Odabir i karakterizacija inhibitora tirozinaze iz rizoma Atractylodis Macrocephalae na temelju odnosa spektar-aktivnost i molekularnog spajanja

Autorska prava © 2021 Yong-Qin Liu i sur. 2is je članak s otvorenim pristupom koji se distribuira pod Creative Commons Attribution Licencom, koja dopušta neograničenu upotrebu, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni rad ispravno citiran.

Cistancheima funkciju poticanja proizvodnje kolagena, što može povećati elastičnost i sjaj kože te pomoći u obnavljanju oštećenih stanica kože.CistancheFeniletanol glikozidi imaju značajan učinak regulacije naniže na aktivnost tirozinaze, a pokazalo se da je učinak na tirozinazu kompetitivna i reverzibilna inhibicija, što može pružiti znanstvenu osnovu za razvoj i korištenje sastojaka za izbjeljivanje u Cistancheu. Stoga cistanka ima ključnu ulogu u izbjeljivanju kože. Možeinhibiraju proizvodnju melaninasmanjiti diskoloraciju i tupost; i potiče proizvodnju kolagena za poboljšanje elastičnosti i sjaja kože. Zbog raširenog prepoznavanja ovih učinaka cistanche, mnogi proizvodi za izbjeljivanje kože počeli su sadržavati biljne sastojke kao što je cistanche kako bi zadovoljili potražnju potrošača, čime se povećala komercijalna vrijednost cistanche uizbjeljivanje kožeproizvoda. Ukratko, uloga cistanhe u izbjeljivanju kože je ključna. Njegov antioksidativni učinak i učinak stvaranja kolagena mogu smanjiti promjenu boje i tupost,poboljšati elastičnost i sjaj kože, te tako postići učinak izbjeljivanja. Također, široka primjena Cistanche u proizvodima za izbjeljivanje kože pokazuje da se njegova uloga u komercijalnoj vrijednosti ne može podcijeniti.

Kliknite na Organic Cistanche za izbjeljivanje

Zatražite više: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Atractylodis macrocephalus Rhizoma (AMR) poznata je klasična kineska tradicionalna medicina (CTM), koja se tisućama godina koristi kao tonik za mnoge bolesti. U staroj Kini koristio se kao dopunska hrana za ljepotu u palači. U preliminarnim studijama otkrivena je funkcija izbjeljivanja kože i značajan inhibicijski učinak na tirozinazu (TYR) koja je reaktivni enzim u sastavu melanina AMR-a, a relevantna istraživanja rijetko su objavljena. U ovoj studiji, tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti (HPLC) zajedno s djelomičnom regresijskom analizom najmanjih kvadrata (PLS) primijenjena je za ispitivanje koherencije između kemijskih sastojaka i inhibicijske aktivnosti 11 serija AMR-a na aktivnost TYR. Rezultati PLS-a pokazali su da bi kromatografski vrhovi 11 (atraktilenolid III) i 15 mogli biti važni učinkoviti sastojci za inhibiciju aktivnosti TYR, što je potvrđeno odnosima spektar-aktivnost. Nadalje, inhibicijska aktivnost atraktilenolida III za TYR potvrđena je in vitro testom pomoću -arbutina koji je služio kao lijek za pozitivnu kontrolu.Therezultati in vitro testa i molekularnog spajanja pokazali su da atraktilenolid III ima visoku inhibitornu aktivnost za TYR i da se može povezati s ostacima u katalitičkom džepu TYR.TheStoga su biološki testovi, molekularni docking i odnosi spektra i aktivnosti prikladni za povezivanje kvalitete uzoraka s aktivnim sastojcima povezanim s farmaceutskim proizvodima. A naše bi proučavanje postavilo teoretsku osnovu za primjenu vodenih ekstrakata AMR-a u kozmetici za izbjeljivanje.

1. Uvod

Tirozinaza (TYR), također imenovana kao polifenol oksidaza, je polifunkcionalni glikozilirani enzim koji sadrži bakar koji postoji u organizmu životinja, biljaka i mikroorganizama u širokom spektru [1-3]. U prisutnosti molekularnog kisika, tirozin prvo katalizira TYR da oksidira u dopa, a zatim dalje oksidira u dopakinon, koji se izomerizira u dopa pigment. Pigment dopa je konačno formirao melanin uz sudjelovanje CO2 i TRP-2, koji uzrokuju razne kožne bolesti kao što su hiperpigmentacija, melazma, pjege i staračke pjege [4, 5]. TYR igra vitalnu ulogu jer je ključni enzim i restrikcijski enzim u tijeku sastava melanina [6-8]. Pigmentne mrlje i melanomi značajno su se povećali povećanjem aktivnosti i količine TYR [9]. Danas su inhibitori TYR-a dobili široku pozornost zbog njihove latentne upotrebe kao hipopigmentiranih sredstava [10].

Atractylodis macrocephalus rhizoma (AMR), suhi rizom Atractylodes macrocephalaKoidz., jedan je od kineskih biljnih lijekova sastavljen u Kineskoj farmakopeji [11-15]. U drevnoj Kini, AMR je odabran za formiranje poznate klasične formule za izbjeljivanje pod nazivom "Sedam-bijela mast" i korišten kao dopunska hrana za ljepotu u palači [16]. Zabilježeno je da AMR uglavnom sadrži seskviterpenoide i triterpenoide (uključujući atraktilenolid I, atraktilenolid II i atraktilenolid III), poliacetilene, kumarine i fenilpropanoide, flavonoide i flavonoidne glikozide, polisaharide, steroide, benzokinone i druge sastojke [17, 18]. Međutim, njegovi učinci na izbjeljivanje kože i aktivni sastojci rijetko su zabilježeni.Thestudija odnosa spektar-aktivnost primijenjena je kako bi se istražila njihova relevantnost.

Istraživanje odnosa spektar-aktivnost ne samo da može zaobići nedostatak segregacije između kemijskih sastojaka i farmakodinamike, već i dovoljno povezati otiske prstiju s farmakodinamikom pomoću matematičkog modela [19, 20].ThOdnos spektar-aktivnost istražuje relevantnost između otiska prsta i farmakodinamike kako bi se ponudila vjerodostojna metoda za pojašnjavanje materijalne baze kineske biljne medicine [21].Theotisci prstiju obično su utvrđeni pomoću HPLC, UPLC, GC, GC MS i LC-MS [19, 22–24]. "Farmakodinamički" podaci obično se dobivaju modelima [25].Themetode obrade podataka, uglavnom uključuju analizu glavnih komponenti (PCA), regresijsku analizu djelomičnih najmanjih kvadrata (PLS), ortogonalnu djelomičnu diskriminantnu analizu najmanjih kvadrata (OPLS-DA), kanoničku korelacijsku analizu (CCA) i sivu relacijsku analizu (GRA) obično [26–29].

Kako bi se razjasnile komponente AMR-a koje pridonose inhibicijskoj aktivnosti TYR-a [30, 31], HPLC-om su utvrđeni otisci prstiju 11 serija AMR-a; farmakodinamika aktivnosti inhibicije TYR in vitro procijenjena je biokemijskom enzimskom metodom. 2e učinkoviti spojevi odabrani su modelom odnosa spektar-aktivnost koji je uspostavljen korelacijom vrhova otiska prsta s farmakodinamičkim podacima. Nadalje, aktivne tvari bile bi potvrđene in vitro testovima i eksperimentima molekularnog spajanja. Ova bi studija mogla postaviti teoretsku osnovu za primjenu AMR-a kao lijeka za liječenje pigmentiranih kožnih bolesti i razvoj kao dodatka kozmetici za izbjeljivanje.

2. Materijali i metode

2.1. Kemikalije i materijali.Metanol (veći ili jednak 99,5 posto) kupljen je od Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Šangaj, Kina). Fosforna kiselina (veća ili jednaka 99 posto) kupljena je od Chengdu Jinshan Chemical Reagent Co., Ltd. (Chengdu, Kina). Acetonitril je kupljen od Tiandi Reagent Co., Ltd. (SAD). Atractylodes III (veće ili jednako 98 posto), fosfatni pufer, tirozinaza i L-tirozin kupljeni su od Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. (Peking, Kina). -Arbutin (veći ili jednak 99,7 posto) kupljen je od Kineske akademije za identifikaciju hrane i lijekova. Tirozinaza i L-tirozin su prije upotrebe otopljeni u fosfatnom puferu (pH 6,8). Atraktiloza III i -arbutin otopljeni su u 50 postotnom metanolu (v/v).Thečista voda je kupljena od Hangzhou Wahaha Baili Food Co., Ltd., (Hangzhou, Kina). Kolona Comix C18 (250 × 4,6 mm, 5 μm) kupljena je od Guangzhou Philemon Scientific Instrument Co., Ltd. (Guangzhou, Kina).

2.2. Biljni materijali.ThePrikupljeno je 11 serija AMR medicinskih uzoraka koji su prikazani u tablici 1.Thegore navedene uzorke potvrdio je profesor Ronggui Qin (Farmaceutska škola, Medicinsko sveučilište Guizhou).

2.3. Izvlačenje.Biljni komadići svakog uzorka (oko 10 g) precizno su izvagani i zatim stavljeni u tikvicu s okruglim dnom, dodana voda i refluksirana da bi se ekstrahirao. Produkti su osušeni pod smanjenim tlakom kako bi se dobio vodeni ekstrakt AMR-a. 2en, vodeni ekstrakti AMR-a (oko 30.00 mg) precizno su izvagani i otopljeni s 50 posto metanola (v/v).

2.4. HPLC analiza.Comix C18 kolona za kromatografiju reverzne faze (250 × 4,6 mm, 5 μm).Themobilna faza 0.1 posto fosfora bila je smjesa kisele vode (A)-acetonitril (B); sustav eluiranja je dizajniran i naveden je u tablici 2.Thesljedeća brzina bila je fiksirana na 0,6 mL/min. Temperatura stupca 2e bila je 30 stupnjeva.TheUA valna duljina bila je 210 nm.Thevolumen injekcije bio je 30 μL.

Metoda detekcije provjerena je testom preciznosti, testom ponovljivosti i testom stabilnosti.

2.5. Kemometrijska analiza.U ovoj studiji, informacije o zajedničkim vrhovima otisaka prstiju 11 serija AMR-a uvezene su u softver SIMCA14.1 za HCA, PCA i OPLS-DA.

2.6. Test inhibicije TYR in vitro. Theekstrakti AMR-a otopljeni su s fosfatnim (pH 6,8) puferom, pohranjeni na 4 stupnja , a zatim korišteni za analizu enzima.

U ovoj studiji, L-tirozin je korišten kao supstrat za određivanje inhibicije aktivnosti TYR.Thereakcijske otopine su pripravljene prema tablici 3, i određena je stopa inhibicije AMR na aktivnost TYR. Najprije su reakcijske otopine stavljene u vodenu kupelj na 37 stupnjeva na 10 minuta. Drugo, otopina TYR je odmah dodana reakcijskim otopinama T2 i T4. 2. Treće, reakcijske otopine su reagirale na konstantnoj temperaturi vodene kupelji od 37 stupnjeva 10 minuta nakon potpunog miješanja. Konačno, vrijednosti apsorbancije reakcijskih otopina su odmah izmjerene na 475 nm. Stope inhibicije ( postoci ) dobivene su iz jednadžbe: stopa inhibicije ( postoci ) =[(AT2− AT1) − (AT4 − AT3)]/(AT2− AT1) × 100 posto.

2.7. Analiza odnosa spektra i aktivnosti. Thesoftver "Kineska tradicionalna medicina kromatografski sustav za procjenu sličnosti otiska prsta 2012. izdanje" korišten je za podešavanje vremena zadržavanja svakog vrha, a područje vrha (PA) obrađeno je izjednačavanjem.Then, dobiveni su kvantitativni podaci.ThePLS regresijska jednadžba postavljena je pomoću softvera SIMCA14.1; područje vrha je uzeta kao nezavisna varijabla (X), a stopa inhibicije TYR je postavljena kao zavisna varijabla (Y).

2.8. Inhibicijski učinak Atractylodes III na TYR i molekularno spajanje.Kako bi se potvrdio inhibicijski učinak atraktilenolida III na TYR, in vitro testovi enzimske aktivnosti provedeni su pomoću -arbutina koji je služio kao lijek za pozitivnu kontrolu.

U simulacijama pristajanja primijenjen je program AutoDock4.2. Kristalna struktura Agaricus bisporusa (PDB ID: 2Y9X) uzeta je kao 3D struktura TYR [32]. Izveli smo simulacije pristajanja TYR-a na Atractylodes III. U svrhu povezivanja s AutoDock Vinom, veličina rešetke je dizajnirana na (x, y, z) =(16, 12, 14), a središte mreže je dizajnirano na (x, y, z) { {10}} (−10.348, −28.279, −45.925). U svakoj simulacijskoj proceduri, napredak sa zadanim parametrima radi iz AutoGrid i AutoDock. Lamarckov genetski algoritam (LGA) usvojen je kako bi se utvrdile najprikladnije orijentacije vezanja liganda.

3. Rezultati i rasprava

3.1. Validacija metodologije.Za analitičku metodu potvrđena je preciznost, ponovljivost i stabilnost. U ispitivanju preciznosti, preciznost relativnih vremena zadržavanja (RRT) i relativnih vršnih površina (RPA) nije premašila {{0}}.02 posto odnosno 4 posto u RSD; sličnost je bila 1. Ponovljivost RRT-ova i RPA-ova bila je manja od 0.11 posto i 4 posto u RSD, a sličnost je bila veća ili jednaka 0.998. Stabilnost je procijenjena ispitivanjem jedne otopine uzorka sačuvane na temperaturi okoline u laboratoriju nakon 0, 6, 8, 12 i 18 sati. RSD-ovi RRT-a i RPA-a uobičajenih vrhova bili su manji od 0,1 posto, odnosno 4 posto; sličnost je bila veća od 0,999.TheOvi rezultati sugeriraju da je AMR eksperimentalni sustav za analizu otisaka prstiju stabilan i pouzdan.

3.2. HPLC utvrđivanje otiska prsta i analiza sličnosti.Otisak referentnih tvari Atractylodes III prikazan je na slici 1(a). Uzorak AMR pokazao je povoljnu segregaciju među svojim vrhovima (Slika 1(b)). Pod savršenim uvjetima, generirani su HPLC otisci prstiju 11 različitih serija AMR uzoraka (Slika 1(c)) i izračunate su sličnosti. Rezultati sličnosti prikazani su u tablici 4, koja pokazuje da su sve vrijednosti sličnosti 11 uzoraka bile veće od 0.8, što ukazuje da su svi uzorci bili slični u vrsti kemijskog sastava. Uočeno je šesnaest uobičajenih vrhova usporedbom vremena zadržavanja UV spektra. Vrh 11 je identificiran kao Atractylodes III pomoću referentnih tvari. RSDs PA-ova za 16 uobičajenih vrhova bili su između 1,18 posto i 58,68 posto (Tablica 5). Ovi rezultati su pokazali da je sadržaj kemijskih tvari u AMR-u iz različitih proizvodnih područja bio različit.

3.3. Kemometrijska analiza

3.3.1. HCA. HCA je primijenjen za identifikaciju AMR-a iz različitih proizvodnih područja na temelju različitih klastera i sličnosti otisaka prstiju. Kao indikator korištena je zajednička površina vrha u 11 serija AMR-a, a klaster analiza je provedena softverom SIMCA14.1. Rezultati su prikazani na slici 2. Uzorci od 11 serija AMR-a podijeljeni su u 3 kategorije kada su udaljenosti klasa bile u rasponu između 20 i 30, od kojih su S4, S8, S9, S1 i S3 grupirani u kategorije I, a S7 je bio svrstani u kategoriju II, dok su S2, S5, S10, S6 i S11 svrstani u kategoriju III.

3.3.2. PCA. U ovoj studiji izračunat je PCA za 11 serija AMR-a; u 16 glavnih komponenti, kumulativni doprinos varijance prvih pet glavnih komponenti bio je 91,3 posto.Thematrica rezultata prve dvije komponente koristila bi se za analizu budući da je kumulativna varijanca premašila 65,9 posto.Thestoga, u nedostatku nekih informacija, konstruirajte dvodimenzionalnu ravninu glavne komponente da je apscisa glavna komponenta, a ordinata druga glavna komponenta. Zatim je 11 uzoraka projicirano na 2D ravninu tako da je promatrano njihovo prirodno skupljanje (Slika 3(a)). Utvrđeno je da S4, S8, S9, S1 i S3 imaju jasne klasifikacije, S7 se mogu podijeliti u jedan tip, a S2, S5, S10, S6 i S11 mogu se podijeliti u drugi tip.Therezultat PCA bio je u skladu s rezultatom HCA.

Svaka točka u dijagramu opterećenja predstavljala je kromatografski vrh, koji predstavlja doprinos svakog kromatografskog vrha sveobuhvatnom učinkuglavne komponente.Thetežinska vrijednost varijabli možeodražavaju korelaciju između kemijskog sastavaa uzorak u najvećoj mjeri.Thedalje odpodrijetlo dijagrama opterećenja, veća je varijablatežina.Therezultat je prikazan na slici 3(b), što je sugeriraloda su kromatografski vrhovi 9, 11 (atraktilenolid III),i 12 imalo je veći utjecaj na prvu glavnu komponentu. Međutim, kromatografski vrhovi 4, 5, 6, 15 i 16imala veći utjecaj na drugu glavnu komponentu. Topokazalo je da gornji kromatografski pikovi mogu imati aveći utjecaj na klasifikaciju.

3.3.3. OPLS-DA.The11 uzoraka podijeljeno je u dvije skupine: S1, S3, S4, S8 i S9 prva skupina, a S2, S5, S6, S7, S10 i S11 druga skupina.Thezajednička informacija o vrhuncu svih uzoraka uvezena je u softver SIMCA14.1 za OPLS-DA. R2 X i R2 Y karakteriziraju brzinu objašnjenja modela prema x i y matricama, pojedinačno, a Q2 karakterizira prediktivnu sposobnost modela.Therezultati su pokazali da su vrijednosti R2 X, R2 Y i Q2 bile 0.939, 0.992, odnosno 0.583, a sve su bile veće od {{ 9}}.5, što ukazuje da je model mogao razlikovati dvije skupine uzoraka i da je imao bolju sposobnost prilagođavanja i predviđanja u obradi podataka. Može se koristiti za razlikovanje AMR-a od različitih proizvodnih područja (Slika 4(a)).

Theprofil varijabli važnih za projekciju (VIP) u OPLS-DA modelu može odražavati doprinos svakog kromatografskog vrha uzorku.TheVIP vrijednosti 16 kromatografskih vrhova odražavaju snagu utjecaja na svaki AMR uzorak. Na temelju načela odabira da je VIP vrijednost bila veća od 1.0, a traka pogreške manja od ishodišta (Slika 4(b)), odabrana su 4 važna kromatografska vrha, koji su poredani redoslijedom: vrh 1 > vrh 6 > vrh 16 > vrh 5.

Therezultati analize dijagrama opterećenja prikazani su na slici 4(c), koji pokazuju da su položaji gornja 4 važna kromatografska vrha bili daleko od ishodišta. Predloženo je da su 4 kromatografska vrha značajno utjecala na klasifikaciju AMR-a, a ove komponente predstavljene s 4 kromatografska vrha mogle bi biti glavne komponente markera svakog uzorka.

3.4. Procjena inhibitorne aktivnosti AMR na TYR in vitro.Theinhibitorni učinci AMR iz različitih proizvodnih područja na aktivnost TYR određeni su biokemijskom enzimskom metodom.Theučinci uzoraka na aktivnost TYR navedeni su u tablici 6. Svaki uzorak s koncentracijom od 10 mg/mL mogao je inhibirati aktivnost TYR i farmakološka aktivnost bila je izrazito različita, među kojima je stopa inhibicije S5 bila najveća, dok je S6 bila najniža.

3.5. Analiza odnosa spektar-učinak. U ovom je članku primijenjen PLS za analizu odnosa spektar-aktivnost.Theparcijalni regresijski koeficijent i VIP vrijednost prikazani su na slikama 5(a) i 5(b), koje pokazuju da su kromatografski vrhovi 1, 2, 5, 6, 7, 9, 10, 11, 15 i 16 bili u pozitivnoj korelaciji s inhibiciju aktivnosti TYR, ali su kromatografski vrhovi 3, 4, 8, 12, 13 i 14 bili u negativnoj korelaciji s njima. Među kromatografskim pikovima koji su pozitivno korelirali s inhibicijom aktivnosti TYR, VIP vrijednosti kromatografskih pikova 11 (Atractylodes III) i 15 bile su veće od 1, što ukazuje da ove dvije komponente značajno utječu na inhibiciju aktivnosti TYR.

3.6. Inhibicijski učinak Atractylodes III na TYR i molekularno spajanje.TheInhibicijski učinak Atractylodes III na aktivnost TYR određen je biokemijskom enzimskom metodom in vitro s -arbutinom kao pozitivnom kontrolom.Therezultati su pokazali da su stope inhibicije Atractylodes III i -arbutina na aktivnost TYR bile 63,68 ± 2,36 posto odnosno 94,85 ± 0.35 posto, kada je koncentracija uzoraka bila 1 mg/mL.

Molekularno spajanje korišteno je za proučavanje mehanizma vezanja Atractylodes III u interakciji s TYR (slike 6(a)–6(c)).TheVezno mjesto tirozinaze gljive sastoji se od uske, plitke šupljine s dva iona bakra (Cu2 plus ) od kojih je svaki stabiliziran s tri histidinska ostatka (npr. His 61) u aktivnom centru enzima. U ovoj studiji, Atractylodes III je spoj male molekule koji se nalazi u aktivnom središtu enzima i stupa u interakciju s okolnim ostacima (His 244, Phe 264, Ala 286, His 263, Val 283, His259, His 85, Asn 260). Zanimljivo je da je Atractylodes III stvorio stabilnu vodikovu vezu s Asn 260 s duljinom veze od 1,9 ˚ A.

4. Zaključci

U ovoj studiji uspostavljena je sustavna metoda koja povezuje HPLC otiske s kemometrijskom analizom kako bi se razlikovali AMR uzorci različitog podrijetla, a učinak izbjeljivanja AMR-a dokazan je biokemijskom enzimskom metodom. Odnosi spektra i učinka pokazali su da su kromatografski vrhovi 1, 2, 5, 6, 9, 10, 11, 15 i 16 bili u pozitivnoj korelaciji s učinkom inhibicije AMR-a na aktivnost TYR-a, među kojima bi vrhovi 11 (atraktilenolid III) i 15 mogli biti važnih aktivnih sastojaka. U međuvremenu, atraktilenolid III ima visoku inhibitornu aktivnost TYR in vitro testa, a rezultat molekularnog spajanja pokazao je da bi njegov mehanizam mogao biti povezan s vezanjem aminokiselinskih ostataka u katalitičkoj kapsuli TYR.TheStoga su ovi rezultati dokazali da su biološki testovi, molekularni docking i odnosi spektra i aktivnosti prikladni za povezivanje kvalitete uzoraka s aktivnim sastojcima povezanim s farmaceutskim proizvodima.

Dostupnost podataka

Podaci korišteni za podupiranje nalaza ove studije dostupni su od odgovarajućeg autora na zahtjev.

Razotkrivanje

Yong-Qin Liu i Chang-Yan Xu smatraju se prvim suautorima.

Sukob interesa

Autori izjavljuju da nemaju sukoba interesa u ovoj studiji.

Prilozi autora

Yong-Qin Liu i Chang-Yan Xu pridonijeli su radu.

Priznanja

Ovu studiju sponzorirao je Program osposobljavanja za inovacije i poduzetništvo za studente fakulteta u provinciji Guizhou (br. 20195200925).

Reference

[1] Y.-L. Wang, G. Hu, Q. Zhang, et al., "Skrining i karakterizacija inhibitora tirozinaze iz Salvia miltiorrhiza i Carthamus tinctorius analizom odnosa spektar-učinak i molekularnim spajanjem", Journal of Analytical Methods in Chemistry, sv. 2018., šifra članka 2141389, 10 str., 2018.

[2] HX Cui, FF Duan, SS Jia, FR Cheng i K. Yuan, "Antioksidativne i inhibicijske aktivnosti tirozinaze sjemenskih ulja iz Torreya grandis fort. ex Lindl," BioMed Research International, sv. 2018., šifra članka 5314320, 10 str., 2018.

[3] Y. Tian, ​​Z. Zhang, N. Gao, P. Huang i FY Wu, "Luminescentni test bez oznake za praćenje aktivnosti tirozinaze i probir inhibitora s odgovarajućim nanočesticama polimera koordinacije lantanida," Spectrochimica Acta Dio A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, sv. 228, 2020.

[4] H. Liu, B. Liu, P. Huang, Y. Wu, FY Wu i L. Ma, "Kolorimetrijsko određivanje tirozinaze na temelju in situ metalizacije srebra katalizirane nanočesticama zlata", MikroChim Acta, sv. 187, br. 10, str. 551, 2020.

[5] DC Franco, GS de Carvalho, PR Rocha, R. da Silva Teixeira, AD da Silva i NR Raposo, "Inhibitorni učinci analoga resveratrola na aktivnost tirozinaze gljiva," Molecules (Basel, Švicarska), sv. 17, br. 10, str. 11816-11825, 2012.

[6] HH Kim, JK Kim, J. Kim, S.-H. Jung, i K. Lee, "Karakterizacija kafeoilkvinskih kiselina iz episodes thunbergianus i njihova inhibicijska aktivnost melanogeneze," ACS Omega, sv. 5, br. 48, str. 30946–30955, 2020.

[7] F. Pintus, D. Span`o, A. Corona i R. Medda, "Anti tirozinazna aktivnost ekstrakata Euphorbia characiase", PeerJ, sv. 3, str. e1305, 2015.

[8] M. Shi, Y. Zhang, M. Song, Y. Sun, C. Li i W. Kang, "Provjera komponenti markera u Psoralea corylifolia L. uz pomoć odnosa spektar-učinak i komponenata knock- objavio UPLC-MS(2)," International Journal of Molecular Sciences, sv. 19, br. 11., 2018.

[9] G.-H. Wang, C.-Y. Chen, T.-H. Tsai i sur., "Procjena inhibitorne i antioksidativne aktivnosti tirozinaze ekstrakta korijena Angelice dahurice za četiri različite fermentacije probiotičkih bakterija", Journal of Bioscience and Bioengineering, sv. 123, br. 6, str. 679–684, 2017.

[10] YS Lin, HJ Chen, JP Huang et al., "Kinetika inhibitorne aktivnosti tirozinaze korištenjem ekstrakata lišća Viti's vinifera," BioMed Research International, sv. 2017., šifra članka 5232680, 5 str., 2017.

[11] S. Yang, J. Zhang, Y. Yan, et al., "Strategija temeljena na mrežnoj farmakologiji za istraživanje farmakoloških mehanizama Atractylodes macrocephala Koidz. za liječenje kroničnog gastritisa," Frontiers in Pharmacology, sv. 10, str. 1629, 2019.

[12] H.-R. Yang, J. Yuan, L.-H. Liu, W. Zhang, F. Chen i C.-C. Dai, "Endophytic Pseudomonas fluorescentno inducirano nakupljanje seskviterpenoida posredovano giberelinskom kiselinom i jasmonskom kiselinom u biljčicama Atractylodes macrocephala Koidz", Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), sv. 138, br. 3, str. 445–457, 2019.

[13] L. Hu, X. Chen, J. Yang i L. Guo, "Geografska provjera autentičnosti tradicionalne kineske medicine Atractylodes macrocephala Koidz. (Baizhu) pomoću analiza stabilnih izotopa i više elemenata", Rapid Communications in Mass Spectrometry, sv. . 33, br. 22, str. 1703–1710, 2019.

[14] H. Li i G. Yang, "Kompletan genom kloroplasta Atractylodes macrocephala Koidz. (Asteraceae)," Mitohondrijska DNA dio B, sv. 5, br. 3, str. 2060-2061, 2020.

[15] S. Gu, L. Li, H. Huang, B. Wang i T. Zhang, "Antitumorska, antivirusna i protuupalna učinkovitost eteričnih ulja iz Atractylodes macrocephala Koidz," Proizvedeno različitim metodama obrade, Molecules , sv. 24, br. 16., 2019.

[16] J. Wang, L. Peng, M. Shi, C. Li, Y. Zhang i W. Kang, "Spectrum effect relationship and component knock-out in Angelica dahurica radix by high-performance liquid chromatography-Q izvršni hibridni maseni spektrometar s kvadrupolnom orbitrapom," Molecules, sv. 22, br. 7. 2017.

[17] B. Zhu, Q.-L. Zhang, J.-W. Hua, W.-L. Cheng i L.-P. Qin, "Thetradicionalne upotrebe, fitokemija i farmakologija Atractylodes macrocephala Koidz.: pregled," Journal of Ethnopharmacology, vol. 226, str. 143–167, 2018.

[18] Y.-Y. Feng, H.-Y. Ji, X.-D. Dong i A.-J. Liu, "Polisaharid topiv u alkoholu iz Atractylodes macrocephala Koidz inducira apoptozu Eca-109 stanica," Carbohydrate Polymers, sv. 226, ID članka 115136, 2019.

[19] W. Li, Y. Zhang, S. Shi, et al., "Odnos spektra i učinka antioksidansa i aktivnosti tirozinaze s sljedbenicima Malus pumila pomoću UPLC-MS/MS i metode izbacivanja komponenti," Food and Chemical Toksikologija, sv. 133, ID članka 110754, 2019.

[20] B. Xu, J. Gao, S. Zhao, Y. Li, Y. Du i H. Pan, "Theodnos spektra i učinka između HPLC otiska prsta i okrepljujućeg krvnog i rastapajućeg zastoja učinka lišća gloga," Chromatographia, vol. 83, br. 3, str. 409–421, 2020.

[21] Y. Feng, Z. Jing, Y. Li et al., "Skrining anafilaktoidnih komponenti injekcije Shuang Huang Lian analizom odnosa spektar-učinak zajedno s UPLC-TOF-MS," Biomedicinska kromatografija, sv. 33, br. 2, ID članka e4376, 2019.

[22] X. Jiang, L. Tao, C. Li et al., "Grupiranje, odnos spektar-učinak i antioksidativni spojevi kineskog propolisa iz različitih regija korištenjem multivarijatnih analiza i off-line anti-DPPH testa," Molecules, sv. . 25, br. 14., 2020.

[23] Y. Zhao, X.-M. Vi, H. Jiang, G.-X. Zou i B. Wang, "Odnos spektra i učinaka između otisaka prstiju tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti i protuupalnih aktivnosti Leontopodium leontopodioides (Willd.) Beauv," Journal of Chromatography B, sv. 1104, str. 11–17, 2019.

[24] X. Zhou, Y. Li, M. Zhang, et al., "Odnos spektra i učinka između UPLC otisaka prstiju i učinka Si Jun Zi Tanga protiv raka pluća," Komplementarna i alternativna medicina temeljena na dokazima, sv. 2019., šifra članka 7282681, 9 str., 2019.

[25] X. Sun, Q. Zhao, Y. Si i sur., "Bioaktivna strukturna osnova proteoglikana iz Sarcandra glabra na temelju odnosa spektar-učinak", Journal of Ethnopharmacology, sv. 259, ID članka 112941, 2020.

[26] S. Gao, H. Chen i X. Zhou, "Studija o odnosu spektar-učinak inhibitorne aktivnosti ksantin oksidaze Ligustrum lucidum," Journal of Separation Science, sv. 42, br. 21, str. 3281-3292, 2019.

[27] J. Tan, J. Liu, H. Wang, et al., "Identifikacija komponenti koje aktiviraju krv iz Xueshuan Xinmaining tablete na temelju odnosa spektar-učinak i mrežne farmakološke analize," RSC Advances, sv. 10, br. 16, str. 9587–9600, 2020.

[28] J. Zhang, T. Chen, K. Li et al., "Provjera aktivnih sastojaka ružmarina na temelju odnosa spektra i učinka između UPLC otiska prsta i vazorelaksantne aktivnosti korištenjem tri kemometrije," Journal of Chromatography B, sv. 1134-1135, ID članka 121854, 2019.

[29] Y. Chen, G. Pan, W. Xu i dr., "Studija odnosa spektra i učinka između HPLC otisaka prstiju i antioksidativne aktivnosti Sabia parviflflora," Journal of Chromatography B, sv. 1140, ID artikla 121970, 2020.

[30] M. Liao, P. Yan, X. Liu, et al., "Odnos spektra i učinka za antitumorsku aktivnost shikonina i shikonofurana u medicinskom Zicaou pomoću UHPLC-MS/MS i kemometrijskih pristupa," Journal of Kromatografija B, sv. 1136, ID članka 121924, 2020.

[31] JH Wu, YT Cao, HY Pan i LH Wang, "Identifikacija antitumorskih sastojaka u otrovu žabe krastače analizom odnosa spektra i učinka i istraživanjem njegovog farmakološkog mehanizma," Molecules, sv. 25, br. 18. 2020.

[32] J. Tang, J. Liu i F. Wu, "Studije molekularnog spajanja i biološka procjena derivata 1,3,4-tiadiazola koji nose dijelove Schiffffove baze kao inhibitore tirozinaze," Bioorganic Chemistry, sv. 69, str. 29–36, 2016.