Meta-analiza rezultata kvantifikacije NAD(P)(H) pokazuje varijabilnost među tkivima sisavaca
Jun 01, 2023
Nikotinamid adenin dinukleotid (NAD plus) igra važnu ulogu u energetskom metabolizmu i signalnim putovima koji kontroliraju ključne stanične funkcije. Thepovećan interes za NAD plus metabolizamiNAD plus -pojačane terapijeje pojačao potrebu za točnim NAD plus kvantificiranjem. Kako bismo ispitali objavljene mjere NAD(P)(H) u tkivima sisavaca, izveli smo ameta-analiza postojećih podataka. Pretraživanje baze podataka Ovid MEDLINE identificiralo je članke s rezultatima kvantifikacije NAD(P)(H) dobivenim iz tkiva sisavaca objavljenim između 1961. i 2021. Pregledali smo 4890 zapisa i izdvojili kvantitativne podatke, kao imetode kvantifikacije, predanalitički uvjeti i karakteristike ispitanika. Ekstrahirane fiziološke koncentracije NAD(P)(H) urazna tkivaiz miševa, štakora i ljudi, otkrio je važnu varijabilnost između i unutar metode koja se proširila na nedavne publikacije. Ovo naglašava relativno slab potencijal za međueksperimentalne analize za NAD(P)(H) kvantitativne podatke i važnost standardizacije za metode kvantifikacije NAD(P)(H) ipredanalitički postupciza buduće predkliničke ikliničke studije.
Kliknite ovdje da biste dobili Cistanche svojstva protiv oksidacije i proizvode protiv starenja
Nikotinamid adenin dinukleotid ima dvostruku ulogu kaoredukcija–oksidacija (redoks)koenzim, u svom oksidiranom (NAD(P) plus ) ireducirani (NAD(P)H) oblici, i kao ako-supstrat (NAD(P) plus ) za enzime uključene u deacilaciju1, mono- i poli-ADP-ribozilacija2,3 i stvaranje sekundarnih glasnika na bazi adenina4-7. Omjer NAD(P) plus /NAD(P)H važan je pokazatelj intracelularnog redoks stanja i igra ključnu ulogu u regulaciji ključnih metaboličkih putova8,9. Na primjer, NAD plus je bitan za glikolizu, zajedno s ciklusom trikarboksilne kiseline (TCA), kako bi se osigurali redukcijski ekvivalenti tijekom stvaranja adenozin trifosfata (ATP), glavnog izvora energije za stanicu8,9. Kada je NAD plus ograničen, također se može regenerirati iz NADH fermentacijom piruvata za proizvodnju laktata u stanicama sisavaca, čime se održava stanična redoks ravnoteža25. NAD plus i NADH također se mogu fosforilirati u NADP odnosno NADPH pomoću NAD plus kinaza (NADK)10,11. NADPH je neophodan za reduktivnu biosintezu, prijenos signala, stanične antioksidativne odgovore, a posebno redukciju glutationa12-14. U citosolu, NADP plus reducira se u NADPH glukoza-6-fosfat dehidrogenazom i 6-fosfoglukonat dehidrogenazom pentozofosfatnog puta (PPP), između ostalih reakcija13. Dok se u mitohondrijima proizvodnja NADPH održava različitim reakcijama, uključujući one koje se oslanjaju na aktivnost enzima nikotinamid nukleotidne transhidrogenaze (NNT) i izocitrat dehidrogenaze (IDH2)15. Kao rezultat toga, pokazalo se da status NAD(P)(H) utječe na staničnu signalizaciju i metabolizam, energetsku homeostazu, mitohondrijsku biogenezu, odgovore na oksidativni stres te održavanje i popravak DNA16-18. Nadalje, budući da je progresija bolesti povezanih sa starenjem, kao što je pretilost19, nealkoholna masna bolest jetre20,21, neurodegeneracija22, mitohondrijske23 i kardiovaskularne24 bolesti, te atrofija ili distrofija mišića25, povezana s promjenama u metabolitima povezanim s NAD plus, pristupi usmjereni na održavanje NAD plus homeostaze trenutno su pod istragom.
Osim uobičajenih redoks prijelaza, NADP plus može se potrošiti izmjenom njegove nikotinamidne skupine s nikotinskom kiselinom u reakciji kataliziranoj cADPR sintazama, kao što je CD38, kako bi se formirao drugi glasnik NAADP, koji je uključen u mobilizaciju kalcija, lučenje hormona i imunološke stanice proliferacija6,7,26. NAD plus se također može konzumirati kada djeluje kao ko-supstrat za stvaranje nikotinamida (NAM), koji se može koristiti kao supstrat za regeneraciju NAD plus putem puta spašavanja NAM-a. NAM se također može metilirati u 1-metil NAM (meNAM), koji se dalje može oksidirati u proizvode razgradnje N1-metil-2-piridon-5-karboksamid (2py) i N1-metil-4-piridon-3-karboksamid (4py). U konačnici, metilirani kataboliti mogu se ukloniti iz tijela putem urina27,28. Skupina NAD plus također se može smanjiti potrošnjom NADP plus putem reakcije bazne izmjene za stvaranje drugog glasnika NAADP14. Održavanje bazena NAD plus, stoga, zahtijeva biosintezu putem Preiss-Handlerovog puta (počevši od zajedničke molekule vitamina B3 niacina (NA; nikotinska kiselina)), de novo putanje biosinteze (počevši od aminokiseline triptofan (Trp)) ili regeneracija od pretvorbe NAM-a preko puta spašavanja u NMN zatim u NAD plus. Konačno, put spašavanja također je važan za biosintezu NAD plus iz nikotinamid ribozida (NR), alternativnog oblika vitamina B3 koji se nalazi u hrani, nakon njegove fosforilacije pomoću nikotinamid ribozid kinaze u NMN i zatim pretvorbe u NAD plus putem puta spašavanja. .
Razumijevanje dinamike NAD plus metaboloma stoga je postalo bitno i u konačnici zahtijeva rigoroznu kvantifikaciju metabolita kako bi se bolje razumjelo spajanje NAD plus metabolita tijekom normalne fiziologije, ili s progresijom bolesti ili zdravim starenjem. Jasna slika ovih promjena ključna je za povezivanje promjena u NAD plus metabolomu s nizvodnim enzimskim ili redoks reakcijama, koje drže ključ za promjene u fenotipovima tkiva. S obzirom na znatnu količinu prethodno prijavljenih kvantitativnih podataka o NAD plus metabolitima kod sisavaca, uključujući sve veći broj izvještaja kod ljudi, bitno je i pravovremeno sažeti te promjene tijekom zdravlja i bolesti. Brojne studije ispitivale su komponente NAD plus metaboloma kod glodavaca i ljudi u različitim metaboličkim stanjima, dobi i bolestima, ali se oslanjaju na različite metode za pripremu ili kvantificiranje uzoraka. Priprema uzorka važna je za metabolite uključene u redoks reakcije zbog moguće razgradnje i interkonverzija pod određenim uvjetima29,30. Smatra se da su za kvantifikaciju tekućinska kromatografija povezana s masenom spektrometrijom (LC-MS) i spektrometrijom magnetske rezonancije (MRS) osjetljive i specifične metode31-33, dok su testovi ciklusa enzima češći. Kvantitativne LC-MS metode zahtijevaju sveobuhvatno uključivanje kontrola kvalitete za pojedinačne metabolite koji se mjere i za ukupni učinak matrice uzoraka, učinak koji objašnjava različite masene spektrometrijske odgovore za određeni analit kada se mjere u različitim otopinama. Bez ovih kontrola, LC-MS je u najboljem slučaju polukvantitativna. U ovoj smo studiji identificirali značajnu varijabilnost u NAD(P)(H) mjerama u studijama na glodavcima i ljudima, naglašavajući potrebu za odgovarajućim metodama izvješćivanja i standardiziranom obradom uzoraka i analitičkim protokolima. Općenito, potrebni su usporedivi NAD(P)(H) skupovi podataka u svim studijama za smisleno tumačenje postojećih i budućih podataka u području NAD plus biologije.
Rezultati
Meta-analiza uobičajenih metoda kvantifikacije, zajedno s proučavanim vrstama, spolom i tkivima.
Povijesno gledano, rane metode korištene za kvantifikaciju NAD(P)(H) oslanjale su se na spektrofotometrijska ili fluorometrijska svojstva ovih metabolita34,35. U novije vrijeme, metode ciklusa enzima povezane sa spektrofotometrijskom ili fluorometrijskom detekcijom češće se koriste za razlikovanje razina NAD(P)(H) koenzima36-38. Rastuća potreba za visokom osjetljivošću i rezolucijom u kvantificiranju ovih koenzima, zajedno s potrebom za mjerenjem ostalih metabolita povezanih s NAD plus, dovela je do upotrebe tehnika tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti (HPLC) i LC-MS. Od ovih pristupa, LC-MS je postao preferirana metoda, budući da masena spektrometrija u kombinaciji s tekućinskom kromatografijom omogućuje specifičnu identifikaciju eluiranih spojeva uz dodatnu korist za uključivanje metabolita izotopa NAD(P)(H) kao unutarnje pojačane kvalitete kontrole. Unatoč svojim prednostima u odnosu na klasične spektrofotometrijske ili fluorometrijske testove, HPLC i LC-MS i dalje su skupi i dugotrajni, što objašnjava zašto testovi ciklusa enzima i dalje postoje u novijim studijama.
Koristeći sustavni pristup, od 241 prihvatljive studije (Dopunski materijal 2), 205 studija koje su uključivale kvantitativnu meta-analizu koncentracija NAD(P)(H) u tkivima miševa, štakora i ljudi odabrano je za daljnju analizu. Od tih studija, 46,7 posto koristilo je testove ciklusa enzima, od kojih je uključivalo kolorimetrijsku (40,9 posto) ili fluorometrijsku (5,8 posto) detekciju, dok je 17,8 posto koristilo HPLC metode (zajedno s UV ili fluorescentnim detektorima), a 13,2 posto koristilo je LC-MS testove ( Slika 1a). Većina studija nije uključivala detaljan opis postupaka ekstrakcije metabolita. Međutim, uobičajeno korišteni postupci ekstrakcije sastojali su se od ekstrakcijskih pufera sa ili bez tenzida (Triton®, Tris, dodecil trimetil amonijev bromid) ili polarnih organskih otapala kao što su acetonitril, metanol, etanol ili kloroform. Prethodne studije su pokazale da su inaktivacija enzima i optimalni pH i temperaturni uvjeti bili učinkoviti u očuvanju stabilnosti različitih NAD(P)(H) oblika30,39,40. Kada su otkriveni, uzorci su obrađeni u uvjetima niske temperature, au uključenim studijama nisu spomenuti redoks aditivi. Redoks reakcije bile su ograničene inaktivacijom enzima u uzorcima prije mjerenja NAD(P)(H) metabolita, obično taloženjem otapalima kao što su etanol, metanol, acetonitril ili perklorna kiselina (PCA). Međutim, upotreba PCA bila je rijetka zbog acido-labilne prirode reduciranih oblika (tj. NADH i NADPH), kao i zbog potrebe za dodatnim korakom neutralizacije. Među studijama koje su prijavile upotrebu PCA tijekom ekstrakcije metabolita (5,4 posto), 3,7 posto prijavilo je samo NAD(P) plus rezultate ili je koristilo drugu ne-kiselu metodu ekstrakcije za pravilno kvantificiranje NAD(P)H. Samo 1,7 posto studija prijavilo je NADH, ukupni NAD(H) i/ili NAD plus /NADH rezultate koristeći samo PCA ekstrakciju. Potencijalna pristranost ovih studija nije se mogla analizirati zbog ograničenih podataka.
Usporedbe srednjih fizioloških razina NAD(P)(H) u tkivima glodavaca i ljudi.
Kako bismo pomogli u identificiranju očekivanih srednjih fizioloških NAD(P)(H) razina za najčešće proučavana mišja, štakorska i ljudska tkiva, prikupili smo podatke iz svih kontrolnih i divljih kohorti iz svake od uključenih studija (Dopunski materijal 2 ). Konkretno, zabilježili smo srednje razine NAD(P)(H) normalizirane na težinu tkiva ili, u slučaju krvi, na volumen. Podaci iz studija koje su normalizirale razine metabolita na sadržaj proteina uključeni su u naš prikupljeni skup podataka (Dopunski materijal 2), ali nisu korišteni za daljnju analizu s obzirom na mali broj prijavljenih rezultata. Osim toga, kada je to bilo moguće, izračunali smo omjere NAD(P) plus /NAD(P)H, kao odraz redoks stanja, kao i ukupne razine NAD(P)(H) (NAD(P) plus plus NAD (P)(H)) koji su uobičajeni izlazi izvješća za NAD(P)(H) popravke. Izdvojeni podaci također su uključivali vrstu, sojeve, dob, spol, metodu kvantifikacije, prehranu i raspored hranjenja, vrstu uzorka, metodu prikupljanja uzorka i vrijeme žetve (prije ili post mortem).
Meta-analiza NAD(H) podataka identificirala je srednje fiziološke koncentracije za NAD plus i NADH u tkivima miša (Slika 2a,b, Dodatna slika 1a,b) i štakora (Dopunska slika 2a,b), od životinja mlađi od 14 mjeseci za miševe i 18 mjeseci za štakore. Ekstrahirani raspon fizioloških vrijednosti omjera NAD plus /NADH i ukupne razine NAD(H) (NAD plus plus NADH) nacrtani su za miševe (Slika 2c,d) i štakore (Dodatna slika 2c,d). Za razliku od studija na miševima, većina prijavljenih podataka o štakorima nije uključivala dob životinja; međutim, odlučili smo uključiti te podatke pod uvjetom da studija nije klasificirala njihove skupine kao starije. Od najistaknutijih proučenih tkiva, ova meta-analiza pokazuje da je srednja razina NAD plus za jetru (596 nmol/g, n=26) viša od svih drugih tkiva kod miševa, dok je iznenađujuće skeletni mišić (162,8 nmol /g, n=9) pokazuje jednu od najnižih srednjih vrijednosti po gramu tkiva (slika 2a). Ovi rezultati mogu ili značiti smanjenu učinkovitost ekstrakcije NAD plus metabolita, zbog visoko vlaknaste prirode mišića ili da postoje važne razlike u metabolizmu NAD plus mišića u usporedbi s drugim visoko metaboličkim tkivima, kao što su jetra i bubrezi.
Unatoč nekoliko kvantitativnih studija o starenju, razine NAD plus kod starih miševa bile su u prosjeku smanjene u jetri, mišićima i retinalnom pigmentiranom epitelu (RPE), u usporedbi s njihovim mladim kohortama i u usporedbi s prosjekom svih studija provedenih s mlađim miševima od 14 mjeseci starosti (dodatna slika 3). Meta-analiza NADH i omjera NAD plus/NADH u starijih životinja nije bila moguća s obzirom na to da je samo jedna od ovih kvantitativnih studija izvršila ta mjerenja.
Ovi podaci pokazuju nedostatak kvantitativnih NAD(H) podataka kod životinja koje stare.
Za podatke dobivene iz studija na zdravim ljudima, dobni rasponi uvelike su varirali među studijama (od 15 do 92,3 godine) i u većini slučajeva podaci nisu bili stratificirani po tim godinama. Najčešće mjerena ljudska tkiva uključivala su skeletne mišiće i komponente krvi, zbog njihove manje invazivne prirode prikupljanja (Slika 3a-d). Rezultati iz drugih ljudskih tkiva (n= 1–2) prikazani su na Dodatnoj slici 4. Ova je analiza pokazala medijan NAD plus koncentracije od 44,62 nmol/ml (n=23) u punoj krvi, sa sličnim Koncentracije NAD plus prijavljene za crvene krvne stanice na 46,96 nmol/ml (n=7) (Slika 3a; Dodatna tablica 1). Međutim, razine NAD plus u krvnoj plazmi bile su znatno niže s medijanom od 0.37 nmol/ml (n=8) (Slika 3a). Srednja razina NAD plus pronađena u skeletnim mišićima ljudi bila je 191,9 (n=4) nmol/g u mokrim mišićnim pripravcima naspram 1713 (n=3) nmol/g u zamrzavanjem osušenim pripravcima, niska temperatura proces dehidracije koji vjerojatno koncentrira metabolite (Sl. 3a). U tkivima koja su češće ispitivana za mjerenja NADH, srednje razine u ljudskim crvenim krvnim stanicama, plazmi i liofiliziranim skeletnim mišićima bile su 1,75 nmol/ml (n =7), 0,39 nmol/ml (n=8) odnosno 136,8 nmol/g (n=6) (slika 3b). Odgovarajući srednji omjeri NAD plus /NADH bili su 23,65 (n=8), 1,57 (n=7) i 12,7 (n=3) (Slika 3c). Zanimljivo je da je srednji omjer NAD plus /NADH za crvene krvne stanice (23,65) i liofilizirane skeletne mišiće (12,7) (Slika 3c) bio nekoliko puta veći od većine tkiva miševa i štakora (Slika 2c i Dodatna slika 2c) , što ukazuje na visoko oksidativno redoks stanje s obiljem dostupnog NAD plus u ovim ljudskim tkivima. U slučaju mišićnog tkiva, to bi moglo imati implikacije pri razmatranju translacijskog potencijala studija na glodavcima koje su identificirale dobrobiti povećanja razine NAD plus u mišićima. Međutim, povišeni omjer NAD plus /NADH u mišićima također može biti rezultat odgođenih postupaka zamrzavanja uzorka u kliničkom okruženju, što može dovesti do nefizioloških promjena u redoks statusu uzorka.
Sakupljene su fiziološke razine NADP(H) u tkivima glodavaca, pri čemu je najčešće mjerenje bilo u jetri. Mišja jetra pokazala je srednju vrijednost od 124,2 nmol/g NADP plus (n=13) i 140,2 nmol/g NADPH (n=4) (Slika 4a,b ), dok je jetra štakora pokazala medijan od 95,11 nmol/g NADP plus (n=10) i 240,7 nmol/g NADPH (n=9) (dodatna slika 5a,b). Medijan omjera NADP plus /NADPH, izveden iz studija koje su mjerila oba metabolita, bio je niži od 1 u većini tkiva miševa i štakora (Slika 4c, Dodatna slika 5c). Srednje ukupne razine NADP(H) (NADP plus plus NADPH) u jetri miša i štakora bile su 244,4 (n=3) (Slika 4d) i 342,1 (n=9) (Dopunska slika 5d) , odnosno. U ljudi su najčešća mjerenja NADP(H) provedena u crvenim krvnim stanicama pokazujući medijan od 33,2 nmol/ml za NADP plus (n=14) i 22,4 nmol/ml za NADPH (n{{30} }) iz studija bez podudaranja, s medijanom omjera NADP plus /NADPH od 1,27 i medijanom ukupnog NADP(H) od 52,0 nmol/ml iz studija koje su mjerila oba metabolita (n=11) (Slika 4e– h). Sve u svemu, količina dostupnih podataka za NADP(H) je rijetka za sve vrste što dovodi do nižeg pouzdanja u srednje vrijednosti za svako tkivo.
Analiza pristranosti i varijabilnosti u metodama kvantifikacije NAD(P)(H).
S obzirom na to da je većina studija uključenih u ovu meta-analizu ispitivala razine NAD plus u uzorcima jetre glodavaca (Slika 1c,e), upotrijebili smo fiziološke razine NAD plus u jetri miša i štakora kako bismo identificirali potencijalnu pristranost u rezultatima koja odgovara metodi kvantifikacije (sl. 5a,b). Prosječna dob miševa uključenih u ovu analizu bila je 17,9 tjedana (raspon: 2-55 tjedana), pri čemu 6 studija nije otkrilo dob životinja. Što se tiče štakora, većina studija nije otkrila dob životinja osim tri koje su bile u rasponu od 2 dana do 8 mjeseci. Niti jedna studija nije prijavila korištenje starih životinja. U mišjoj jetri, veliki raspon prijavljenih koncentracija za NAD plus kretao se od 1,8 do 1132 nmol/g jetre sa srednjom vrijednošću od 596.0 (n=26) (Slika 5a) , dok su koncentracije NADH bile u rasponu od 0.9 do 109 nmol/g tkiva sa srednjom vrijednošću od 66.43 (n=6) (dopunska slika 6a). Važno je da je koeficijent varijacije od 52,5 posto i 76,5 posto izračunat za srednje fiziološke rezultate NAD plus i NADH u mišjoj jetri, izmjereno višestrukim metodama kvantifikacije, pokazujući opseg varijabilnosti u studijama. Kao što je predviđeno iz ovih rezultata, srednji omjer NAD plus /NADH u mišjoj jetri (3,41 plus /− 3,16 SD, n=19) pokazao je jednako veliki raspon varijabilnosti s CV-om od 92,7 posto (dodatna slika 6c) . Slična varijabilnost u mjerama NAD plus i NADH također je primijećena u jetri štakora (CV=42.6 posto za NAD plus i CV=44.4 posto za NADH). Odgovarajuće koncentracije za NAD plus i NADH u jetri štakora bile su u rasponu od 159 do 796 (n=16) odnosno 65 do 265 (n=12) nmol/g (Slika 5b, Dodatna slika 6b ), dok su omjeri NAD plus /NADH pokazali CV od 50.1 posto (srednja vrijednost: 3,219 plus /− 1,612 SD, n=23) (dopunska slika 6d). Srednje vrijednosti i standardne devijacije za NAD plus, NADH, ukupni NAD(H) i podaci o omjeru NAD plus/NADH u jetri miša i štakora, grupirani metodom kvantifikacije, prikazani su u Dodatnoj tablici 2. U vezi s razinama NADP(H) i omjera NADP plus / NADPH, slična varijabilnost primijećena je u tkivima jetre. Razine NADP plus kretale su se od 50.4 do 247,4 nmol/g tkiva za miševe (dopunska slika 8a) i od 45,7 do 171 nmol/g tkiva za štakore (dopunska slika 8b), dok su razine NADPH kretala se od 28 do 236,9 nmol/g tkiva za miševe (dopunska slika 8c) i od 90 do 409 nmol/g tkiva za štakore (dopunska slika 8d). Na kraju, omjer NADP plus /NADPH bio je u rasponu od 0,12 do 0,55 u mišjoj jetri (dodatna slika 8e) i od 0,12 do 1,44 u jetri štakora (dodatna slika 8f).
u najvećem rasponu rezultata (1,8 do 1132,3 nmol/g). Čak su i najnovije ispitane LC-MS studije pokazale primjer raspona ovih NAD plus vrijednosti, uključujući vrijednosti od 1,8 nmol/g41 i 33,8 nmol/g42 i mnogo veće vrijednosti od 946,3 nmol/g43 i 1132,3 nmol/g44. Osim toga, čini se da veliki raspon LC-MS NAD plus vrijednosti nije u korelaciji sa studijama koje su isključile interne standarde obilježene izotopom (Slika 5a), metodom koja se koristi za poboljšanje identifikacije metabolita i točnosti kvantificirane vrijednosti . Međutim, dvije identificirane LC-MS studije koje su se oslanjale isključivo na vanjsku standardnu krivulju za NAD plus kvantifikaciju, umjesto uključivanja interne kontrole, bile su u prosjeku niže od prosjeka za sve mjere (Slika 5a). Nadalje, studije koje su koristile normalizaciju internog standarda koristile su različite vrste internih standarda, kao što je uključivanje jednog označenog referentnog metabolita45,46 ili ekstrakata označenih metabolita iz kvasca43,44 ili staničnih kultura41. Zanimljivo je da su te studije koje su koristile standarde izvedene iz ekstrakta kvasca ili stanične kulture dale najviše ili najniže mjere izvedene LC-MS za razine NAD plus u jetri. Ovo potencijalno naglašava kako stanični ekstrakti standarda bogatih izotopima mogu doprinijeti varijabilnosti u NAD plus mjerenjima jer učinak matrice dodanog standardnog kvasca ili staničnog ekstrakta može utjecati na učinkovitost ionizacije i posljedično izmjerene koncentracije ciljnih metabolita.
Ograničenja ove analize kvantificirajuće pristranosti i varijabilnosti uključuju potencijalne razlike u okolišu, genetičkoj pozadini, žrtvovanju, spolu i dobi. Svi podaci za ovu analizu potječu od životinja na prehrani, ali se mogu razlikovati po vrsti. Nakon žrtvovanja, postoje izvještaji o razlikama u stanju hrane ili gladovanja životinje i doba dana za žrtvovanje. Osim toga, iako je većina studija na miševima provedena na pozadini C57BL/6, postojao je veći raspon pozadina korištenih za štakore u studijama (Wistar: 38 posto, Albino Wistar: 25 posto i 6 posto za Hooded Wistar, Sprague–Dawley, Holtzman, ACI, Long-Evans i Zucker štakori). U ispitivanjima na mišjoj jetri nije bilo statističkih razlika između muških i ženskih vrijednosti za NAD plus, NADH ili ukupne razine NAD(H) ili za omjer NAD plus/NADH (Dodatna slika 7). Međutim, ne možemo donositi zaključke zbog ograničenog broja ženskih kohorti.
Pitajte za više:
E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950
