Fitokemijski pregled i estrogena aktivnost ukupnih glikozida Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Sažetak

Tijekom desetljeća postojali su stalni napori da se poboljša kvaliteta ljudskog života. Postmenopauzalni sindrom je ozbiljna briga za dobrobit zdravlja žena. Hormonska terapija trenutno je glavni način liječenja ovog stanja. Međutim, ova terapija može dovesti do zlouporabe estrogena, što dovodi do neželjenih reakcija i nuspojava. Zbog toga je hormonska terapija bila neuspješna u ublažavanju postmenopauzalnog sindroma.Cistanche deserticolaje klasična tonična biljka u tradicionalnoj kineskoj medicini. Pokazuje značajnu estrogenu aktivnost. Glavni aktivni spojevi ove biljke su glikozidi. U prethodnom eksperimentu identificirana su tri važna faktora koji doprinose ukupnom prinosu glikozida, prinosu akteozida i estrogenskoj aktivnosti, naime koncentracija eluensa, pH i volumen eluensa. U ovom eksperimentu, optimalan proces pročišćavanja određen je korištenjem metodologije središnjeg kompozitnog dizajna i površinske reakcije za dobivanje glikozida iz ove biljke. Koncentracija eluensa (etanol) od 85 posto i volumen od 25 BV pri pH od 11 bili su optimalni. Dvadeset i jedan aktivni spoj identificiran je testom tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti/kvadrupolne time-of-flight masene spektrometrije. Ova studija daje dragocjene uvide za daljnja dubinska istraživanja koja procjenjuju estrogene aktivnosti ukupnih glikozidaCistanche deserticola.

Ključne riječi: Središnji kompozitni dizajn; Cistanche deserticola ukupni glikozidi; LC/Q-TOF-MS; tehnologija pročišćavanja; test rasta maternice.

Uvod

Cistanche deserticolaje jestiva, klasična tonična biljka. Prvi put se spominje u Shen Nongovom biljnom klasiku i uvršten je u najviši razred. Topla je i slatka biljka. Ima brojna ljekovita svojstva, poput prehrane jetre i bubrega, jačanja mišića i kostiju te poboljšanja imunološke regulacije uz djelovanje protiv starenja i tumora [1-4]. Neki prirodni spojevi izolirani su i identificirani iz ekstrakata ove biljke, a glavni su feniletanoidni glikozidi, lignanoidi, iridoidi, polisaharidi i alkaloidi [5-8].

Lijekovi dobiveni iz ljekovitog bilja sadrže različite aktivne spojeve koji su prvenstveno zaslužni za njihovo terapeutsko djelovanje. Učinkovitost istog lijeka dobivenog iz različitih biljnih izvora može varirati zbog razlika u vrsti i količini aktivnih spojeva prisutnih u njemu. Stoga je važno identificirati i kvantificirati sve aktivne spojeve prisutne u lijekovima dobivenim iz ljekovitog bilja. Isto vrijedi i za C. deserticola. Metodologija površine odziva je eksperimentalna metoda za istraživanje interakcije između različitih čimbenika istovremeno [9-10]. Može se koristiti za optimizaciju ekstrakcijskih parametara za fitofarmaceutike i kvantitativnu procjenu aktivnih spojeva u lijekovima. Centralni kompozitni dizajn (CCD) jedan je od eksperimentalnih dizajna korisnih u metodologiji odzivne površine. U usporedbi s ortogonalnim i uniformnim dizajnom, CCD ima veću preciznost i bolju predvidljivost [11].

Postmenopauzalni sindrom može značajno smanjiti kvalitetu života žena. Obično se za liječenje ovog stanja koristi estrogen. Međutim, dugotrajna primjena estrogena može dovesti do zlouporabe, uzrokujući različite neželjene reakcije i nuspojave. Stoga je prijeko potrebno odabrati alternativnu terapiju, po mogućnosti biljni lijek koji sadrži estrogen kao aktivni sastojak za liječenje postmenopauzalnog sindroma [12-13].

U preliminarnom eksperimentu, strukture različitih prirodnih spojeva dobivenih iz C. deserticola identificirane su uporabom masene spektrometrije (MS) [14]. Potvrđeno je da su glikozidi glavni aktivni spojevi koji imaju značajno estrogensko djelovanje [14-15]. Kako bi se razvio siguran i učinkovit estrogenski aktivni sastojak u novom lijeku, potrebno je dubinsko istraživanje TGCD-a nakon pročišćavanja. U ovoj studiji, CCD je prvi put korišten za optimizaciju pročišćavanja ukupnih glikozida C. deserticola (TGCD). Zatim je korišten test rasta maternice za procjenu estrogenih aktivnosti istog glikozida. Za kvalitativnu analizu spojeva TGCD nakon pročišćavanja korištena je tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti/kvadrupolna time-of-flight masena spektrometrija (HPLC/Q-TOF-MS). Ovaj postupak je primijenjen kako bi se eksplicitno pokazala prisutnost različitih aktivnih spojeva s estrogenskom aktivnošću u TGCD. To istovremeno može pružiti osnovu za njegovu kliničku upotrebu u postmenopauzalnom sindromu zamjenjujući estrogen.

Eksperimentalna procedura

instrumenti

Agilent 1290 HPLC sustav (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, SAD), Agilent 6530 serija kvadrupolnih vremenski-proletnih LC/MS (Q-TOF) sustava (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, SAD) i kemijska HPLC{ {5}}D radne stanice korištene su kao kromatografski instrumenti za obradu podataka. Milli-Q ultračista voda korištena je za cijelo istraživanje. AR1140 elektronička analitička vaga (Ohaus International Ltd.); 680 čitač mikropločica (Bio-Rad Corporation); i 64R centrifuga velike brzine (Beckman Coulter Allegra) korištena je za pripremu uzorka.

Lijekovi i kemikalije

C. deserticola kupljena je na tržištu lijekova, a identificirao ju je prof. Zhang Delian (Harbinsko sveučilište za trgovinu, Kina). Standardni dietilstilbestrol (99 posto čistoće, serija br. 60518) kupljen je od dr. Ehrenstorfera (Njemačka). Ostali standardni akteozid (111530-200505) i ehinakozid (111670-200503) dobiveni su od Nacionalnog instituta za kontrolu farmaceutskih i bioloških proizvoda, Peking, Kina. Čistoća svakog standarda bila je > 98 posto. Acetonitril (ACN), metanol i mravlja kiselina (MS stupanj) nabavljeni su od Thermo Scientific Pierce (Rockford, IL, USA). Ultračista voda dobivena je od Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd. (Hangzhou, Kina). Svi komercijalno dostupni reagensi bili su analitičke kvalitete.

Priprava ukupnih glikozida otopine za pročišćavanje C. deserticola

Nakon potapanja u 75 postotni etanol tijekom 12 sati, sirovi prah C. deserticola (100 g) ekstrahiran je s 800 mL 75 postotnog (v/v) etanola na 80 stupnjeva tijekom 150 minuta pod refluksom. Zatim je filtriran kroz dvoslojni filtar i potom ekstrahiran s 800 mL 75 postotnog etanola dva puta tijekom dodatnih 150 minuta. Nakon toga, filtrati su spojeni i koncentrirani u vakuumu na 45 stupnjeva. Ekstrakt je dobiven uklanjanjem otapala. Ekstraktu je dodana određena količina destilirane vode da se dobije koncentracija od 0,5 g/mL, koja je korištena za ispitivanje procesa pročišćavanja.

Za adsorpciju korištenjem AB-8 makroporozne smole, pH otopine ispitnog uzorka je podešen na 11. Prvo je korišteno 2 BV destilirane vode da se isperu nečistoće. Zatim je eluens u koncentraciji od 25 BV 85 posto etanola eluiran i sakupljen. Konačno, sakupljeni pročišćeni eluens je spojen. Ekstraktu je dodana određena količina destilirane vode do koncentracije od 1,5 g/mL koja je korištena za intragastričnu primjenu. Za pozitivnu kontrolu, otopina dietilstilbestrola (20 ug/mL) je pripremljena s prahom dietilstilbestrola.

Prema omjeru pročišćavanja ({{0}}.6), određena količina ekstrakta (ekvivalent 1 g C. deserticola) prebačena je u odmjernu tikvicu od 10 mL, otopljen u 50 posto (v/v) otopini metanola u ultrazvučnoj kupelji tijekom 5 minuta i razrijeđen do 10 mL. Medicinska otopina je dobivena nakon filtracije supernatanta kroz filtarsku membranu od 0,45 μm. Akteozid i ehinakozid (1 mg svaki) su pomiješani i potpuno otopljeni u 10 mL 50 posto (v/v) otopine metanola. Na kraju, standardna otopina je filtrirana kroz Millipore filter od 0,45 μm prije analize.

LC-MS uvjeti

Kromatografsko odvajanje provedeno je u HPLC sustavu (Agilent 129{{10}}), opremljenom kvaternim sustavom za isporuku otapala, vakuumskim rasplinjačem i fotodiodnim detektorom. MS/MS analiza je provedena u instrumentu Agilent-1290 HPLC/6530 Q-TOF-MS sustav, opremljen elektrosprej ionizacijskim izvorom u pozitivnim i negativnim ionskim modovima. Za odvajanje je korišten kolona Waters Symmetry shield RP C18 (4,6 × 250 mm, 5 μm) (Waters Corporation, Milford, MA, SAD). Mobilna faza se sastojala od 0,2 posto vodene otopine mravlje kiseline (v/v) (A) i ACN (B), a pumpana je brzinom protoka od 0,5 mL/min. Volumen injekcije svakog uzorka bio je 10 μL. Gradijentni program eluiranja bio je sljedeći: 5-23 posto B za 0-35 minuta, 23-25 ​​posto B za 35-65 minuta i 25-5 posto B za 65-70 minuta. Temperatura kolone je održavana na 30 stupnjeva. Kromatogrami su praćeni i snimani na 330 nm. Tlak atomizacijskog plina postavljen je na 30 psi, a kapilarni napon je bio 3,5 kV. Brzina protoka suhog plina bila je 8 L/min pri temperaturi od 30 stupnjeva. Temperatura plaštnog plina postavljena je na 400 stupnjeva pri brzini protoka od 12 L/min. Energija sudara postavljena je na 10-20 eV za skeniranje niske energije i 30-50 eV za skeniranje visoke energije. Podaci spektra mase snimljeni su u rasponu skeniranja od 50-1000 Da u načinima skeniranja pozitivnih i negativnih iona. U ovoj studiji, brza i učinkovita usporedba između TGCD i standarda provedena je pod istim LC-MS uvjetima.

Test rasta maternice

To je provedeno u strogom skladu s preporukama Vodiča za njegu i korištenje laboratorijskih životinja Nacionalnog instituta za zdravlje. Sve eksperimentalne postupke pregledao je i odobrio Etički odbor za životinje Harbinskog sveučilišta za trgovinu, Kina.

Nezrele ženke Kunming miševa (oko 21 dan od rođenja, odbijene) težine 12 ± 2 g, kupljene su od Changchun National Biological Industry Base Laboratory Animal Center (Changchun, Kina). Miševi su smješteni u prostoriju s reguliranom temperaturom (22 ± 2 stupnja) s hranom i vodom ad libitum. Pokusi na životinjama započeli su nakon pet dana aklimatizacije. Miševi su gladovali preko noći s vodom ad libitum prije intragastrične primjene ispitivane otopine.

Miševi su nasumično podijeljeni u 22 skupine, s 10 životinja u svakoj skupini. Primijenjeni su im eksperimentalni lijekovi iste količine dva puta dnevno (ujutro i navečer) tijekom četiri dana kako slijedi:

Skupina 1: Intragastrični ukupni glikozidi C. deserticola otopina za pročišćavanje (20 mL/kg), (volumen otopine/težina miša),

Skupina II: Intragastrična destilirana voda (negativna kontrolna skupina), i

Skupina III: Intragastrični dietilstilbestrol (20 ug/mL) (pozitivna kontrolna skupina).

Petog dana svi miševi su žrtvovani. Maternice su odmah uklonjene i izvagane te su izračunati koeficijenti uterusa.

Statistička analiza

Dvostrani t-test uparenog uzorka korišten je za utvrđivanje statistički značajnih razlika u različitim parametrima u različitim eksperimentalnim skupinama. Analiza je provedena korištenjem SPSS statističkog softvera (SPSS za Windows v21.0, SPSS Inc., SAD). Razlike su smatrane statistički značajnim na razini pouzdanosti od 95 posto (p <>

Rezultati i rasprava

Linearnost i korelacija prinosa akteozida i ukupnih glikozida

Linearna regresijska jednadžba prinosa akteozida bila je y {{0}}x – 14,75 (gdje je x koncentracija akteozida, a y njegova odgovarajuća vršna površina) s koeficijentom korelacije r=1 u koncentracijskom području od 0.12−{{10}}.72 mg/mL. To je ukazivalo na linearnu kalibracijsku krivulju. Linearna regresijska jednadžba ukupnog prinosa glikozida bila je y=26.074x plus 0,0866 (gdje je x koncentracija ukupnih glikozida, a y odgovarajuća površina vrha) s koeficijentom korelacije r { {12}}.9982 u rasponu koncentracija od 0,013−0,065 mg/mL. Ovo također ukazuje na linearnu kalibracijsku krivulju.

Metodološko istraživanje

U metodološkom istraživanju ispitana je preciznost, ponovljivost, stabilnost i iskorištenje uzoraka. U eksperimentu s preciznošću, relativna standardna devijacija (RSD) akteozida i ukupnih glikozida bila je 1,43 posto odnosno 0.05 posto. U eksperimentu ponovljivosti, RSD akteozida i ukupnih glikozida bio je 0,10 posto odnosno 1,44 posto. U 24-satnom eksperimentu stabilnosti, RSD akteozida i ukupnih glikozida bio je 0,14 posto, odnosno 0,90 posto. U pokusu iskorištenja, iskorištenje akteozida bilo je 100,50 posto s RSD od 2,08 posto, dok je iskorištenje ukupnih glikozida bilo 99,12 posto s RSD od 1,65 posto. Sve dinarske vrijednosti bile su manje od 3 posto. Ovi rezultati pokazali su dobru preciznost i ponovljivost. Osim toga, uzorak je bio stabilan 24 sata. Rezultati oporavka također su unutar dopuštenog raspona (95-105 posto). Stoga se ova metoda može koristiti za određivanje prinosa akteozida i ukupnih glikozida nakon pročišćavanja.

Jednofaktorsko ispitivanje TGCD

Na pročišćavanje TGCD-a pomoću makroporozne smole mogu utjecati mnogi čimbenici, kao što su vrsta smole, čimbenici statičke adsorpcije (vrijeme adsorpcije, koncentracija curenja i pH otopine uzorka) i uvjeti eluiranja (brzina protoka, volumen i koncentracija). Koristeći adsorpcijski kapacitet i brzine desorpcije i elucije TGCD kao indekse, eksperimentalni uvjeti su određeni na temelju rezultata jednofaktorskih eksperimenata. Upotrebom makroporozne adsorpcijske smole tipa AB-8 određeni su sljedeći optimalni uvjeti: 0.5 mg/mL otopine uzorka, pH 10, statičko vrijeme adsorpcije 8 h, 2 BV destilirana voda za pranje nečistoća, 20 BV 80 postotnog etanola kao eluens, i brzina protoka od 0,5 BV/min. Konkretni rezultati prikazani su na slikama 1-7.

CCD za optimizaciju tehnologije pročišćavanja TGCD

Na temelju rezultata jednofaktorskog istraživanja odabrana su tri čimbenika koji značajno utječu na metodu pročišćavanja kao indeksi, a to su pH otopine uzorka (x1), koncentracija eluensa (x2) i volumen eluensa (x3). Prema principu CCD-a svaki faktor ima pet razina. Maksimalne i minimalne razine ovih različitih faktora postavljene su prema rezultatima preliminarnog eksperimenta. Razine faktora prikazane su u tablici 1, a eksperimentalni rezultati prikazani su u tablici 2.

Ukupni prinosi glikozida i akteozida određeni su kako bi se optimizirala metoda pročišćavanja za TGCD. Prvo, ukupni prinosi glikozida i akteozida postavljeni su na numerički kriterij poželjnosti (d) između {{0}}-1. Zatim je izračunata ukupna poželjnost (OD) [OD=(d1, d2, d3,....,dn)1/n, gdje je n broj indeksa]. SPSS21.{{10}} softver i design-expert softver korišteni su za višestruku linearnu regresiju i binomno prilagođavanje neovisnih varijabli i OD, s p < 0.05="" je="" uzeto="" u="" obzir="" statistički="" značajan="" standard="" jednadžbe.="" jednadžba="" s="" većom="" r-vrijednošću="" (koeficijent="" višestruke="" korelacije)="" odabrana="" je="" kao="" model="" koji="" najbolje="" odgovara.="" multivarijantna="" linearna="" jednadžba="" predstavljena="" je="" kao="" y="–" 1.02="" –="" 0.131x1="" plus="" 0.034x2="" plus="" 0,012x3="" (r="" {{="" 25}}.55,="" str="0.004)." binomna="" jednadžba="" je="" y="–" 21,92173="" –="" 0,74079x1="" plus="" 0,62914x2="" plus="" 0,041161x3="" plus="" 0,014972x1x2="" plus="" 2,06050*10-4x1x3="" plus="" 1,05698="" ×="" 10-3x2x3="" -="" 0.029589x="" {56}}.78730="" ×="" 10-3x22="" -="" 2.89446="" ×="" 10-3x32="" (r="0.91," p="0.012)." iz="" gornjih="" jednadžbi="" vidljivo="" je="" da="" je="" koeficijent="" korelacije="" multivarijatne="" linearne="" regresijske="" jednadžbe="" manji.="" korelacija="" između="" neovisnih="" i="" zavisnih="" varijabli="" vrlo="" je="" niska="" i="" smatra="" se="" nepovoljnom="" za="" korištenje="" u="" linearnom="">

No, koeficijent korelacije binomne jednadžbe bio je visok i rezultirao je dobrim uklapanjem. Stoga je odabran binomni model. Na temelju sveobuhvatne analize površine i karte konture u kombinaciji s eksperimentalnim podacima (OD vrijednost blizu {{0}}.6), dobiven je optimalni raspon metode pročišćavanja. Na slici 8 se može vidjeti da je maksimalna OD vrijednost generirana kada je pH otopine uzorka (A) bio u rasponu od 9-10, a koncentracija eluensa (B) bila u rasponu od 79-85 posto. . Slika 9 pokazuje da je maksimalna OD vrijednost dobivena kada je pH vrijednost otopine uzorka (A) bila u rasponu od 9-10, a volumen eluenta (C) bio je u rasponu od 20-25 BV. Slika 10 pokazuje da je maksimalna OD vrijednost dobivena kada je koncentracija eluensa (B) bila u rasponu od 80-85 posto, a volumen eluensa (C) bio je u rasponu od 20-25 BV. Iz sveobuhvatne analize ovih podataka, utvrđeno je da pH otopine uzorka, koncentracija eluensa i volumen eluensa budu u rasponu od 9-10, 80-85 posto, odnosno 20-25 BV. Na temelju multivarijantne binomne jednadžbe za rezultate varijabilnih derivata i optimalne sheme, utvrđeno je da je najbolja metoda pročišćavanja TGCD pri koncentraciji eluensa (etanol) od 85 posto i volumenu od 25 BV pri pH 11. Odgovarajuća vrijednost OD bila je 0,8332 , a ukupni prinos glikozida bio je 73,0339 posto. Vizualni dojam sa slika 8-10 identificira najbolju metodu kao onu u kojoj su uzete u obzir interakcije između dva faktora, iako najbolja metoda izvedena iz formule prepoznaje onu u kojoj su uključene interakcije između tri faktora. Dva su se rezultata razlikovala i smatralo se da je optimalna metoda pročišćavanja ona s koncentracijom eluensa (etanola) od 85 posto i volumenom od 25 BV pri pH 11.

Mjerenje rasta maternice

Koeficijent uterusa svake skupine prikazan je u tablici 3. U usporedbi s negativnom kontrolnom skupinom, rezultati ostalih skupina značajno su se razlikovali. Utvrđeno je da TGCD dobiven 20 različitih metoda pročišćavanja ispoljava estrogensko djelovanje.

Potvrdni eksperiment

Sveobuhvatni rezultati CCD-a i testa rasta maternice pokazali su da se smatra da je optimalna metoda pročišćavanja ona s koncentracijom eluensa (etanola) od 85 posto i volumenom od 25 BV pri pH 11. Tijekom

procesu validacije, prosječni prinos ukupnih glikozida bio je 70,9150 posto. Prosječno odstupanje između predviđenih i stvarnih vrijednosti iznosilo je 2,1180 posto. Stoga se može sugerirati da su predvidljivost i eksperimentalna vjerodostojnost ovog modela dobri.

Identifikacija TGCD nakon pročišćavanja

Na temelju vremena zadržavanja i MS podataka, spekuliran je 21 prirodni sastojak, uključujući kampneozid 1, 2'-acetilakteozid, cistanozid A, cistanozid B, siringalid A, 3'- - L-ramnopiranozid, tubulozid A, tubulozid B, salidrozid, cistanozid G, tenipozidna kiselina, dekafeoilakteozid, 8-epiloganska kiselina, ehinakozid, cistanozid F, cistantubulozid B1, izoakteozid, akteozid, cis-akteozid, kankanozid E, osmantusid B i cistanozid C. Vrijeme zadržavanja, MS i MS/ MS informacije, formula i nagađani spojevi prikazani su u tablici 4.

Q-TOF-MS posebno je prikladan za strukturnu identifikaciju složenih molekularnih komponenti lijekova i hrane jer može pružiti moguće elementarne sastave kroz točnu molekularnu masu i strukturne karakteristike fragmenata iona. Kako bi se uspostavila sustavna strukturna karakterizacija, Q-TOF-MS, MS podaci, pretraživanje baze podataka i objavljena referentna literatura također su korišteni za identifikaciju. Molekularna formula svake ciljane komponente izvedena je iz matičnog iona i usklađena je s poznatim spojevima. Ova se formula može dalje odrediti iz njezinih srodnih fragmenata iona. Na primjer, vrh 5 pokazao je predominantni deprotonirani ion na m/z 654 (C30H38O16), koji je bio identičan elementarnom sastavu kampneozida 1. Gubitak kafeoila nastao je iz fragmenta iona na m/z 493, a gubitak rha dio je formiran iz iona fragmenta na m/z 347.

Zaključak

Koristeći LC-Q-TOF-MS tehnologiju, razvijena je i potpuno validirana jednostavna i robusna metoda kvalitativne analize za TGCD. Validacijski podaci za probir i identifikaciju prirodnih spojeva iz TGCD bili su zadovoljavajući. Nagađa se o dvadeset i jednom bioaktivnom spoju iz TGCD-a kako slijedi: salidrozid, cistanozid G, genipozidna kiselina, dekafeoilakteozid, kampneozid 1, 8-epiloganska kiselina, 2'-acetilakteozid, cistanozid A, cistanozid B, siringalid A3′{{9 }}L-ramnopiranozid, ehinakozid, cistanozid F, cistantubulozid B1, izoakteozid, akteozid, tubulozid A, cis-akteozid, kankanozid E, osmantusid B, cistanozid C i tubulozid B. Strukturna karakterizacija ovih spojeva može pružiti eksperimentalni temelj za njihova kontrola kvalitete i daljnja klinička primjena zbog njihovog estrogenog djelovanja. Ovo može ponuditi novu i poboljšanu terapijsku opciju za liječenje postmenopauzalnog sindroma, čime se izbjegavaju nuspojave i nuspojave estrogenske terapije.

Kratice

TGCDCistanche deserticolaukupni glikozidi LC/Q-TOF-MS tekućinska kromatografija/kvadrupolna vremenska spektrometrija mase

RSM metodologija odzivne površine

CCD središnji kompozitni dizajn

MS masena spektrometrija HPLC/Q-TOF-MS Tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti/kvadrupolna time-oflight masena spektrometrija

ACN acetonitril

BV volumen kreveta

OD ukupna poželjnost

LC-MS tekućinska kromatografija-spektrometrija mase

Q-TOF-MS kvadrupolna vremenska spektrometrija mase

TCM tradicionalni kineski lijekovi

RSD relativna standardna devijacija

Priznanja

Ovaj projekt podržali su Nacionalna zaklada za prirodne znanosti Kine (br. 81073015), Zaklada za znanost o prirodi provincije Heilongjiang (ZD2017014), plan obuke mladih inovativnih talenata Koledža u provinciji Heilongjiang (UNPYSCT- 2017209). Autori izjavljuju da ne postoji sukob interesa u vezi s objavljivanjem ovog rada.

Sukob interesa

Autori navode da nema sukoba interesa.

Reference

[1] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y., Tu PF, Feniletanoidni glikozidi s protuupalnim djelovanjem iz stabljika Cistanche deserticola uzgojenih u pustinji Tarim, Fitoterapia, 2013., 89, {{4} }.

[2] Guo Y., Cao L., Zhao Q., Zhang L., Chen J., Liu B., Zhao B., Preliminarne karakterizacije, antioksidativna i hepatoprotektivna aktivnost polisaharida iz Cistanche deserticola, International Journal of Biological Macromolecules , 2016, 293, 678-685.

[3] Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y., Tu PF, Protuupalni iridoidi iz stabljika Cistanche deserticola uzgojenih u pustinji Tarim, Kineski časopis za prirodne lijekove, 2016., 14, 61-65.

[4] Peng F., Chen J., Wang X., Xu C., Liu T., Xu R., Promjene u razinama feniletanoidnih glikozida, antioksidativnoj aktivnosti i drugim kvalitetnim svojstvima u kriškama Cistanche deserticola obradom parom, kemijska i Pharmaceutical Bulletin (Tokio), 2016., 64, 1024-1030.

[5] Wang T., Zhang X., Xie W., Cistanche deserticola YC Ma, "Desert Ginseng": pregled, The American Journal of Chinese Medicine, 2012., 40, 1123-1141.

[6] Song Y., Song Q., Li J., Zhang N., Zhao Y., Liu X., Jiang Y., Tu P., Integrirana strategija za kvantitativno razlikovanje kamilice izmeđuCistanche deserticolai C. tubulosa pomoću tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti-hibridne trostruke kvadrupolne linearne ionske zamke masene spektrometrije, Journal of Chromatography A, 2016., 1429, 238-247.

[7] Li Y., Peng Y., Wang M., Zhou G., Zhang Y., Li X., Brzi probir i identifikacija razlika između metabolitaCistanche deserticolai C. tubulosa vodeni ekstrakt u štakora UPLC-Q-TOF-MS kombiniranom analizom prepoznavanja uzoraka, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2016., 131, 364-372.

[8] Li WL, Sun XM, Song H., Ding JX, Bai J., Chen Q., HPLC/Q-TOF-MS-Based Identification of Absorbed Constituents and Their Metabolites in Rat Serum and Urine after Oral Administration of Cistanche ekstrakt deserticole, Journal of Food Science, 2015, 80, H2079-2087.

[9] Almasi A., Dargahi A., Mohamadi M., Biglari H., Amirian F., Raei M., Uklanjanje penicilina G kombinacijom sonolize i fotokatalitičkog (sono-fotokatalitičkog) procesa iz vodene otopine: optimizacija procesa koristeći RSM (Response Surface Methodology), Electron Physician, 2016, 8,

[10] 2878-2887. Hou W., Zhang W., Chen G., Luo Y., Optimizacija uvjeta ekstrakcije za maksimalnu fenolnu, flavonoidnu i antioksidativnu aktivnost iz lišća Melaleuca bract data koristeći metodologiju površine odgovora, PloS One, 2016., 11,

[11] e0162139. Pooralhossini J., Ghaedi M., Zanjanchi MA, Asfaram A., Izbor ekstrakcije potpomognute ultrazvukom u kombinaciji sa spektrofotometrijom za brzo određivanje galne kiseline u uzorcima vode: Središnji kompozitni dizajn za optimizaciju procesnih varijabli, Ultrasonics Sonochemistry, 2017., 34 , 692- 699.

[12] Han L., Boakye-Yiadom M., Liu E., Zhang Y., Li W., Song X., Fu F., Gao X., Strukturalna karakterizacija i identifikacija feniletanoidnih glikozida izCistanches deserticola YC Maprema UHPLC/ESI-QTOF-MS/MS, fitokemijska analiza, 2012., 23, 668-676.

[13] Lu D., Zhang J., Yang Z., Liu H., Li S., Wu B., Ma Z., Kvantitativna analiza Cistanches Herba pomoću tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti u kombinaciji s detekcijom niza dioda i visoko- masena spektrometrija rezolucije u kombinaciji s kemometrijskim metodama. Journal of Separation Science, 2013., 36, 1945-1952.

[14] Li WL, Chen Q., Yang B., Gao S., Zhang JJ, Pregled fitoestrogenih učinkovitih ekstrakata i dozeCistanche deserticola, Kineski biljni lijekovi, 2013., 5, 292-296.

[15] Li YP, Huang FR, Dong J., Xiao C., Xian RY, Ma ZG, Zhao J., Rapid Identification of Cistanche via Fluorescence Spectrum Imaging Technology Combined with Principal Components Analysis and Fisher Distinction, Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi, 2015., 35, 689-694.