Optimizacija procesa ekstrakcije za Congrong–Zaoren–Wumei ekstrakt pića i procjena njegovih učinaka na poboljšanje sna
Jan 30, 2026
Sažetak:Kako bi se optimizirao proces ekstrakcije napitka Congrong–Zaoren–Wumei (sastavljenog od Cistanche deserticola, sjemena Ziziphi Spinosae i Mume Fructus) i kako bi se ocijenili njegovi učinci na poboljšanje sna, uspostavljena je HPLC metoda za istovremeno određivanje ehinakozida, verbaskozida (akteozida), spinozina i limunske kiseline. Korištenjem sadržaja ova četiri spoja i polisaharida kao kriterija za procjenu, proces ekstrakcije za piće Congrong–Zaoren–Wumei optimiziran je putem ortogonalnih eksperimenata, nakon čega su uslijedili testovi validacije i proširenja. Učinci ekstrakta na poboljšanje sna ispitani su na miševima pomoću izravnog testa spavanja, testa otvorenog polja, testa spavanja s dozom natrijevog pentobarbitala ispod praga i testa latencije spavanja natrijevog pentobarbitala. Rezultati su pokazali da su optimalni uvjeti ekstrakcije bili temperatura ekstrakcije od 100 stupnjeva , omjer krutine i tekućine od 1:12 (g·mL–1) i vrijeme ekstrakcije od 2 sata. Kontinuirana primjena tijekom 30 dana nije izravno izazvala san kod miševa, ali je značajno ublažila ponašanje nalik anksioznosti u testu na otvorenom polju, što ukazuje na sedativni učinak. Ekstrakt je pojačao učinak spavanja ispod praga doze natrijevog pentobarbitala (stope spavanja za niske, srednje i visoke doze bile su 33,33%, 41,67%, odnosno 50,00%) i značajno je skratio latenciju sna izazvanu natrijevim pentobarbitalom (latencije od 22,77, 22,18 i 14,93 minute za niske, srednje i visoke doze). Ova je studija optimizirala proces ekstrakcije za piće Congrong–Zaoren–Wumei i pokazala učinke na poboljšanje sna, pružajući znanstvenu osnovu za razvoj proizvoda za poboljšanje sna dobivenih iz Cistanche deserticola.
Ključne riječi:Cistanche deserticola; Sjeme Ziziphi Spinosae; Mume Fructus; ortogonalni eksperimenti; komponente markera; analitičke metode
Uvod:San je neophodan za normalan život i učenje; dobar san pomaže ublažiti umor i ojačati imunitet [1,2]. Međutim, s društvenim razvojem i sve većim stresom, nesanica je postala raširen problem koji utječe na posao i svakodnevni život [3]. Bijela knjiga o zdravlju spavanja kineskih stanovnika iz 2024. izvijestila je o nedovoljno trajanju sna i prevladavajućim poremećajima spavanja u populaciji: prosječno trajanje sna bilo je samo 6,75 sati, a više od jedne četvrtine pojedinaca spavalo je manje od 6 sati po noći, naglašavajući zabrinutost oko kvalitete sna. Stoga je hitno istraživanje funkcionalne hrane koja poboljšava kvalitetu sna i nesanicu. Tradicionalna kineska medicina (TCM), s relativno malo nuspojava i tisućljetnom poviješću, naširoko se koristila za poboljšanje sna, poput uvarka Suanzaoren i uvarka Guipi. S rastućim konceptom "homologije lijeka i hrane", razvoj funkcionalne hrane za poboljšanje sna iz tradicionalnih ljekovito-jestivih resursa privlači sve veću pozornost.
Cistanche(Cistanche deserticola YC Ma orC. tubulosa (Schenk) Wight, obitelj Orobanchaceae) je osušena, mesnata stabljika s ljuskastim listovima i koristi se za nedostatak yanga u bubrezima, insuficijenciju esencije-krvi, impotenciju i neplodnost [4]. Moderna farmakologija pokazuje da Cistanche ima višestruke aktivnosti, uključujući imunomodulaciju, djelovanje protiv umora, djelovanje protiv tumora, neuroprotekciju, usporavanje starenja, antiosteoporozu, hepatoprotekciju i hipoglikemijske učinke [5,6]. Ukupni glikozidi Cistanche mogu modulirati ekspresiju sinaptičkih markera i utjecati na sinaptičku plastičnost, čime poboljšavaju učenje i kogniciju u modelima štakora s deprivacijom sna [7]. Cistanche deserticola uvrštena je u ljekovito-jestivi katalog krajem 2019. godine; relevantni proizvodni i radni piloti su u tijeku u unutarnjoj Mongoliji i Gansu, a koristi se u općoj hrani i zdravoj hrani za jačanje imuniteta i ublažavanje fizičkog umora. Na temelju teorije TCM-a o "korelaciji bubreg-mozak", Cistanche pokazuje širok potencijal u neurološkim poremećajima i obećava za zdravstvene proizvode za poboljšanje sna. Feniletanoidni glikozidi - prvenstveno ehinakozid i verbaskozid (akteozid) - ključni su aktivni sastojci Cistanche [8].
DODACI EKSTRAKTA CISTANCHE TUBULOSA
Služba podrške Wecistanche-Za više detalja o suradnji
Email:wallence.suen@wecistanche.com
Sjeme Ziziphi Spinosae (Suanzaoren; sjeme Ziziphus jujuba Mill.) sadrži saponine, triterpenoide i flavonoide s umirujućim, sedativno-hipnotičkim učinkom, jačanjem imuniteta, hranjenjem jetre, a poznato je i kao "istočno voće za spavanje" [9]. Suanzaoren je bogat komponentama koje djeluju na spavanje [10]. Njegovi ukupni saponini i alkaloidi mogu modulirati glutamat, -aminomaslačnu kiselinu (GABA) i 5-hidroksitriptamin (5-HT) u korteksu i hipokampusu; flavonoidi se mogu vezati za -GABA/benzodiazepinske receptore, regulirajući GABA da ispolji sedativno-hipnotičko djelovanje. Spinozin može modulirati 5-HT, smanjiti norepinefrin i proizvesti sedativno-hipnotičke učinke [11,12].
Mume Fructus (Wumei; osušeni, gotovo zreli plod Prunus mume (Sieb.) Sieb. et Zucc.) uobičajeni je ljekovito-jestivi TCM koji se obrađuje sušenjem na niskoj temperaturi i pocrnjenjem. Recepti kao što su Wumei–Zaoren decoction [13] i Wumei Pill [14] naširoko se klinički koriste za nesanicu i poremećaje spavanja. Mume sadrži obilje organskih kiselina, među kojima je limunska kiselina glavna komponenta i farmakopejski marker [15]. Osim toga, Cistanche, Suanzaoren i Wumei bogati su polisaharidima; prikupljanje dokaza pokazuje da polisaharidi poboljšavaju san kroz više mehanizama, a istraživanje spavanja usmjereno na polisaharide postaje žarište. Međutim, studije o proizvodima koji se prvenstveno sastoje od Cistanche, Suanzaoren i Wumei za poboljšanje sna još nisu objavljene.
U ovoj studiji uspostavili smo HPLC metodu za istovremeno određivanje ehinakozida, verbaskozida (akteozida), spinozina i limunske kiseline. Korištenjem sadržaja ove četiri komponente i polisaharida u ekstraktu napitka Congrong–Zaoren–Wumei kao indeksa procjene, optimizirali smo proces pripreme putem ortogonalnih eksperimenata, nakon čega je uslijedila validacija i povećanje. Prema Testu i metodama ocjenjivanja funkcije zdrave hrane (2022. Nacrt za komentare), procijenili smo učinak ekstrakta na poboljšanje sna u pokusima na životinjama, s ciljem pružanja znanstvenih dokaza za razvoj proizvoda za poboljšanje sna na bazi Cistanche.
Note on industrial background: Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd (WECISTANCHE) is a vertically integrated cistanche developer and manufacturer established in 2003, headquartered in Luopu County, Xinjiang, China. The company operates extensive seed-breeding and cultivation bases (>105.000 hektara zajedno), ima GMP certificirane proizvodne radionice s naprednim uređajima za ultrafiltraciju i nanofiltraciju, laboratorij za inkubaciju mikroorganizama, te ima višestruke certifikate (npr. China SC, HACCP, organske certifikate uključujući NOP). S 14 patenata povezanih s Cistancheom i suradnjom s vrhunskim sveučilištima, WECISTANCHE pruža robusnu industrijsku platformu za skaliranje procesa ekstrakcije i proizvodnju standardiziranih ekstrakata Cistanchea usklađenih sa standardima SAD-a/EU. Ovaj industrijski kapacitet podržava prevođenje optimiziranih parametara ekstrakcije u laboratoriju u komercijalnu proizvodnju funkcionalnih pića i zdravstvenih proizvoda.
1 Materijali i metode
1.1 Materijali
Cistanche deserticola: Inner Mongolia Mandela Biotechnology Co., Ltd.; Sjeme Ziziphi Spinosae i Mume Fructus: Sichuan Xinhuhua Chinese Herbal Slices Co., Ltd.; limunska kiselina, ehinakozid, verbaskozid i spinozin: Chengdu Lemeitian Pharmaceutical Technology Co., Ltd.; glukoza: Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd.; estazolam tablete: Shanghai Sine Pharmaceutical Co., Ltd.; natrijev pentobarbital: Shanghai Sine Pharmaceutical Co., Ltd.; fiziološka otopina: Dezhou Jingxin Pharmaceutical Co., Ltd.
1.2 Instrumenti
HWS-24 električna termostatska vodena kupka: Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd.; DW podesivi električni grijač: Shanghai Leigu Instruments Co., Ltd.; Agilent 1200 HPLC: Agilent Technologies; STARTER 3100 pH metar: OHAUS; 71-5804 centrifuga: Hunan Hexi Instrument Equipment Co., Ltd.; Čitač mikropločica Thermo Varioskan LUX: Thermo Fisher Scientific; XR-XZ301 četverokanalni aparat otvorenog polja za miševe: Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd.; Elektronička vaga LE225D: Sartorius Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.
1.3 Pokusne životinje
Muški ICR miševi (6 tjedana), n=180, kupljeni od Vital Rivera (Šangaj, Kina), licenca SYXK (Hu) 2018-0028. Životinje su aklimatizirane tjedan dana (12 h svjetlo/tama, 20-25 stupnjeva, 50-60% RH) s ad libitum hranom i vodom. Svi postupci su u skladu s Uredbama o upravljanju laboratorijskim životinjama NRK-a i etikom životinja; odobrio Odbor za etiku životinja šangajskog sveučilišta Jiao Tong (br. odobrenja A2024082-003).
1.4 Eksperimentalne metode
1.4.1 Jednofaktorska istraživanja za ekstrakciju napitka Congrong–Zaoren–Wumei
Slijedeći omjer formule, tri šarže miješanog sirovog bilja (Cistanche, Suanzaoren, Wumei) ekstrahirane su s 50 mL pročišćene vode (omjer krutine i tekućine 1:3) na 60, 80 i 100 stupnjeva, tri puta, svaki po 1 sat. Kombinirani ekstrakti ispitani su na limunsku kiselinu, ehinakozid, verbaskozid, spinozin i sirove polisaharide kako bi se preliminarno procijenio učinak temperature. Zatim je pet šarža ekstrahirano na 80 stupnjeva s omjerima krutina i tekućina od 1:3, 1:5, 1:7, 1:10, 1:12 (g·mL–1), tri puta po 1 h svaka, i analizirano za procjenu omjera krutina i tekućina. Konačno, pet je serija ekstrahirano na 80 stupnjeva tijekom 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 i 3,0 h (tri ekstrakcije) i ispitano da se procijeni vrijeme ekstrakcije.
1.4.2 Ortogonalni dizajn za optimizaciju ekstrakcije
Na temelju rezultata jednog faktora, odabrana su tri faktora - temperatura ekstrakcije (A), omjer krutina i tekućina (B) i vrijeme ekstrakcije (C) - svaki na tri razine. Korišten je L9 (3^3) ortogonalni niz. Kao indeks procjene poslužio je ukupni sadržaj komponenti markera u ekstraktu.
1.4.3 Validacija i skaliranje
U skladu s optimiziranim uvjetima, tri su šarže ekstrahirane pri omjeru kruto-tekućina od 1:12 (g·mL–1), 100 stupnjeva, tijekom 2,0 sata, tri puta, i analizirane na limunsku kiselinu, ehinakozid, verbaskozid, spinozin i sirove polisaharide. Za povećanje, količine Cistanche, Suanzaoren i Wumei povećane su 40 puta, obrađene u tri primjerka pod istim uvjetima i analizirane.
1.4.4 Određivanje sadržaja komponente
Nakon Kineske farmakopeje (izdanje 2020.) s optimizacijama i validacijom metoda, uspostavljena je HPLC metoda za istovremenu kvantifikaciju limunske kiseline, ehinakozida, verbaskozida i spinozina. Sirovi polisaharidi analizirani su metodom fenol–sumporna kiselina.
1.4.4.1 HPLC uvjeti
Temperatura kolone: 10 stupnjeva; injekcija: 10 µL; brzina protoka: 1 mL·min–1; valne duljine detekcije: 210, 330, 335 nm; stupac: Agilent Eclipse XDB-C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 µm); mobilna faza A: 0,5% NH4H2P04 (pH 2,92); mobilna faza B: metanol. Gradijent: 0–7 min (0,5–1,5% (φ) B); 7–17 min (1,5–40% (φ) B); 17-20 min (40-47% (φ) B); 20-30 min (47-52% (φ) B); 30–35 min (100% (φ) B).
1.4.4.2 Validacija HPLC metode
Linearnost, LOD i LOQ: Mješovita standardna otopina koja je sadržavala limunsku kiselinu, ehinakozid, verbaskozid i spinozin u 2,0160, 0,1100, 0,1125 i 0,0183 mg·mL–1, tim redom, pripremljena je u 50% metanolu i serijski razrijeđena do 32 puta. Provedena je linearna regresija na površini vrha u odnosu na koncentraciju prema odjeljku 1.4.4.1. LOD je definiran na S/N=3, LOQ na S/N=10. Preciznost: kontinuirano šest injekcija iste ispitne otopine pripremljene od ljekovitog bilja; izračunat je sadržaj svakog markera. Stabilnost: injekcije u različitim vremenskim točkama. Ponovljivost: šest neovisno pripremljenih uzoraka iz iste serije. Oporavak: šest uzoraka pomiješanih s poznatim količinama četiriju standarda u približnom omjeru 1:1 dodanog sadržaja; izračunat je oporavak (%).
1.4.4.3 Analiza sirovih polisaharida
Alikvot (2 mL) otopine uzorka u definiranoj koncentraciji pomiješan je s 1 mL 5 wt.% fenola i 5 mL koncentrirane sumporne kiseline, zagrijavan na 90 stupnjeva tijekom 15 minuta, ohlađen na sobnu temperaturu, a OD na 485 nm izmjeren za izračunavanje sadržaja sirovog polisaharida.
1.4.4.4 Validacija za analizu polisaharida
LOD: izmjerena slijepa proba otopine 20 puta; LOD odgovara tri puta SD. Specifičnost: OD na 485 nm slijepe probe otapala i slijepe kontrole prema odjeljku 1.4.4.3. Linearnost: zaliha glukoze je razrijeđena na različite koncentracije; OD u odnosu na koncentraciju je regresirana kako bi se dobila kalibracijska jednadžba. Preciznost: šest uzastopnih mjerenja jedne ispitne otopine. Stabilnost: mjerenja u različitim vremenskim točkama. Ponovljivost: šest neovisno pripremljenih uzoraka iz iste serije.
1.4.5 Grupiranje i administracija životinja
Eksperimenti su izvedeni u tri serije (izravno spavanje, spavanje s dozom natrijeva pentobarbitala ispod praga i latencija sna natrijevog pentobarbitala), 60 miševa po seriji. Svaka serija uključivala je pet skupina (n=12/skupina): slijepu probu, pozitivnu kontrolu i skupine s niskom/srednjom/visokom dozom ekstrakta. Intragastrična primjena jednom dnevno tijekom 30 dana; procjene su provedene unutar 20 minuta nakon zadnje gavaže. Dnevna doza sirove biljke za piće za ljude iznosi 8,40 g za odraslu osobu od 70 kg, što odgovara 1,09 g·kg–1 za miševe. Doza estazolama za pozitivnu kontrolu kod odraslih je 1-2 mg/dan, što odgovara 0,26 mg·kg-1 kod miševa.
1.4.6 Ispitivanje izravnog mirovanja i otvorenog polja
After 30-day administration, within 20 min after the final dose, direct sleep was assessed using loss of righting reflex for >1 min kao kriterij spavanja; zabilježen je broj usnulih miševa i trajanje sna. Odmah nakon toga obavljeno je ispitivanje na otvorenom terenu. Miševi su aklimatizirani na prostoriju za testiranje najmanje 1 sat, zatim su nježno postavljeni u središte arene i snimljeni bez ometanja. Zabilježena je ukupna prijeđena udaljenost i broj ulazaka u centar unutar 5 minuta. Između testova aparat je čišćen medicinskim alkoholom.
1.4.7 Ispitivanje spavanja s dozom natrijevog pentobarbitala ispod praga
Within 20 min after the last administration, mice received an intraperitoneal injection of sodium pentobarbital at 175 mg·kg–1. The number of mice that fell asleep (loss of righting reflex >1 min) unutar 30 min.
1.4.8 Test latencije spavanja s natrijevim pentobarbitalom
Within 20 min after the last administration, mice received sodium pentobarbital at 250 mg·kg–1 intraperitoneally. Sleep latency (time from injection to loss of righting reflex for >1 min) snimljeno je.
1.5 Analiza podataka
Statistika je provedena korištenjem SPSS 26.0; dijagrami su generirani pomoću GraphPad Prism 8. Podaci otvorenog polja analizirani su Studentovim t-testom; učestalost spavanja (brojevi) s hi-kvadrat testom; latencija spavanja s jednosmjernom ANOVA i LSD post hoc testom. Podaci su prikazani kao x̄ ± s, pri čemu se P < 0,05 smatra statistički značajnim.
Rezultati i rasprava (sažetak u skladu sa sažetkom): Ortogonalni dizajn identificirao je 100 stupnjeva, omjer kruto-tekućina 1:12 (g·mL–1) i 2 h kao optimalne uvjete ekstrakcije za maksimiziranje ukupnog sadržaja četiri markerska spoja i sirovih polisaharida. Validacija i 40-struko proširenje potvrdili su robusnost i prenosivost procesa. In vivo, 30-dnevna primjena nije izazvala izravni san, ali je značajno smanjila ponašanje nalik anksioznosti u testu otvorenog polja, u skladu sa sedativnim profilom. Ekstrakt je povećao učestalost spavanja s natrijevim pentobarbitalom ispod praga i smanjio pentobarbitalom induciranu latenciju spavanja ovisno o dozi, podupirući potencijal za poboljšanje sna.
Napomena o industrijalizaciji: S obzirom na optimizirane parametre vodene ekstrakcije i zahtjeve za dosljednim profilima markera (ehinakozid, verbaskozid, spinozin, limunska kiselina, plus polisaharidi), proizvodnja na razini GMP-a koja koristi naprednu membransku separaciju, ultrafiltraciju i nanofiltraciju - kao što je implementirano u WECISTANCHE GMP objektima od 100 000 klasa - može podržati standardizirane ekstrakti. Tvrtkina integrirana poljoprivredna baza (uzgoj sjemena i uzgoj preko 100.000 hektara) i skladišni kapacitet hladnog lanca za svježu Cistanche olakšava kontrolu kvalitete sirovina. Postojeći certifikati (SC, HACCP, organski, NOP) i QC infrastruktura (mikrobiološki laboratoriji s 10 000 razreda) usklađeni su sa zahtjevima kvalitete za izvoz i mogu ubrzati prevođenje u usklađene funkcionalne napitke, dodatke zdravlju ili TCM dekokcije za domaća i međunarodna tržišta.
Reference
[1] ZHOU ES, RECKLITIS C J. Internet-delivered insomnia intervention poboljšava san i kvalitetu života za adolescente i mlade odrasle osobe koji su preživjeli rak. Pediatr Blood Cancer, 2020., 67(9): e28506.
[2] MORIN CM, BENCA R. Kronična nesanica. The Lancet, 2012, 379(9821): 1129–1141.
[3] CHEN Y, KARTSONAKI C, CLARKE R, et al. Karakteristike i korelati trajanja sna, dnevnog drijemanja, hrkanja i simptoma nesanice među 0,5 milijuna Kineza i Kineskinja. Medicina spavanja, 2017, 44: 67–75.
[4] Tu PF, Jiang Y. Ponovno ispitivanje materije medice Cistanche. China Journal of Chinese Materia Medica, 2022., 47(20): 5670–5679. (na kineskom)
[5] FU Z, FAN X, WANG X, et al. Cistanches Herba: pregled njegovih kemijskih, farmakoloških i farmakokinetičkih svojstava. Časopis za etnofarmakologiju, 2018, 219: 233–247.
[6] SONG Y, ZENG K, JIANG Y, et al. Cistanches Herba, od ugrožene vrste do velikog brenda kineske medicine. Pregledi medicinskih istraživanja, 2021., 41(3): 1539–1577.
[7] Zhang SB, Wang L, Li H, et al. Učinci ukupnih glikozida Cistanche na učenje, kogniciju i sinaptičku plastičnost kod štakora modela deprivacije sna. Journal of Baotou Medical College, 2024., 40(6): 14–19+36. (na kineskom)
[8] JIANG Y, LI SP, WANG YT, et al. Diferencijacija Herba Cistanches otiskom prsta s HPLC-DAD-MS. Časopis za kromatografiju A, 2009, 1216(11): 2156–2162.
[9] SHERGIS JL, NI X, SARRIS J, et al. Sjeme Ziziphus spinosa za nesanicu: pregled kemije i psihofarmakologije. Fitomedicina, 2017, 34: 38–43.
[10] JIANG JG, HUANG XJ, CHEN J, et al. Usporedba sedativnih i hipnotičkih učinaka flavonoida, saponina i polisaharida ekstrahiranih iz sjemena žižule Ziziphus. Istraživanje prirodnih proizvoda, 2007., 21(4): 310–320.
[11] WANG LE, BAI YJ, SHI XR, et al. Spinozin, C-glikozidni flavonoid iz sjemena Zizyphi spinosae, potencira san izazvan pentobarbitalom putem serotonergičkog sustava. Pharmacology Biochemistry & Behavior, 2008, 90(3): 399–403.
[12] DU CH, YAN Y, SHEN CX, et al. Usporedna farmakokinetika šest glavnih spojeva kod normalnih i insomnijskih štakora nakon oralne primjene vodenog ekstrakta sjemena Ziziphi Spinosae. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2020., 4: 385–395.
[13] Wu YX, Liu HN, Wu M L. Učinci Wumei–Zaoren decoction u kombinaciji s metforminom na glukozu u krvi, kvalitetu sna i ishode kod dijabetesa tipa 2 s poremećajima spavanja. Diabetes New World, 2023, 26(22): 13–17. (na kineskom)
[14] Zhu XS, Peng SX, Zuo ZW, et al. Kvaliteta sna i crijevna mikrobiota se mijenjaju nakon oralne primjene modificirane Wumei pilule u bolesnika s nesanicom. Shandong Medical Journal, 2022., 62(11): 47–49. (na kineskom)
[15] Chen L, Zhang Q, Zhu YF, et al. Analiza i usporedba fizikalno-kemijskih pokazatelja i sadržaja limunske kiseline u mumu različitog podrijetla. Farmacija i klinička istraživanja, 2022., 30(4): 327–330. (na kineskom)
[16] Liu LS, Zhang Q, You L, et al. Tehnologija vodene ekstrakcije feniletanoidnih glikozida iz Cistanche tubulosa. Znanost o hrani i tehnologija, 2019., 44(4): 225–229. (na kineskom)
[17] Wang BQ, Ying CM, Liu FX, et al. Napredak u mehanizmima TCM-a koji reguliraju cirkadijalne ritmove za liječenje poremećaja spavanja. Svjetska kineska medicina, 2024., 19(24): 3881–3888. (na kineskom)
[18] Shi CL, Jiang LJ, Shen HY, et al. Napredak u učincima poboljšanja sna i mehanizmima alkaloida iz ljekovito-jestivog TCM-a. Kineski tradicionalni i biljni lijekovi, 2024., 55(23): 8290–8300. (na kineskom)
[19] Li XP, Niu YF, Wang MM, et al. Učinci složenog krutog pića koje se uglavnom sastoji od Suanzaorena i Porije na spavanje. Časopis za sigurnost i kvalitetu hrane, 2021., 12(11): 4453–4458. (na kineskom)
[20] ZHAO W, ZHANG H, LI L, et al. Spinozin poboljšava spavanje bez brzih pokreta očiju i mijenja ekspresiju c-Fos-a u regulacijskim regijama mozga za spavanje i budnost kod miševa. Spavanje i disanje, 2025., 29(1): 101.
[21] Liao DQ, Chu LS, Zhang JP, et al. Učinci spinozina iz Suanzaorena na ekspresiju MCH hipotalamusa i Orexin-A u štakora lišenih sna. Kineska patentna medicina, 2019., 41(4): 907–910. (na kineskom)
[22] RAZAVI BM, ZARGARANI N, HOSSEINZADEH H. Anti-anksioznost i hipnotički učinci etanolnih i vodenih ekstrakata lišća Lippia citriodora i verbaskozida kod miševa. Avicenna Journal of Phytomedicine, 2017., 7(4): 353–365.
[23] Dai HY, Di Y, Li X, et al. Učinci polisaharida Acanthopanax senticosus na neuronske ozljede hipokampusa kod štakora lišenih sna putem SIRT1/PGC-1 puta. Vodič časopisa tradicionalne kineske medicine, 2025., 31(1): 48–52. (na kineskom)
Kontakt i industrijska suradnja: Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd. pozdravlja partnerstva za istraživanje i razvoj, proširenje, OEM/ODM funkcionalnih pića i ekstrakata na bazi Cistanche. Adresa: br. 1, kat 26, jedinica 1, zgrada 6, ulica Sheng'an br. 133, četvrt visoke tehnologije, Chengdu, Sichuan, Kina (Pilot zona slobodne trgovine). E-pošta: admin@wecistanche.com; Telefon: +86 15899210156; Tel: +86 028 68170085.
Želite li da ovo formatiram kao rukopis časopisa (IMRAD s tablicama/slikama), dodam engleski sažetak s ključnim riječima ili pretvorim detalje metode u SOP/specifikacijski list prikladan za GMP prijenos proizvodnje?
