Dio Ⅱ Identifikacija i validacija potpisa parova gena povezanih s imunološkim sustavom za tri urološka raka

Rezultati

1. Uspostava i evaluacija IRGPI-ja

Ukupno 2,700 pacijenata s tri urološka karcinoma, uključujući 835 pacijenata s rakom mokraćnog mjehura, 888 s rakom prostate i 977 s rakom bubrega, bilo je uključeno u ovu studiju. Kao što je prikazano na Dodatnoj slici 1, 1622 pacijenta u TCGA kohortama korišteno je kao skup podataka za metatrening. Još 1,078 pacijenata iz sedam GEO skupova podataka i dva ICGC skupa podataka sačinjavali su meta-validacijski skup podataka. Među 2483 IRG-a iz ImmPort baze podataka, 606 IRG-ova je izmjereno na svim platformama i zadovoljilo je kriterije (MAD > 0.5) na svim nezavisnim setovima za obuku. Na temelju 606 IRG-ova izgrađeno je 183.315 IRGP-ova. Nakon uklanjanja onih koji nisu podijeljeni među svim skupovima podataka ili sa stalnim redoslijedom u bilo kojem skupu podataka, 18.041 IRGP je ostavljen i odabran za daljnju analizu. Prvo je filtrirano 10.943 IRGP-a korištenjem univarijantnog Coxovog regresijskog modela u skupu podataka meta-treninga. Za daljnji pregled kandidata za IRGP, LASSO je proveden 30 puta kako bi se odabrali oni koji su se pojavili više od 15 puta od 30 analiza. Kao rezultat toga, odabrano je 25 IRGP i 41 jedinstveni IRG. Multivarijatni Coxov regresijski model zatim je korišten za dobivanje modela predviđanja temeljenog na IRGP-u i generiranja IRGPI rezultata za sve uzorke. Pacijenti u kohorti meta-treninga klasificirani su u skupine s niskim i visokim imunološkim rizikom pomoću medijana IRGPI (-1.216973). Postojale su značajno različite prognoze u pogledu RFS-a između skupina s niskim i visokim rizikom u kohorti za metatrening (Slika 1A, omjer rizika [HR] 6,078, 95-postotni interval pouzdanosti [CI] 4.754-7).769 ; P < 2×10-16). IRGPI također može podijeliti pacijente u podskupine sa značajno različitim RFS-om u skupini za obuku raka mokraćnog mjehura (Slika 1B, HR 2,308, 95 posto CI 1.660- 3.210; P=3×{{55} } ), rak prostate (Slika 1C, HR 3,054, 95 posto CI 1.778-5.245; P=2×10-5 ) i rak bubrega (Slika 1D, HR 5,582, 95 posto CI 3.899-7.992; P < 2×10-16). Vremenski ovisne ROC krivulje korištene su za procjenu sposobnosti IRGPI-a za predviđanje prognoze. Vrijednosti površine ispod krivulje (AUC) u predviđanju 1-, 3-, 5- i 10- godina RFS pacijenata bile su 0,816, 0,818, 0,828, odnosno 0,763, u kohorti meta-treninga (dodatna slika 2A). Kada su pacijenti stratificirani prema različitim stadijima tumora, spolu i dobnim skupinama, skupine s niskim i visokim IRGPI-om ostale su značajno različite za RFS, a viši IRGPI rezultat bio je povezan sa značajno lošijom prognozom (Slika 2). Pacijenti s visokim IRGPI i uznapredovalim stadijem tumora imali su najveći RFS među svim pacijentima u kohorti meta-treninga (dodatna slika 2B). Multivarijantne analize sugeriraju da je IRGPI neovisni prognostički faktor (HR 4,22, 95 posto CI 3.23- 5.52; P < 2×10-16) nakon prilagodbe za dob i stadij.

2. Validacija IRGPI-ja

Vanjske validacijske skupine korištene su kako bi se potvrdila sposobnost IRGPI-ja da predvidi RFS pacijenata s tri urološka karcinoma u različitim populacijama. Isti IRGP-ovi korišteni su za izračun IRGPI-a, a pacijenti su također klasificirani u skupine niskog i visokog rizika. RFS pacijenata u skupinama s niskim i visokim IRGPI značajno su se razlikovali u kohorti meta-validacije (Slika 3A, HR 3,326, 95 posto CI 2.623-4.217; P < 2×10-16), validacija skup podataka o raku mokraćnog mjehura (Slika 3B, HR 3,987, 95 posto CI 2.641-6.019; P=1×{{20}}), validacijski skup podataka raka prostate (Slika 3C, HR 3,277, 95 posto CI 2.275-4.719; P=2×10-11) i validacijski skup podataka o raku bubrega (Slika 3D, HR 2,523, 95 posto CI 1.529-4.165; P=2×10-4 ). Krivulje vrijeme-ROC pokazale su stabilne prediktivne sposobnosti, s {{40}}, 3-, 5- i 10-godišnjim AUC-ovima od 0.794, 0,764, 0,739, odnosno 0,605 (dodatna slika 2C). Slično tome, pacijenti s visokim IRGPI i uznapredovalim stadijem tumora imali su najveći RFS među pacijentima u kohorti meta-validacije (dodatna slika 2D). U skladu sa skupinama za obuku, IRGPI je uspio podijeliti pacijente u značajno različite skupine u smislu RFS-a u uglavnom neovisnim skupinama za validaciju (dodatna slika 3). Kada se razmatraju bolesnici s ranom ili kasnom bolešću, muški bolesnici i bolesnici stariji od 60 godina, IRGPI je ostao visoko prognostički, a viši IRGPI rezultat bio je povezan sa značajno lošijom prognozom (Slika 4). Nakon prilagodbe za dob i stadij u Coxovim regresijskim analizama, IRGPI je ostao neovisni prognostički faktor u meta-validacijskoj kohorti (HR 2,15, 95 posto CI 1.45-3.19; P=0.000149; ).

3. Funkcionalna analiza i infiltrirajući imunološki sadržaj povezan s IRGPI

41 jedinstveni IRG relevantan je za IRGPI u kohorti meta-treninga koji su uglavnom bili uključeni u imunološki i upalni odgovor, aktivnost citokina i kemotaksiju (Slika 5). Različiti imunološki infiltrati bili su obogaćeni u kohorti meta-treninga, a makrofagi M2, T-stanice CD8, T-stanice CD4 u mirovanju pamćenja, makrofagi M0 i makrofagi M1 pokazali su veću zastupljenost (Slika 6A). Među njima, postoci makrofaga M0, makrofaga M1 i makrofaga M2 bili su značajno različiti između IRGPI rizičnih skupina (Slika 6B). Nadalje, ti su rezultati potvrđeni u kohortama meta-validacije u kojima je obogaćeno istih pet imunoloških infiltrata s većim brojem imunoloških stanica (Slika 6C). Postoci makrofaga M1 i makrofaga M2 također su bili značajno različiti između IRGPI rizičnih skupina (Slika 6D).

4. Nomogram temeljen na IRGPI i kliničkim faktorima

Univarijatna Coxova regresijska analiza pokazala je da su dob, stadij i IRGPI rezultat značajni prediktori prognoze. Kako bismo uspostavili kvantitativni pristup za predviđanje RFS-a, izveli smo nomogram temeljen na prognostičkim čimbenicima (IRGPI, dob i stadij) u skupovima meta-treninga i meta-validacije (Slika 7A, 7B). Pouzdanost nomograma procijenjena je kalibracijskim dijagramom. Kao rezultat toga, linijski segmenti u kalibracijskim dijagramima bili su blizu crte od 45 stupnjeva, što ukazuje na izvrsno slaganje između predviđanja i opažanja u kohorti za metatrening (dodatna slika 4A–4D) i kohorti za meta-validaciju (dodatna slika 4E). –4H).

Kliknite ovdje za preuzimanjeCistanche suplementi

Rasprava

U ovoj studiji razvili smo potpis temeljen na 25 IRGP-ova za istovremeno predviđanje prognoze raka mokraćnog sustava, uključujući rak mokraćnog mjehura, prostate i bubrega. Potpis je pokazao snažnu sposobnost predviđanja RFS-a urinarnih karcinoma u skupinama za obuku i skupinama za višestruku validaciju. Naš potpis također može razlikovati različite RFS u definiranim skupinama pacijenata (npr. u ranoj fazi) u stratificiranim analizama. Konstruirani nomogram temeljen na IRGPI rezultatu i kliničkim prognostičkim čimbenicima mogao je kvantitativno predvidjeti stope RFS pacijenata s rakom mjehura, prostate i bubrega.

Bolesnici s rakom mokraćnog mjehura [36], prostate [37] i raka bubrega [38] imaju značajan rizik od recidiva, čak i nakon kirurške resekcije. Primjena raznih adjuvantnih terapija, osobito u bolesnika u ranom stadiju, ostaje sporna [39]. Hitno su potrebni pouzdani prognostički biomarkeri kako bi se identificirali pacijenti s većim rizikom od recidiva i odabrali pacijenti koji imaju odgovor na terapiju. Razvijeni su mnogi potpisi temeljeni na ekspresiji gena za predviđanje prognoze raka mokraćnog mjehura [40-42], prostate [43-45] i raka bubrega [46-48]. Međutim, zajednički nedostatak u tim studijama bile su tehničke pristranosti uzrokovane normalizacijom profila ekspresije izvedenih s različitih platformi korištenjem RNA-Seq ili mikronizova. Na temelju relativnog rangiranja ekspresije gena, potpis IRGP-a u ovoj studiji usredotočen je na usporedbe po parovima unutar profila ekspresije gena uzoraka. Potreba za normalizacijom podataka eliminirana je u najvećoj mjeri, a tehničke pristranosti između različitih platformi pri kombiniranju više profila ekspresije gena su izbjegnute. Nekoliko je istraživača identificiralo potpise IRGP-a povezane s prognozom pacijenata s rakom mokraćnog sustava; na primjer, Fu et al. pronašli su novi IRGP potpis koji je imao značajnu prognostičku vrijednost u predviđanju ukupnog preživljenja kod raka mokraćnog mjehura [49]. Istraživači u južnoj Kini također su razvili IRGP za predviđanje prognoze pacijenata s papilarnim karcinomom bubrežnih stanica [50]. Međutim, ove studije nisu imale dovoljnu potvrdu zbog relativno male veličine uzorka i mogle su predvidjeti samo prognozu jednog tumora. U ovoj smo studiji integrirali skupove podataka velikih razmjera s više platformi kako bismo identificirali potpis IRGP-a. Potpis je mogao istovremeno predvidjeti RFS triju glavnih uroloških tumora i bio je robustan nakon provjere. Stoga se naš potpis može ekspeditivno unaprijediti u kliničku upotrebu.

Standardizirani Cistanche

Tumorsko imunološko mikrookruženje povezano je s prognozom raka mokraćnog mjehura [22, 51], prostate [23, 52] i raka bubrega [24, 53]. U eri imunoterapije, prognostički biomarkeri relevantni za tumorsko imunološko mikrookruženje mogu otvoriti novi put za identificiranje novih prognostičkih biomarkera. U ovoj studiji, većina IRG-ova uključenih u naš imunološki potpis bili su citokini, antimikrobna sredstva i citokinski receptori, koji su usko povezani s imunološkim odgovorom i upalnim procesima. Analiza obogaćivanja također je pokazala da su IRG-ovi relevantni za imunološki potpis uglavnom uključeni u imunološki i upalni odgovor i aktivnost citokina. U glavnim tumorima mokraćnog sustava nađeno je pojačano upalno mikrookruženje. Ovo je otkriće bilo u skladu s prethodnim studijama koje su pokazale da su nastanak i progresija tumora povezani s povećanim upalnim mikrookruženjem [54, 55]. Različite imunološke stanice poput neutrofila i makrofaga uključene su u proces upalnog odgovora tumora. Makrofagi su povezani s lošom prognozom kod mnogih vrsta raka [56, 57]. U ovoj studiji otkrili smo da je razina infiltracije makrofaga M1 u imunološki visokorizičnoj skupini značajno povećana. Disregulirana imunološka struktura može rezultirati razlikama u preživljavanju među rizičnim skupinama prema definiciji IRGPI-ja. Važno je napomenuti da je razina infiltracije M1 makrofaga u visokorizičnim i niskorizičnim skupinama nedosljedna u istraživanjima [49, 50, 58-61]. Od ovih studija, dvije su u skladu s našim rezultatom [50, 58], tri navode da nema značajne razlike [59-61], a samo je jedno istraživanje u suprotnosti s našim [49]. Nedosljednosti u razini infiltracije M1 makrofaga mogu biti povezane s razlikama u ispitivanoj populaciji, odnosno uzorci koji generiraju ocjene rizika su različiti.

Treba napomenuti da je u ovoj studiji bilo ograničenja. Prvo, prognostički potpis 25 IRGP-ova temeljio se na retrospektivnoj studiji, iako je devet skupova podataka korišteno za rigoroznu provjeru valjanosti. Naši rezultati trebaju biti dodatno potvrđeni u prospektivnim kohortama s različitim atributima uzorka. Drugo, naš prognostički potpis također treba potvrditi kvantitativnom lančanom reakcijom polimeraze u stvarnom vremenu prije nego što se može klinički primijeniti. Treće, uklonili smo IRGP-ove s konstantnim vrijednostima kako bismo smanjili utjecaj skupnih učinaka između različitih platformi, ali skupni učinci se ne mogu eliminirati.

Cistanche prah

Zaključno, naših 25 potpisa IRGP-a obećavajući je i robustan prognostički biomarker za predviđanje RFS-a raka mokraćnog mjehura, prostate i bubrega, uključujući rak u ranom stadiju. Štoviše, ovaj je potpis bio povezan s infiltracijom podskupova imunoloških stanica i imunološkim odgovorom, ukazujući na povezanost između imunološkog mikrookruženja i tih karcinoma, te bi stoga mogao pomoći u formuliranju personalizirane strategije imunoterapije. Iako kliničku korisnost našeg potpisa treba potvrditi u prospektivnim studijama, naša je studija svejedno pružila ploču obećavajućih prognostičkih markera integracijom skupova podataka velikih razmjera.

Učinak ekstrakta Cistanche na poboljšanje mokraćnog sustava

Ekstrakt Cistanche potječe iz biljke Cistanche Deserticola, koja se tradicionalno koristi u kineskoj medicini zbog svojih zdravstvenih dobrobiti. Njegova učinkovitost u poboljšanju mokraćnog sustava jedno je od njegovih dobro poznatih svojstava.

Istraživanja su pokazala da ekstrakt Cistanche sadrži niz bioaktivnih spojeva koji imaju antioksidativno i protuupalno djelovanje. Ovi spojevi mogu pomoći u zaštiti od oksidativnog stresa, upala i oštećenja stanica u mokraćnom sustavu. To dovodi do poboljšane funkcije i smanjenog rizika od uroloških bolesti.

Jedno područje u kojem je ekstrakt Cistanche pokazao obećavajuće rezultate je poboljšanje simptoma povezanih s benignom hiperplazijom prostate (BPH). BPH je stanje u kojem se prostata povećava i komprimira mokraćnu cijev, uzrokujući urinarne simptome kao što su pojačana hitnost, učestalost, slab protok i nepotpuno pražnjenje mjehura.

Istraživanja pokazuju da ekstrakt Cistanche može ublažiti ove simptome smanjenjem veličine prostate. To postiže inhibicijom aktivnosti enzima pod nazivom 5-alfa-reduktaza, koji pretvara testosteron u dihidrotestosteron (DHT), hormon koji potiče rast prostate. Smanjenjem razine DHT-a, ekstrakt Cistanche sprječava daljnje povećanje prostate i poboljšava urinarne simptome.

Ekstrakt Cistanche također ima protuupalne učinke koji mogu koristiti drugim stanjima mokraćnog sustava, kao što su infekcije mokraćnog sustava (UTI) i intersticijski cistitis (IC). Oba stanja uzrokuju upalu stijenke mjehura, što dovodi do učestalog mokrenja, hitnosti, boli i nelagode. Smanjenjem upale, ekstrakt Cistanche može pružiti olakšanje od ovih simptoma.

Zaključno, sposobnost ekstrakta Cistanche da poboljša mokraćni sustav proizlazi iz njegovih protuupalnih i antioksidativnih svojstava. Iako su istraživanja još u ranoj fazi, dosadašnji dokazi upućuju na to da bi ekstrakt Cistanche mogao biti učinkovita opcija liječenja za liječenje stanja mokraćnog sustava kao što su BPH, UTI i IC. Unatoč tome, važno je napomenuti da pojedinci uvijek trebaju razgovarati o svim potencijalnim dodacima prehrani svojoj prehrani s kvalificiranim pružateljem zdravstvenih usluga kako bi bili sigurni da su sigurni i prikladni za njihove individualne potrebe.

Dobrobiti Cistanche

Reference

36. Wang X, Ding Y, Wang J, Wu Y. Identifikacija ključnih čimbenika povezanih s rakom mokraćnog mjehura pomoću lncRNA-miRNAmRNA troslojne mreže. Prednji Genet. 2020.; 10:1398.

37. Heidenreich A, Bastian PJ, Bellmunt J, Bolla M, Joniau S, van der Kwast T, Mason M, Matveev V, Wiegel T, Zattoni F, Mottet N i European Association of Urology. Smjernice EAU o raku prostate. Dio II: Liječenje uznapredovalog, relapsirajućeg i na kastraciju otpornog raka prostate. Eur Urol. 2014.; 65: 467-79.

38. Kelsey R. Rak bubrega: ccrcc1-4 klasifikacija za predviđanje relapsa. Nat Rev Urol. 2018.; 15:205.

39. Roberts ME, Aynardi JT, Chu CS. Leiomiosarkom maternice: pregled literature i najnovije informacije o mogućnostima liječenja. Gynecol Oncol. 2018.; 151: 562-72.

40. Shariat SF, Karakiewicz PI, Godoy G, Karam JA, Ashfaq R, Fradet Y, Isbarn H, Montorsi F, Jeldres C, Bastian PJ, Nielsen ME, Müller SC, Sagalowsky AI, Lotan Y. Survivin kao prognostički marker za urotelni karcinom mokraćnog mjehura: multicentrična vanjska validacijska studija. Clin Cancer Res. 2009.; 15:7012-9.

41. Mo Q, Nikolos F, Chen F, Tramel Z, Lee YC, Hayashi K, Xiao J, Shen J, Chan KS. Prognostička snaga genskog potpisa diferencijacije tumora za urotelne karcinome mokraćnog mjehura. J Natl Cancer Inst. 2018.; 110:448-59.

42. Sikic D, Eckstein M, Wirtz RM, Jarczyk J, Worst TS, Porubsky S, Keck B, Kunath F, Weyerer V, Breyer J, Otto W, Rinaldetti S, Bolenz C, et al. Ekspresija gena FOXA1 za definiranje molekularnih podtipova mišićno-invazivnog raka mokraćnog mjehura nakon radikalne cistektomije. J Clin Med. 2020.; 9:994.

43. Gerke JS, Orth MF, Tolkach Y, Romero-Pérez L, Wehweck FS, Stein S, Musa J, Knott MM, Hölting TL, Li J, Sannino G, Marchetto A, Ohmura S, et al. Integrativna klinička analiza transkriptoma otkriva TMPRSS2-ERG ovisnost o prognostičkim biomarkerima u adenokarcinomu prostate. Int J Rak. 2020.; 146: 2036-46.

44. Wu CL, Schroeder BE, Ma XJ, Cutie CJ, Wu S, Salunga R, Zhang Y, Kattan MW, Schnabel CA, Erlander MG, McDougal WS. Razvoj i validacija 32-genskog prognostičkog indeksa za progresiju raka prostate. Proc Natl Acad Sci USA. 2013.; 110:6121-6.

45. Zhao SG, Evans JR, Kothari V, Sun G, Larm A, Mondine V, Schaeffer EM, Ross AE, Klein EA, Den RB, Dicker AP, Karnes RJ, Erho N, et al. Krajolik prognostičkih izvanrednih gena kod visokorizičnog raka prostate. Clin Cancer Res. 2016.; 22:1777–86.

46. ​​Liang T, Sang S, Shao Q, Chen C, Deng Z, Wang T, Kang Q. Abnormalna ekspresija i prognostički značaj EPB41L1 u bubrežnom karcinomu svijetlih stanica na temelju rudarenja podataka. Cancer Cell Int. 2020.; 20:356.

47. Yang CA, Huang HY, Yen JC, Chang JG. Prognostička vrijednost profiliranja genskog puta povezanog s RNASEH2A-, CDK1- i CD151-za karcinom bubrega. Int J Mol Sci. 2018.; 19:1586.

48. Kim KM, Hussein UK, Bae JS, Park SH, Kwon KS, Ha SH, Park HS, Lee H, Chung MJ, Moon WS, Kang MJ, Jang KY. Obrasci ekspresije FAM83H i PANX2 povezani su s kraćim preživljavanjem pacijenata s karcinomom bubrežnih stanica svijetlih stanica. Prednja onkol. 2019.; 9:14.

49. Fu Y, Sun S, Bi J, Kong C, Yin L. Novi imuno-povezani prognostički potpis genskog para za predviđanje ukupnog preživljenja kod raka mokraćnog mjehura. BMC Rak. 2021.; 21:810.

50. Zhou X, Qiu S, Jin D, Jin K, Zheng X, Yang L, Wei Q. Razvoj i validacija individualiziranog imuno-povezanog genskog para prognostičkog potpisa u papilarnom karcinomu bubrežnih stanica. Prednji Genet. 2020.; 11:569884.

51. Wong YN, Joshi K, Khetrapal P, Ismail M, Reading JL, Sunderland MW, Georgiou A, Furness AJ, Ben Aissa A, Ghorani E, Oakes T, Uddin I, Tan WS, et al. Limfociti iz urina kao neinvazivna mjera imunološkog mikrookruženja tumora mokraćnog mjehura. J Exp Med. 2018.; 215: 2748-59.

52. Luo C, Chen J, Chen L. Istraživanje profila ekspresije gena i imunološkog mikrookruženja između skupina s visokim i niskim opterećenjem tumorskih mutacija kod raka prostate. Int. Immunopharmacol. 2020.; 86:106709.

53. Şenbabaoğlu Y, Gejman RS, Winer AG, Liu M, Van Allen EM, de Velasco G, Miao D, Ostrovnaya I, Drill E, Luna A, Weinhold N, Lee W, Manley BJ, et al. Pogreška na: Karakterizacija tumorskog imunološkog mikrookruženja u jasnostaničnom karcinomu bubrežnih stanica identificira prognostički i imunoterapijski relevantne potpise messenger RNA. Genome Biol. 2017.; 18:46 sati.

54. Greten FR, Grivennikov SI. Upala i rak: okidači, mehanizmi i posljedice. Imunitet. 2019.; 51:27-41.

55. Crusz SM, Balkwill FR. Upala i rak: napredak i novi uzročnici. Nat Rev Clin Oncol. 2015.; 12: 584–96.

56. Cassetta L, Pollard JW. Ciljanje na makrofage: terapijski pristupi liječenju raka. Nat Rev Drug Discov. 2018.; 17: 887-904.

57. Ngambenjawong C, Gustafson HH, Pun SH. Napredak u terapiji usmjerenoj na makrofage povezane s tumorom (TAM). Adv Drug Deliv Rev. 2017.; 114: 206–21.

58. Shi YR, Xiong K, Ye X, Yang P, Wu Z, Zu XB. Razvoj prognostičkog potpisa za rak mokraćnog mjehura na temelju gena povezanih s imunološkim sustavom. Ann Transl Med. 2020.; 8:1380.

59. Zheng X, Zhou X, Xu H, Jin D, Yang L, Shen B, Qiu S, Ai J, Wei Q. Novi imunološki genski potpis koji otkriva značajke mikrookruženja tumora i imunoterapijsku prognozu mišićno-invazivnog raka mokraćnog mjehura . Prednji Genet. 2021.; 12:764184.

60. Zhang LH, Li LQ, Zhan YH, Zhu ZW, Zhang XP. Identifikacija IRGP potpisa za predviđanje prognoze i imunoterapijske učinkovitosti kod raka mokraćnog mjehura. Front Mol Biosci. 2021.; 8:607090.

61. Tao Z, Zhang E, Li L, Zheng J, Zhao Y, Chen X. Model ujedinjenog rizika od 11 imunološki povezanih parova gena i kliničkog stadija za predviđanje ukupnog preživljenja u bolesnika s karcinomom bubrežnih stanica svijetlih stanica. Bioinženjeringom. 2021.; 12:4259-77.

Biao Xie 1, Kangjie Li 1, Hong Zhang 1, Guichuan Lai 1, Dapeng Li 2, Xiaoni Zhong1.

1. Odjel za biostatistiku, Škola javnog zdravstva i menadžmenta, Medicinsko sveučilište Chongqing, Chongqing, Kina

2. Institut za hepatologiju, Nacionalni klinički istraživački centar za infektivne bolesti, Shenzhen Third People's Hospital, Shenzhen, Kina