu [J], Clin Chem Acta, 1982, 112:93.

[10] Xu Shuyun, Bian Ruyuan, Chen Xiu, Metodologija farmakološkog pokusa [M]. 2. izdanje, Peking: People's Medical Publishing House, 1991.922.

[11]Halliwell B, Gutteridge JMC. Slobodni radikali u biologiji i medicini CM J. 2. izdanje. New York Oxford University Press * 1989.543-550.

L12] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Eliya Yiming, et al. Uklanjanje slobodnih radikala i zaštitni učinci na oštećenje DNK uzrokovano OH -[J]. Kineski farmaceutski časopis, 2001, 36(1):29 -31.

[13] Wu Yuling, Xu Guangyuan. Eksperimentalna studija o akutnoj kardiotoksičnosti i zaštitnom učinku vitamina E u miševa induciranom adriamicinom [J]. Journal of Dalian Medical University, 1991, 13(1): 22-27.