Prednosti akteozida - liječenje glioblastoma

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

TAE WOONG HWANG;DONG HUN KIM; DA BI KIM1;TAE WON JANG;GUN‑HWA KIM;MINHO MOON;KYUNG AH YOON;DAE EUN CHO;JAE HO PARK;JWA‑JIN KIM

1. Uvod

Glioblastomje najčešći tip malignog primarnog tumora mozga i najinvazivniji i najrazorniji primarni tumor mozga (1,2), s medijanom stope preživljenja od ~18 mjeseci s agresivnom multimodalnom terapijom. Trenutačne odluke o liječenju ograničene su i uključuju zračenje, kemoterapiju i operaciju u kombinaciji s alkilirajućim agensom temozolomidom (TMZ) (3,4). Unatoč dostupnosti agresivnih terapija, pacijenti sglioblastomopćenito imaju lošu prognozu (5). TMZ je glavni kemoterapijski lijek koji se koristi u kliničkom liječenju malignih bolestiglioblastom(6-8); kao alkilirajuće sredstvo u nizu, može prodrijeti kroz krvno-moždanu barijeru (9-11). Tijekom progresije malignog glioblastoma i opsežne invazije kroz mozak, stalno rastuća rezistencija na lijekove na TMZ smanjuje njegovu terapijsku učinkovitost (12,13). Sukladno tome, novi terapijski lijekovi za suzbijanjeglioblastomhitno se traže.

Prethodne studije su izvijestile da stanice glioma prolaze kroz staničnu smrt putem autofagije ili programirane stanične smrti tipa II kao odgovor na TMZ (14,15). Autofagiju može inhibirati 3-metiladenin (3-MA) ​​pretvorbom lakog lanca 3 (LC3)-I proteina 1 povezanog s mikrotubulima u LC3-II, čime se smanjujeglioblastomstanična smrt (16,17); međutim, uloga autofagije ovisi o staničnom kontekstu. S iznimkom citotoksične uloge tijekom djelovanja TMZ-a, indukcija autofagije staničnim stresom je citoprotektivni proces koji eliminira stresom izazvane citoplazmatske nakupine, organele i makromolekule u stanicama sisavaca kroz lizosomski sustav. Zauzvrat, stanice uključene u održavanje homeostaze dobivaju energiju kroz te kataboličke procese (18,19). Složene uloge autofagije sugeriraju da aktivator autofagije može imati antikancerogene učinke u kombinaciji s liječenjem TMZ-om inducirajućiglioblastomstanična autofagija bez ispoljavanja štetnih učinaka ili pružanja dobrobiti normalnim tkivima. Treba napomenuti da je TMZ pokazao sinergističke terapijske učinke u kombinaciji s vitaminom D, uključujući potisnutu vitalnost stanica i pojačanu autofagiju uglioblastomStanice. Nadalje, pokazalo se da kombinacija TMZ i vitamina D ima antikancerogene učinke in vivo, uključujući smanjenu veličinu tumora i produljenu stopu preživljavanja. Ove studije sugeriraju da bi kombinirano liječenje moglo imati sinergističke učinke protiv raka putem autofagičnih mehanizama u TMZ-u.glioblastomterapija (15).

Akteozidje feniletanoidni glikozid koji je široko rasprostranjen u nekoliko tonizirajućih tradicionalnih kineskih biljnih lijekova (20,21). Brojna farmakološka djelovanja, uključujući antioksidativna, antikancerogena, protuupalna, antinefritička i antimetastatska djelovanja, povezana su sakteozid(22-24). Prethodne studije su to pokazaleakteozidima zaštitne učinke protiv oštećenja jetre izazvanih ugljikovim tetrakloridom i D-galaktozaminom. Mehanizmi koji leže u pozadini zaštitnih učinaka akteozida vjerojatno su povezani s njegovom sposobnošću inhibicije bioaktivacije posredovane P450 i učinaka hvatanja slobodnih radikala izazvanih izlaganjem ugljikovom tetrakloridu (25,26).

Stoga dokazi upućuju na to da obojeakteozidi TMZ induciraju antikancerogene učinke putem stanične smrti. Međutim, njihova povezanost i antikancerogeno djelovanje u kontekstuglioblastomostaje za razjasniti. Stoga je cilj ove studije bio provjeriti sinergističke učinke protiv rakaakteozidu kombinaciji s TMZ uglioblastomterapija. Provedeno je ispitivanje stanične viabilnosti kako bi se analizirali antikancerogeni učinci kombiniranog liječenja u C6glioblastomstanice (štakorglioblastomstanične linije), a rezultati su uspoređeni s onima nakon liječenja samo TMZ-om. Za daljnje ispitivanje mehanizma stanične smrti uzrokovane istodobnim liječenjem sakteozidi TMZ, ispitani su geni povezani s apoptozom i autofagijom u C6 stanicama.

akteozid protiv tumora

2. Materijali i metode

Kultura stanica:

Štakor C6glioblastomstanična linija kupljena je od American Type Culture Collection (Rockville, MD, SAD). Stanice su uzgajane u sterilnim uvjetima na 37˚C u vlažnom okruženju s 5 posto CO2 u Dulbecco modificiranom Eagleovom mediju (DMEM) dopunjenom s 10 posto fetalnog goveđeg seruma (FBS) i 1 posto antibiotika i antimikotika (svi Welgene, Daegu , Koreja).

Biljni materijal:

Abeliophyllum distichum Nakai [vaučer br. Park1001(ANH)] prikupljeno je u tematskom parku Misun‑hyang, Seongbul-Mountain Recreation Forest, Koreja.

Indukcija kalusa:

Kako bi se potaknulo stvaranje kalusa (27), iz svježih biljaka izolirani su eksplanti listova veličine 1‑cm2. Eksplant je uzgojen na mediju Murachige i Skoog (4 posto saharoza, 0.9 posto agar s dodatkom 1 mg/l naftalen octene kiseline i 1 mg/l 2,4-dikloro fenoksi octene kiseline, pH 5,7) na 25˚C. Kalus je induciran 20 dana kasnije. Dovoljna količinaakteozidje dobiveno subkulturom za odvajanje i pročišćavanjeakteozidiz kalusa (slika 1). Različite serije pročišćenogakteozidkorišteni su u svakom eksperimentu. Svaki eksperiment je izveden tri puta koristeći različitu šaržu.

Izolacija i pročišćavanje:

Frakcije etil acetata su koncentrirane u vakuumu i korištene kao uzorak za pročišćavanje akteozida.Akteozidje izoliran i pročišćen sustavom za ubrzanu kromatografsku izolaciju (Isolera™ Spektra, Biotage, Uppsala, Švedska) upotrebom SNAP KPHOSPHO‑SIL i SNAP Ultra patrona (Biotage). Theakteozidpročišćen iz kalusa je kvantitativno analiziran korištenjem standardnog akteozida HPLC-PDA analizom. Konačno, akteozid čistoće veće od ili jednak 95 posto dobiven je iz kalusa i upotrijebljen kao uzorak za kemoterapiju na bazi temozolomidaglioblastom.

Analiza 3-(4,5-dimetiltiazol-2-l)-,5-difeniltetrazolij bromida (MTT):

Kako bi se identificirala polumaksimalna inhibitorna koncentracija TMZ-a (IC50 vrijednost) protiv C6 stanica, 1x104 stanica u jednostaničnim suspenzijama nasađeno je u pojedinačne jažice ploča s 96 jažica i inkubirano 24 sata na 37˚C prije tretmana TMZ-om na navedenoj koncentracije (1, 5, 10 i 20 mM) na 37˚C tijekom 24 h. Nakon određivanja vrijednosti TMZ IC50 kao 5 mm, stanice su tretirane 24 h s 5 mM TMZ, 50 µMakteozid, ili kombinacija ta dva (5 mM TMZ i 50 µMakteozid). Otopina MTT (5 mg/ml) je dodana u svaku jažicu (10 µl) i uzgajana na 37˚C tijekom 2 sata. Nakon toga, medij je uklonjen i DMSO je dodan u volumenu od 200 ul svaki i reagirao je na sobnoj temperaturi 30 minuta. Apsorbancija na 595 nm je izmjerena da se odredi vitalnost stanica.

Test zacjeljivanja rana:

Suspenzija stanica C6 u 1 ml uzgajana je u ploči s 12 jažica i uzgajana do konfluencije. Stanice su tretirane TMZ-om,akteozid, ili TMZ plusakteozida zatim se izgrebe sterilnim vrhom pipete od 10-µl kako bi se stvorila umjetna rana. 0 i 24 sata nakon ranjavanja, digitalne slike procesa zacjeljivanja rane snimljene su pomoću invertnog mikroskopa. Migracija stanica je kvantificirana mjerenjem veličine ožiljka nakon 0 i 24 sata pomoću softvera za analizu slike, softvera ImageJ 1.43u/Java1.6.0_22 (NIH, Bethesda, Maryland, SAD). Svaki eksperiment je izveden tri puta, a mjerenja su izvedena u tri primjerka.

Imunobloting:

C6 stanice su tretirane s TMZ,akteozid, ili TMZ plusakteozidtijekom 24 h. Stanice su lizirane na ledu RIPA (25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl, 1 posto Nonidet P-40, 1 posto natrijev deoksikolat, 0,1 posto SDS) puferom za lizu nadopunjeno koktelom inhibitora proteaze i fosfataze (Roche, Basel, Švicarska) tijekom 30 min. Nakon centrifugiranja na 18,341 xg tijekom 15 minuta na 4˚C, dobiven je supernatant. Koncentracija proteina određena je pomoću Bradfordovih testova proteina (Bio‑rad, Hercules, CA, SAD). Jednake količine ukupnih proteina (30 µg) stavljene su u pojedinačne jažice i frakcionirane putem elektroforeze putem 10-15 posto SDS-PAGE. Proteini su elektrotransferirani na membrane od poliviniliden difluorida (EMD Millipore, Bedford, MA, SAD). Nakon inkubacije u otopini za blokiranje koja sadrži 5 posto nemasnog mlijeka u slanoj otopini pufera Tween/Tris tijekom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Mrlje su ispitivane 1:1,000-razrijeđenim primarnim antitijelima (kat. br. 9662, kaspaza 3; Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, SAD), B0-stanični limfom 2 (sc- 7382, Bcl-2), Bcl-2-povezani X protein (kat. br. 2772, Bax), fosforilirani (p-)p53 (sc-101762), ukupni-p53 (sc-6243), ‑aktin (kat. br. 4970; sve; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, SAD), LC‑3 (L8918, Sigma; Merck KGaA, Darmstadt, Njemačka), Rab7 (kat. br. 9367, Cell Signaling Technology, Inc. ), p62 (kat. br. 114), p‑p38 (kat. br. 9211), ukupno-p38 (kat. br. 9212), p-c-Jun N-terminalna kinaza (kat. br. 9251, p ‑JNK), total-JNK (kat. br. 9252), p-ekstracelularna kinaza regulirana signalom (kat. br. 9101, p-ERK), total-ERK (kat. br. 9102; sve Cell Signaling Technology, Inc. .) preko noći na 4˚C. Zatim je uslijedila inkubacija sa sekundarnim protutijelima konjugiranim s peroksidazom hrena (1:2, 000; LF-SA8001A, kozji anti-mišji IgG-HRP) ili LF-SA8002A (kozji anti-zečji IgG-HRP), AB Frontier, Seul, Koreja.) 2 h na sobnoj temperaturi. Proteini su zatim vizualizirani izlaganjem Chemi‑Doc (Bio‑Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, SAD).

Imunofluorescentno bojenje:

Membranski protein 1 povezan s lizosomom (LAMP1) i LC3 markeri su za lizosomalnu i autofagiju. Stanice (1x105 stanica/jažici) su pripremljene na steriliziranim staklenim pokrovnim stakalcima (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, SAD) u tri primjerka. Nakon liječenja TMZ-om,akteozid, ili TMZ plusakteozid24 h, stanice su fiksirane u 4 posto paraformaldehida 30 min, blokirane s 5 posto normalnog pilećeg seruma (S-3000; Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, SAD), 0,1 posto Triton X -100 i zatim inkubirao 1 h radi permeabilizacije i blokiranja nespecifičnih interakcija protein-protein. Stanice su zatim inkubirane s anti-LAMP1 (1:200; sc-19992, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) i anti-LC3 (1:400; PM036, MBL International, Woburn, MA, SAD) preko noći na 4˚ C. Stanice su zatim isprane dva puta s PBS-om i inkubirane dodatna 2 sata u mraku s mješavinom Alexa Fluor 488 i 594 sekundarnih protutijela (1:200; Alexa Fluor 488 (A-11008) i 594 (A-11007), Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, SAD) i ponovno isprana s PBS. Jezgre su obojene pomoću 4,6-diamidino-2-fenilindola (Sigma; Merck KGaA), a zatim dvaput isprane s PBS-om. Stakalca su zatim montirana i slike su snimljene pod laserskim konfokalnim mikroskopom LSM‑700.

Slika 1. Kemijska struktura akteozida.

Protočna citometrija.

Stanice su analizirane na Mitotracker Green i MitoSOX protočnom citometrijom pomoću FACSCanto II protočnog citometra, kako je naveo proizvođač (BD Biosciences). Nakon dva ispiranja s PBS-om, stanice su fiksirane u 4-postotnom paraformaldehidu 30 min na sobnoj temperaturi i permeabilizirane s 0,25-postotnim Tritonom X-100 u PBS-u 20 min. Stanice su obojene primarnim antitijelima preko noći na 4˚C (1:200), a zatim sekundarnim antitijelima 1 sat na ledu. Nakon dva ispiranja s PBS-om, stanice su fiksirane u 4 posto paraformaldehida i odmah testirane. Podaci protočne citometrije prikupljeni su korištenjem 10 000 stanica i analizirani pomoću softvera FlowJo 7.6.1 (Tree Star, Inc., Ashland, OR, SAD).

Statistička analiza:

Svi podaci analizirani su pomoću programa GraphPad Prism 5.0 i prikazani su kao srednja vrijednost ± standardna pogreška srednje vrijednosti. Podaci su analizirani jednosmjernom analizom varijance s Tukeyjevim post hoc testom višestrukih usporedbi za usporedbu srednjih vrijednosti među više grupa. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Cistanche Echinacoside: Anti-apoptoza

3. Rezultati

3.1 Istodobno liječenje TMZ-om i supresorima akteozidaglioblastomproliferaciju i migraciju stanica.

Kombinirano liječenje s TMZ iakteozidinhibirao vitalnost C6 stanica. TMZ je smanjio vitalnost stanica na način ovisan o dozi (Slika 2A), dok sam akteozid nije imao značajan učinak ni na jednoj razini liječenja (Slika 2B). Nakon inkubacije u mediju kulture koji je sadržavao TMZ sa ili bez akteozida tijekom 24 sata, proveden je MTT test za usporedbu citotoksičnosti različitih razina liječenja. TMZ je značajno potisnuo vitalnost stanica, dok akteozid nije značajno potisnuo rast stanica. Kombinirano liječenje TMZ-om i akteozidom značajno je smanjilo vitalnost stanica (slika 2C). Liječenje samo TMZ-om ili akteozidom smanjilo je sposobnost zacjeljivanja rana (slika 3A). Udaljenost rane (u postocima) izmjerena je korištenjem rezultata prikazanih na slici 3A pomoću softvera ImageJ. Udaljenost rane značajno se povećala nakon kombiniranog tretmana (slika 3B), u usporedbi s bilo kojim pojedinačnim tretmanom. Ovi rezultati pokazuju da je istodobna terapija TMZ-om i akteozidom bila učinkovit inhibitorglioblastomproliferaciju i migraciju stanica.

3.2 Akteozid i TMZ sinergistički utječu na apoptozu u C6 stanicama.

Rezultati Western blot analize otkrili su da su razine cijepane kaspaze-3, Bax i fosforiliranog p53 bile više, a razine Bcl-2 niže nakon kombiniranog liječenja s TMZ iakteozidnego nakon liječenja samo TMZ-om (slika 4A).Akteozid‑posredovana mitohondrijska funkcija i stvaranje reaktivnih kisikovih vrsta (ROS), koji su ključni posrednici apoptotičke signalizacije, zatim su promatrane u C6 stanicama tretiranim TMZ-om. Kako bi se potvrdila mitohondrijska masa, provedena je analiza razvrstavanja stanica aktiviranih fluorescencijom pomoću MitoTracker Greena. Istodobno liječenje TMZ-om iakteozidrezultiralo je većom mitohondrijskom masom od liječenja samim TMZ-om (slika 4B). Stvaranje ROS-a bilo je značajno veće nakon istodobnog liječenja TMZ-om i akteozidom nego nakon liječenja samim TMZ-om (Slika 4C). Ovi rezultati sugeriraju da su stvaranje ROS-a i funkcija mitohondrija važni u apoptozi izazvanoj liječenjem TMZ-om plus akteozidom. Istodobno liječenje TMZ-om i akteozidom izaziva autofagiju u C6 stanicama. Prijavljeno je da TMZ izaziva autofagiju (28,29); stoga je ova studija ispitala stupanj do kojeg je autofagija bila izazvana liječenjem TMZ-om i akteozidom. C6 stanice su tretirane s TMZ sa ili bez akteozida; nakon 24 h, a stanice su obojene za imunofluorescenciju da se otkriju LAMP1 i LC3 kao markeri autofagije. Veće razine ekspresije LAMP1 i LC3 primijećene su nakon kombiniranog tretmana (slika 5A). Ekspresija proteina povezana s autofagijom također je ispitana i otkriveno je da TMZ inducira konverziju LC3-I u LC3-II, što je znak stvaranja autofagosoma. Veća stopa pretvorbe LC3-I u LC3-II primijećena je nakon istodobnog liječenja TMZ-om i akteozidom od liječenja samim TMZ-om. Razine ekspresije Rab7 i p62 ukazale su na indukciju autofagije u stanicama tretiranim TMZ-om (Slika 5B). Ovi nalazi sugeriraju da je istodobno liječenje TMZ-om i akteozidom pojačalo autofagijski proces uglioblastomStanice.

3.3 Akteozid inducira ekspresiju gena MAPK putanje u liječenju koje se temelji na TMZ-u.

Prethodne studije su pokazale da TMZ regulira MAPK put, uključujući p38, JNK i ERK (30). Stoga je ova studija istraživala je liakteozidutječe na ekspresiju MAPK gena povezanog s TMZ-om. C6 stanice su tretirane s TMZ sa ili bezakteozid. Nakon 24 sata, liječenje TMZ-om rezultiralo je višim razinama ekspresije p-p38, p-JNK i p-ERK. Ekspresija gena reguliranih TMZ-om bila je značajno veća nakon liječenja TMZ-om plus akteozid nego nakon liječenja samo TMZ-om (slika 6). Ova zapažanja sugeriraju daakteozidutječe na terapijske mehanizme temeljene na TMZ-u putem MAPK puta.

Acteoside anti-glioblastom

Rasprava

Rezultati ove studije pokazuju da kombinirano liječenje TMZ saakteozidnudi terapijski potencijal zaglioblastomliječenju i pružiti dokaze da kemosenzibilizacija na kombinaciju TMZ iakteozidmože se dogoditi pojačanom autofagijom. Kao mutacijaglioblastomstanice mogu dovesti do inaktivacije apoptotičkog puta, indukcija autofagije pomoću TMZ plusakteozidzajedničko liječenje može predstavljati alternativnu metodu zaglioblastomterapija. Međutim, je li autofagija jedini mehanizam zaglioblastomterapija TMZ plusakteozidzajedničko liječenje tek treba razjasniti.

Autofagija je bitan stanični mehanizam za razgradnju proteina i citoplazmatskih organela. Katabolička prednost inducirane autofagije može biti važna u stresnim uvjetima; stoga bi indukcija autofagije mogla biti adaptivni mehanizam za prevenciju stanične smrti (31-33). Prethodne studije su izvijestile da je smanjena autofagija povezana s rakom (34-36). Osim toga, nekoliko proteina i signalnih putova povezanih s autofagijom deregulirano je tijekom maligne transformacije, što rezultira smanjenjem autofagne aktivnosti. Visoke razine ekspresije LC3 također su povezane s povećanim stopama preživljavanja pacijenata sglioblastoms lošim rezultatima (37,38). Slično tome, rezultati ove studije pokazuju da obnova normalne autofagije može biti latentna strategija zaglioblastomterapiji i može poslužiti kao mehanizam za ograničavanje abnormalnog rasta tumorskih stanica.

U normalnoj autofagiji, određene citoplazmatske komponente se izoliraju unutar autofagosoma koji se zatim stapaju s lizosomom da bi se razgradili i reciklirali (39,40). Kada je autofagija pojačana, stope stvaranja autofagosoma nadmašuju stope lizosomske degradacije; ovo se stanje naziva autofagijskim stresom. Ako se stres ili abnormalna autofagija nastavi, može doći do stanične smrti putem iscrpljenosti energije ili promjena u ravnoteži beclin-1/Bcl-2. Apoptozu također može potaknuti hiperaktivnost autofagosoma, koja zahvaća citoplazmatske organele uključujući mitohondrije ili endoplazmatski retikulum (41). Pretpostavlja se da opća autofagija može inducirati staničnu smrt tijekom normalne citoplazmatske i organelne izmjene u zdravim stanicama. U tom procesu stanica se 'kanibalizira' iznutra, što je ključna karakteristika programirane stanične smrti tipa II. Iako mehanizmi kojimaakteozidpojačava terapeutski učinak na bazi TMZ-aglioblastomterapija tek treba u potpunosti razjasniti, učinci protiv raka koje pokazuje kombinirano liječenje ispitano u ovoj studiji mogu biti povezani s ovim autofagijskim mehanizmima.

Akteozidje feniletanoidni glikozid dobiven iz biljaka (22,26). Prethodne studije su izvijestile o različitim biološkim aktivnostima akteozida. Promjene u razinama ekspresije cijepane kaspaze-3 i LC3 u ovoj studiji pokazuju da liječenje kombinacijom TMZ iakteozidinduciranu apoptozu i autofagiju u C6 stanicama (Slike 4 i 5). Pokazalo se da kombinirano liječenje ima sinergistički učinak naglioblastomStanice. Iako ostale moguće mehanizme ovih sinergističkih učinaka tek treba razjasniti, ova studija identificirala je indukciju autofagije kao ključni tumoricidni mehanizamakteozidkemosenzibilizacija tijekom TMZ-aglioblastomterapija.

Acteoside liječi glioblastom

Reference

1. Friedman HS, Kerby T i Calvert H: Temozolomid i liječenje malignog glioma. Clin Cancer Res 6: 2585-2597, 2000.

2. Mrugala MM i Chamberlain MC: Mehanizmi bolesti: Temozolomid iglioblastom- gledati u budućnost. Nat Clin Pract Oncol 5: 476-486, 2008.

3. Agarwala SS i Kirkwood JM: Temozolomid, novi alkilirajući agens s djelovanjem na središnji živčani sustav, može poboljšati liječenje uznapredovalog metastatskog melanoma. Onkolog 5: 144-151, 2000.

4. Stevens MF, Hickman JA, Stone R, Gibson NW, Baig GU, Lunt E i Newton cG: Antitumorski imidazotetrazini. 1. Sinteza i kemija 8-karbamoil-3-(2-kloretil)imidazo[5,1-d]-1,2,3, 5-tetrazin-4(3H)-ona, novog antitumorskog lijeka širokog spektra agent. J Med Chem 27: 196-201, 1984.

5. Fulda S: Liječenje temeljeno na staničnoj smrtiglioblastom. Stanična smrt dis 9: 121, 2018.

6. Chen PH, Shen WL, Shih CM, Ho KH, Cheng CH, Lin CW, Lee CC, Liu AJ i Chen KC: Put Notch3 inhibiran CHAC1 uključen je u citotoksičnost glioma izazvanu temozolomidom. Neuropharmacology 116: 300-314, 2017.

7. Oshiro S, Tsugu H, Komatsu F, Ohmura T, Ohta M, Sakamoto S, Fukushima T i Inoue T: Učinkovitost liječenja temozolomidom u bolesnika s gliomom visokog stupnja. Anticancer Res 29: 911-917, 2009.

8. Van den Bent MJ: Adjuvantno liječenje glioma visokog stupnja. Ann Oncol 17 (Dodatak 10): x186-x190, 2006.

9. Shen W, Hu JA i Zheng JS: Mehanizam antitumorskih učinaka temozolomida na stanice glioma. J Int Med Res 42: 164-172, 2014.

10. Barciszewska AM, Gurda D, Głodowicz P, Nowak S i Naskręt‑Barciszewska MZ: Novi epigenetski mehanizam djelovanja temozolomida u stanicama glioma. PLoS One 10: e0136669, 2015.