Lamivudin poboljšava kognitivni pad kod SAMP8 miševa: integracija in vivo farmakološke evaluacije i mrežne farmakologije Ⅱ

3|REZULTATI

3.1|3TC poništava gubitak tjelesne težine uzrokovan starenjem i poboljšava rezultat starenja

Promjene tjelesne težine miševa u različitim eksperimentalnim skupinama prikazane su na slici 1D. Rezultati su pokazali da su svi miševi dobili tjelesnu težinu u 4 tjedna. Pod standardnom dijetom, SAMP8 miševi tretirani s 3TC dobili su na težini brže od onih koji su tretirani nosačima. Rezultati rezultata starenja prije i nakon tretmana 3TC-om ili nosačem pokazali su da su prosječni rezultati starenja SAMP8 miševa bili relativno viši, dok je obrnuti trend postignut tretmanom 3TC-om (Slika 1E). Rezultati rezultata povezanih sa starenjem svake skupine miševa prikupljenih posljednjeg dana eksperimenta pokazali su da su SAMP8 miševi tretirani s 3TC pokazali značajna poboljšanja u nekoliko rezultata starenja, uključujući sjaj kože (p < 0. 01, t=3.901), neprozirnost rožnice (p < 0,01, t=4.753) i čir na rožnici (p < 0,05 , t=6.125) (Dodatna tablica S1).

Kliknite ovdje da biste saznali kako Cistanche do kognitivne funkcijeI nabavite proizvode za prodaju

3.2|3TC poboljšava kognitivni pad SAMP8 miševa

Morrisov test vodenog labirinta proveden je kako bi se ocijenilokognitivni učinciod 3TC (slika 2). Rezultati putanja i eksperimenata usmjerene navigacije tijekom pet uzastopnih dana pokazali su da su SAMR1 miševi pokazali značajno niže latencije bijega od onih SAMP8 miševa (p < 0.05, t=3. 194) (Slika 2A–B). Međutim, trećeg i petog dana, latencije bijega SAMP8 miševa tretiranih s 3TC bile su značajno kraće u usporedbi s onima SAMP8 miševa tretiranih nosačem (p < 0,05, t=3.115), dok nije bilo statističkih podataka. otkrivena je značajnost u usporedbi sa skupinom SAMR1. Iako je brzina plivanja SAMP8 miševa tretiranih s 3TC prvog dana bila znatno brža od brzine plivanja u druge dvije skupine, nije otkrivena značajna razlika između tri pokusne skupine u sljedeća 4 dana pokusa (Slika 2C).

Rezultati ispitivanja sonde i putanje 6. dana pokazali su da su i skupina SAMP8 tretirana SAMR1 i 3TC-om provele više vremena u ciljnom kvadrantu nego skupina SAMP8 tretirana nosačem (p < 0.{{ 19}}5, t=4.512; Slika 2D–E). Štoviše, broj križanja također je bio veći i u SAMR1 miševima i u skupini SAMP8 tretiranoj s 3TC nego u skupini SAMP8 tretiranoj nosačem, sa statistički značajnom razlikom otkrivenom između skupina sa i bez tretmana s 3TC (p < 0.05, t=5.79; Slika 2F). Grupa SAMP8 tretirana nosačem pokazala je najviše latencije za pronalaženje platforme pod vodom među svim grupama sa statistički značajnom razlikom otkrivenom između grupa tretiranih i grupa koje nisu tretirane 3TC (p < 0,05, t=4).415; Slika 2G).

SLIKA 2 Učinci tretmana 3TC na poboljšanja kognitivnog pada kod SAMP8 miševa. (A) Karta putanje miševa nakon ulaska u vodu iz drugog kvadranta tijekom testa navigacije pozicioniranja petog dana. (B) Escape kašnjenje u eksperimentu navigacije pozicioniranja za svaku grupu. (C) Brzina plivanja miševa u svakoj skupini u testovima ponašanja. (D) Karta putanje miševa u eksperimentu istraživanja svemira. (E) Postotak ukupnog vremena provedenog u ciljnom kvadrantu tijekom ispitivanja sonde u svakoj skupini. (F) Broj puta kada su miševi prešli platformu u svakoj skupini u pokusima sonde. (G) Vrijeme bijega do cilja. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SD. Studentov t-test: *p < 0.05, **p < 0.01 i ***p < 0.001. ns: nema statističke značajnosti. Crne zvjezdice ili "ns" predstavljaju usporedbu sa skupinom vozila SAMR1 plus. Crvene zvjezdice ili "ns" predstavljaju usporedbu sa skupinom vozila SAMP8 plus. Svaka skupina sastojala se od najmanje osam životinja

3.3|Ciljni geni 3TC otkriveni kvantitativnom PCR-om u stvarnom vremenu

Prethodne studije su pokazale da 3TC može smanjiti SASP i IFN-I signale odgovora na glatke mišićne stanice starijih miševa, ali nema izvješća o povezanim genima neuroloških degenerativnih bolesti u tkivu mozga. Kako bismo istražili učinak 3TC-a na mozak miševa, istražili smo ekspresiju deset gena kandidata od interesa u hipokampusu i korteksu miševa koristeći kvantitativni PCR u stvarnom vremenu. U hipokampusu (Slika 3A), značajno pojačano regulirani geni za starenje (skupine SAMR1 naspram SAMP8 tretiranih nosačem) uključivali su jedan gen povezan s transpozonom (L1-ORF1, p < 0). 05), tri gena odgovora na IFN-I (Ifna, Irf7 i Oas1, p < {{20}}.05), dva gena povezana s AD-om (PS{ {19}} i APP, p < 0.01) i tri reprezentativna SASP gena (Il6, Mmp3 i Pai1, p < 0.01), dok je značajno smanjen -regulirani geni za liječenje 3TC (skupine SAMP8 tretiranih nosačem u odnosu na SAMP8 tretiranih 3TC) uključivali su jedan gen povezan s transpozonom (L1-ORF2, p < 0,05), dva gena odgovora na IFN-I (Ifna i Oas1, p < 0,001) i tri reprezentativna SASP gena (Il6, Mmp3 i Pai1, p < 0,01). Slični rezultati dobiveni su u korteksu, iako je pojačana regulacija gena povezanog s AD-om smanjena tretmanom 3TC u korteksu u usporedbi s hipokampusom (p < 0,05; Slika 3B).

3.4|3TC smanjuje morfološke abnormalnosti i gubitak neurona u hipokampusu SAMP8 miševa izazvan starenjem

Primijenili smo metode bojenja H & E i Nissl kako bismo istražili morfološke promjene uzrokovane 3TC u hipokampusu, koji je bio ključno područje kognicije i pamćenja. U usporedbi sa skupinom SAMR1 tretiranih nosačem, skupina SAMP8 tretiranih nosačem pokazala je povećanu stopu čišćenja hipokampalnih neurona, blago poremećen raspored stanica, nuklearnu koncentraciju pronađenu u nekim neuronima i blagi edem hipokampusa. Ta su oštećenja poboljšana u skupinama liječenim 3TC-om (Slika 4A). Gubici Nissl-pozitivnih održivih neuronskih stanica s tipičnom neuropatološkom promjenom primijećeni su u skupini SAMP8 na temelju bojenja Nisslom, dok su te promjene djelomično poništene u skupini SAMP8 liječenoj s 3TC (Slika 4B–C). Smrt neurona u hipokampusu također je otkrivena TUNEL bojanjem s najvećim i najmanjim količinama TUNEL-pozitivnih stanica (zeleno) uočenih u skupini SAMP8 tretiranoj nosačem odnosno SAMR1 skupini tretiranoj nosačem, dok je skupina SAMP8 tretiran s 3TC otkriven je značajno manje od skupine SAMP8 tretirane nosačem (Slika 4D–E).

3.5|Navodni ciljevi 3TC-a

Mrežna farmakološka analiza otkrila je ukupno 269 proteina kao predviđenih ciljeva za 3TC od kojih je 164 identificirala baza podataka Pharmmapper, odnosno 105 baza podataka ChEMBL (dodatna tablica S3). PPI mreža konstruirana je na temelju ciljnih gena 3TC korištenjem baze podataka String s ukupno 32 jezgrena čvora u mreži identificirana kao ključni ciljevi 3TC kod SAMP8 miševa (Slika 5A). Koristili smo String 9.1 za oponašanje interakcija između ključnih ciljnih proteina 3TC kako bismo identificirali tri skupine proteina sa sličnim funkcijama (Slika 5B).

3.6|Analiza obogaćivanja 3TC ključnih ciljnih mreža

3.6.1|GO analiza

Analiza GO obogaćivanja ciljnih gena identificiranih tijekom tretmana 3TC-om pomoću STRING otkrila je ukupno 550 bioloških procesa s p < 0.05 (Slika 6A; Dodatna tablica S4), kao što je odgovor na kiselu kemikaliju, odgovor na reaktivne spojeve kisika i negativna regulacija procesa apoptoze. GO analiza također je identificirala ukupno 23 stanične komponente s p < 0,01, poput endomembranskog sustava, citoplazmatske vezikule, vezikule, citoplazmatskog dijela i dijela plazma membrane (dodatna tablica S5), dok je ukupno 69 molekularnih funkcija identificirano pomoću GO analiza grupirana je u ukupno 19 kategorija (dodatna tablica S6). Vrijedno je napomenuti da je termin vezanja proteina tau, za koji se smatralo da je povezan sAlzheimerova bolest, pokazao je značajan odnos s 3TC (p < 0.05).

3.6.2|Metabolički putevi ciljnih mreža 3TC

Ukupno 109 značajnih putova liječenja pregledano je KEGG analizom (p < 0.05; slika 6B; dodatna tablica S7) s mnogim putovima povezanim s karcinomima, uključujući putevi u raku, kemijska karcinogeneza, rak prostate, proteoglikani u raku i mikroRNA u raku. Tri puta za koje je otkriveno da su povezani s neuroinflamacijom, staničnim smrću i neuronskim prijenosom signala uključivali su signalizaciju estrogena (p < 0.0001), fosfor inozitid 3-kinazu i protein kinazu B (PI3K/Akt) (p < 0,0001) i signalni putovi interakcije neuroaktivnog liganda i receptora (p < 0,001).27-29

3.6.3|Način uvezivanja

Provedene su studije spajanja između 3TC i tri odabrane potencijalne mete, to jest EGFR koji predstavlja signalni put estrogena, AKT1 koji predstavlja signalni put P13K/Akt i ADRB2 koji predstavlja signalni put interakcije neuroaktivnog liganda i receptora. Rezultati analize načina vezanja pokazali su (Slika 6C) da su aminokiselinski ostaci Thr854, Asn842, Arg841 i Glu762 receptorskog proteina EGFR djelovali u interakciji s malim molekulama 3TC liganada stvarajući vodikove veze, dok su aminokiselinski ostaci Lys55, Val40, Ala53, Met111, Val158, Asn114, Leu168, Ser155, Asp169, Lys153, Asn156s i Gly35 formirali su hidrofobne interakcije s malim molekulama 3TC liganda. Aminokiselinski ostaci Asp292, Glu191, His194, Glu198s i Thr195 receptorskog proteina AKT1 formirali su vodikovu vezu s 3TC, dok su aminokiselinski ostaci Phe179, Leu295, Glu198 i Lys179 stvorili hidrofobnu interakciju s 3TC. Aminokiselinski ostaci Asp331 i Phe332 iz ADRB2 međusobno su komunicirali s 3TC da bi formirali vodikovu vezu, dok su aminokiselinski ostaci Phe336, Ala335, Val54, Ala57, Ile58, Leu64, Asn69, Ile72 i Pro330 iz ABRB2 formirali hidrofobnu interakciju s 3TC. Ovi rezultati docking studija pružili su dokaze vezanja 3TC-a na svoje mete, što je bilo važno za razumijevanje mehanizma djelovanja lijeka. Nadalje smo proveli in vitro eksperimente kako bismo potvrdili rezultate bioinformatičke analize

SLIKA 3 Učinci tretmana 3TC na ekspresiju gena kandidata u moždanom tkivu miša. Miševi su tretirani nosačem ili 3TC kontinuirano tijekom 4 tjedna. Za sva stanja, ekspresija L1-ORF1 i L1-ORF2, tri reprezentativna gena odgovora na IFN-I (Ifna, Irf7 i Oas1), dvaGeni povezani s Alzheimerovom bolešću(PS{{0}} i APP) i tri reprezentativna SASP gena (Il6, Mmp3 i Pai1) u hipokampusu (A) i korteksu (B) procijenjeni su kvantitativnom PCR-om u stvarnom vremenu s profiliranjem ekspresije gena prikazanih u histogramu. Studentov t-test: *p < 0.05, **p < 0,01 i ***p < 0,001. ns: nema statističke značajnosti. Crne zvjezdice ili "ns" predstavljaju usporedbu sa skupinom vozila SAMR1 plus. Crvene zvjezdice ili "ns" predstavljaju usporedbu sa skupinom vozila SAMP8 plus.

3.7|3TC štiti HT22 stanice od citotoksičnosti izazvane FA reguliranjem niza molekula

Kako bismo istražili učinke 3TC kao inhibitora reverzne transkriptaze na stare neurone in vitro, inducirali smo starenje u HT22 stanicama s FA. Rezultati su pokazali da se LINE-1 aktivirao u starim neuronima, a taj je trend preokrenuo 3TC (Slika 7A–B). Uz to, 3TC je pokazao antagonistički učinak na staničnu smrt izazvanu FA (Slika 7C). Kao što se očekivalo, stimulacija TH22 stanica s FA tijekom 24 sata rezultirala je značajnom inhibicijom ekspresije EGFR, p-AKT1 i ADRB2 (p < 0.001), u usporedbi s netretiranom kontrolom. , dok je istodobno liječenje s 3TC dovelo do značajno povećane ekspresije EGFR, p-AKT1 i ADRB2 izazvane FA (p < 0,001; slika 7D,E).

4|RASPRAVA

Kognitivni padovi, osobito gubitak pamćenja, obično su povezani s prirodnim starenjem. Theučinci starenjaposebno su izraženi u prefrontalnom korteksu i hipokampusu, područjima mozga koja su kritično uključena u spoznaju i raspoloženje.30 SAMP8 miševi izvedeni su iz linije SAM-P/2 kao mišji model demencije koji brzo stari. Prethodno istraživanje pokazalo je da miševi SAMP8 pokazuju kognitivni pad povezan sa starenjem uz kratak životni vijek, pokazujući progresivno učenje i nedostatke pamćenja kao i neuropatološka obilježja demencije u prefrontalnom korteksu i hipokampusu.31 Životni vijek miševa SAMP8 gotovo je upola manji od SAMR1, koji su korišteni kao kontrole za SAMP8.32 U našem istraživanju, miševi SAMP8 odabrani su kao idealni životinjski model za istraživanje opadanja kognitivnih funkcija tijekom starenja, s homolognim miševima koji se normalno razvijaju SAMR1 korištenim kao anti- kontrolna skupina starenja

SLIKA {{0}}TC smanjuje oštećenje neurona u hipokampusu SAMP8 miševa. (A) Fotomikrografije presjeka hipokampusa obojenih H & E za svaku skupinu miševa (traka=50 μm). Crne strelice označavaju koncentrirane jezgre, a plave strelice označavaju područja gdje su neuroni ozbiljno izgubljeni i poremećeni. (B) Identifikacija preživljavanja neurona Nisslovim bojanjem u hipokampusu (bar=20 μm). (C) Količina zdravih neuronskih stanica u svakom vidnom polju s gusto obojenim Nisslovim tijelima. (D) Slike apoptotičkih stanica označenih TUNEL (zelenim) testom u svakoj skupini miševa (traka=20 μm). (E) Kvantifikacija TUNEL-pozitivnih stanica u svakom vidnom polju. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SD. Studentov t-test: ***p < 0,001. Crne zvjezdice predstavljaju usporedbu sa skupinom vozila SAMR1 plus. Crvene zvjezdice predstavljaju usporedbu sa skupinom vozila SAMP8 plus.

Starenje obično uzrokuje gubitak težine tijela zbog trošenja kostiju, atrofije mišića i disfunkcije u probavnom sustavu.33 Naši rezultati su pokazali da je 3TC djelomično ublažio trend gubitka težine. U usporedbi s netretiranim miševima, SAMP8 miševi tretirani s 3TC pokazali su tendenciju povećanja svoje tjelesne težine s godinama. Ovi su rezultati u skladu s onima koji su ranije objavljeni, što sugerira da 3TC poboljšava zdravlje tijela miševa.34 Kako bi se objektivno i točno procijenili učinci liječenja 3TC-om na poboljšanjekarakteristike starenjamiševa, zabilježili smo rezultate starenja tijekom tretmana. Naši rezultati su pokazali da s povećanjem vremena tretmana 3TC, SAMP8 miševi pokazuju tendenciju usporavanja starenja. Konkretno, liječenje 3TC-om odigralo je značajnu ulogu u poboljšanju sjaja kože, neprozirnosti rožnice i čira na rožnici uzrokovanog starenjem kod SAMP8 miševa. Ovi rezultati sugeriraju da cilj 3TC protiv starenja postoji na koži i tkivu rožnice. Prethodne studije potvrdile su da se L1 koristio kao meta za poboljšanje degenerativnih bolesti uzrokovanih starenjem, dok su inhibitori reverzne transkriptaze uključujući 3TC korišteni kao prenosivi inhibitori L1.13 Do danas, molekularni mehanizam uloge L1 u živčanom sustavu i mogućnost liječenja bolesti povezanih sa živčanim sustavom kao što je AD regulacijom L1 nije uvjerljivo objašnjena. Nadalje, studije su pokazale da genetska rekombinacija u APP genu može biti ključni događaj u patogenezi sporadične AD, koja je vrsta demencije.15 rekombinacija neuronskih gena nije zabilježena, dok njezina pojava i oštećenja DNA i RNA intermedijera zahtijevaju aktivnosti reverzne transkriptaze proteinskih funkcija. Stoga inhibitori reverzne transkriptaze kao što je 3TC mogu igrati ulogu u prevenciji i liječenju AD-a koji uzrokuje kognitivni pad. Ovu su spekulaciju potvrdili naši rezultati Morrisovih eksperimenata u vodenom labirintu koji su istraživali učinke 3TC-a na kognitivne sposobnosti kod SAMP8 miševa.

SLIKA 7 Eksperimenti in vitro potvrdili su ključne molekule 3TC protiv neuronske degeneracije. Starenje stanica mišjeg neurona HT22 inducira formaldehid (FA). (A) Imunofluorescentna detekcija LINE-1 ORF1p u kontroli, FA i FA plus 3TC skupinama (traka=20 μm). (B) Kvantifikacija imunofluorescentne analize u (A). (C) Kvantifikacija preživjelih neurona po ×400 polju u različitim skupinama. (D) EGFR, p-AKT1 i ADRB2 detektirani su Western blot analizom. (E) Kvantifikacija Western blot analize u (D). Studentov t-test: ***p < 0,001. Crne zvjezdice predstavljaju usporedbu s kontrolnom skupinom. Crvene zvjezdice predstavljaju usporedbu s FA skupinom

Naši rezultati Morrisovih testova vodenog labirinta pokazali su da su nakon 5 dana plivačkog treninga SAMP8 miševi koji su oralno uzeli 3TC uspjeli pronaći skrivenu platformu brže od netretiranih SAMP8 miševa. S obzirom da su miševi tretirani 3TC-om pokazali veću tjelesnu težinu, što se može povezati s brojem skeletnih mišića, bilježili smo brzinu plivanja svake skupine miševa kako bismo eliminirali učinak mišićne snage. Iako su miševi koji su uzimali 3TC plivali brže od ostalih skupina prvog dana plivačkog treninga, razlika se nije zadržala u sljedeća 4 dana. Stoga isključujemo utjecaj mišićne snage na rezultate testova vodenog labirinta. Slično tome, rezultati eksperimenta istraživanja svemira 6. dana pokazali su da su SAMP8 miševi tretirani s 3TC pokazali tendenciju pronalaženja izvorne platforme aktivnije od netretiranih miševa. Ovi rezultati upućuju na to da liječenje 3TC-om poboljšava kognitivna i pamćenja uzrokovana starenjem kod SAMP8 miševa. Kako bismo istražili potencijalne molekularne mehanizme 3TC-a koji poboljšava starenje mozga, primijenili smo kvantitativni PCR u stvarnom vremenu za mjerenje razina mRNA gena kandidata u hipokampalnom i kortikalnom tkivu svake skupine miševa. Naši rezultati sugeriraju da liječenje 3TC inhibira L1 izazvan starenjem u mozgu i smanjuje ekspresiju gena povezanih s IFN, SASP i AD, što ukazuje da su signalni putovi aktivirani starenjem bili potisnuti liječenjem 3TC. Naši rezultati sugeriraju da 3TC može poboljšati inteligenciju i fenotipove starenja inhibiranjem transpozicije L1 kako bi se u konačnici poboljšala kronična upala u mozgu uzrokovana starenjem. Napominjemo da je potrebno više studija kako bi se pružila snažna potpora ovim molekularnim mehanizmima poboljšanja starenja mozga tretmanom 3TC-om koji je otkriven u ovoj studiji. Trenutačno se u našem laboratoriju provode istraživanja farmakološkog mehanizma inhibitora reverzne transkriptaze na živčanim stanicama na modelima glijalnih i neuronskih stanica starenja in vitro.

Naši rezultati eksperimenata HE i Nissl bojenja pokazali su da je 3TC sanirao gubitak neurona u hipokampusu uzrokovanstarenje, u konačnici ublažavajući neurodegeneraciju spašavajući neurone od smrti. Osim toga, uočili smo više apoptotskih stanica u hipokampusu SAMP8 miševa u usporedbi sa SAMR1 miševima. Naši su rezultati dodatno pokazali da je liječenje 3TC-om značajno smanjilo broj apoptotskih stanica, vjerojatno zbog izravnog učinka 3TC-a na proteine ​​povezane s apoptotskim putem ili druge uzvodne molekule.

Učenje i pamćenje važne su kognitivne sposobnosti koje uključuju složenu mrežu funkcionalnih regija mozga koje zajedno rade na upravljanju i obradi informacija. Stoga, sve spojeve koji pokazuju učinke na mozak treba uzimati oprezno uz potpuno razumijevanje njihovih potencijalnih ciljeva. Pristup mrežne farmakologije sustavna je analitička tehnologija koja se koristi za istraživanje mreža interakcija višestrukih čimbenika kao što su bolesti, lijekovi, geni i meta proteina. Proveli smo mrežne farmakološke analize, uključujući PPI i analize obogaćivanja, na temelju ukupno 269 potencijalnih ciljeva (s 32 temeljna cilja) 3TC-a označenih korištenjem baza podataka Pharmmapper i ChEMBL. Naši su rezultati pokazali da 3TC može igrati važnu ulogu u održavanju normalnih funkcija živčanog sustava putem signalizacije estrogena i signalnih putova interakcije PI3K/Akt i neuroaktivni ligand-receptor, što dodatno objašnjava učinke 3TC-a na zaštitu normalnih funkcija živaca i inhibiranje smrti neuronskih stanica. Reprezentativne molekule u relevantnim putovima odabrane su za provedbu molekularnog spajanja i in vitro pokusa kako bi se potvrdili rezultati bioinformatičke analize. Kako bi se pružilo više dokaza u prilog ovim nagađanim molekularnim mehanizmima 3TC-a koji rade sinergistički sa živčanim sustavom, potrebna su daljnja istraživanja kako bi se identificirale točne komponente uključene i regulirane u tim putevima.

Kao dioantiretrovirusna terapija(ART), 3TC je opsežno proučavan proteklih godina i odobren je za liječenje kroničnog virusa hepatitisa B (HBV).35 Mora se napomenuti da ako se 3TC koristi za liječenjeneurodegenerativne lezije povezane sa starenjem, potrebno je uzeti u obzir njegovu farmakološku toksičnost zbog slabog imunološkog sustava kod starije populacije i pacijenata oboljelih od raka. Studije su pokazale da uobičajene nuspojave 3TC-a uključuju infekciju gornjih dišnih putova, mučninu, povraćanje, bolove u trbuhu i proljev. Stoga klinička primjena 3TC-a treba biti iznimno oprezna. Trenutačno se 3TC može koristiti kao farmakološki alat za proučavanje molekularnih mehanizama, ali ne i kao navodna terapija. Ukratko, naša studija je po prvi put pokazala da 3TC poboljšava kognitivne funkcije SAMP8 miševa poništavanjem starenja mozga, pružajući eksperimentalne dokaze za upotrebu inhibitora reverzne transkriptaze kao potencijalnih tretmana za neurodegenerativne bolesti.

PRIZNANJE

Ovaj je rad podržala Nacionalna zaklada za prirodne znanosti Kine (81670942, 81470704 i 81972057).

SUKOB INTERESA Autori izjavljuju da nisu u sukobu interesa.

REFERENCE

1. Baulac S, Lu H, Strahle J, et al. Povećana ekspresija DJ-1 pod oksidativnim stresom i uMozak Alzheimerove bolesti. Mol Neurodegener. 2009;4:12.

2. Delgado-Lara DL, González-Enríquez GV, Torres-Mendoza BM, et al. Učinak primjene melatonina na gene sata PER1 i BMAL1 u bolesnika sParkinsonova bolest. Biomed Pharmacother. 2020;129:110485.

3. Agatonovic-Kustrin S, Kettle C, Morton DW. Molekularni pristup u razvoju lijekova za Alzheimerovu bolest. Biomed Pharmacother. 2018;106:553-565.

4. Khosla S, Farr JN, Tchkonia T, Kirkland JL. Uloga staničnog starenja u starenju i endokrinim bolestima. Nat Rev Endocrinol. 2020;16:263-275.

5. Zolfaghari MA, Karimi A, Kalantari E, et al. Usporedna studija imunoreaktivnosti proteina dugog umetnutog elementa-1 u malignim tumorima kože. BMC Rak. 2020;20:567.

6. Sae-Lee C, Biasi J, Robinson N, et al. Obrasci metilacije DNA LINE-1 i Alu za predsimptomatsku demenciju kod dijabetesa tipa 2. PLoS jedan. 2020;15:e0234578. 7. Baeken MW, Moosmann B, Hajieva P. Aktivacija retrotranspozona oštećenim mitohondrijima u neuronima. Biochem Biophys Res Commun. 2020;525:570-575. 8. Jones RB, Garrison KE, Wong JC, Duan EH, Nixon DF, Ostrowski MA. Inhibitori nukleozidnih analoga reverzne transkriptaze različito inhibiraju retrotranspoziciju ljudske LINE-1. PLoS jedan. 2008;3:e1547