Propusnost crijeva i depresija u bolesnika s upalnom bolesti crijevaⅠ
Dec 20, 2023
Sažetak: Depresija je globalni zdravstveni problem koji zahtijeva ranu i točnu dijagnozu kako bi se osigurao brz pristup odgovarajućem liječenju. Nedavno je pozornost usmjerena na analizu osi mozak-crijeva-mikrobiota među višestrukim psihopatološkim stazama. Crijevna barijera igra ključnu ulogu, a disfunkcije koje se javljaju na ovoj razini imaju implikacije na mentalno zdravlje. Cilj ove studije bio je istražiti ulogu biomarkera crijevne propusnosti, tj. kalprotektina, zonulina, proteina koji veže lipopolisaharid (LBP) i proteina koji veže crijevne masne kiseline (I-FAB), u depresiji u pacijenata s upalnom bolesti crijeva (IBD). ).
Ovo je prva studija ove vrste koja se provodi u Rumunjskoj, istočnoj Europi, s naglaskom na pacijente s Crohnovom bolešću i ulceroznim kolitisom. Korelacije identificirane između depresije i kalprotektina te depresije i LBP-a imaju potencijal rasvijetliti proces brze dijagnoze depresije uz pomoć biomarkera. Budući da je depresija povezana s smanjenjem kvalitete života bolesnika s IBD-om, potreba za pristupom odgovarajućem liječenju mora biti hitna.
1. Uvod
Depresija je individualni, profesionalni i društveni invaliditet povezan sa somatskim bolestima [1,2] i s visokim rizikom smrtnosti od samoubojstva [3]. Međutim, pristup stručnjacima, ispravna dijagnoza i učinkovito liječenje su ograničeni [4]. Rana i točna dijagnoza [5,6], kao i personalizirani odabir liječenja [7], neophodni su za smanjenje patnje i financijskog tereta bolesti [3]. Prema dijagnostičkim kriterijima u Diagnostic and Statistical Manual of MentalDisorders (DSM V) [8], depresija je afektivni poremećaj s heterogenom skupinom simptoma. Da bi se postavila dijagnoza, potrebna je prisutnost pet od devet sljedećih simptoma: depresivno raspoloženje, nedostatak zadovoljstva, poteškoće sa spavanjem i apetitom, niska razina energije, kognitivne promjene, osjećaj krivnje i krivnje te suicidalne ideje. Do sada je točno patofiziološki mehanizmi za postizanje koristi od učinkovitog liječenja nisu poznati. Nekoliko je mehanizama dovedeno u pitanje, ali teorije se još uvijek razvijaju.
Tako su istražene disfunkcije na osovini hipotalamus-hipofiza, neurotransmiteri, živac vagus, metaboliti kratkolančanih masnih kiselina, triptofan, upalni čimbenici i osovina mozak-crijeva-mikrobiota [9-12]. Dokazano je da ne samo da poremećaji povezani sa stresom dovode do promjena u sastavu crijevne mikrobiote kroz osovinu hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda, već i crijevo utječe na
središnji živčani sustav putem vagalne stimulacije, crijevne propusnosti i otpuštanja upalnih i protuupalnih spojeva i promjena u cirkulirajućim agensima u krvi [13]. Tijekom posljednja dva desetljeća, proučavanje uključenosti osovine mozak-crijeva-mikrobiota u mentalne poremećaje dobilo je zamah [9,14]. U tom kontekstu, uloga sindroma curenja crijeva dobila je više pažnje [15,16].
Intestinalna barijera ima glavnu ulogu u probavi i apsorpciji hranjivih tvari; sekundarno, ona strogo kontrolira transport antigena iz lumena u submukozu i održava ravnotežu između tolerancije i imunološkog odgovora koji uzrokuje upalu. Na cjelovitost crijevne barijere može utjecati prehrana, disbioza crijevne mikrobiote ili drugi čimbenici. Oni imaju potencijal izazvati imunoaktivaciju translokacijom mikrobnih antigena i metabolita. Trenutno su zonulin u serumu, intestinalni protein koji veže masne kiseline (IFABP/FABP2) i LBP, kao i fekalni albumin, kalprotektin i zonulin, analizirani kao intestinalna propusnost markeri [17]. Kalprotektin je protein koji veže kalcij i cink, inicijalno izoliran iz leukocita; koristan je u razlikovanju upalne bolesti crijeva od sindroma iritabilnog crijeva. Igra glavnu ulogu tijekom upale i smatra se proteinom akutne faze [18]. ].
Normalne vrijednosti su između 10 i 50 ili 60 (ug/g). Vrijednosti iznad 200 (ug/g) mogu ukazivati na upalnu bolest, a vrijednosti iznad 500-600 (ug/g) sigurno upućuju na postojanje crijevne bolesti [19]. Lipopolisaharid-vezujući protein (LBP) bitna je lipidna komponenta vanjske membrane gram-negativnih bakterija [20], što uzrokuje endotoksemiju [21]. LBPis koji proizvode hepatociti, masno tkivo i crijevne stanice funkcionira kao protein akutne faze I i igra važnu ulogu u imunološkom odgovoru [22]. LBP je prisutan u serumu u koncentracijama od 5-15 mg/mL i povećava se 10 do 50 puta tijekom reakcije akutne faze. Funkciju barijere održava zonulin, poznat kao jedini fiziološki modulator bliskih intracelularnih spojeva (TJ) [15,23, 24]. Zonulin reverzibilno otvara TJ, djelujući na proteazom aktivirani receptor 2 koji se nalazi u unutarstaničnom prostoru spojnog kompleksa [25]. Srednja vrijednost zonulina je 34 ng/mL [26].
Intestinalni protein koji veže masne kiseline (I-FABP/FABP2) jedan je od devet različitih identificiranih FABP-a koji pripadaju superobitelji proteina koji vežu lipide. Glavna uloga je unutarstanični transport i regulacija apsorpcije masnih kiselina [27]. Kada dođe do oštećenja epitelne intestinalne barijere, I-FABP se oslobađa u cirkulaciju i njegova se koncentracija u plazmi povećava [28]. Smatra se da je granična vrijednost za I-FAPB 2 ng/mL. U ovom kontekstu, cilj nam je bio istražiti ulogu biomarkera crijevne propusnosti u depresiji kod bolesnika s upalnom bolesti crijeva (IBD) (i) ispitivanjem odnosa između kalprotektina, zonulina, LBP-a , IFABP/FABP2 i depresije i (ii) procjenom utjecaja depresije na kvalitetu života.
2. Materijali i metode
2.1. Grupa za učenje
Inicijalna skupina uključivala je 60 pacijenata s Gastroenterološke klinike Okružne kliničke bolnice Constanta između travnja i lipnja 2021. Kriteriji za uključivanje bili su dijagnoza IBD-a, dob od 18 godina i više, poznavanje čitanja i pisanja te pristanak na sudjelovanje u studiji. Kriteriji isključenja bili su uskraćivanje pristanka, teška depresija ili drugi teški psihički poremećaji zbog kojih su upućivani u specijaliziranu psihijatrijsku službu. Nakon informiranog pristanka, pacijente je telefonom kontaktirao istraživač kako bi primijenili sociodemografski upitnik o depresiji i upitnik o kvaliteti života. U studiju je bilo uključeno 30 pacijenata koji su prošli kroz sve faze studije.
2.2. Korišteni upitnici
Upitnik o zdravlju pacijenata-9 (PHQ-9) [29] primijenjen je na sudionike kako bi se procijenila razina depresije kojom su bili pogođeni. Ovaj standardni upitnik sadrži devet stavki na koje treba odgovoriti na temelju simptoma koje je pacijent imao tijekom posljednjih 14 dana. Rezultati su klasificirani na sljedeći način: 1–4 minimalna depresija, 5–9 blaga depresija, 10–14 umjerena depresija, 15–19 umjereno teška depresija i 20–27 teška depresija. Slično tome, primijenili smo upitnik za kvalitetu života (EQ{{ 14}}D) [30,31] za prikupljanje podataka o kvaliteti života. Stavke sadržane u ovom alatu su mobilnost pacijenta, samozbrinjavanje, uključenost u uobičajene aktivnosti, bol ili nelagoda te tjeskoba ili depresija. Na pitanja se odgovara na ljestvici od pet stupnjeva.
2.3. Uzimanje uzoraka i laboratorijska analiza
Serološki uzorci za zonulin, IFABP/FABP2, LBP i fekalni uzorci za kalprotektin prikupljeni su prema protokolu za prikupljanje i transport potencijalno zaraznih bioloških uzoraka. Uzorci seruma prikupljani su venskom punkcijom, natašte i u vacutainer s aktivatorskom tkaninom. Fekalni uzorci su prikupljeni iz spontano emitirane stolice u posudama bez nosivog medija. Serum je testiran na zonulin s MyBioSource Kit, Inc. (San Diego, CA, SAD). i IFABP/FABP2 i LBP s kompletom Wuhan Fine Biotech Co., Ltd. (Wuhan, Kina). Uzorci su testirani na kalprotektin s kompletom EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG. Svi testovi su provedeni enzimski imunosorbentnim testom (ELISA) na ADALTIS Analyzer GEN-4 i Victor X4 prema uputama proizvođača kompleta.
Raspon normalnih vrijednosti definirao je proizvođač kompleta samo za kalprotektin kako slijedi: Manje od ili jednako 50.0 mcg/g kao normalno, 50.1– 120,0 mcg/g kao granična vrijednost, a veća ili jednaka 120,1 mcg/g kao pozitivna vrijednost za crijevnu bolest. Za zonulin, proizvođač reakcijskog kompleta nije specificirao donje granice detekcije. Donja granica detekcije za komplet IFABP/FABP2 bila je 0,156 ng/mL, 3,125 ng/mL za LBP i 3,125 ng/mL za kalprotektin. Za zonulin, I-FABP/FABP2 i LBS/LBP, proizvođač kita nije priopćio raspon normalnih vrijednosti, a korištene su vrijednosti koje su koristili drugi autori u svojim studijama. Serum je ekstrahiran iz svakog uzorka krvi centrifugiranjem na 3000 × g 30 minuta koristeći Thermo Scientific SL16R centrifugu.
Svi dobiveni serumi držani su zamrznuti na -200 ◦C do provođenja analiza. Za IFABP/FABP2 i LBP, uzorci su razrijeđeni do 1/2 puferom za razrjeđivanje uzorka prije testiranja. Uzorci stolice držani su na -20 ◦C do dana testiranja. Ekstrakcija uzorka stolice provedena je korištenjem pufera za ekstrakciju od 980 iu zajedno s 20 mg stolice, miješana 30 sekundi, a zatim centrifugirana na 2000 x g 10 minuta korištenjem Thermo Scientific SL16R centrifuge. Zatim je izvršeno razrjeđivanje uzoraka s 980 iu pufera uzorka i 20 iu ekstrakcijskog supernatanta.
Za četiri markera korištene su mikropločice s 96 jažica obloženih antitijelima za hvatanje: anti-kalprotektinskim antitijelima, anti-IFABP/FABP2 antitijelima, anti-LBP antitijelima ili anti-zonulinskim antitijelima. Načela testa bila su ista i temeljila se na tehnologiji imunološkog testiranja povezanog s enzimima (ELISA). Standardni uzorci, uzorci za ispitivanje i protutijela za detekciju konjugirana s biotinom kasnije su dodani u jažice. TMB supstrati (3,30,5,50-tetrametilbenzidin) korišteni su za vizualizaciju enzimske reakcijeHRP (peroksidaza hrena). HRP je katalizirao TMB da proizvede plavi produkt koji se promijenio u žuti nakon dodavanja otopine za zaustavljanje kiseline.
Gustoća žute mrlje bila je proporcionalna količini uzorka uhvaćenog na ploči. Intenzitet boje izmjeren je na 450 nm u čitaču mikropločica, a zatim je izračunata ciljna koncentracija.
2.4. Statistička analiza
Statistička analiza provedena je korištenjem IBM SPSS statističkog softvera verzije 23 (Armonk, NY, SAD: IBM Corp.). Podaci su prikazani kao medijan i IQR (interkvartilniraspon P75–P25) za kontinuirane varijable u slučaju iskrivljenih distribucija ili kao postoci za kategoričke varijable.
Budući da je Shapiro–Wilkov test normalnosti pokazao, u slučaju analiziranih kontinuiranih varijabli, statističke vrijednosti testa čija je vjerojatnost (p) niža od razine značajnosti {{0}}.05, uvjet za normalnost nije zadovoljena, osim za varijable LBP i PHQ 9, za koje je p >=0.05. Smatrali smo da je prikladniji neparametarski pristup proučavanju korelacije između dotičnih varijabli, uz prikaz Spearmanovog rho koeficijenta korelacije (ρ) i s njim povezane vjerojatnosti (p). Razina značajnosti postavljena je na 0,05.
Prirodni biljni lijek za ublažavanje zatvora - Cistanche
Cistanche je rod parazitskih biljaka koji pripada obitelji Orobanchaceae. Ove su biljke poznate po svojim ljekovitim svojstvima i stoljećima se koriste u tradicionalnoj kineskoj medicini (TCM). Vrste Cistanche uglavnom se nalaze u sušnim i pustinjskim regijama Kine, Mongolije i drugih dijelova središnje Azije. Cistanche biljke karakteriziraju mesnate, žućkaste stabljike i vrlo su cijenjene zbog svojih potencijalnih zdravstvenih koristi. U TCM-u se vjeruje da Cistanche ima tonična svojstva i obično se koristi za hranjenje bubrega, povećanje vitalnosti i podršku seksualnoj funkciji. Također se koristi za rješavanje problema povezanih sa starenjem, umorom i općom dobrobiti. Iako Cistanche ima dugu povijest upotrebe u tradicionalnoj medicini, znanstvena istraživanja o njegovoj učinkovitosti i sigurnosti su u tijeku i ograničena su. Međutim, poznato je da sadrži različite bioaktivne spojeve poput feniletanoidnih glikozida, iridoida, lignana i polisaharida, koji mogu pridonijeti njegovim ljekovitim učincima.
Wecistancheovcistanche prašak, cistanche tablete, cistanche kapsule, a drugi proizvodi razvijeni su korištenjempustinjacistanchekao sirovine, a sve to dobro djeluje na otklanjanje zatvora. Specifični mehanizam je sljedeći: vjeruje se da Cistanche ima potencijalne koristi za ublažavanje zatvora na temelju tradicionalne upotrebe i određenih spojeva koje sadrži. Dok su znanstvena istraživanja posebno o učinku Cistanche na zatvor ograničena, smatra se da ima više mehanizama koji mogu pridonijeti njegovom potencijalu za ublažavanje zatvora. Laksativni učinak:Cistanchedugo se koristi u tradicionalnoj kineskoj medicini kao lijek za zatvor. Vjeruje se da ima blagi laksativni učinak, što može pomoći u promicanju pokreta crijeva i izazvati zatvor. Ovaj se učinak može pripisati različitim spojevima u Cistancheu, poput feniletanoidnih glikozida i polisaharida. Vlaženje crijeva: Na temelju tradicionalne upotrebe, smatra se da Cistanche ima hidratantna svojstva, posebno usmjerena na crijeva. Poticanje hidratacije i podmazivanja crijeva može pomoći omekšati alate i olakšati prolaz, čime se ublažava zatvor. Protuupalni učinak: Zatvor ponekad može biti povezan s upalom u probavnom traktu. Cistanche sadrži određene spojeve, uključujući feniletanoidne glikozide i lignane, za koje se vjeruje da imaju protuupalna svojstva. Smanjenjem upale u crijevima može poboljšati redovitost pražnjenja crijeva i ublažiti zatvor.
