Studija o estrogenim učincima ehinakozida i akteozida iz Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Tianjinsko sveučilište tradicionalne kineske medicine, Tianjin 300193, Kina
Sažetak: U ovoj studiji, estrogenski učinciehinakozidiakteozidHerba Cistanche su istražene. Za otkrivanje estrogenih učinaka korišten je zakon lucif-brisanja reporter plazmidaehinakozidiakteozid. Eksperimenti kompetitivnog vezanja receptora estrogena korišteni su za otkrivanje njihovog kompetitivnog učinka s estrogenom. Rezultati su to pokazaliehinakozidiakteozidmože povećati aktivnost ERE. KadaehinakozidiliakteozidAko se doda u djelovanje estrogena, aktivnost reporterskog gena vođena ERE može se stimulirati kao agonist estrogena. Stoga je zaključeno daehinakozidiakteozidje imao aktivnost fitoestrogena putem stimuliranja ERE-povećanja aktivnosti reporterskog gena.Ehinakozidiakteozidbili potencijalni SERM-ovi.
Ključne riječi: ehinakozid; akteozid; fitoestrogeni ;
Herba Cistanche je biljka iz roda Cistanche (Oroban- chaceae) iz roda Cistanche (Cistanche). To je suha mesnata stabljika s ljuskastim listovima. Ima funkcije hranjenja yanga bubrega, njege esencije i krvi te vlaženja crijeva. Koristi se kod nedostatka yanga bubrega, nedostatka esencije i krvi, impotencije i neplodnosti, bolova u struku i koljenima, slabosti mišića i kostiju, suhih crijeva i zatvora ¨. 2J. Trenutačno su glavne kemijske komponente izolirane i identificirane iz Cistanche fenil glikozidi, iridoidi, lignani, flavonoidi, polisaharidi, oligosaharidi, galaktitol, hlapljive komponente, alkaloidi, itd. Među njima, glikozidi fenetilnog alkohola su glavni aktivni sastojci u Cistanche cistanche, i također su glavni detekcijski pokazatelji za kontrolu kvalitete Cistanche, a predstavljeni suehinakozid i verbaskozid. Suvremene farmakološke studije pokazale su da Cistanche ima funkcije imunološke regulacije, antioksidacije, starenja, umora, neuroprotekcije i zaštite jetre. Neke farmakološke studije također pokazuju da Cistanche može pospješiti regeneraciju kostiju, inhibirati stvaranje osteoporoze i fitoestrogena kod žena u postmenopauzi. U ovom eksperimentu odabrali smo ehinakozid i verbaskozid, koji su glavni pokazatelji kontrole kvalitete u Cistancheu, i testirali estrogeneučinci ehinakozidai verbaskozid metodom luciferaze reporter plazmida i eksperiment kompetitivnog vezanja estrogenskih receptora. Istražite mehanizam ehinakozida i verbaskozida estrogena
1 Materijal i metode
1.1 Materijal Hela stanice (ljudske stanice raka vrata maternice), kupljene od Shanghai Institute of Cell Biology;ehinakozidje odvojen i pročišćen iz Cistanche deserticola u našem laboratoriju i testiran je pomoću HPLC-ELSD. Theehinakozidreferentna tvar (Kineski nacionalni institut za kontrolu farmaceutskih i bioloških proizvoda, broj serije: 111670) korištena je kao kontrola, a izmjerena čistoća bila je 95,1 posto. Theakteozidje odvojen i pročišćen iz pustinje Cistanche u našem laboratoriju i dobiven HPLC-om. ELSD test, s referentnom supstancom Verbascum glikozid (Kineski institut za kontrolu farmaceutskih i bioloških proizvoda, broj serije: 111530) kao kontrolom, izmjerena čistoća bila je 96,4 posto; plazmidi ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (ekstrahirani u našem laboratoriju) ; Estradiol (E), Sigma Company; Fetalni goveđi serum (FBS), tvrtka PAA; Fetalni goveđi serum tretiran aktivnim ugljenom (CS-FBS), tvrtka PAA; DMEM bez fenolnog crvenog, tvrtka Sigma; Dimetil sulfoksid (DMSO), Amresco Company; LB medij, Shanghai Shenggong Biotechnology Company; PassiveLysis5X međuspremnik, Promega Company; Lipofectamine2000, Promega Company; Komplet za ekstrakciju plazmida, tvrtka TIANGEN; Kit za detekciju reporter gena luciferaze proizvod je tvrtke Promega.
1.2 Stanična kultura Hela stanice su uzgojene u DMEM mediju kulture koji je sadržavao 10 posto fetalnog goveđeg seruma. Najmanje jedna generacija prije eksperimenta zamijenjena je s DMEM medijem kulture koji je sadržavao 1 posto fetalnog goveđeg seruma tretiranog aktivnim ugljenom.
1.3 Određivanje transfekcije i aktivnosti luciferaze Hella stanice su nasađene u 24-ploču s jažicama u gustoći od 70 do 80 posto. Nakon što se stanice zalijepe za stijenku i gustoća stanica dosegne 90 posto, slijedite upute u lipo. Upute za transfekcijski reagens Feetamine2000 transficiraju ekspresijske plazmide ERa, ER[3 i ERE, reporterske plazmide Renila, nakon 8 sati promijenite medij i dodajte ispitivane lijekove različitih koncentracija. Nakon inkubacije preko noći, upotrijebite višenamjenski čitač pločica za otkrivanje estrogenskog odgovora. Aktivnost komponente ERE luciferaze, izračunajte relativni utjecaj lijekova na aktivnost luciferaze.
1.4 Obrada podataka i statistička analiza
Korištenjem statističkog softvera SPSS18.0 podaci su izraženi kao srednja vrijednost±standardna devijacija (x±S). Jednosmjerna analiza varijance (ANOVA) i Dunnettov t-test višestruke usporedbe korišteni su za analizu podataka između skupina. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Akteozid
2 Eksperimentalni rezultati
2.1 Učinak verbaskozida na aktivnost elementa odgovora na estrogen ERE luciferaze Rezultati pokazuju da u usporedbi s kontrolnom skupinom, kada je posredovan ERa i ER[3, E (10 nmol) može značajno pojačati element odgovora na estrogen ERE luciferaze. Aktivnost verbaskozida može pojačati aktivnost elementa estrogenskog odgovora ERE luciferaze na 10, 100, 1, 10 i 50 txmol. Kada koncentracija dosegne 50 umol, pojačana regulacija aktivnosti ERE luciferaze je ekvivalentna onoj kod estradiola. Ovisi o dozi, ali selektivnost za estrogenske receptore ERa i EP~ nije očita (Slika 2).
2 Učinci različitih koncentracijaakteozidna aktivnost luciferaze ERE
Napomena: U usporedbi s kontrolnom skupinom, P
2.2 Učinakehinakozidna aktivnost ERE luciferaze elementa odgovora na estrogen Rezultati pokazuju da u usporedbi s kontrolnom skupinom kada posreduju ERa i ER[3, E(10nmol) može značajno pojačati element odgovora na estrogen ERE fluorescencija Ehinakozid može pojačati odgovor na estrogen aktivnost ERE luciferaze elementa na 10, 100, 1, 10 i 50 iksmola. Kada koncentracija dosegne 50 Ixmol, pojačana regulacija aktivnosti ERE luciferaze je nešto niža od one estrogena. Diol također ovisi o mjeraču, ali ima malu razliku u selektivnosti za estrogenske receptore ERa i E (Slika 3).
2.3 Kompetitivni učinak vezivanja glikozida Verbascuma i estradiola na estrogenske receptore Rezultati pokazuju da se glikozidi Verbascuma mogu kompetitivno vezati za estrogenske receptore s estradiolom i antagonizirati aktivnost estradiola na element odgovora na estrogen ERE luciferazu. Učinak pojačane regulacije. U usporedbi sa skupinom E (10 nmo1), verbaskozidi mogu smanjiti aktivnost luciferaze estradiola na element odgovora na estrogen ERE do različitih stupnjeva pri 1, 10 i 50 p, mol, a verbaskozidi pokazuju ovisnost o dozi. Kada koncentracija dosegne 50 Ixmol, antagonistički učinak na estradiol je najočitiji (Slika 4).
2.4 Natjecateljski obvezujući učinakehinakozida estradiol na estrogenske receptore. Rezultati to pokazujuehinakozidtakođer se mogu kompetitivno vezati za estrogenske receptore s estradiolom i antagonizirati odgovor estradiola na estrogen. Povećanje aktivnosti ERE luciferaze. U usporedbi sa skupinom E (10 nmol), verbaskozid može smanjiti aktivnost luciferaze estradiola na element odgovora na estrogen ERE do različitih stupnjeva pri 1, 10 i 50 mol, iehinakozidpokazuje lijenu dozu. Seks, kada koncentracija dosegne 50lxmol, antagonistički učinak na estradiol je najočitiji (Slika 5)
3 Rasprava
Ovaj eksperiment je prvi put pokazao da jasni podaci to pokazujuehinakozidi verbaskozid, glavni aktivni sastojci u Cistancheu, mogu se vezati za estrogenske receptore ERa i EP~, pojačati aktivnost luciferaze ERE i izvršiti estrogenske učinke, pokazujući aktivnost SERM-a. Analiza gornjih eksperimentalnih podataka pokazuje da je u ERa sustavu pojačana regulacija verbaskozida na aktivnost luciferaze ERE elementa estrogenskog odgovora pri 50 lxmol ekvivalentna 0.977 puta većoj od E2 (1 0nmol), što je ekvivalentno onome u sustavu ERI3. 0,970 puta; slično, u ERa sustavu, učinak regulacije ehinakozida na aktivnost ERE luciferaze elementa estrogenskog odgovora pri 50 lxmol ekvivalentan je onom E (10 nmol), što je ekvivalentno 0 u ERI3 sustavu. 937 puta, regulacija verbaskozida na aktivnost elementa odgovora na estrogen ERE luciferaze malo je veća od one kodehinakozid, a selektivnost za estrogenske receptore ERa i ER[3 nije očita, dok echinacea glikozidi imaju slabe razlike u selektivnosti za estrogenske receptore ERa i ERI3. Ove razlike mogu biti povezane s različitim skupinama povezanim s R4 položajem verbaskozida i ehinakozida. Estrogen uglavnom djeluje preko estrogenskih receptora. Postoje dvije glavne podvrste estrogenskih receptora, ERa i ER [3, estrogen i supstance koje djeluju na estrogen spajaju se s estrogenskim receptorom kako bi formirali dimer, a zatim se dimeriziraju. Tijelo se kombinira s elementom odgovora na estrogen ERE, i zatim vrši estrogenski učinak [2l,. Fitoestrogeni i estrogeni imaju slične strukture i funkcije. Studije su pokazale da fitoestrogeni mogu regulirati metabolizam kostiju i imaju iznimno važnu ulogu u održavanju ravnoteže resorpcije kostiju i stvaranja kostiju. Djelotvoran je kod osteoporoze u bolesnika sa senilnom hipofunkcijom. Ima određeni klinički učinak prevencije i liječenja¨. Stoga se nagađa da je učinak Cistanche u poticanju regeneracije kostiju i inhibiciji nastanka osteoporoze kod žena u postmenopauzi preko fitoestrogena. Ovaj eksperiment također pokazuje da se ehinakozid i verbaskozid mogu kompetitivno vezati za estrogenske receptore s estradiolom i antagonizirati pojačanu regulaciju estradiola na aktivnost ERE luciferaze. Mehanizam ovog djelovanja poznat je resveratrolu. Učinak fitoestrogena sličan je J. Dalje je objašnjeno da ehinakozid i verbaskozid ostvaruju estrogenske učinke vezanjem na estrogenske receptore ERa i ER3. Gore navedene studije o fitoestrogenskoj aktivnosti Cistanche i mehanizmu njegovog estrogenskog učinka pokazuju da Cistanche može odgoditi nastanak postmenopauzalne osteoporoze u žena poboljšanjem razine estrogena u tijelu ili liječenjem liječenja uzrokovanog padom razine estrogena u tijelu. Osteoporosis daje mogućnost i daje teoretsku osnovu za proširenje opsega kliničke medicinske uporabe Cistanche.
Referenca
1 Komisija za kinesku farmakopeju（(国家药典委员）). Farmakopeja Narodne Republike Kine. Peking: Chemical Industry Press, 2010. Svezak 1:126.
2 Li SZ（李时珍）.Kompendij Materije Medice. Peking: People * s Medical Publishing House （人民卫生出版社）, 1977.727.
3 Zeng LQ（曾群力）, Zheng YF（郑一凡）,Lv ZL（吕志良）. Imunobiološka aktivnost i njen mehanizam djelovanja polisaharida cistanha. J Zhejiang Univ, Med Ed （浙江 大学学报,医学版）,2002,31:284-287.
