SLC37A2, molekula povezana s fosforom povećava se u stanicama glatkih mišića u kalcificiranoj aorti Ⅱ

Rezultati

Potražite molekule kandidate ukalcificiran fosfatomAoSMC. Za potragu za molekulama čija se ekspresija povećava u kalcificiranom AoSMC, analiza DNK mikronizova od oko 26 000 gena provedena je pomoću kalcificirane AoSMC i nekalcificirane AoSMC mRNA. Slika 1 prikazuje HeatMap različitih gena eksprimiranih između AoSMC koji nisu uzgajani s 2,6 mM i onih uzgajanih s 2,6 mM P tijekom 12 dana. Ukupno 3066 gena povećalo se više od dva puta na uzgojenom naspram nekultiviranom AoSMC. Geni s povećanom ekspresijom bili su molekule povezane s stvaranjem osteoblasta kao što su osteopontin, faktor specifičan za osteoblast periostin (POSTN), Wnt3, interleukin-6 (IL-6), ifaktor rasta fibroblasta23 (FGF23) kao i nekoliko molekula u SLC superobitelji (Tablica 1). Među tim molekulama usredotočili smo se na SLC37A2 za koju se mRNA povećala oko 3,1 puta na AoSMC uzgojenom s 2,6 mM P tijekom 12 dana u usporedbi s AoSMC koja nije uzgajana s 2,6 mM P. Za SLC37A2 je objavljeno da je povezan s regulacijom P, ali njegova detaljna funkcija je nepoznat učinak upale na ekspresiju SLC37A2.Vaskularna kalcifikacijaobjavljeno je da ga potiče upala pa smo ispitali utječe li upalni odgovor na mRNA SLC37A2. 24 sata nakon tretmana LPS-om, IL-6 se značajno povećao u usporedbi s AoSMC koji nije tretiran LPS-om (Slika 2A). Ovi rezultati su također viđeni 72 sata nakon tretmana LPS-om. Nije bilo značajnih razlika između skupina u ekspresiji SLC37A2mRNA (slika 2B).

KLIKNITE OVDJE DA DOBIJETE PRIRODNI ORGANSKI EKSTRAKT CISTANCHE S 25% EHINAKOSIDA I 9% AKTEOZIDA ZA FUNKCIJU BUBREGA

Usluga podrške Wecistanche-najvećeg izvoznika cistanche u Kini:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/telefon:+86 15292862950

Kupite za više pojedinosti o specifikacijama:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Ekspresija SLC37A2 u kalcificiranom AoSMC izazvanom fosfatom. Kako bismo odredili je li SLC37A2 uključen u kalcifikaciju, ispitali smo ekspresiju mRNA SLC37A2 na nekalcificiranom i kalcificiranom AoSMC (Slika 3). Kalcifikacija je uočena u AoSMC uzgojenom s 2,6 mM P tijekom 6 dana, a naprednija kalcifikacija uočena je u AoSMC uzgojenom s 2,6 mM P tijekom 12 dana (Slika 3A). Runx2 mRNA značajno se povećala na kalcificiranom AoSMC u usporedbi s nekalcificiranim AoSMC (Slika 3B). SLC37A2 mRNA značajno se počela povećavati 3. dana u kalcificiranom AoSMC, a 9. dana, kalcificirani AoSMC značajno se povećao oko dva puta u usporedbi s nekalcificiranim AoSMC (Slika 3C). Ekspresija proteina SLC37A2 značajno se povećala oko dva puta 6. dana u kalcificiranom AoSMC u usporedbi s nekalcificiranim AoSMC (Slika 3D).

Ekspresija SLC37A2 u štakorima modela CKD.

Kako bismo otkrili je li SLC37A2 uključen u vaskularnu kalcifikaciju in vivo, ispitali smo ekspresiju mRNA SLC37A2 na žilama adeninom induciranih CKD štakora. Štakori CKD izazvani adeninom stvoreni su prema protokolu prikazanom na slici 4A. Tablica 2 prikazuje tjelesnu težinu i biokemijske podatke na dan žrtvovanja. Tjelesna težina odCKD izazvan adeninomštakora bila je značajno niža u usporedbi sa štakorima bez KBB-a. U usporedbi sa skupinom bez kronične bolesti bolesti, skupine s kroničnom bolesti bolesti imale su više razine P i Cr u plazmi, a niže razine Ca u plazmi i 24-satno izlučivanje P, Ca i Cr mokraćom. Nadalje, ovi su rezultati bili istaknutiji u skupini s CKD-HP, kao što se vidi u prethodnim studijama.37,39) Stoga se bubrežna funkcija smanjila u skupini s CKD-HP, osobito u skupini s CKD-HP. Ispitali smo ekspresiju mRNA u aortnim žilama štakora s KBB (Slika 4). Iako nije bilo značajnih razlika u ekspresiji Runx2 mRNA, faktora transkripcije koji se rano pomiče u mehanizmu vaskularne kalcifikacije, između skupina (slika 4B) ekspresija osteopontinske mRNA značajno se povećala u skupini s CKD-HP u usporedbi s ne- CKD grupa iCKD-LP grupa(Slika 4C). Ekspresija mRNA SLC37A2 također je značajno povećana u skupini koja je primala CK D-HP u usporedbi s grupom koja nije imala CKD i skupinom s CKD-LP (Slika 4D). Budući da su postojale velike individualne razlike u ovih štakora, ispitali smo korelaciju između osteopontina i mRNA SLC37A2 i pronašli značajnu korelaciju između ovih molekula (Slika 4E). Histološki pregled torakoabdominalne aorte otkrio je medijalnu kalcifikaciju samo u aorti CKD-HP skupine (slika 5A). Kako bismo ispitali mjesto ekspresije SLC37A2 na aorti, proveli smo imunološko bojenje aorte CKD-HPrats. SLC37A2 bio je snažno izražen na području gdjevaskularna kalcifikacijadogodila (slika 5B).

Slika 1. HeatMap različito izraženih gena između AoSMC nekultiviranih s 2,6 mM P i AoSMC uzgojenih s 2,6 mM P. Crvena boja predstavlja gene s visokom razinom signala, a zelena predstavlja gene s niskom razinom signala. AOSMC stanice glatkih mišića aorte. Pogledajte sliku u online verziji.

Rasprava

Istraživali smo kandidate P-srodne molekule uključene u vaskularnu kalcifikaciju. Naši rezultati su pokazali da je SLC37A2 jedna od molekula koje povećavaju svaskularna kalcifikacijain vitro i in vivo.

Obitelj SLC37 pripada superobitelji SLC i uključuje proteine: SLC37A 1-440) Obitelj SLC37 sadrži transmembranske proteine ​​u membrani endoplazmatskog retikuluma i ima sekvencu homolognu bakterijskom organofosfatfosfatnom antiporteru.(41) SLC37A4 je poznatiji kaotransporter glukoze6-fosfata.(2-44 Međutim, postoji nekoliko izvješća o SLC37A2, a pojedinosti o njegovoj funkciji nisu u potpunosti razjašnjene. SLC37A2, također poznat kao SPX2, obilno je izražen u mišjim makrofagima, slezeni, timusu i bijelom masnom tkivu (WAT ) genetski pretilih mišjih modela i stanica sličnih osteoklastima izvedenih iz Raw264.7 stanica.(45.6) Protein SLC37A2 prenosi i razmjenu glukoze-6-fosfat/fosfat i fosfat/fosfat.(4) Nedavno su izvješća pokazala povezanost SLC37A2 s bolešću životinja. (47-49) Defekt SLC37A2 uzrokujekraniomandibularna osteopatija(CMO), samoograničavajuća proliferativna bolest kostiju kod terijerskih pasmina. (47) Kod mliječnih goveda homozigotna mutacija SLC37A2 odgovorna je za smrt embrija. (8.9) Osim toga. SLC37A2 se smatra metom za ciljne gene vitamina D. (dakle) Također je razmatran potencijal fosfor-Ser294 ciljnog gena za progesteronski receptor u napredovanju raka dojke (1). Zabilježeno je da upala može uzrokovati i pogoršati vaskularnu kalcifikaciju. (2s26) Nadalje. SLC37A2 je obilno izražen u makrofagima i WAT-u koji su zahvaćeni infiltracijom makrofaga. (s) Stoga. smatrali smo da bi SLC37A2 mogla biti molekula eksprimirana tijekom upale. Međutim, naši nalazi nisu pokazali povećanje ekspresije SLC37A2 u AoSMC izloženom upalnom odgovoru, čini se da ova molekula nije izravno pod utjecajem upalne stimulacije. SLC37A2 može biti uključen u vaskularnu kalcifikaciju kroz mehanizam koji nije upala.

Zabilježeno je da SLC37A2 djeluje kao P-vezanantiporter. (41) Osim toga, objavljeno je da je SLC37A2 ciljni gen za vitamin D, a gen SLC37A2 sadrži glavno mjesto vezivanja vitamina Dreceptor (ss2). Sustavno korelirane promjene u ekspresiji gena SLC37A2 i cirkulirajućih oblika vitamina D. uočen je u mononuklearnim stanicama ljudske periferne krvi. (50) Receptori vitamina D vežu se za 1a, 25-dihidroksi vitamin D, koji je metabolit vitamina D, i reguliraju ekspresiju gena. lo, 25dihidroksivitamin D, djeluje na apsorpciju Ca i P u crijevima, mobilizaciju Ca u kostima i reapsorpciju Caina u bubrezima. (3) Postoji izvješće da je kod štakora modela CKD-a izazvanog adeninom, serum la, 25-dihidroksi vitamina D, bio značajno viši kod štakora s visokim unosom vitamina P, s uznapredovalom vaskularnom kalcifikacijom, u usporedbi sa štakorima s niskim unosom -p unos hranom.39) SLC37A2 može biti povezan s regulacijom P putem vitamina D. Potrebna su daljnja istraživanja kako bi se razjasnilo da vitamin D utječe na ekspresiju SLC37A2 in vitro i vivo.

Pokazalo se da je mehanizam vaskularne kalcifikacije sličan onom kod stvaranja kostiju. Nedostatak SLC37A2 uzrokovan CMO klinički je usporediv s ljudskom infantilnom kortikalnom hiperostozom, također poznatom kao Caffeyeva bolest.7 Osim toga, postoje izvješća da se SLC37A2 eksprimira u koštanoj srži i osteoklastima. o Hytone i sur. (7 pretpostavili su da disfunkcija SLC37A2 bi uzrokovao neravnotežu u funkciji osteoblastične i osteoklastične tvorbe kostiju i kao rezultat toga doveo do hiperostoze.

Runx2 je bitan transkripcijski faktor za vaskularnu kalcifikaciju. Također je objavljeno da je Runx2 faktor transkripcije diferencijacije osteoblasta izražen u razvoju epitelnih stanica dojke. (s435) Čini se da je Runx2 neophodan za regulaciju ciljanih gena fosfor-Ser294 progesterona, koji su povezani s progresijom raka dojke. SLC37A2 se smatra kandidatom za fosfor-Ser294 ciljni gen za progesteronski receptor. (s1) Stoga se smatra da Runx2 može regulirati SLC37A2. U ovoj studiji, ekspresija SLC37A2 mRNA u aorti CkD štakora bila je u korelaciji s osteopontinskom mRNA, koja cilja na gen Runx2.