Višesmjerno djelovanje Bakuchiola protiv staničnih mehanizama starenja lica - Eksperimentalni dokazi za holistički pristup liječenju 1. dio

Sažetak

Cilj: Starenje kože je višefaktorski proces koji uključuje stvaranje reaktivnih kisikovih vrsta, uzastopnu upalu sa smanjenom vitabilnošću epidermalnih i dermalnih stanica, i rezultirajuće oštećenje izvanstaničnog matriksa. Učinkoviti dermo-kozmetički modaliteti tretmana trebali bi se u idealnom slučaju baviti ovim obilježjima u holističkom pristupu. Ovdje smo odredili odgovarajući profil aktivnosti bakuchiola, meroterpena biljnog porijekla, u nizu in vitro, ex vivo i in vivo studija i usporedili ga s retinolom, koji se trenutno smatra zlatnim standardom u lokalnoj kozmetici protiv starenja.

Glikozid cistanhe također može povećati aktivnost SOD-a u tkivima srca i jetre, te značajno smanjiti sadržaj lipofuscina i MDA u svakom tkivu, učinkovito čisteći različite reaktivne kisikove radikale (OH-, H₂O₂, itd.) i štiteći od oštećenja DNA uzrokovanog pomoću OH-radikala. Cistanche feniletanoidni glikozidi imaju jaku sposobnost hvatanja slobodnih radikala, veću reducirajuću sposobnost od vitamina C, poboljšavaju aktivnost SOD u suspenziji spermija, smanjuju sadržaj MDA i imaju određeni zaštitni učinak na funkciju membrane spermija. Cistanche polisaharidi mogu pojačati aktivnost SOD i GSH-Px u eritrocitima i plućnom tkivu eksperimentalno starih miševa uzrokovanu D-galaktozom, kao i smanjiti sadržaj MDA i kolagena u plućima i plazmi, te povećati sadržaj elastina, imaju dobar učinak čišćenja na DPPH, produžiti vrijeme hipoksije u starim miševima, poboljšati aktivnost SOD u serumu i odgoditi fiziološku degeneraciju pluća u eksperimentalno starim miševima Uz stančnu morfološke degeneraciju, pokusi su pokazali da Cistanche ima dobru antioksidacijsku sposobnost i ima potencijal da bude lijek za prevenciju i liječenje bolesti starenja kože. U isto vrijeme, ehinakozid u Cistancheu ima značajnu sposobnost hvatanja slobodnih radikala DPPH i može hvatati reaktivne vrste kisika, spriječiti degradaciju kolagena izazvanu slobodnim radikalima, a također ima dobar učinak popravka na oštećenje aniona slobodnih radikala timina.

Kliknite na Antioxidant Cistanche Tubulosa

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Metode: Antioksidativni kapacitet i snaga bakuchiola i retinola analizirani su mjerenjem redukcije 2,2'-difenil-1-pikrilhidrazila (DPPH) putem njegovog raspada apsorpcije i spektroskopije elektronske spinske rezonancije. Učinci na prostaglandin E2 (PGE2), faktor inhibicije migracije makrofaga (MIF), faktor rasta fibroblasta 7 (FGF7), kolagen tipa I i VII (COL1A1, COL7A1), razine fibronektina (FN) kao i metabolizam tetrazolija topljivog u vodi 1 (WST-1) određeni su u ljudskim dermalnim fibroblastima. Epidermalna regeneracija procijenjena je korištenjem in vitro modela zacjeljivanja rana. Razine FN proteina analizirane su ex vivo nakon tretmana s formulacijom koja sadrži bakuchiol, retinol ili vehikulum korištenjem tekućine za usisavanje mjehurića. Poboljšanje stanja kože utvrđeno je in vivo u usporednoj studiji podijeljenog lica nakon primjene bakuchiola ili nosača.

Rezultati: Za razliku od retinola, bakuchiol je pokazao visoku antioksidacijsku učinkovitost. Razine PGE2 i MIF značajno su smanjene i bakuchiolom i retinolom. Bakuchiol, ali ne i retinol, značajno je povećao razinu proteina FGF7. Razine metabolizacije WST-1 značajno su povećane bakuchiolom i retinolom. Primjena bakuchiola i retinola dovela je do značajnog povećanja razine proteina COL1A1, COL7A1 i FN. Rane kojima je dodat bakuchiol, ali ne i retinol, pokazale su značajno povećanje regeneracije epidermisa. Klinički, područja tretirana formulacijom koja sadrži bakuchiol pokazala su statistički značajno povećanje vrijednosti FN proteina nakon 4-tjedne primjene u usporedbi s netretiranim područjima i područjima tretiranim nosačem.

Zaključak: Ovi podaci pružaju dokaze za višesmjernu učinkovitost bakuchiola protiv staničnih obilježja starenja kože. Njegov profil aktivnosti dijeli neke zajedničke značajke s retinolom, ali pokazuje nekoliko do sada nepoznatih pozitivnih učinaka u našim studijama, naime stimulaciju kritične komponente izvanstaničnog matriksa FN i ubrzanu regeneraciju epiderme i zacjeljivanje rana.

KLJUČNE RIJEČI

protiv starenja, bakuchiol, potkrijepljenost tvrdnje in vivo/ex vivo/in vitro, retinol, fiziologija/strukture kože

UVOD

Staru kožu karakteriziraju bore, neujednačena pigmentacija, hrapavost kože i opuštenost. Ovi klinički znakovi rezultat su strukturnih i metaboličkih promjena uzrokovanih procesima unutarnjeg i vanjskog starenja. Intrinzično starenje pripisuje se čimbenicima uključujući skraćivanje telomera, kronične upale, pojedinačne mutacije mitohondrijske DNA i slobodne radikale [1]. Stara koža dodatno uključuje smanjenje svojih antioksidativnih sustava[2]. Također, stopa proliferacije stanica opada zbog procesa biološkog starenja koji dovodi do gubitka strukture i funkcije kože. Ekstrinzično starenje prvenstveno je potaknuto UV zračenjem i utjecajima okoliša. Ove uvrede rezultiraju oštećenjem kože koje pojačava kronološki pad i ubrzava starenje kože. Ljudska koža dalje gubi sposobnost da se nosi s upalnim stanjima tijekom starenja, što rezultira kroničnim proupalnim stanjem.

Lokalna primjena retinoida kao što su retinoična kiselina, retinal ili retinol smatra se kliničkim zlatnim standardom za učinkovito liječenje protiv starenja [3, 4]. Molekularni mehanizmi retinoida opsežno su opisani [5-10]. Lokalni retinoidi učinkovito smanjuju vidljive znakove starenja poput bora, opuštenosti ili hrapavosti [4, 11] i smanjuju depigmentaciju fotooštećene kože uključujući livedo reticularis i actinic lentigines [12]. Međutim, lokalno liječenje retinoidima može dovesti do suhoće i iritacije kože ovisno o koncentraciji [13]. Budući da primjena retinola uzrokuje manje nuspojave u usporedbi s drugim retinoidima poput retinoične kiseline [6, 14], on je široko korištena djelatna tvar u kozmetičkom tretmanu starenja lica.

Za razliku od retinola koji se u proizvodima za njegu kože primjenjuje od 1984. [15], bakuchiol je tek nedavno dobio pozornost kao topikalni spoj protiv starenja. Bakuchiol je meroterpen (Slika 1) koji se dobiva iz sjemena Psoralea corylifolia. Stoljećima se koristi u tradicionalnoj indijskoj i kineskoj medicini [16, 17] i dobro se podnosi [18]. Predloženo je da bakuchiol pokazuje funkcije slične retinolu, budući da u modelu nadomjestaka kože obje tvari pokazuju slične obrasce ekspresije gena in vitro [19] i poboljšanje fotooštećenja kože in vivo [20]. Stoga se također naziva funkcionalnim analogom retinoida biljnog podrijetla [21]. Daljnje studije pokazale su antioksidativne [19, 22-24], protuupalne [19, 25-27], antibakterijske [28] kao i antiproliferativne i antitumorske učinke [29, 30] bakuchiola.

Kako bi se učinkovito poboljšali i odgodili višefaktorski procesi starenja kože, potrebno je pozabaviti se različitim staničnim mehanizmima u integriranom pristupu. Bakuchiol istovremeno modulira različite mete što ga čini spojem koji obećava u tom pogledu. Budući da su oksidativni i upalni stresovi usko povezani sa starenjem kože, njihova prevencija bakuchiolom može poboljšati cjelokupno stanje kože. Međutim, kvaliteta trenutnih znanstvenih dokaza nedavno je kritički procijenjena [31]. U tom kontekstu, odredili smo (i) antioksidativne i (ii) protuupalne sposobnosti bakuchiola i retinola i ispitali njihovu sposobnost da poboljšaju stanični metabolizam i sintezu faktora rasta 7 sažeto kao (iii) aktivnost stanica. Nadalje smo analizirali utječu li bakuchiol i retinol na ekspresiju određenih (iv) komponenti ECM-a i poboljšavaju (v) epidermalnu regeneraciju i reepitelizaciju. Konačno, provedena je in vivo studija kako bi se potvrdio klinički kapacitet bakuchiola za usporavanje starenja u ljudskoj koži.

MATERIJALI I METODE

Ispitni materijali

Bakuchiol je nabavljen od Sytheon Ltd (Boonton, New Jersey, Sjedinjene Države). Retinol je kupljen od Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, Sjedinjene Američke Države). Za pokuse sa staničnom kulturom, obje ispitivane tvari su svježe razrijeđene u DMSO (Merck, Darmstadt, Njemačka). Za osnovne otopine DMSO-a, primijenjena koncentracija ispitivanih tvari bila je 1000-puta iznad najviše koncentracije primijenjene u staničnoj kulturi dajući 0.1 posto DMSO-a u mediju ili puferu. Daljnja razrjeđenja izvedena su korištenjem medija ili pufera s 0.1 posto DMSO. Stoga su svi eksperimenti sa staničnom kulturom provedeni u prisutnosti 0.1 posto DMSO. Za studije in vivo, lokalni retinol je formuliran u istom nosaču kao i bakuchiol.

Studije in vitro

Određivanje antioksidativnog kapaciteta

Bakuchiol, retinol (oba primijenjena u konačnoj koncentraciji od 100 μM) ili visokostandardni trolox (Merck, konačna koncentracija od 25 μM) razrijeđeni su u DMSO. Ukratko, 30 μL ovih spojeva (10-puta veća koncentracija od konačne koncentracije testa) dodano je u 96-jažicu s ravnim dnom. Nakon toga, 270 μL 39 ug/mL DPPH (Merck, razrijeđen u 1:1 smjesi voda/etanol) brzo je dodano u svaku jažicu dajući konačnu koncentraciju od 10 posto DMSO. Kao kontrola, DPPH otopina je inkubirana s DMSO bez ispitivanih tvari. Nadalje, slijepe kontrole su izvedene inkubiranjem bakuchiola ili retinola s vodom/etanolom (1:1) ili samo smjesom voda/etanol (1:1) koja sadrži 10 posto DMSO u odsutnosti DPPH. Nakon 10, 30 i 60 minuta, izmjerena je apsorbancija na 524 nm pomoću Spark multimode čitača mikropločica (Tecan, Männedorf, Švicarska). Signali praznih kontrola su oduzeti.

Određivanje antioksidativne moći

HDF-ovi su nasađeni u {{0}}pločice s jažicama s 150 000 stanica/jažici u 2 mL medija koji je sadržavao 10 posto telećeg seruma i inkubirani su 24 sata. Nakon toga, stari medij je odbačen, a stanice su tretirane medijem koji je sadržavao 2 posto telećeg seruma i bakuchiol ili retinol u konačnoj koncentraciji od 10 µM. Kontrolni HDF-ovi su dopunjeni s 0,1 posto DMSO bez bakuchiola ili retinola. Slijepe kontrole izvedene su inkubiranjem medija bez stanica. Nakon 24 sata, kondicionirani medij je prebačen u centrifugalne kolone Vivaspin koncentratora proteina (5000 MWCO; Sartorius, Göttingen, Njemačka) i koncentriran približno 10-puta. Volumeni svih srednjih supernatanta izjednačeni su ponovnim dodavanjem protoka. Razine FGF7 proteina u koncentriranom kondicioniranom mediju analizirane su korištenjem komercijalno dostupnog ELISA pribora prema uputama proizvođača (Bio-Techne GmbH). Mjerenja su provedena korištenjem Spark multimode čitača mikropločica (Tecan). Signali dobiveni iz slijepih kontrola su oduzeti i razine FGF7 proteina su normalizirane na ukupni broj stanica koji je određen korištenjem brojača stanica (Scepter, Merck).

Određivanje metabolizma WST-1

HDF-ovi su nasađeni u {{0}}ploče s jažicama s 3000 stanica/jažici u 100 μL medija koji sadrži 10 posto telećeg seruma i inkubirani su 24 sata. Osiromašeni medij je odbačen, a stanice su tretirane sa 100 μL medija koji je sadržavao retinol ili bakuchiol u konačnoj koncentraciji od 1 μM odnosno 10 μM. Kontrolni HDF-ovi su dopunjeni s 0,1 posto DMSO bez bakuchiola ili retinola. Kao daljnja kontrola, stanice su tretirane s 10 posto triton-X (Merck). Slijepe kontrole izvedene su inkubiranjem medija bez stanica. Nakon 72 sata, stanice su obojene komercijalno dostupnim reagensom za proliferaciju stanica WST-1 prema uputama proizvođača (Merck). Apsorbancija je mjerena na 450 i 620 nm pomoću Tecan infinity M200 čitača mikropločica (Tecan). Razlika u tim mjerenjima korištena je za analizu. Signali praznih kontrola su oduzeti.

Određivanje razine proteina COL1A1 i COL7A1

HDF-ovi su nasađeni u {{0}}pločice s jažicama s 10  000 stanica/jažici u 100 μL medija koji sadrži 10 posto telećeg seruma i inkubirani su 24 sata. Bakuchiol ili retinol razrijeđeni su u 100 μL medija bez telećeg seruma i dodani sadašnjem mediju u konačnoj koncentraciji od 1 μM odnosno 10 μM. Kontrola je dopunjena sa 100 μL medija bez seruma dajući koncentraciju od 0,1 posto DMSO koja odgovara tretmanu retinolom i bakuchiolom. Kao visoki standard primijenjeno je 10 ng/mL transformirajućeg faktora rasta (TGF-) i 11 ug/mL natrijevog askorbata (oba Merck). Slijepe kontrole izvedene su inkubiranjem medija bez stanica. Nakon 4 sata, razine proteina COL1A1 i COL7A1 u kondicioniranom mediju analizirane su korištenjem komercijalno dostupnih ELISA kompleta prema uputama proizvođača (Novus Biologicals, Littleton, Colorado, Sjedinjene Države). Mjerenja su provedena korištenjem Spark multimode čitača mikropločica (Tecan). Signali praznih kontrola su oduzeti. Razine proteina COL1A1 i COL7A1 normalizirane su na ukupnu količinu proteina u staničnom lizatu koja je određena korištenjem komercijalno dostupnog pribora za analizu bicinhoninske kiseline (Thermo Fisher Scientific) prema uputama proizvođača. Preduvjet za korištenje rezultata bila je pozitivna reakcija stanica na visoki standard TGF-a i natrijev askorbat.

Za analizu razina proteina COL7A1 nakon produljenog vremena inkubacije, HDF-ovi su nasađeni u 96-pločice s jažicom s 3000 stanica po jažici u 100 μL medija koji je sadržavao 10 posto telećeg seruma. Svi tretmani, kontrole i analiza provedeni su kao što je gore opisano s iznimkom da su bakuchiol i retinol korišteni samo u konačnoj koncentraciji od 10 µM. Stanice su sakupljene kada je postignuta subkonfluencija, posebno nakon 72 ili 96 sati.

Određivanje razine FN proteina

HDF-ovi su nasađeni u {{0}}ploče s jažicama s 10 000 stanica/jažici u 100 μL medija koji sadrži 10 posto telećeg seruma i inkubirani su 24 sata. Stari medij zamijenjen je medijem koji je sadržavao 2 posto telećeg seruma i bakuchiol ili retinol u konačnoj koncentraciji od 10 μM. Kontrola je dopunjena s 0,1 posto DMSO bez bakuchiola ili retinola. Slijepe kontrole izvedene su inkubiranjem medija bez stanica. Nakon 24 sata, razine FN proteina u kondicioniranom mediju analizirane su korištenjem komercijalno dostupnog kompleta ELISA prema uputama proizvođača (R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, Sjedinjene Države). Mjerenja su provedena korištenjem Spark multimode čitača mikropločica (Tecan). Signali praznih kontrola su oduzeti. Razine FN proteina normalizirane su na ukupnu količinu proteina u staničnom lizatu koja je određena kao što je gore navedeno.

Određivanje epidermalne regeneracije u in vitro modelu zacjeljivanja rana

Eksperimenti su provedeni kako je prethodno opisano [34]. Za liječenje modela zacjeljivanja rana, bakuchiol ili retinol razrijeđeni su u DPBS-u i dodani u konačnoj koncentraciji od 100μM u područje rane (5 μL po rani). Referentne rane su dopunjene istom količinom DPBS-a koji sadrži 0,1 posto DMSO-a bez bakuchiola ili retinola. Dodatne rane su ostavljene neobrađene kao daljnja kontrola. Modeli zacjeljivanja rana inkubirani su 43 sata na 95 posto vlažnosti, 5 posto CO2 i 37 stupnjeva. Nakon toga, uzorci su brzo zamrznuti u izopentanu prethodno ohlađenom tekućim dušikom i pohranjeni na -80 stupnjeva. Ponovna epitelizacija procijenjena je u sekcijama kriostata obojenim hematoksilinom i eozinom mjerenjem duljine regeneriranog epidermisa pomoću Leica DMLS mikroskopa (10x), Leica MC 170 HD CCD kamere i softvera Leica LAS V4.9 (Leica Microsystems, Wetzlar, Njemačka). Kvantifikacija je izvedena na slijepi način.

In vivo studije I i II

Za obje in vivo studije, preporuke trenutne verzije Helsinške deklaracije i smjernice Međunarodne konferencije o usklađivanju dobre kliničke prakse promatrane su kao primjenjive na kozmetičku studiju. Protokol studije I odobrilo je Nezavisno etičko povjerenstvo Freiburg (feki kod 08/2610). U obje studije svi su volonteri dali pisani, informirani pristanak. Ispitanici su imali zdravu kožu, pripadali su Fitzpatrick tipu kože I do III, a početak ili promjena hormonskih lijekova bili su kriterij isključenja.

Tijekom 10--dnevnog perioda predkondicioniranja i tijekom cijelog razdoblja studije, ispitanici su se morali suzdržati od izlaganja UV zračenju u ispitnim područjima. Aktivnosti koje potiču znojenje bile su zabranjene 24 sata prije planiranih procjena.

Istraživač je pokazao ispravnu primjenu formulacija koristeći količinu koja je odgovarala uobičajenom režimu njege kože subjekata.

Studija I: Ex vivo određivanje razine FN proteina

Od 52 ispitanice, koje su bile uključene u ovu studiju kontroliranu vozilom, 33 ispitanice su završile studiju, a podaci 31 ispitanice (30-64 godine, prosječna dob: 50,9 godina) uključeni su u analizu podataka. Do odustajanja je došlo zbog pandemije SARS-CoV-2 i osobnih razloga (13 ispitanika), kao i zbog reakcija nekompatibilnosti (pet ispitanika, uzrokovanih liječenjem retinolom). Reakcije nekompatibilnosti posredovane retinolom kao i problemi s uzorkovanjem uzrokovali su različit broj ispitanika testiranih za svako stanje (pogledajte rezultate za detalje).

Sedam dana prije planiranih procjena zabranjena je uporaba proizvoda za njegu kože, sredstava za čišćenje i sapuna na podlakticama. Prvog dana istraživanja uspostavljena su četiri ispitna područja na unutarnjoj strani podlaktica. Na dva testna područja primijenjene su dvije formulacije veruma koje sadrže {{0}}.5 posto bakuchiola odnosno 0,15 posto retinola. U mišljenju koje je objavio Znanstveni odbor za sigurnost potrošača 2016., primijenjena koncentracija retinola smatra se kozmetičkim tretmanom [35]. U druga dva ispitna područja korišteno je odgovarajuće vozilo ili je područje ostavljeno netretirano. Pozicioniranje mjesta tretmana je promijenjeno. Nakon 4 tjedna primjene ispitnih formulacija dva puta dnevno, volonteri su se vratili u institut za ispitivanje. U svakom testnom području stvorena su tri usisna mjehura (promjera 7 mm) kako je prethodno opisano [36, 37]. Ukratko, vakuumske blister čašice izrađene po narudžbi stavljene su na ispitna područja i primijenjen je vakuum od 550–850 mbara. Nakon otprilike 90-150 minuta, kada su se formirali mjehurići za usisavanje, vakuum je otpušten, a tekućina je aspirirana iz mjehurića pomoću 24-mjerne igle. Tekućine su odmah zamrznute na -80 stupnjeva na suhom ledu do analize. Razine FN proteina kvantificirane su u uzorcima tekućine iz usisnog mjehurića korištenjem komercijalno dostupnog kompleta ELISA (R&D Systems). Mjerenja su provedena korištenjem Spark multimode čitača mikropločica (Tecan). Razine FN normalizirane su na ukupne razine proteina u uzorcima tekućine iz usisnog mjehurića koji su određeni kao što je gore navedeno.

Studija II: In vivo određivanje poboljšanja stanja kože

Ukupno su 43 volonterke bile uključene u ovu usporednu studiju podijeljenog lica kontroliranu vozilom. Prema medicinskim procjenama ispitanici su imali mješoviti tip kože (suhu, normalnu, masnu i mješovitu kožu). 34 ispitanika (39–66 godina, prosječna dob: 56,2 godine) završila su studiju i bila su uključena u analizu. Ispadanje je uzrokovano tehničkim problemima i nepridržavanjem (osam ispitanika), kao i reakcijama nekompatibilnosti (jedan ispitanik, uzrokovan tretmanom nosačem i bakuchiolom).

Dva tjedna prije početka istraživanja i tijekom cijelog razdoblja istraživanja volonteri su se morali suzdržati od korištenja proizvoda za samotamnjenje ili intenzivnih kozmetičkih tretmana lica (npr. uklanjanje površnih slojeva kože). Tijekom 10--dnevnog razdoblja predkondicioniranja i tijekom studije, subjekti su zamoljeni da se suzdrže od izvođenja trajne šminke, tretmana trepavica i obrva, maski za oči i flastera. Tri dana prije prve procjene ispitanici su zamoljeni da se suzdrže od korištenja proizvoda za njegu lica. Večer prije planiranog ocjenjivanja ispitanici su bili dužni prestati s nanošenjem dekorativne kozmetike.

U prvih 7 dana 10-dnevne faze predkondicioniranja, ispitanici su primili posudicu s kremom koja je sadržavala kremu za ispitivanje (bez informacija o sadržaju) i nanosili su je dva puta dnevno na cijelo lice. Na početku, volonteri su izvršili samoocjenjivanje. Konkretno, vizualno su procjenjivali cjelokupni izgled kože lica promatrajući njezinu svježinu i blistavost te eventualne znakove starenja kože. Primijenjena je vizualna analogna ljestvica u rasponu od 1 (jako umoran, ostario) do 10 (vrlo svjež, bez znakova ostarjele kože). Zatim su subjekti primili dvije slijepe staklenke s kremom koje su sadržavale verum (nosač koji sadrži 0,5 posto bakuchiola) odnosno nosač, bez ikakve specifikacije sadržaja. Tijekom razdoblja istraživanja od 12 tjedana, jedna strana lica tretirana je dva puta dnevno verumom, dok je druga strana lica tretirana dva puta dnevno nosačem. Raspodjela tretmana na ispitna mjesta je promijenjena. Nakon 12 tjedana redovite upotrebe, volonteri su ponovno izvršili samoocjenjivanje kao što je gore navedeno.

Statistička analiza

Statističke analize provedene su pomoću programa Microsoft Excel za Office 365 (Microsoft Corporation, Redmond, Washington, Sjedinjene Američke Države), SAS softverskog paketa za Windows V9.4 (SAS Institute GmbH, Heidelberg, Njemačka) i GraphPad Prism V8 (GraphPad Software, San Diego , Kalifornija, Sjedinjene Države).

Normalna distribucija podataka procijenjena je Shapiro-Wilkovim testom. Ako je normalna distribucija potvrđena, provedena je ponovljena analiza varijance mjerenja (RM-ANOVA) s post hoc usporedbom po parovima. Ako je hipoteza o normalnosti odbačena, Blom-transformirani rangovi izvornih podataka procijenjeni su korištenjem RM-ANOVA s post-hoc usporedbom po parovima, ili su izvorni podaci procijenjeni korištenjem Wilcoxonovog testa rangiranja znakova. Svi statistički testovi bili su dvostrani na razini značajnosti alfa=0.05.

REZULTATI

Studije in vitro

Određivanje antioksidativnog djelovanja

Kako bismo analizirali (i) antioksidativne učinke bakuchiola i retinola, proveli smo dva različita testa koristeći DPPH kao detektorsku molekulu.

Antioksidativni kapacitet

Antioksidativni kapacitet određen je mjerenjem redukcije DPPH preko njegovog apsorpcijskog pada. Trolox visokog standarda pokazao je značajno povećan antioksidativni kapacitet u odnosu na kontrolu (p=0.0000 za sve naznačene vremenske točke) potvrđujući ispravno mjerenje (Slika 2a). Što se tiče kontrole, apsorbancija u uzorcima tretiranim bakuchiolom također je značajno smanjena u svim ispitivanim vremenskim točkama (10 min: p=0.0003, 30 i 60 min: p=0.0000 ) pokazujući povećani antioksidativni kapacitet. Nasuprot tome, retinol nije pokazao značajan antioksidativni kapacitet u usporedbi s kontrolom.

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】