Prijenos ehinakozida i akteozida osjetljiv na floridzin i promijenjeni put apsorpcije u crijevima nakon primjene ekstrakta Cistanche Tubulosa

Za više informacija:ali.ma@wecistanche.com

Tadatoshi Tanino i dr

Sažetak Ciljevi

Cilj ove studije bio je ispitati korisne učinkeEkstrakt Cistanche tubulosana poboljšanje niske crijevne propusnosti ehinakozida (ECH) i akteozida (ACT).

Metode

Apsorpcija ECH i ACT uEkstrakt Cistanche tubulosaje okarakteriziran korištenjem monoslojeva ljudskih crijevnih stanica Caco-2 s netaknutim spojevima. Apsorpcija ECH i ACT ovisna o prijenosniku glukoze potvrđena je tehnikom intestinalne perfuzije.

Ključni pronalasci

Prividna propusnost (Papp) nije bila značajno različita između intaktnog ECH i intaktnog ACT. U prisutnosti floridzina, Papp za ECH i ACT pri visokoj dozi bio je smanjen na 20 posto od dotičnog neliječenja, ali nije bio promijenjen floretinom i verapamilom.Ekstrakt Cistanche tubulosapri niskim i visokim dozama pojačao je Papp ECH i ACT (oba trostruko), što je rezultiralo njihovim velikim sudjelovanjem u apsorpciji neovisnoj o transporteru glukoze ovisnoj o natriju. Pri niskoj koncentraciji, popratne razine ECH i ACT u portalnoj krvi značajno su potisnute floridzinom.

Zaključak

Dijetalno i ljekovitoEkstrakt Cistanche tubulosapovećanje intestinalne apsorpcije ECH i ACT može poslužiti za bolje upravljanje ljudskim zdravljem, iako bi uključivanje transporta osjetljivog na floridzin trebalo smanjiti.

Ključne riječiakteozid; Caco-2 jednoslojevi stanica;Ekstrakt Cistanchetubulosa; ehinakozidtransporter glukoze osjetljiv na floridzin

Ekstrakt Cistanche tubulosa

Kliknite na Cistanche tubulosa prah

Uvod

Korijenje Cistanche tubulosa tradicionalno se koristilo za lijekove i hranu.Ekstrakt Cistanche tubulosapoznato je da ima farmakološke učinke u raznim bolestima mozga, funkcijama protiv starenja, metabolizmu masti i rastu kose.[1–4] Nedavno su iridoidi, monoterpenoidi, feniletanoidni glikozidi i lignani izolirani izCistanche tubulosa[5,6] Feniletanoidni glikozidi, klasa polifenolnih spojeva, glavni su kemijski sastojci vrsta Cistanche, [7] iako njihove količine variraju među različitim vrstama. Ehinakozid (ECH; Slika 1) jedan je od glavnih feniletanoidnih glikozida u HerbaCistanchisu. Hidrolizira se u akteozid (ACT; također se naziva i verbaskozid) pomoću enzima bakterijskog podrijetla u debelom crijevu.[8,9] ECH i ACT posjeduju korisnu aktivnost hepatoprotekcije[10] i protuupalne aktivnosti[11] kod glodavaca. Iznenađujuće, visoko topljivi u vodi ECH poboljšava bihevioralne i neurokemijske ishode u mišjem modelu Parkinsonove bolesti i inhibira aktivaciju kaspaze-3 i kaspaze-8 u neuronima cerebelarnih granula.[9] Dobro je poznato da krvno-moždana barijera strogo ograničava ulazak i distribuciju ksenobiotika u mozak iz krvi. Wu i dr.[12] također je pokazao da se u vodi topljivi ACT brzo distribuira u moždanim tkivima štakora. Stoga se ECH i ACT mogu prenijeti u mozak, crijeva i jetru posebnim sustavom(ima).

Iako postoje čvrsti dokazi koji upućuju na to da konzumacijaEkstrakt Cistanche tubulosaje koristan za ljudsko zdravlje, propusnost čistog ECH kroz monoslojeve stanica Caco{{0}} pri apikalnoj koncentraciji od 8,4 ± 1,6 ug/ml jednaka je ili niža od paracelularnog transportnog markera manitola.[13] Kada se štakorima peroralno daje čisti ECH (doza 1{{10}}0 mg/kg), apsorpcija je iznimno brza (Tmax, 15 min), a maksimalna koncentracija u serumu vrlo niska (Cmax, 0.61 ± 0.32 ug/ml).[14] Apsolutna bioraspoloživost ECH je samo 0.83 posto. Slično, kada se Caco-2 stanice inkubiraju s fenolnom frakcijom djelomično pročišćenom iz otpadne vode tvornice maslina, apsorpcija čistog ACT-a je brza s vršnom akumulacijom nakon 30 min i ukupnom učinkovitošću akumulacije od 0,1 posto, osiguravajući unutarstanične razine od 130 pmol/mg staničnog proteina.[15] U štakora je maksimalna koncentracija (0,13 ± 0,03 ug/ml) čistog ACT-a postignuta unutar 30 minuta nakon oralnog doziranja od 100 mg/kg, [12] što ukazuje na brzu intestinalnu apsorpciju. Oralna bioraspoloživost ACT-a, kao i ECH-a, prilično je niska (0,12 ± 0,04 posto), što ukazuje na mogućnost učinaka prvog prolaska kroz intestinalni trakt i jetru. U žuči štakora, metilacijski i glukuronidacijski konjugati ECH-a glavni su metaboliti [16], iako opseg jetrenog metabolizma ostaje nejasan. Preliminarno smo otkrili da su ECH i ACT prilično stabilni u homogenatima crijevne sluznice štakora i umjetne želučane kiseline (podaci nisu prikazani). Najar i dr.[17] pokazao da ACT inhibira aktivnost P-glikoproteina (P-gp)-ATPaze na način sličan verapamilu (reprezentativni inhibitor P-gp), što implicira modulator P-gp; međutim, nije sigurno je li ACT dostupan kao P-gp supstrat. Zanimljivo je da su nedavna otkrića prehrambenih flavonoid-D-glukozida pokazala da protein otpornosti na više lijekova (MRP2) prikriva transporter glukoze ovisan o natriju (SGLT)1-posredovan unos kvercetin 4′-O- -glukoze,[18 ,19] koji je odgovoran za vrlo slabu apsorpciju. Međutim, vrlo malo se zna o osjetljivosti polifenolnih glukozida na apsorpcijske transportere, uključujući transportere glukoze. Podaci o apsorpcijskim karakteristikama kvercetin4'-glukozida i ECH koji brzo propušta krvno-moždanu barijeru potaknuli su nas da istražimo unos feniletanoidnih glikozida u prehrani C koji je osjetljiv na transporter. tubuloza.

U ovoj smo studiji istraživali apsorpciju intaktnog ECH i ACT-a posredovanu transporterom glukoze koristeći monoslojeve Caco-2 stanica ljudskog crijeva. Istovremeno, apsorpcijski transport ECH-a i ACT-a istodobno s hranomEkstrakt Cistanche tubulosaje karakteriziran in-vitromodelom i in-situ intestinalnim perfuzijskim sustavom s portalnim uzorkovanjem krvi, koji može lako razlikovati između opsega apsorpcije i izbjegavanja dispozicije prvog prolaza kroz jetru.

Materijali i metode

Materijali

Intact ECH i ACT bili su velikodušni darovi EishinTrading Co., Ltd (Osaka, Japan). Floridzin i floretin nabavljeni su od Tokyo Kasei Co., Ltd. (Tokio, Japan). Verapamil i p-kumarinska kiselina, korišteni kao interni standardi za ispitivanje tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti (HPLC), nabavljeni su od Sigma-Aldrich (St Louis, MO). ,SAD). Sve ostale korištene kemikalije bile su analitičke kvalitete i komercijalno dostupne.

Biljni materijal i priprema metanolnog ekstrakta

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) je višegodišnja parazitska biljka koja raste na korijenu vrste Salvadora ili Calotropis, a rasprostranjena je u sjevernoafričkim, arapskim i azijskim zemljama. Osušene stabljike C. tubulosa usitnjene su u prah i ekstrahirane tri puta s metanolom pod refluksom tijekom 3 sata. Uparavanjem otapala pod sniženim tlakom dobiven je metanolni ekstrakt. Metanolni ekstrakt (komercijalni stupanj, serija br. 20070130; registrirano trgovačko ime, Sabaku Ninnjinn Kanka) bio je velikodušan dar Eishin Trading Co., Ltd preko Muraoke i Morikawe (Sveučilište Kinki, Japan), a botaničku identifikaciju proveo je profesor Jia Xiaoguang u Institut za tradicionalnu kinesku i etnološku medicinu Xinjiang.

Analiza biljnih ekstrakata: kromatografija

Odredili smo sadržaj ECH i ACT uEkstrakt Cistanche tubulosa(Broj serije 20070130) pomoću HPLC analize opisane u nastavku. Dobiveni podaci prikazani su u tablici 1.

Kultura stanica

Stanice Caco{{0}}, kupljene od American Type CultureCollection (ATCC, Rockville, MD, SAD), korištene su u pasažima 38–53. Uzgajani su u mediju kulture koji se sastojao od Dulbecco modificiranog Eagleovog medija (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japan) dopunjenog 0.1 mM neesencijalnim aminokiselinama, 10 posto fetalnog goveđeg seruma inaktiviranog toplinom, 100 U/ml penicilina G i 0,1 mg/ml streptomicin sulfata.

Proučavanje prometa

Stanice Caco-2 nasađene su na polikarbonatne filtre pri gustoći od 6,4 × 103 stanica/cm2. Jednoslojevi su korišteni za pokuse transporta 21-25 dana nakon sjetve. Intaktni ECH i ACT koji su bili ekvivalentni njihovom sadržaju uEkstrakt Cistanche tubulosa (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

Ehinakozid uEkstrakt Cistanche tubulosa

In situ intestinalna perfuzija

Muški Wistar štakori (230-250 g) dobiveni su iz SLCJapan (Hamamatsu, Japan). Životinje su bile smještene u klimatiziranoj prostoriji pod ciklusom svjetlo/mrak od 12 sati 1 tjedan prije upotrebe. Štakori su hranjeni standardnom laboratorijskom hranom (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japan) s vodom ad libitum i izgladnjivani su preko noći prije testa. In-siture cirkulirajuća perfuzijska studija provedena je prema modificiranoj proceduri koju su opisali Mihara et al. [20] Ukratko, štakori su anestezirani 25-postotnom otopinom uretana (1 mg/kg) kako bi se izbjeglo smanjenje krvnog tlaka. Napravljen je rez na srednjoj liniji abdomena i otkriveno je tanko crijevo. Žučni kanal je podvezan kako bi se izbjegla sekrecija žuči u perfuzat. Cijelo tanko crijevo kao jedan segment (od duodenuma do ileuma) je isprano normalnom fiziološkom otopinom na 37 stupnjeva tijekom 10 minuta dok ispiranje nije postalo bistro. Staklene cijevi povezane sa silikonskim cijevima zatim su kanilirane u oba kraja tankog crijeva i pričvršćene koncem za šavove. Zatim je tanko crijevo premješteno u abdomen, a kanile su spojene na peristaltičku pumpu. Portalna vena kanilirana je polietilenskom cijevi (PE10).Ekstrakt Cistanche tubulosakomercijalno dostupan suspendiran je u Krebs-Henseleit bikarbonatnom puferu (pH 7,4) kako bi se dobila konačna koncentracija od 4,5 mg/ml i centrifugiran 10 min na 8000 okretaja u minuti kako bi se uklonile netopljive komponente. Supernatant u odsutnosti ili prisutnosti floridzina (1 mM) ponovno je sakupljen u spremnik, koji je održavan na temperaturi od 37 ± 0,5 stupnjeva tijekom cijelog eksperimenta. U navedeno vrijeme krv je uzeta kroz kanilu portalne vene. Nakon centrifugiranja uzoraka krvi, dobivena plazma je deproteinizirana acetonitrilom koji je sadržavao interni standard i centrifugirana je na 3000 okretaja u minuti. Supernatanti su ispareni, a ostatak odvojen s mobilnom fazom koja se sastoji od facetonitrila i 0,5 posto octene kiseline. Pomiješana otopina je napunjena na HPLC kolonu. Štakori su korišteni u skladu s etičkim postupcima prema Smjernicama za njegu i korištenje laboratorijskih životinja koje su izdali japanska vlada i Sveučilište Kinki.

HPLC analiza

HPLC analiza provedena je na sustavu opremljenom sa Shimadzu SPD{{0}}A, UV detektorom, Shimadzu LC-10A pumpom i Shimadzu C-R4A chromatopac integratorom (Kyoto, Japan). ECH i ACT razdvojeni su pomoću Inertsil ODS kolone (5 μm, 4,6 × 150 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japan). Korištena je mobilna faza acetonitrila i 0,5 postotne octene kiseline u omjeru 15:85 (v/v) pri brzini protoka od 1,0 ml/min. Detekcija je provedena na 334 nm

Kinetička analiza

Koeficijenti prividne propusnosti (Papp) procijenjeni su iz nagiba linearnog dijela vremenskog tijeka prijenosa spoja kroz monoslojeve stanica Caco-2, kako slijedi: P dQ dt AC app=( ) ( )

gdje je dQ/dt stopa propusnosti, C0 početna koncentracija otopljene tvari u donornoj komori, a A je površina membrane (4,7 cm2).

U ispitivanju intestinalne perfuzije štakora na licu mjesta, površina ispod krivulje koncentracija u plazmi-vrijeme (AUC0–90) u portalnoj veni od nultog vremena do zadnjeg mjerenja izračunata je prema linearnom trapezoidnom pravilu.

Akteozid uEkstrakt Cistanche tubulosa

Fizikalno-kemijska svojstva

Polarna površina i nepolarna površina spojeva izračunate su pomoću programa SAS (verzija 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , NC, SAD). Eksperimentalno određene vrijednosti log P i pKa dobivene su iz literature.

Statistička analiza

Podaci su analizirani jednosmjernom analizom varijance nakon koje je slijedio Tukeyev post-hoc test. Vrijednosti vjerojatnosti manje od 5 posto smatrane su značajnima.

Rezultati

Apsorpcijski transport ehinakozida i akteozida kroz jednoslojeve Caco-2 stanica

Kod miševa i štakora, intaktni ECH[10,14] i ACT[12,21] davani su oralno u dozama od 100-1000 mg/kg. TheEkstrakt Cistanche tubulosakorišteni su sadržavali približno 30 posto ECH i 15 posto ACT po dozi. Budući da je ekstrakt promijenio osmotski tlak i pH u mediju za inkubaciju, koncentracije od 4,5 i 13,5 mg/ml određene su na temelju oralne doze (intaktni spojevi: 2–20 mg/2{{2{{31} }}} g tjelesne težine) kod miševa. Ekstrakt u niskim (4,5 mg/ml) i visokim dozama (13,5 mg/ml) sadržavao je 2.0 i 6,1 mg za ECH i 1.0 odnosno 3.0 mg za ACT. Primijenili smo količine ekstrakta C. tubulosa koje su bile mnogo niže od oralnih doza ECH i ACT prijavljenih kod ljudi (preporučeni unos ekstrakta u prehrani: 150 mg koji sadrži približno 45 mg za ECH i 22,5 mg za ACT). Pri niskim i visokim dozama intaktnih spojeva, profili apsorpcije (Slika 2) i Papp nisu se značajno razlikovali između ECH i ACT kao ECH ekvivalenta (Tablica 2). Kada je ekstrakt C. tubulosa u visokoj dozi od 13,5 mg/ml stavljen u medij, Papp vrijednosti (1,27 ± 0.13 i 0.34 ± 0.03 × 10−6 cm/s, redom) popratnih ECH i ACT bili su trostruko veći od onih (0,38 ± 0,09 odnosno 0,10 ± 0,03 × 10-6 cm/s) intaktnog ECH i ACT (Tablica 2). Ekstrakt je, za razliku od netaknutih spojeva, značajno poboljšao apsorpcijski transport ECH i ACT.

Inhibitorni učinak floridzina, floretina i verapamila

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 mM) floretina nije se moglo koristiti zbog primjetne toksičnosti za stanice. Dodatno, P-gp je identificiran kao važan igrač odgovoran za interakciju između biljnih lijekova i klinički važnih P-gps supstrata. Verapamil nije poboljšao apsorpcijski transport intaktnih spojeva (Slika 3).

Apsorpcijski transport ECH i ACT u ekstraktu (niska doza) bio je značajno inhibiran floridzinom (tablica 2 i slika 4). Ekstrakt u visokoj dozi potisnuo je inhibiciju osjetljivu na floridzin, iako je transport netaknutih ECH i ACT bio osjetljiviji na floridzin (Tablica 2).

Studija intestinalne perfuzije in situ

U studiji na licu mjesta testirali smo jesu li ECH i ACT inEkstrakt Cistanche tubulosaprenosili su SGLT1 koji se nalazi na apikalnoj strani tankog crijeva. Kada je dijetalni ekstrakt u niskoj dozi (4,5 mg/ml) perfundiran, ECH i ACT su se brzo pojavili u portalnoj krvi (Slika 5). AUC je određen kao 2702,8 ± 384,1 μm·min za ECH i 698,3 ± 197,2 μm·min za ACT. Nakon što je AUC normaliziran sadržajem izEkstrakt Cistanche tubulosa, apsorbirana količina nije bila značajno različita između ECH i ACT. SGLT1-osjetljivi floridzin, za razliku od floretina, značajno je potisnuo apsorpcijski transport pratećeg ECH (AUC, 649,4 ± 248,2 μm·min) i ACT (nije detektirano).

Rasprava

Neki biljni sastojci su supstrati P-gp-a koji je visoko izražen u jetri, crijevima, mozgu i bubrezima. P-gp je odlučujući čimbenik za in vivo bioraspoloživost, raspodjelu i distribuciju biljnih lijekova, uključujući gospinu travu, kurkumin, ehinaceju, ginseng, ginko i đumbir.[22,23]Bioraspoloživost genisteina{{5} }glukozid, derivat flavonoida, također je ograničen intestinalnim MRP2 transporterom.[24] Stoga je ova studija osmišljena kako bi se istražila svojstva apsorpcije ECH i ACT istovremeno u prehrani i lijekovimaEkstrakt Cistanche tubulosa.

Polarizirani monoslojevi Caco{{0}} stanica, kao i crijeva,[25], eksprimiraju glavne intestinalne efluksne transportere lijekova, kao što su P-gp, MRPs i protein otpornosti na rak dojke.[26]Flavonoidi u ishrani kvercetina[27] i miricetina[28] inhibiraju efluks posredovan P-gp-om, kako u staničnim tako iu životinjskim modelima. Verapamil, inhibitor P-gp-a, nije promijenio propusnost ACT-a i ECH-a kroz monoslojeve Caco-2stanica (Slika 3), što ukazuje da intaktni ECH i ACT nisu bili ograničeni efluksnom pumpom P-gp-a. Naše prethodne studije pokazale su da proteini MRP2 nisu eksprimirani u monoslojevima stanica Caco-2.[29] P-gp i MRP2-posredovani efluks mogao bi se isključiti u ECH i ACT transportu. Neki glikozidi kvercetina niske lipofilnosti apsorbiraju se učinkovitije od samog kvercetina.[30] Također je važno napomenuti da se ACT sa šećernom ostatkom brzo distribuira u moždanim tkivima. Naša je pažnja bila usmjerena na kombinirano djelovanje dva transportera glukoze u enterocitima: SGLT u membrani četkastog ruba i olakšani difuzijski transport glukoze (GLUT) u bazolateralnoj membrani. Caco-2 stanična kultura može se koristiti kao model za proučavanje floretin-osjetljivih GLUT2 i floridin-osjetljivih SGLT1 i 2 transportera.[31-34]Glukoza se transportira od apikalne do bazolateralne strane Caco-2 monoslojeva velikom brzinom s Pappofom od 36,8 ± 1,1×10−6 cm/s.[35] Posjeduje veći Papp od markera transcelularnog transporta propranolola (23,4 ± 2,8 × 10−6 cm/s). Kao što je prikazano u tablici 2, intaktni ECH i ACT imali su mnogo niži Papp od onog zabilježenog u glukozi i pasivnom propranololu. Izračunali smo logaritam koeficijenta raspodjele (oktanol-voda), log P je izračunat na -2,32 i 0.077 za ECH i ACT, respektivno. Vjeruje se da se polarni ili hidrofilni spojevi prenose paracelularnim putem (preko uskih spojeva). Čini se da se dva feniletanoidna glikozida, poput manitola, transportiraju paracelularnim putem. Međutim, floridzin je dramatično smanjio apsorpcijsku propusnost intaktnog ECH i ACT (Tablica 2), sugerirajući da apicalSGLT1 igra glavnu ulogu u intestinalnoj apsorpciji intaktnog ECH i ACT. Pri ekvivalentnoj dozi, veća hidrofobna ACT propusnost bila je blizu ECH propusnosti (Slika 2 i Tablica 2). Yoshikawa i dr.[36] su pokazali da se olakšavajući transporteri (GLUT 1 i 2), kao i SGLT1 osjetljiv na floridin, intenzivno eksprimiraju u tankom crijevu. Budući da se apsorbirane količine spojeva temelje na ravnoteži mase između unosa i eliminacije, procijenili smo sudjelovanje GLUT2. Glukoza prolazi kroz apikalne membrane enterocita putem SGLT1 s visokim afinitetom i niskim kapacitetom i izlazi preko bazolateralne membrane kroz GLUT2 s niskim afinitetom i velikim kapacitetom. Floretin (specifični inhibitor GLUT2) nije ukinuo transport netaknutih ECH i ACT (Slika 3). Funes i dr.[37] pokazalo je da ACT snažno djeluje na fosfatne skupine fosfolipidnih membrana. Kako su hidroksilne skupine u izobilju u strukturi ACT-a, najvjerojatnije su interakcije do kojih će doći vodikove veze između tih skupina i polarnih glava glicerola ili fosfatnih skupina. Kada su intaktni ECH i njegov ekvivalent ACT inkubirani s monoslojevima Caco-2 tijekom 11 h, stanična akumulacija ACT (0,24 ± 0,04 nmol/cm2) bila je trostruko veća od one za ECH (0,07 ± 0,01 nmol/cm2). Mislili smo da su SGLT1-osjetljivi ECH i ACT polako premješteni iz enterocita u krvotok, što je vjerojatno dovelo do uočenog niskog Papa. U usporedbi s visoko hidrofilnim ECH, niska propusnost ACT-a može biti posljedica interkalacije u stanične membrane.

Ekstrakt Cistanche tubulosa

Polifenolni spojevi se konzumiraju u biljnim mješavinama tijekom njihove kliničke primjene i komercijalno su dostupni kao dodaci prehrani. U in vitro studiji, pokazalo se da na apsorpciju fenolnog epikatehina nije utjecao sastav sastojaka prehrambenih materijala za piće.[38] Nasuprot tome, Hypericum perforatumL. matrice proizvoda utječu na transport kvercetinglukozida (rutin i izokvercitrin) i hiperozida kroz Caco-2 stanice zbog razlika u fitokemijskom sastavu matrice i karakteristikama transporta, tj. paracelularnog prijenosa i prijenosa posredovanog ili aktivnog transporta.[39] U ovoj studiji, C. tubulosa je omogućila trostruko veći transepitelni transport nego netaknuti ECH i ACT (Slika 2 i Tablica 2). Nagađamo da komponente uEkstrakt Cistanche tubulosaaktivirati transporter osjetljiv na floridin i/ili ubrzati eliminaciju unutarstaničnog ECH i ACT.Ekstrakt Cistanche tubulosaČini se da je visoka doza uvelike prikrila moć transporta osjetljivog na floridzin (Tablica 2). Dijetalni ugljikohidrati[40] i proteini[41]stupaju u interakciji s nekim polifenolima u gastrointestinalnom traktu. Morikawa et al.[10] pokazao je da se pet iridoida, kankanozida AD, i kankanol, monoterpenski glikozid, kankanozid E, dva feniletanoidna oligoglikozida, kankanozidi F i G, i acilirani oligo šećer, kankanoza, mogu izolirati izEkstrakt Cistanche tubulosa

trenutno korišten. Ostali sastojci, uključujući proteine ​​uEkstrakt Cistanche tubulosa, ostaju nejasni. Zajedno s gornjim nagađanjima, osmišljeni smo da ispitamo da li druge komponente stupaju u interakciju sa SGLT1 i inhibiraju li apsorpciju ECH i ACT.

Pokusi in vivo ne mogu lako razlikovati opseg apsorpcije i izbjegavanje dispozicije prvog prolaska kroz jetru. In-situ intestinalni perfuzijski model ima prednost u odnosu na in-vivo i in-vitro modele zbog jednostavne kontrole parametara eksperimenta i isključivanja utjecaja drugih organa te održavanja netaknute crijevne prokrvljenosti.[22] Uključivanje transportera glukoze osjetljivog na floridin procijenjeno je u anin-situ intestinalnom perfuzijskom sustavu. Kao što je prikazano na slici 5, apsorbirane količine popratnih tvari ECH i ACT uEkstrakt Cistanche tubulosa (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10−6 cm/s potpuno se apsorbiraju kod ljudi, dok se slabo apsorbiraju lijekovi i peptidi (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10−6 cm/s (Tablica 2), što ukazuje na visoku oralnu bioraspoloživost kod životinja i ljudi. Crespy i dr.[43] pokazalo je da se efluks u studiji intestinalne perfuzije in situ nije značajno razlikovao između floridzina i floretina. Oni [44] su također pokazali da je oralna bioraspoloživost floridzina s visokom osjetljivošću na SGLT1 bila samo 10 posto kod štakora. Buduće studije trebaju procijeniti bioraspoloživost i učinak prvog prolaza kroz jetru ECH-a koji se istodobno primjenjuje nakon oralne primjene dijetalnog ekstrakta u visokim dozama. Rezultati in situ upućuju na to da je unosEkstrakt Cistanche tubulosamože poboljšati nisku oralnu apsorpciju intaktnog ECH i ACT.

Zaključak

Dijetalno i ljekovitoEkstrakt Cistanche tubulosapovećanje intestinalne apsorpcije ECH i ACT može poslužiti za bolje upravljanje ljudskim zdravljem, iako bi uključivanje transporta osjetljivog na floridzin trebalo smanjiti.

Deklaracije

Sukob interesa

Autor(i) izjavljuje(ju) da nema sukoba interesa za otkrivanje

Financiranje

Ovaj je rad djelomično podržao High-Tech ResearchCenter sa Sveučilišta Kinki.

Priznanja

Autori se žele zahvaliti Osamu Muraoka (Sveučilište Kinki, Osaka, Japan) i Toshio Morikawa (Sveučilište Kinki, Osaka, Japan) na nabaviEkstrakt Cistanche tubulosai čistih sastojaka. Vrlo smo zahvalni Masahiro Iwaki (Sveučilište Kinki) na potpori u studiju.

Ekstrakt Cistanche tubulosaproizvoda

Od: ' Prijenos ehinakozida i akteozida osjetljiv na floridzin i promijenjen put apsorpcije u crijevima nakon primjeneEkstrakt Cistanche tubulosa' od straneTadatoshi Tanino i dr

---© 2015. Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, str. 1457–1465,Feniletanoidni glukozidi koje prenosi SGLT1

Reference

1. Tanaka J i sur. Učinak odEkstrakt Cistanche tubulosana razne bolesti mozga. Stil hrane 21 2008; 12: 24–26.

2. Tanaka J i sur. Funkcije protiv starenjaEkstrakt Cistanche tubulosa. Stil hrane 21 2008; 12: 27–29.
3. Tanaka J i sur. Funkcije ljepote i rasta koseEkstrakt Cistanche tubulosa. Stil hrane 21 2008; 12: 29–32.
4. Tanaka J i sur. Učinak na metabolizam mastiEkstrakt Cistanche tubulosa. Stil hrane 21 2008; 12: 30–33.
5. Yoshizawa F i sur. Sastojci Cistanche tubulosa Schrenk (Hook) f.II. izolacija i struktura novog feniletanoidnog glikozida i novog neolignanskog glikozida. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M i sur. Feniletanoidni oligoglikozidi i acilirani oligosećeri s vazorelaksantnim djelovanjem iz Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468-7475.
7. Tu PF i sur. Analiza feniletanoidnih glikozida Herba cistances pomoću RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997.; 32: 294–300.
8. Lei L i sur. Metabolička regulacija feniletanoidnih glikozida iz Herba cistanches u gastrointestinalnom traktu psa. Yao Xue Xue Bao 2001.; 36: 432–435.
9. Geng X i sur. Neuroprotektivni učinci ehinakozida u mišjem MPTP modelu Parkinsonove bolesti. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. Morikawa T i sur. Acilirani feniletanoidni oliglikozidi s hepatoprotektivnim djelovanjem iz pustinjske biljke Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD i sur. Učinci verbaskozida, biotehnološki pročišćenog kulturama biljnih stanica syringa vulgaris, u modelu parodontitisa kod glodavaca. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707–717.
12. Wu YT i sur. Određivanje acteozida u Cistanche deserticola i Boschniakia rossica i njegove farmakokinetike u štakora koji se slobodno kreću pomoću LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matija A i sur. Studije propusnosti alkilamida i konjugata kafeinske kiseline iz ehinaceje korištenjem modela monosloja stanica kako-2. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7–13.
14. Jia C i sur. Određivanje ehinakozida u serumu štakora reverzno-faznom tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti s ultraljubičastom detekcijom i njegova primjena na farmakokinetiku i bioraspoloživost. J Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. Cardinali A et al. Verbaskozidi iz vode mlina za masline: procjena njihove biopristupačnosti i intestinalnog unosa korištenjem in vitro sustava probave/caco-2 modela. J Food Sci 2011; 176: H48-H54.
16. Jia C i sur. Metabolizam ehinakozida, dobrog antioksidansa, u štakora: izolacija i identifikacija njegovih bilijarnih metabolita. Lijek Metab Dispos 2009; 37: 431–438.
17. Najar IA i sur. Modulacija aktivnosti P-glikoprotein ATPaze nekim fitokonstituentima. Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA i sur. Efluks dijetalnog flavonoida kvercetin 4′-beta-glukozida kroz monoslojeve ljudskih crijevnih kako-2 stanica pomoću apikalnog proteina povezanog s rezistencijom na više lijekova-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA i sur. Stanični unos dijetalnog flavonoida kvercetin 4'-beta-glukozidaze putem prijenosnika glukoze SGLT1 ovisnog o natriju. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837–843.
20. Mihara K i sur. Intestinalni metabolizam prvog prolaza eperizona u štakora. Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi B i sur. Antihiperalgezijsko djelovanje verbaskozida u dva modela neuropatske boli. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594–601.

22. Cook TJ et al. Intestinalna propusnost klorpirifosa metodom jednoprolazne intestinalne perfuzije u štakora. Toksikologija 2003; 184: 125–133.

23. Kumar YS i sur. Interakcija biljnih lijekova posredovana P-glikoproteinom i citokromom P-450-. Drug Metabol Drug Interact 2010; 25: 3–16.
24. Walle UK i sur. Prijenos genistein-7-glukozida ljudskim crijevnim CACO-2 stanicama: potencijalna uloga za MRP2. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. Ito K i sur. Apikalna/bazolateralna površinska ekspresija transportera lijekova i njihova uloga u vektorskom transportu lijekova. Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L i sur. Caco-2 stanične kulture u procjeni intestinalne apsorpcije: učinci nekih istodobno primijenjenih lijekova i prirodnih spojeva u biološkim matricama. (Sveučilište u Helsinkiju, Finska, 2006.) Akademska disertacija, str. 1–66.
27. Scambia G i sur. Kvercetin pojačava učinak adriamicina u staničnoj liniji MCF-7 humanog raka dojke otpornoj na više lijekova: P-glikoprotein kao moguća meta. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459–464.
28. Choi DH i sur. Učinak miricetina, antioksidansa, na farmakokinetiku losartana i njegovog aktivnog metabolita, EXP-3174, u štakora: moguća uloga citokroma P450 3A4, citokroma P450 2C9 i P- inhibicija glikoproteina miricetinom. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T i sur. Predlijek paklitaksel-2′-etilkarbonata može zaobići stanični efluks posredovan P-glikoproteinom i povećati citotoksičnost lijeka. Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC i sur. Apsorpcija dijetetskih kvercetin glikozida i kvercetina u zdravih dobrovoljaca s ileostomom. Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL i sur. Difuzijska komponenta intestinalne apsorpcije glukoze posredovana je glukozom induciranim regrutiranjem GLUT2 na membranu četkice. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Matter K et al. Razvrstavanje endogenih proteina plazma-membrane događa se na dva mjesta u kultiviranim ljudskim intestinalnim epitelnim stanicama (Caco-2). Cell 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L i sur. Prisutnost i diferencijalna ekspresija mRNA transportera heksoze SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 i GLUT5 u klonovima stanica Caco-2 u odnosu na rast stanica i potrošnju glukoze. Biochem J 1994; 298: 629-633.

34. Mesonero J i sur. O šećeru ovisna ekspresija transportera fruktoze GLUT 5 u stanicama Cac-2. Biochem J 1995; 312: 757–762.

35. Walgren RA i sur. Prijenos kvercetina i njegovih glukozida kroz Caco-2 stanice ljudskog crijevnog epitela. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T i sur. Usporedna ekspresija transportera heksoze (SGLT1, GLUT1, GLUT2 i GLUT5) kroz gastrointestinalni trakt miša. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L i sur. Učinci verbaskozida, fenilpropanoidnog glikozida iz limunske verbene, na membrane modela fosfolipida. Chem Phys lipids 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP i sur. Utjecaj sastava čokoladne matrice na biodostupnost flavan-3-ola kakaa in vitro i bioraspoloživost kod ljudi. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418-9426.
39. Gao S i sur. Visoko varijabilni sadržaji fenola u proizvodima od gospine trave utječu na njihov transport u modelu Caco-2 stanica ljudskog crijeva: farmaceutsko i biofarmaceutsko obrazloženje za standardizaciju proizvoda. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650-6659.
40. Schramm DD i sur. Utjecaj hrane na apsorpciju i farmakokinetiku kakaovih flavanola. Life Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C i sur. Vinska matrica bez etanola i polifenola potiče diferencijaciju Caco-2 stanica ljudskog crijeva. Utjecaj njihove povezanosti s ekstraktom sjemenki grožđa bogatim procijanidinom. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541-5548.
42. Artursson P i sur. Korelacija između oralne apsorpcije lijeka kod ljudi i prividnih koeficijenata propusnosti lijeka u ljudskim unutarnjim epitelnim (Caco-2) stanicama. Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V i sur. Usporedba intestinalne apsorpcije kvercetina, floretina i njihovih glukozida u štakora. J Nutr 2001a; 131: 2109-2114.
44. Crespy V i sur. Bioraspoloživost floretina i floridzina u štakora. J Nutr 2001b; 131: 3227-3230.