Svojstva koja se odnose na kožu i sastojci iz ekstrakta nadzemnih dijelova Persicaria Senticosa
Mar 19, 2022
Kontakt: ali.ma@wecistanche.com
Yun-Hyeok Choi, 1 Jae Yeon Lee, 2 Ji Eun Lee, 1 Yeon Woo Jung, 1 Wonsik Jeong, 1 Seong Su Hong, 1 Young-Rak Cho, 2 i Chun Whan Choi 1
1. Uvod
Persicaria senticosaje jednogodišnja biljka iz obitelji Polygonaceae, koja je rasprostranjena u cijeloj Koreji. Od davnina se ova biljka koristi kao narodni lijek s blagotvornim učincima za liječenje raznih bolesti kao što su otklanjanje oteklih dijelova rana ili karbunkula i celulitisa i cirkulacije krvi te otklanjanje zastoja krvi. Nedavne studije su to pokazalePersicaria senticosaimao je protuupalni učinak [1]; međutim, ova biljka nije navedena kao bioaktivni kozmetički sastojak. Prethodne fitokemijske studije na cvjetovima, stabljici i korijenju roda Polygonum otkrile su razne flavonoide i fenolne spojeve kao što su hidroksibenzojeva kiselina, rutin, kvercetin-3-O-glukuronid, kvercetin-3-O-glukozid i luteolin-7-O-rutinozid smatra se glavnim aktivnim komponentama [2, 3]. Ovi aktivni spojevi pokazuju različite farmakološke učinke, kao što su protuupalni, antiulkusni, antihipertenzivni i antikancerogeni učinci [4]. Tijekom pregleda kozmetičkih sastojaka mjerenjem učinka hvatanja radikala na 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH), ABTS hvatanje radikala, inhibicija elastaze,tirozinazainhibicije i ispitivanja dušikovog oksida, nekoliko ekstrakata poligona pokazalo je snažno djelovanje.
Kliknite zaCistanche se koristi za smanjenje aktivnosti tirozinaze.
2. Materijali i metode
2.1. Biljni materijali i opći postupci prirodnih proizvoda.
Persicaria senticosaprikupljeno je iz Seo-myeona, Chuncheon-si, Gangwon-do, Koreja, 2016. (GPS: N 37 stupanj 55′30.1″, E 127 stupanj 37′ 57.0″, nadmorska visina: 434 m). Uzorke vaučera (G071) potvrdio je dr. Chun Whan Choi.Persicaria senticosapohranjeni su u herbariju Biocentra, Gyeonggido Business & Science Accelerator, Suwon, Južna Koreja (Sl. S3). 99,9-postotni metanolni ekstrakt tridesetčetiripoligona dobiven je iz Banke korejskih biljnih ekstrakta na Korejskom istraživačkom institutu za bioznanost i biotehnologiju (Daejeon, Koreja). 1H i 13C NMR eksperimenti izvedeni su na spektrometru Bruker Ascend 700 MHz s tetrametilsilanom (TMS). LC-ESI-MS dobiven je na instrumentu Triple TOF 5600 plus (AB SCIX, SAD) i HRESI-MS na instrumentu LTQ Orbitrap XL (Thermo, SAD). Tankoslojna kromatografija (TLC) provedena je na pločama silika gela 60F254 (Merck, Njemačka) i silikagela 60 RP-18 F254S (Merck, Njemačka). Kromatografija na stupcu (CC) izvedena je pomoću silika gela 60 (70~230 mesh, Merck, Njemačka), ODS-A (12 nm S-7 μm, YMC GEL, Japan), a preparativna HPLC izvedena je na LC{{ 23}}A (Shimadzu, Japan).
2.2. NEMA testa.
Stanice RAW 264.7 posađene su u 96-ploče s jažicama (5 × 104 stanice po jažici) i tretirane su uzorkom 1 h prije stimulacije LPS-om (1 ug/mL) 24 h. Negativna kontrola tretirana je medijem bez seruma. Količina nitrita, astabilnog metabolita NO, mjerena je Griessreagensom (1 posto sulfanilamida i 0,1 posto naftil etilendiamin dihidroklorida u 2,5 postotnoj fosfornoj kiselini). Apsorbancija je naknadno izmjerena na 540 nm pomoću ELISA čitača. Količina nitrata određena je standardnom krivuljom za natrijev nitrit [5–7].
2.3. Ispitivanje stanične citotoksičnosti.
Stanice RAW 264.7 nasađene su pri gustoći od 5 × 104 stanica/jažici u 96-pločice s jažicama. Stanice su tretirane uzorcima 1 h prije LPS (1 ug/mL) stimulacije 24 h. MTT (5 mg/mL u PBS) je dodan u svaku jažicu i inkubiran 2 sata. Medij je uklonjen iz jažica aspiracijom, DMSO je dodan u svaku jažicu, a ploča je protresena. Apsorpcija svake jažice izmjerena je na valnoj duljini od 540 nm pomoću ELISA čitača. Podaci su predstavljeni kao srednja vrijednost ± standardna devijacija tri ponavljanja.
2.4. DPPH analiza aktivnosti uklanjanja radikala.
Aktivnost hvatanja DPPH radikala mjerena je pomoću metode koju su opisali Blois [8] i Ozgen et al. [9]. Uzorak je dodana otopina DPPH otopljena u metanolu, koji je razrijeđen do tražene koncentracije, te je reakcija provedena na sobnoj temperaturi 30 min. Apsorbancija je mjerena na 517 nm pomoću ELISA čitača. Kao pozitivna kontrola korišten je antioksidans butilirani hidroksianisol (BHA) te je određena IC50 vrijednost uzorka.
2.5. ABTS aktivnost uklanjanja radikala.
Aktivnost hvatanja radikala ABTS mjerena je prethodno opisanom metodom [10, 11]. ABTS plus nastao je miješanjem 7 mM otopine ABTS i 2,45 mM otopine kalijevog persulfata (K2S2O8) s ABTS: K2S2O8 (omjer 2:1) tijekom 12-16 sati kako bi se formirao kation (ABTS plus). Apsorpcija je izmjerena na 734 n pomoću ELISA čitača. BHA, antioksidans, korišten je kao pozitivna kontrola.
2.6. Test inhibicije tirozinaze.
Tirozinazainhibitorna aktivnost je mjerena upotrebom metode koju su opisali Yagi et al. [12]. Reakcija je provedena u 0.1M puferu kalijevog fosfata (pH 6,5) koji sadrži 1,5 mM L-tirozina i 1250 jedinica/mL tirozinaze gljiva. Reakcijska smjesa je inkubirana na 37 stupnjeva 20 minuta. Ispitni uzorci ispitani su na inhibiciju tirozinaze mjerenjem njezina učinka natirozinazaaktivnost korištenjem SpectraMax 190PC ELISA čitača mikroploča na 490 nm. Kao pozitivna kontrola korišteni su arbutin i kojična kiselina te je određena IC50 vrijednost uzorka.
2.7. Test inhibicije elastaze.
Reakcija je provedena u {{0}}.5 mM Tris puferu (pH 8,5) koji sadrži 1 mg/mL N-sukcinil-(Ala)3-p-nitroanilida i 0,6 jedinica/mL elastaze . Reakcijska smjesa je inkubirana na 25 stupnjeva 10 minuta. Ispitni uzorci su testirani na inhibiciju elastaze mjerenjem njenog učinka na aktivnost elastaze pomoću ELISA čitača na 405 nm. Ursolicacid je korišten kao pozitivna kontrola, te je određena IC50 vrijednost uzorka [13].
2.8. Statistička analiza.
Statistička analiza podataka provedena je softverom PRIZM5 (GraphPad, CA, SAD), a podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SD. Jednostrani Studentov t-test korišten je za analizu značajnosti razlika između skupina, a P < 0:05="" smatralo="" se="" statistički="">
3. Rezultati i rasprava
3.1. Svojstva biljnih ekstrakata u obitelji Polygonaceae povezana s kožom.
Učinak uklanjanja radikala na DPPH, ABTS uklanjanje radikala, inhibicija elastaze,tirozinazainhibicije, i ispitivanje dušikovog oksida na nekoliko ekstrakata Polygonum pokazalo je snažno djelovanje. Rezultati su pokazali da Persicariajaponica i Rumex longifolius imaju NO test (IC{{0}}.3 i ispod 25,0ug/mL). Za DPPH, IC50 metanolnog ekstrakta Polygonum ciliinerve, Polygonum alpinum i Persicaria Chinensis bio je 36,9, 15,4, odnosno 19,2 ug/mL. U ABTS aktivnosti uklanjanja radikala, IC50 metanolnog ekstrakta Polygonum cuspidate i Polygonum alpinum bio je 5,2 odnosno 5,3 ug/mL. UtirozinazaInhibicijsko djelovanje, IC50 metanolnog ekstrakta korijena Polygonum sachalinens i Polygonum cuspidata bio je 289,0 odnosno 483,9 ug/mL. U testu inhibicije elastaze, IC50 metanolnog ekstrakta Polygonum sachalinense, Polygonum cuspidatum, Persicaria hydropiper, Persicaria sieboldi, Polygonumorientale, Persicaria lapathifolia, Persicaria dissitiflora, Rumexacetosella, Rumex Crispus, Polygonum alpinum, Persicaria Perriasica Perriassis, japoceria Persicaria conspicua, Rheum palmatum i Persicaria lapathifolia bile su ispod 100 ug/mL (Tablica 1).
3.2. Svojstva frakcija Persicaria senticosa vezana uz kožu.
Učinak hvatanja radikala na 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH), hvatanje radikala ABTS, inhibiciju elastaze i ispitivanje dušikovog oksida na nekolikoPersicaria senticosautvrđeno je da frakcije pokazuju snažno djelovanje. Rezultati su pokazali da frakcije CH2Cl2 i EtOAc imaju NO analizu (ispod 25 i 44,64 ug/mL, redom). Aktivnosti hvatanja radikala DPPH i ABTS frakcija EtOAc bile su 13,7 i 5.0 ug/mL. U testu inhibicije elastaze, IC50 frakcija n-heksana i CH2Cl2 bio je ispod 100 ug/mL (Tablica 2).
3.3. Izolacija i određivanje spojeva iz ekstrakta Persicaria senticosa.
Persicaria senticosanadzemni dijelovi (1,4 kg), osušeni u hladu i usitnjeni u prah, dodani su u 4{{10}} Lof 70 posto etanola (HPLC stupnja) i dva puta na sobnoj temperaturi (svaki put 2 dana) i koncentrirani su u vakuumu na 40 stupnja da se dobije 180,4 g ekstrakata. Ekstrakti su suspendirani u destiliranoj vodi i zatim razdijeljeni s n-heksanom (4:0L×3), CH2Cl2 (4:0L×3), EtOAc (4:0L×3) i n-butanolom (4:0L×3) da se dobije n-heksan (11,7 g), CH2Cl2 (7,4 g), EtOAc (21,7 g), butanol (22,5 g) i frakcije topljive u vodi (110,1 g), (Shema 1). Frakcija EtOAc (21,7 g) je odvojena pomoću MPLC koja je koristila gradijentne smjese kao eluente (F001-003). Spojevi 1 (3,2 mg) i 5 (3,9 mg) izolirani su iz F002 koji su korišteni prep-HPLC. Frakcija F001 je odvojena pomoću MPLC koja je koristila gradijentne smjese kao eluente (F011-F018). Spoj 6 (1,5 mg) je izoliran iz F016 koji je korišten preparativnom HPLC. Spoj 7 (2,7 mg) izoliran je iz F017 koji je korišten preparativnom HPLC. F012 je odvojen korištenjem MPLC koji je koristio gradijentne smjese kao eluens (F121-F124). Spoj 4 (10,8 mg) izoliran je iz F124 koji je korišten preparativnom HPLC. Dodatno, F014 je odvojen preparativnom HPLC korištenjem gradijentnih smjesa kao eluensa (F141-F143). Spoj 3 (2,3 mg) izoliran je iz F141 pomoću preparativne HPLC. Spoj 2 (4,8 mg) je izoliran iz F142 korištenjem semipreparativne HPLC. Pročišćavanje EtOAc topljivog sloja provedeno je odvajanjem kromatografijom na stupcu i MPLC analizom do spojeva 1-7. Identificiran je kao loliolid (1) [14], kvercetin-3-O-glukozid (2) [15], kvercetin-3-O-glukuronid (3) [16], 4-metoksi kaftraratna kiselina (4) [17], kemferol-3-(6-metilglukuronid) (5) [18], kvercetin-3-(6-metilglukuronid) (6) [19, 20], i kvercetin (7) [21]. Struktura je razjašnjena kombinacijom 1D i 2D NMR i MS spektrometrije, kao i usporedbom s objavljenom literaturom (Slika 1).
3.4. Svojstva spojeva iz Persicariasenticosa vezana uz kožu.
Učinak čišćenja radikala na DPPH,tirozinazainhibicije i test dušikovog oksida na nekoliko spojeva izPersicaria senticosapokazalo se da pokazuje snažnu aktivnost (Slika S4–7). Rezultati su pokazali da Spoj 7 ima NO test (IC50 29.7 ug/mL). Za DPPH, IC50 spojeva 2, 3, 5 i 7 bio je 39,6, 31,2, 37,0, odnosno 22,7 ug/mL. U inhibitornoj aktivnosti tirozinaze, IC50 Spoja 7 bio je 14,3 ug/mL (Tablica 3).
4. Zaključci
Persicaria senticosaje jednogodišnja biljka iz obitelji Polygonaceae koja je rasprostranjena u cijeloj Koreji. Od davnina se ova biljka koristi kao narodni lijek s blagotvornim djelovanjem za liječenje raznih bolesti. Ova studija procijenila je svojstva i sastojke povezane s kožom iz ekstrakta nadzemnog dijela Persicaria senticosa i trideset četiri biljke Polygonaseae. Tijekom pregleda kozmetičkih sastojaka mjerenjem učinka uklanjanja radikala na DPPH,ABTS uklanjanje radikala, protiv bora je procijenjeno pomoću inhibicije elastaze, izbjeljivanje je proučavanotirozinazainhibicija, a protuupalni je testiran testom dušikovog oksida. Utvrđeno je da je nekoliko ekstrakata Polygonuma pokazalo moćno djelovanje. Rezultati su pokazali da ekstrakt Persicaria senticosametanolic ima aktivnosti hvatanja radikala DPPH i ABTS (IC50 61.0 i 17,5 ug/mL). U testu inhibicije elastaze i testu dušikovog oksida, IC50 metanolnog ekstrakta Persicaria senticosa bio je 241,5 ug/mL odnosno 71,8 ug/mL. 70-postotni etanolni ekstrakt Persicaria senticosa razdijeljen je s n-heksanom, CH2Cl2, EtOAc, n-BuOH i vodenim frakcijama.
EtOAc topljiva frakcija pokazala je snažno djelovanje vezano uz kožu (Slika 2 i Tablica 3). Ovi rezultati sugeriraju da aktivne komponente uPersicaria senticosaodgovorni za aktivnost povezanu s kožom koncentrirani su u EtOAc topljivoj frakciji Persicaria senticosa (Shema 1). S druge strane, frakcija topiva u n-heksanu, diklormetanu i frakcija topljiva u BuOH dobivena iz ekstrakta Persicaria senticosa pokazala je ekvipotentnu aktivnost u ispitivanju dušikovog oksida, DPPH i ABTS aktivnosti vezanja radikala, dok je preostala vodena frakcija pokazala slabe inhibitorne učinke (Tablica 2. ).
Stoga, pročišćavanje triju aktivnih frakcija, tj. EtOAc topljive frakcijePersicaria senticosaprovedeno je za pročišćavanje aktivnih principa odgovornih za aktivnost povezanu s kožom nakon čega je uslijedio proces opisan u Shemi 1.
Pročišćavanje EtOAc topljivog sloja izPersicaria senticosa70-postotni etanolni ekstrakt izveden je odvajanjem kromatografijom na koloni i MPLC analizom na spojeve 1-7. Identificiran je kao loliolid (1), kvercetin3-O-glukozid (2), kvercetin-3-O-glukuronid (3), 4-metoksi kaftrarična kiselina (4), kemferol{{ 11}}(6-metilglukuronid) (5), kvercetin-3-(6-metilglukuronid) (6) i kvercetin (7). Struktura je razjašnjena kombinacijom 1D i 2D NMR i MS spektrometrije, kao i usporedbom s objavljenom literaturom (slika S2). Učinak hvatanja radikala na 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH),tirozinazainhibicije, a ispitivanje dušikovog oksida na nekoliko spojeva iz Persicaria senticosa pokazalo je snažno djelovanje. Rezultati su pokazali da Spoj 7 ima NO analizu (IC5029,7 μM). Za DPPH, IC50 spojeva 2, 3, 5 i 7 bio je 39,4, 32,1, 37,0, odnosno 22,7 μM. Utirozinazainhibitorne aktivnosti, IC50 spoja 7 bio je 14,3 μM. Kao što je prikazano na slici 3, spojevi 2 i 5 glavni su spojevi u EtOAc topljivoj frakciji Persicaria senticosa (-Sl. S1). A spojevi 2 i 5 pokazali su izvrsnu antioksidacijsku aktivnost (Slika 4), što je u skladu s prethodnim studijama [18, 22].
Ova studija je to pokazalaPersicaria senticosai Polygonaseae sadrže kemijske spojeve s aktivnostima povezanim s kožom i mogu biti zanimljivi kao novi izvor bioaktivnih tvari za kozmetičku industriju.
