Feniletanoidni oligoglikozidi i acilirani oligosećeri s vazorelaksantnim djelovanjem iz Cistanche Tubulosa
Mar 15, 2022
za više informacija:ali.ma@wecistanche.com
Masayuki Yoshikawa i sur
Sažetak
Metanolni ekstrakt iz osušenih stabljikaCistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight pokazao je inhibitorni učinak na kontrakcije inducirane noradrenalinom u izoliranim trakama aorte štakora. Iz ekstrakta su izolirani novi feniletanoidni aminoglikozidni sastojci, kankanozidi F i G, te acilirani oligo šećer, kankanoza, zajedno s 14 poznatih spojeva. Strukture ovih novih spojeva određene su na temelju njihovih kemijskih i fizikalno-kemijskih dokaza. Osim toga, glavni sastojci, kankanozid F, kankanoza, ehinakozid, akteozid i cistanozid F, pokazali su vazorelaksantnu aktivnost, a razjašnjeno je nekoliko strukturnih zahtjeva za aktivnost. 2006 Elsevier Ltd. Sva prava pridržana.
Kliknite za Cistanche efekt proizvode
Uvod
parazitska biljka Orobanchaceae,Cistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight, široko je rasprostranjen u Sjevernoj Africi, Arabiji i azijskim zemljama, a stabljikeCistanche tubulosa, kao i C. salsa i C. deserticola, tradicionalno se koriste kao sredstvo za poticanje cirkulacije krvi i liječenje impotencije, steriliteta, lumbaga, tjelesne slabosti i tonika.2,3 Tijekom naših studija karakterizacije bioaktivnih sastojaka iz kineskog prirodnog lijekovi, 1,4-14 izvijestili smo o izolaciji i razjašnjavanju strukture pet iridoida, kankanozida A–D i kankanola, te monoterpeneglikozida, kankanozida E, zajedno sa 16 poznatih spojeva iz stabljikaCistanche tubulosa1 Kao nastavak studije o ovom biljnom lijeku, otkriveno je da metanolni ekstrakt pokazuje inhibicijski učinak na kontrakcije inducirane noradrenalinom u izoliranim trakicama torakalne aorte štakora. Iz ovog metanolnog ekstrakta dodatno smo izolirali feniletanoidne oligo glikozide, kankanozide F (1) i G (2), i anacilirani oligo šećer, kankanozu (3) i 14 poznatih spojeva, ehinakozid (4), akteozid (5), izoakteozid (6). ),20-acetilakteozid (7), tubulozide A (8) i B (9), cistanozid F (10), salidrozid (11), (2R,3R)-butan-2,{{18 }}diol 2-ObD-glukopiranozid,Meso-butan-2,3-diol2-ObD-glukopiranozid, etil bD-glukopiranozid,3-metil butanol bD-glukopiranozid, ( plus )-pinorezinol40-ObD -glukopiranozid, i (plus)-siringarezinol 40-ObD-glukopiranozid. Ovaj se rad bavi razjašnjavanjem strukture novih spojeva (1-3), kao i vazorelaksirajućim učincima glavnih sastojaka (1, 3-6, 10 i 11) na kontrakcije izazvane noradrenalinom u izoliranim trakama aorte štakora na temelju tradicionalne primjene za cirkulaciju krvi (slika 1).
Rezultati i rasprava
2.1. Vazorelaksirajući učinak metanolnog ekstrakta iz stabljikaCistanche tubulosao kontrakciji izazvanoj noradrenalinom u izoliranoj torakalnoj aorti štakora
Kao što je prikazano u tablici 1, metanolni ekstrakt iz stabljikaCistanche tubulosa(kupljeno u Urumqiju, pokrajina Xinjiang, Kina) pokazuje vazorelaksantnu aktivnost na kontrakcije izazvane noradrenalinom u izoliranim trakama aorte štakora, ovisno o vremenu i koncentraciji (30–3{{10}} 0 lg/mL). Metanolni ekstrakt dalje je pročišćen kromatografijom na stupcu normalne i reverzne faze i konačno HPLC-om da se dobije 1 (0.016 posto), 2(0.{{31} }25 posto ), 3 (0.020 posto ), 4 (3.09 posto ),3 5 ({{64} }.68 posto ),3 6(0.096 posto ),3 7 (0.017 posto ),3 8 (0,052 posto ),3 9 (0,0036 posto ),3 10(0,025 posto ),15 11 (0,044 posto ),16 (2R,3R)-butan-2,{{44 }}diol2-ObD-glukopiranozid (0,0087 posto),17 mezo-butan-2,3-diol 2-ObD-glukopiranozid (0,0065 posto),17 etilb-D- glukopiranozid (0,055 posto),17 3-metilbutanol bD-glukopiranozid (0,0030 posto),17 (plus)-pinorezinol 40-ObD-glukopiranozid (0,016 posto),18 i (plus)-syringaresinol{{81} }ObD-glukopiranozid (0,022 posto ).15
2.2. Strukture kankanozida F (1) i G (2)
Kankanozid F (1) dobiven je kao bijeli prah s negativnom optičkom rotacijom (½a -28D -44.8- u MeOH). IR spektar 1 pokazao je apsorpcijske trake na 156{{69} }, 1508 i 1458 cm-1 koji se mogu pripisati aromatskom prstenu i jakim apsorpcijskim vrpcama na 3432, 1075 i 1044 cm-1, što ukazuje na strukturu aminoglikozida. U pozitivnim i FAB-MS s negativnim ionima od 1, pikovi kvazimolekularnih iona uočeni su pri m/z 647 (M plus Na) plus i 623 (MH), a FAB-MS analiza visoke razlučivosti otkrila je da je molekularna formula 1 C26H40O17. 1H i 13C NMR (CD3OD, tablica 2) spektri 1, koji su pripisani različitim NMR eksperimentima,19 pokazali su signale koji se mogu pripisati dva metilena [d 2,78 (2H, m, H2-7), 3,70, 4.{{ 39}} (1H svaki, oba m, H2-8)] i orto- i meta-spregnuti aromatski protoni tipa ABC [d 6,56 (1H, dd, J=1).9,7,9 Hz, H-6), 6,67 (1H, d, J=7.9 Hz, H-5), 6.69 (1H, d, J=1.9 Hz, H{ {64}})] zajedno s tri glukopiranozne skupine [d 4,30 (1H, d, J=8.0 Hz, H-10), 4,37 (1H, d, J=8. 0 Hz, H-1000), 5,16 (1H, br s, H-100)]. Struktura aminoglikozida u 1 karakterizirana je eksperimentom povezivanja heteronuklearnih višestrukih veza (HMBC), koji je pokazao dugotrajne korelacije između sljedećih parova protona i ugljika (H-10 i C-8; H-100 i C-30; H-1000 i C-60) kao što je prikazano na slici 2. Enzimska deacilacija ehinakozida (4), čija je apsolutna stereostruktura prethodno objavljena,3 s tanazom13,14 dala je 1. Na temelju gore navedenih dokaza, struktura kankanozida F utvrđena je kao 2-(3,4- dihidroksi fenil)etil OaL-ramnopiranozil(1-3)[bD-glukopiranozil(1-6)]-b-D-glukopiranozid (1).
Kankanozid G (2) također je dobiven kao bijeli prah s negativnom optičkom rotacijom (½a-26D-35.0-u MeOH). IR spektar 2 pokazao je apsorpcijske trake na 3432, 1709, 1638, 1518, 1447 i 1040 cm-1, što se može pripisati hidroksilnoj, konjugiranoj ester karbonilnoj i eterskoj funkciji i aromatskom prstenu. Molekularna formula, C29H36O14, 2 određena je iz FAB-MS s pozitivnim i negativnim ionima [m/z 631 (M plus Na) plus i 607(MH)-] i FAB-MS visoke rezolucije. Enzimska deacilacija 2 s tanazom dala je cistanozid G(12), čija je apsolutna stereostruktura ranije objavljena.16 Pri alkalnoj hidrolizi 2 s 10 postotnom vodenom otopinom kalijevog hidroksida (KOH)—50 postotnom vodenom otopinom 1,4-dioksana (1:1, v/v), kafeinska kiselina je identificirana HPLC analizom. 1H i 13C NMR (CD3OD, tablica 2) spektri19 od 2 ukazuju na prisutnost sljedećih funkcija: 4-hidroksifeniletil alkohol dio {dvametilena [d 2,82 (2H, m, H2-7), 3,70, 3,96 ( 1H svaki, oba m, H2-8)] i orto-spregnuti aromatski protoni tipa A2B2- [d 6,65, 7,03 (2H svaki, oba d, J=8).6 Hz,H{ {62}},5 i H-2,6)]} i dva glukopiranozna ostatka [d4.33 (1H, d, J=7.9 Hz, H-10), 5.19 (1H, br s, H-100)] zajedno s kafeoilnim ostatkom {trans-olefin [d 6.29, 7.56 (1H svaki, oba d, J=15).9 Hz, H{{84 }} i H-7)] i dihidroksibenzen tipa pirokatehola [d 6,78 (1H, d,J=8.3 Hz, H-5), 6,89 (1H, dd, J {{ 96}},9, 8,3 Hz, H-6), 7,04 (1H, d, J=1,9 Hz, H-2)]}. U eksperimentu HMBC na 2, uočena je korelacija dugog dometa između 60-protona [d 4,36 (1H, dd, J=6.1, 11,6 Hz),4,50 (dd, J {{ 119}}.8, 11.6 Hz)] i kafeoil karbonilkarbon (dC 169.1). Posljedično, utvrđeno je da je struktura kankanozida G 4-hidroksifenil-OaL-ramnopiranozil(1! 3)-(6-O-kafeoil)-bD-glukopiranozid (2).
2.3. Struktura kankanoze (3)
Kankanoza (3), ½a- 27D-35.3- (MeOH), također je dobivena kao bijeli prah. IR spektar 3 pokazao je apsorpcijske trake na 343{{30}}, 1702, 1639, 1611, 1458 i 1071 cm-1, koje se mogu pripisati hidroksilne, konjugirane esterske karbonilne i eterske funkcije i aromatski prsten. Pozitivni i negativni ionski FAB-MS od 3 pokazali su kvazimolekularne ionske vršne vrijednosti na m/z 673 (M plus Na) plus odnosno m/z 649 (MH). FAB-MS visoke rezolucije od 3 otkrio je da je molekularna formula C27H38O18. Alkalnom hidrolizom 3 s 10 posto KOH–50 posto vodene otopine 1,4-dioksana oslobođena je kavena kiselina, koja je identificirana HPLC analizom, zajedno s oligo šećerom. Kiselinska hidroliza ovog oligo šećera s 1,0 M klorovodične kiseline (HCl) oslobodila je L-ramnozu i D-glukozu, koje su identificirane HPLC analizom pomoću detektora optičke rotacije.1,13,14 Spektri 1H i 13CNMR (CD3OD, Tablica 3)19 od 3 pokazala je signale koji se mogu pripisati trisaharidnoj skupini {d [5,11 (d,J=3.4 Hz), 4.57 (d, J=7.9 Hz), a-i b-oblik mješavine H{ {52}} (oko 1:1)], 4.25, 4.27 (oba d, J=7.7 Hz, H-1000), 5.13, 5.18 (oba br s, H{{66 }})} zajedno s kafeoil grupom [d 6,28, 6,29 (oba d, J=15.9 Hz, H-9), 6.78 (d,J=8.0 Hz, H -5), 6,96 (dd, J=2.0, 8.0 Hz, H-6), 7.06 (d, J=2.0 Hz, H{{90} }), 7,60 (d, J=15.9 Hz, H-7)]. U HMBC eksperimentima na 3, uočene su dugotrajne korelacije između 40-protona [d 5,04, 4,99 (oba dd, J=9,5, 9,8 Hz)] i kafeoil karbonilnog ugljika (dC168,53 , 168,65). Na temelju gore navedenih dokaza, struktura kankanoze je razjašnjena u bea-L-ramnopiranozil(1-3)[bD-glukopiranozil(1-6)]-O-(4- O-kafeoil)-D-glukopiranoza (3).
2.4. Vazorelaksirajući učinak glavnih sastojaka (1, 3–6, 10, 11) izCistanche tubulosana kontrakciju izazvanu noradrenalinom i visokim K plus u izoliranoj torakalnoj aorti štakora
Kao što je prikazano u tablici 4 i na slici 3, inhibitorni učinci glavnih sastojaka, kankanozida F (1) i kankanoze (3), ehinakozida (4), akteozida (5), izoakteozida (6), cistanozida F (10) i salidrozida ( 11) ispitane su kontrakcije izazvane noradrenalinom u izoliranoj torakalnoj aorti štakora. Kao rezultat toga, spojevi 3-5 i 10 koji imaju kafeoilnu skupinu u 40-položaju značajno su inhibirali kontrakcije, ovisno o vremenu i/ili koncentraciji (10-100 lM), dok 6 ima 60- O-kafeoilni dio pokazao je slabiju aktivnost od spojeva 4 i 5. S druge strane, spoj 1 s kateholnim skupinama pokazao je značajnu inhibiciju, ali spoj 11 s fenolnom skupinom nije pokazao takav učinak. Ovi su nas rezultati doveli do pretpostavke da su 40-O-kafeoilni dio i 10-O-dihidroksifenetilni dio bitni za snažnu vazorelaksantnu aktivnost. S druge strane, spojevi 1, 3–6 i 10 (100 lM) nisu pokazali nikakve učinke na kontrakcije inducirane visokom koncentracijom kalijevog kationa (visoki K plus) različito od nifedipina, blokatora kalcijevih kanala ovisnog o naponu, u ista tkiva (podaci nisu prikazani). Ovo otkriće sugerira da ti aktivni sastojci inhibiraju kontrakcije putem kalcijevog kanala kojim upravljaju receptori, ali ne i putem kalcijevog kanala ovisnog o naponu. Nedavno su Iizuka i suradnici izvijestili da je feniletanoid, forzitiazid, iz ploda Forsythia suspensa inhibirao kontrakcije izazvane noradrenalinom u pripravcima aortalnog prstena štakora i sugerirali da je inhibicija kontrakcija induciranih noradrenalinom djelomično uzrokovana forzitiazidom priljev kalcija.20 Međutim, u ovoj studiji, opuštajući učinci aktivnih sastojaka uočeni su ca. 30 minuta nakon dodatka noradrenalina na drugačiji način od prazosina, antagonista a1-receptora adrenalina. Mehanizam djelovanja aktivnih sastojaka treba dodatno proučiti.
3. Eksperimentalni
3.1. Opći eksperimentalni postupak
Za dobivanje fizičkih podataka korišteni su sljedeći instrumenti: specifične rotacije, Horiba SEPA-300 digitalni polarimetar (l=5 cm); UV spektri, Shimadzu UV-1600spektrometar; IR spektri, Shimadzu FTIR-8100 spektrometar; 'H NMR spektri, JEOL JNM-LA500 (500 MHz) spektrometar; 13C NMR spektri, spektrometar JEOLJNM-LA500 (125 MHz) s tetrametilsilanom kao internim standardom; FABMS i HR-FAB MS, maseni spektrometar JEOL JMS-SX 102A; HPLC detektor, Shimadzu RID-6A indeks loma i SPD 10A UV-vis detektori. HPLC kolona, YMC-PackODS-A (250 · 4,6 mm id) i (250 · 20 mm id) kolone korištene su za analitičke, odnosno preparativne svrhe
Za kromatografiju su korišteni sljedeći eksperimentalni uvjeti: kromatografija na stupcu silika gela normalne faze, silika gel BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd, 150–350 mesh); kolonska kromatografija na silika gelu reverzne faze, Chromatorex ODS DM1020T (FujiSilesia Chemical, Ltd, 100-200 mesh); TLC, prethodno obložene TLC ploče sa silika gelom 60F254 (Merck, 0,25 mm) (normalna faza) i silika gel RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm) (reverzna faza); HPTLC reverzne faze, TLC ploče prethodno obložene silika gelom RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm); detekcija je postignuta prskanjem s 1 posto Ce(SO4)2–10 posto vodene otopine H2SO4, nakon čega je uslijedilo zagrijavanje.
Cistanche tubulosa
3.2. Biljni materijal
Osušene stabljikeCistanche tubulosakupljeni su u Urumqiju, provincija Xinjiang, Kina, u siječnju 2005. preko EishinTrading Co., Ltd, Osaka, Japan, kao što je prethodno opisano.1
3.3. Ekstrakcija i izolacija
Frakcije {{0}} (590 mg), 2-1 (466 mg), 2-3 (3931 mg), 3-3(3610 mg), 3-4 (190 mg), 4-5 [=ehinakozid (4, 2595 mg, 0,44 posto )], 4-6 (1635 mg), 5-2 (1114 mg), {{ 20}} (306 mg), 5-4(347 mg), 5-5 (=4, 1620 mg, 2,03 posto) i 5-6 (1453 mg) dobiveni su iz metanolni ekstrakt stabljikaCistanche tubulosakao što je prethodno objavljeno.1 Frakcija 1–2 (590 mg) je pročišćena pomoću HPLC [MeOH/H2O (35:65,v/v)] da se dobije 3-metilbutanol bD-glukopiranozid (18 mg , 0.0030 posto ), ( plus )-pinorezinol 40-ObD-glukopir anozid (96 mg, 0. 016 posto ), i ( plus )-syringaresinol 40-O bD-glukopiranozid (129 mg, 0.022 posto ) zajedno cistanoklorin (21 mg, {{ 76}}.{{80}}035 posto ). Frakcija 2-1 (466 mg) je odvojena pomoću HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)] da se dobije (2R,3R)-butan-2,{{40 }}diol 2-ObD-glukopiranozid(12 mg, {{1{{108}}4}}.0087 posto ), (2R, 3S)-butan-2,3-diol 2-ObD glukopiranozid (9 mg, 0.0065 posto ), i etil bD -gluko piranozid (76 mg, 0.{055 posto ) zajedno s uridinom (0.0069 posto ). Frakcija 2-2 (535 mg) je pročišćena pomoću HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)] da se dobije salidrozid (11, 41 mg, 0,022 posto) zajedno s antirhidom (15 mg, 0,0079 posto) i6-deoksikatalpol (214 mg, 0,11 posto). Frakcija 2-3(535 mg) je odvojena pomoću HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)] da se dobije 11 (17 mg, 0,022 posto) zajedno s gluro stranom (110 mg, 0,14 posto) i barciozid (164 mg, 0,21 posto). Frakcija 3-3 (510 mg) podvrgnuta je HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)] da se dobije akteozid (5, 257 mg, 0,31 posto), izoakteozid (6, 79 mg, 0,096 posto) i 20-acetilakteozid (7, 14 mg, 0,017 posto). Frakcija 3-4 (190 mg) dalje je pročišćena pomoću HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)] kako bi se dobio kankanozid G (2, 17 mg, 0,0029 posto) i tubulozid B (9, 21 mg, 0,0036 postotak). Frakcija 4-6 (75 mg) je pročišćena pomoću HPLC [MeOH/H20 (35:65, v/v)] da se dobije 5 (18 mg, 0,065 posto). Frakcija 5-2 (1114 mg) podvrgnuta je HPLC [MeOH/H2O (10:90, v/v)] da se dobije 2 (24 mg, 0,030 posto). Frakcija 5-3 (306 mg) je pročišćen pomoću HPLC [MeOH/H20 (15:85, v/v)] da se dobije kankanozid F (1,13 mg, 0,016 posto). Frakcija 5-4 (347 mg) podvrgnuta je HPLC [MeOH/H2O (10:90, v/v)] da se dobije kankanoza (3, 30 mg, 0,038 posto) i cistanozid F (10, 20 mg, 0,025 postotak). Frakcija 5-6 (530 mg) je pročišćena pomoću HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] da se dobije 4 (185 mg, 0,62 posto), 5 (91 mg, 0,30 posto) i tubulozid A (8, 16 mg, 0,052 posto).
3.3.1. Kankanosid F (1).
Bijeli prah, ½a{{0}}D -44.8- (c0,50, MeOH). Pozitivni ion visoke rezolucije FAB-MSm/z: izračunato za C26H40O17Na (M plus Na) plus, 647,2163. Nađeno: 647,2160. UV [MeOH, nm (log e)]: 224 (3,83), 283 (3,37). IR (KBr): 3432, 2940, 1560, 1508, 1458, 1075, 1044 cm{28}. 'H NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u tablici 2. 13C NMR podaci (125 MHz, CD3OD) dC: dano u tablici 2. FAB-MS pozitivnih iona m/z: 647 (M plus Na) plus. FAB-MS negativnih iona m/z: 623 (MH), 477 (M-C6H1104)-, 623 (M-C6H1105)-, 623 (M-C12H2109)-.
3.3.2. Kankanosid G (2).
Bijeli prah, ½a{{0}}D -35.0-(c 0,80, MeOH). Pozitivni ion visoke rezolucije FAB-MSm/z: izračunato za C29H36O14Na (M plus Na) plus, 631,2003. Pronađeno: 631,1996. UV [MeOH, nm (log e)]: 329 (4.10). IR (KBr): 3432, 2924, 1709, 1638, 1518, 1447, 1264, 1040 cm-1. 1H NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u tablici 2. 13C NMR podaci (125 MHz, CD3OD) dC: dano u tablici 2. Pozitivni ion FAB-MS m/z: 631 (M plus Na) plus negativni ion FAB-MS m/z: 607 (MH)-, 461 (M-C6Hn04).
3.3.3. Kankanose (3).
Bijeli prah, ½a{{0}}D -35.3- (c0,50, MeOH). Pozitivni ion visoke rezolucije FAB-MSm/z: izračunato za C27H38O18Na (M plus Na) plus, 673,1956. Nađeno: 673,1959. UV [MeOH, nm (log e)]: 219 (4,10), 247 (3,96), 333 (4,21). IR (KBr): 3430, 2962, 1702, 1639, 1611, 1458, 1264, 1071 cm{32}. 'H NMR (500 MHz, CD3OD) d: dano u tablici 3. 13C NMR podaci (125 MHz, CD3OD) dC: dano u tablici 3. FAB-MS pozitivnih iona m/z: 673 (M plus Na) plus. Negativni ion FABM-Sm/z: 649 (MH), 487 (M-C9H803)-, 325 (M-C15H1808)-.
Cistanche tubulosa
3.4. Enzimska deacilacija 2 i 4 s tanazom
Otopina 2 (4,8 mg, 0.008 mmol) u H2O (1.0 mL) tretirana je s tanazom (3,7 mg, iz Aspergillus oryzae , Wako Pure Chemical Ind., Ltd, Osaka, Japan) i otopina je miješana na 37 stupnjeva 24 sata. Nakon što je EtOH dodan u reakcijsku smjesu, otapalo je uklonjeno pod sniženim tlakom, a ostatak je pročišćen pomoću HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] da bi se dobio cistanozid G (12, 2,8 mg, 80 posto).16 Kroz sličnim postupkom, otopina 4 (9,2 mg, 0,012 mmol) u H20 (2,0 mL) tretirana je s tanazom (7,5 mg) i otopina je miješana na 37 stupnjeva 24 sata. Obrada reakcijske smjese kako je gore opisano dala je ostatak, koji je pročišćen pomoću HPLC [MeOH/H20 (15:85, v/v)] da se dobije 1 (4,7 mg, 62 posto).
3.5. Alkalna i kisela hidroliza 2 i 3
Otopina 2 i 3 (svaki 3,5 mg) u 50 postotnoj vodenoj otopini 1,4-dioksana (1.0 mL) tretirana je s 10 postotnom vodenom KOH (1.{{30}} mL) i sve je miješano na 37 C 1 h, redom. Uklanjanje otapala pod smanjenim tlakom dalo je reakcijsku smjesu, koja je podvrgnuta HPLC analizi [kolona: YMC-Pack ODS-A, 250 · 4,6 mm id; mobilna faza: MeOH/H20 (30:70, v/v); detekcija: UV (254 nm); brzina protoka: 1,0 mL/min] za identifikaciju kafeinske kiseline (tR: 13,1 min). Zatim je reakcijska smjesa iz 3 otopljena u 1 M HCl (2,0 mL) i zagrijavana pod refluksom 3 sata. Nakon hlađenja, reakcijska smjesa ekstrahirana je s EtOAc. Vodeni sloj je podvrgnut HPLC analizi pod sljedećim uvjetima: HPLC kolona, KaseisorbLC NH2-60-5, 250 · 4,6 mm id (Tokyo Kasei Co., Ltd, Tokyo, Japan); detekcija, optička rotacija [ShodexOR-2 (Showa Denko Co., Ltd, Tokio, Japan); pokretna faza, CH3CN/H20 (85:15, v/v); brzina protoka 0,8 mL/min]. Identifikacija L-ramnoze i D-glukoze prisutnih u vodenom sloju provedena je usporedbom njihovog vremena zadržavanja i optičke rotacije s onima autentičnih uzoraka, tR: 9,9 min (L-ramnoza, negativna optička rotacija) i 17,9 min (D-glukoza, pozitivna optička rotacija).
3.6. Vazorelaksacijska aktivnost
3.6.1. Priprema tkiva.
Muški štakori Sprague–Dawley težine 250–350 g žrtvovani su odsijecanjem obje karotidne arterije pod anestezijom, a torakalna aorta je izolirana i izrezana na spiralne trake (2–3 mm ·15–2{{25 }} mm). Fiziološka otopina soli sadržavala je NaCl (118,0 mM), KCl (4,7 mM), KH2PO4 (1,2 mM), MgSO4 (1,2 mM), CaCl2 (2,5 mM), NaHCO3 (25,0 mM) i D-glukozu (10,0 mM). Otopina je prozračena plinskom smjesom od 95 posto O2–5 posto CO2 i držana na 37 stupnjeva. Kako bi se ispitao mehanički odgovor, svaki je pripravak suspendiran u kupki organa (6 ml) i podvrgnut početnom opterećenju od oko 1 g. Prije početka pokusa dopušten je jedan sat razdoblja ekvilibracije. Kontrakcije su mjerene izometrijski putem pretvarača sile-pomaka (AD Instruments) i zabilježene na poligrafu.
3.6.2. Inhibicijski učinak na kontrakcije izazvane dl-noradrenalinom ili visokim K plus.
Nakon ekvilibracije, dl-nor-adrenalin (konačna koncentracija: 1 lM) ili 3 M KCl (0.1 mL, konačna koncentracija K plus: 54 mM) je dodan u kupku. Tkiva su isprana tri puta i ponovno uravnotežena nakon što je kontrakcija dosegla maksimalnu razinu. Održana kontrakcija ponovno je izazvana dodatkom dl-noradrenalina ili KCl, a zatim je ispitivani spoj primijenjen na 10-100 lM (noradrenalin) ili 100 lM (visoki K plus). Kontraktilni odgovor prije primjene ispitnog uzorka smatra se 100 postotnim. Kao referentni spojevi korišteni su prazosin hidroklorid i nifedipin.
3.6.3. Statistička analiza.
Vrijednosti su izražene kao srednje vrijednosti ± SEM. Za statističku analizu korištena je jednosmjerna analiza varijance praćena Dunnettovim testom za višestruku usporednu analizu. Vrijednosti vjerojatnosti (p) manje od 0.05 smatrane su značajnima.
Priznanja
Ovo istraživanje poduprlo je 21. COE Program, Academic Frontier Project i Grant-in-Aid for Scientific Research Ministarstva obrazovanja, kulture, sporta, znanosti i tehnologije Japana.
Literatura i bilješke
1. Ovaj rad je broj 19 u seriji 'Bioaktivni sastojci iz kineskih prirodnih lijekova.' Za rad broj 18, vidi Xie, H.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Nakamura, S.; Muraoka, O.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bik. 2006, 54, 669–675.
2. Namba, T. U Enciklopediji Wakan-Yaku (Traditional Sino-Japanese Medicines) sa slikama u boji; Hokuryusha: Osaka, 1994.; Vol II.
3. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Chem. Pharm. Bik. 1987, 35, 3309–3314.
4. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Tao, J.; Ueda, K.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bik. 2002., 50, 208–215.
5. Morikawa, T.; Matsuda, H.; Toguchida, I.; Ueda, K.; Yoshikawa, MJ Nat. proizvod 2002., 65, 1468–1474.
6. Tao, J.; Morikawa, T.; Toguchida, I.; Ando, S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Bioorg. Med. Chem. 2002, 10, 4005–4012.
7. Morikawa, T.; Tao, J.; Ando, S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. proizvod 2003, 66, 638–645.
8. Tao, J.; Morikawa, T.; Ando, S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bik. 2003, 51, 654–662.
9. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Xie, H.; Yoshikawa, M. Planta Med. 2004, 70, 847–855.
10. Sunce, B.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Tewtrakul, H.; Wu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, MJ Nat. proizvod 2004., 67, 1464–1469.
11. Morikawa, T.; Sunce, B.; Matsuda, H.; Wu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bik. 2004., 52, 1194–1199.
12. Xie, H.; Wang, T.; Matsuda, H.; Morikawa, T.; Yoshikawa, M.; Tani, T. Chem. Pharm. Bik. 2005., 53, 1416–1422.
13. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. proizvod 2006, 69, 881–886.
14. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Wang, T.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Bik. 2006, 54, 506–513.
15. Kobayashi, H.; Karasawa, H.; Miyase, T.; Fukushima, S. Chem. Pharm. Bik. 1985, 33, 1452–1457.
16. Karasawa, H.; Kobayashi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Fukushima, S. Yakugaku Zasshi 1986, 106, 721–724.
17. Kitajima, J.; Ishikawa, T.; Tanaka, Y. Chem. Pharm. Bik. 1998, 46, 1643–1646.
18. Chiba, M.; Hisada, S.; Nishibe, S.; Thieme, H. Fitokemija 1980, 19, 335–336.
19. 1H i 13C NMR spektri od 1–3 dodijeljeni su uz pomoć poboljšanja bez izobličenja polarizacijskim prijenosom (DEPT), korelacijske spektroskopije dvostrukog kvantnog filtera (DQF COSY) i heteronuklearne višestruke kvantne koherencije (HMQC), heteronuklearne višestruke povezanosti veza (HMBC) eksperimenti.
20. Iizuka, T.; Nagai, M. Yakugaku Zasshi 2005, 125, 219–224.
