Kako Cistanche sprječava bolest jetre

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Sažetak

Istražiti preliminarne karakteristike, antioksidativno i hepatoprotektivno djelovanje polisaharida izCistanche deserticola (CDP), tri polisaharidne frakcije, CDP-A, CDP-B i CDP-C, dobivene su sukcesivnom membranskom filtracijom (mikrofiltracija, ultrafiltracija i nanofiltracija). Analizirane su molekularne težine, sastavi monosaharida, čistoće i IR spektri triju frakcija. Rezultati su pokazali da CDP-C sadrži veći udio galakturonske kiseline (GalUA) od CDP-B i CDP-A. Također su analizirane antioksidativne aktivnosti i rezultati su otkrili da CDP-C ima najveću aktivnost. Stoga je dalje proučavano hepatoprotektivno djelovanje CDP-C. In vitro istraživanja, CDP-C je pospješio održivost HepG2 stanica. Istraživanje in vivo, CDP-C je ublažio promjene izazvane alkoholom, uključujući serološke indekse (alanin transaminazu, kiselu fosfatazu, -glutamil transpeptidazu i trigliceride) i jetrene pokazatelje (superoksid dismutaza, malondialdehid, glutation S-transferaza i triglicerid) u modelu životinje. Izražena mikrovezikularna steatoza i blaga nekroza u jetrenoj histopatologiji modelnih životinja također su oslabljene primjenom CDP-C. Ovi nalazi pokazuju da CDP-C posjeduje hepatoprotektivno djelovanje protiv kronične ozljede jetre izazvane alkoholom. Temeljni mehanizam bi mogao biti da CDP-C može smanjiti sadržaj MDA i TG i modulirati aktivnosti odgovarajućeg enzima. Ovo se svojstvo može povezati s GalUA u CDP-C.

Ključna riječ: Cistanche deserticola; polisaharidi; Preliminarne karakterizacije; antioksidans; Hepatoprotektivno djelovanje.

cistanchebienfaitsdeserticola

1. Uvod

Cistanche je višegodišnji holoparazit i uglavnom je rasprostranjen u pustinjskom području sjeverozapadne Kine [1, 2]. Stabljika vrste Cistanche (Orobanchaceae) prvi je put zabilježena u Shen Nongovoj kineskoj Materia Medici. Cistanche se dugo koristi kao tradicionalni biljni lijek za liječenje nedostatka bubrega, impotencije, staračkog zatvora, bolova i slabosti u struku i koljenima te nedostatka krvi [3, 4]. Farmakološka istraživanja otkrila su da Cistanche ima protuupalno djelovanje [5, 6], djelovanje protiv osteoporoze [7, 8], sedativno djelovanje [9], djelovanje protiv umora [10], neuroprotektivno djelovanje [11]. Osim toga, polisaharidi iz Cistanche deserticola (CDP) imaju antihiperglikemijske i hipolipidemijske učinke [12], imunološku aktivnost [13] i proliferacijski učinak na limfocite [14].

Alkohol, piće koje se konzumira diljem svijeta, i aditiv u hrani uzrokovao je gotovo 2,5 milijuna smrti svake godine u svijetu [15, 16]. Te su smrti uglavnom povezane s bolešću jetre izazvanom zlouporabom alkohola [17, 18]. Bolest jetre izazvana alkoholom složena je višestupanjska kronična progresija, koja se normalno razvija od alkoholne steatoze do alkoholnog hepatitisa i konačno do alkoholne ciroze [19]. Stoga je prepoznavanje aktivnih prirodnih proizvoda za one konzumente alkohola kako bi se spriječilo ili usporilo napredovanje alkoholne ozljede jetre u ranoj fazi korisna strategija upravljanja.

Cistanche deserticola YC Ma i Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight dvije su ljekovite vrste zabilježene u Kineskoj farmakopeji [3]. Mnogi su radovi razjasnili hepatoprotektivno djelovanje C. tubulosa [20-24] i C. deserticola [25, 26]. Ali ova hepatoprotektivna istraživanja uvijek su bila usmjerena na akutnu ozljedu jetre izazvanu ugljičnim tetrakloridom (CCl4) ili D-galaktozaminom i lipopolisaharidom, ali nisu se bavila kroničnom ozljedom jetre povezanom sa zlouporabom alkohola. Osim toga, ova su izvješća bila uglavnom usmjerena na mehanizam feniletanoidnih glikozida (PhG), a ne na CDP. Stoga su u ovoj studiji ispitane preliminarne karakterizacije CDP-a i njihove antioksidativne aktivnosti (in vitro). Štoviše, uspostavljen je model ozljede jetre ICR miševa izazvane bijelim alkoholnim vinom kako bi se ispitala hepatoprotektivna aktivnost CDP-a protiv kronične ozljede jetre izazvane alkoholom.

cistanche i ekstrakt herba tongkat ali

2. Materijali i metode

2.1. Materijali

Stabljike C. deserticola sakupljene su iz Alashan lige, unutarnja Mongolija u Kini,i identificirao ga je prof. Xiaodong Wang (Odjel za inženjerstvo biorafinerije, Institut za procesno inženjerstvo, Kineska akademija znanosti, Peking, NR Kina).

Dimetil sulfoksid (DMSO), 2, 2-azino-bis (3-etilbenztiazolin-6-sulfonska kiselina) (ABTS), 3-(4, 5-dimetiltiazol{ {8}}il)-2, 5-difeniltetrazolij bromid (MTT) i 1, 1-difenil-2-pikril-hidrazil (DPPH) kupljeni su od Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, SAD). Dulbeccov modificirani Eagle Medium (DMEM) i fetalni goveđi serum (FBS) kupljeni su od Invitrogen, Inc. Er Guo-tou white spirit je kupljen od Beijing Red Star Co., LTD. Bicyclol je kupljen od Beijing Union Pharmaceutical Factory. Vodene otopine pripremljene su s ultra čistom vodom iz Milli-Q sustava za pročišćavanje vode (Millipore, Bedford, MA, SAD). Svi ostali reagensi bili su analitičke kvalitete.

2.2. CDP ekstrakcija i frakcijska filtracija

Sirovi CDP-ovi pripremljeni su u skladu s prethodno objavljenom metodom naše skupine [27] uz male modifikacije. Ukratko, prah (40 mesh) C. deserticola (50 kg) je ultrazvučno (40 kHz i 6 kW) ekstrahiran s 1000 L vodene otopine etanola (50 posto, v/v) na 60 ◦C tijekom 120 minuta. Polisaharidi su iz ekstrakta odvojeni makroporoznom smolom (HPD 300). Otopina polisaharida koncentrirana je pod sniženim tlakom, deproteinizirana Sevagovom metodom [28], a proizvod osušen smrzavanjem nazvan je sirovi CDP.

Zatim je 50 g sirovog CDP-a otopljeno u 2,5 L ultračiste vode i uzastopno odvojeno mikrofiltracijom, ultrafiltracijom i nanofiltracijom (granične vrijednosti nominalne molekularne težine bile su 300 kDa, 10 kDa i 200 Da. Učinkovita membrana površina je bila 0,625 m2). Zaostala otopina mikrofiltracije je liofilizirana i nazvana CDP-A. Propuštena otopina mikrofiltracije filtrirana je ultrafiltracijom, dok je zaostala otopina liofilizirana i nazvana CDP-B. Propuštena otopina ultrafiltracije je filtrirana nanofiltracijom, zadržana otopina je liofilizirana i nazvana CDP-C.

2.3. Preliminarne karakterizacije CDP-ova

Molekularne veličine CDP-a procijenjene su prema prethodno objavljenoj metodinaša grupa [29]. Sastav monosaharida analiziran je metodom koju su opisali P. Zhang et al [30]. Čistoće su određene metodom fenol-sumporna kiselina [31]. Sadržaj proteina određen je metodom koju spominju Bradford i Maja Kozarski [32, 33]. FT-IR spektri CDP-a snimljeni su infracrvenim spektrometrom Fourierove transformacije (FT/IR-660 Plus, JASCO) u rasponu od 400~4000 cm-1.

2.4. Antioksidativne aktivnosti

Učinci čišćenja CDP-a na hidroksil, superoksidni anion, DPPH i ABTS radikale procijenjeni su prema metodama koje su opisali Sun [34], Wang [35], Yap [36] i Fatiha [37].

cistanche erektilna disfunkcijazabubreg

2.5. Hepatoprotektivna aktivnost CDP-C in vitro

Na temelju rezultata antioksidativnog testa, CDP-C je odabran za proučavanje hepatoprotektivnog djelovanja. HepG2 stanice (kupljene od Kineskog centra za prikupljanje tipskih kultura, Peking, Kina) uzgajane su u DMEM-u koji je sadržavao FBS inaktiviran toplinom (10 posto), streptomicin (0,1 ug/mL), penicilin (100 IU/mL), i neesencijalne aminokiseline. Stanice su inkubirane u vlažnoj atmosferi s 5 posto CO2 na 37 stupnjeva, sakupljene u fazi eksponencijalnog rasta, nasađene u 96-pločice s jažicom (4×104 stanica po jažici, 100 μL) i inkubirati 24 h. Stanice negativne skupine tretirane su alkoholom (konačna koncentracija bila je 3,5 posto, v/v), dok je naivna skupina tretirana vodom. Stanice pozitivne skupine tretirane su alkoholom i biciklolom (konačna koncentracija bila je 200ug/mL). Stanice četiri ispitivane skupine tretirane su alkoholom i CDP-C (konačna koncentracija CDP-C bila je 0,11, 0,3333, 1,00 i 3,00 mg/mL). Sve su stanice kultivirane još 48 h.

Viabilnost HepG2 stanica određena je metodom MTT testa koju su spomenuli J. Tong i suradnici [38] uz male modifikacije. Ukratko, MTT (5 mg/mL, 20 µL po jažici) dodan je u ploče sa 96-jažicama sa stanicama, a stanice su inkubirane 4 h. Otopine su uklonjene i dodan je DMSO (150 μL/jažici). Apsorpcija svake jažice izmjerena je na 492 nm upotrebom 96-čitača ploče za jažice (Thermo Scientific, Amerika). Viabilnost stanica izračunata je pomoću sljedeće formule:

Preživljavanje stanica ( postotak )=(A uzorak - Prazno) ×100/ (A naivno - Prazno)

Gdje je uzorak A bio apsorbancija pokusne skupine; Naivna je bila apsorbancija kontrolne skupine bez uzorka; Prazna proba bila je apsorbancija medija kulture bez uzorka i nasađenih stanica.

2.6. Hepatoprotektivna aktivnost CDP-C in vivo

2.6.1. Životinje

Korištene su odrasle ženke ICR miševa (22-25 g, kupljene od Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. Broj dozvole za životinje bio je 11400700128). Životinje su bile smještene u prostoriji s kontroliranim okolišem s hranom i vodom ad libitum (relativna vlažnost bila je 40-60 posto, 22-26 stupanj), ventilacija zraka 12-18 puta/h i uvjeti svjetlosnog zračenja bio je 12-satni ciklus svjetlo/tama od 150-300 luksa. Miševi su aklimatizirani na uvjete u sobi za životinje 7 dana prije pokusa. Svi postupci koji uključuju životinje tijekom pokusa provedeni su u strogom skladu s pravilima za korištenje laboratorijskih životinja koja su usvojena i objavljena od strane Nacionalnog instituta za zdravlje Sjedinjenih Država.

2.6.2. Eksperimentalni dizajn

ICR miševi su nasumično podijeljeni u šest skupina (naivna skupina, negativna kontrolna skupina, pozitivna kontrolna skupina i tri testne skupine) s 10 životinja u svakoj skupini. Naivna skupina oralno je davana destiliranom vodom. Negativnoj kontrolnoj skupini oralno je primijenjen alkohol (Er Guo-tou white spirit, 56 posto, 6 mL/kg). Pozitivnoj kontrolnoj skupini oralno je primijenjen biciklol (300 mg/kg) i 5 sati kasnije alkohol. Trima ispitivanim skupinama oralno je primijenjen CDP-C u dozi od 200, 600, 1800 mg/kg, a 5 sati kasnije i alkohol. Svi miševi su davani 31 uzastopni dan.

2.6.3. Određivanje seroloških indeksa

Otprilike 4 sata nakon posljednjeg alkoholiziranog tretmana krv je sakupljena iz očne duplje i centrifugirana na 3000 g tijekom 15 minuta. Nakon što je serum odvojen, enzimske aktivnosti alanin transaminaze (ALT), kisele fosfataze (ACP), -glutamil transpeptidaze (-GTP) i triglicerida (TG) određene su pomoću dijagnostičkih pribora.
2.6.4. Određivanje jetrenih pokazatelja

Nakon prikupljanja krvi, svi miševi su pogubljeni. Jetra svakog miša je odmah izrezana, isprana fiziološkom otopinom. Komad jetrenog tkiva odvojen je od lijevog režnja. Zatim je tkivo usitnjeno i homogenizirano s vodenom otopinom kalijevog klorida (1,15 posto, w/v) u staklenom homogenizatoru (Potter Elvehjem Teflon) 60 sekundi da se dobije homogenat jetre (10 posto w/v). Aktivnosti enzima superoksid dismutaze (SOD), malondialdehida (MDA), glutation S-transferaze (GST) kao i sadržaja triglicerida (TG) mjerene su dijagnostičkim priborom.

2.6.5. Histopatološke studije

Preostali dio jetre fiksiran je u Bouinovom fiksativu 24 sata, nakon dehidracije upotrebom vodene otopine etanola (50-100 posto, v/v), tkivo jetre je pročišćeno u ksilenu i uklopljeno u parafin. Jetreni presjeci (5 mm) obojeni su alum hematoksilinom i eozinom (HE). Slike presjeka jetre i histopatoloških promjena snimljene su svjetlosnim mikroskopom (Nikon-DS-L1-5M).

2.7. Statistička analiza

Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna pogreška srednje vrijednosti (SEM) iz tri (analiza kemijskog sastava i analiza antioksidansa), pet (preživljavanje stanica) ili deset (in vivo istraživanje) neovisnih eksperimenata. Statistička značajnost razlika između skupina analizirana je jednosmjernom analizom varijance (ANOVA) nakon čega je uslijedio Student-Newman-Keulsov test višestrukih raspona pomoću softvera SPSS 19.0. U svim analizama str<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. Rezultati i rasprava

3.1. Karakterizacije CDP-a

Kao što je prikazano na slici 1A, CDP-A sadrži dvije skupine, molekularne težine su 4000 kDa i 3946 kDa. Molekularne težine CDP-B i CDP-C su 2400 kDa i 1300 kDa. Sastav monosaharida prikazan je na slici 1B. CDP-A, CDP-B i CDP-C sadrže šest esencijalnih monosaharida s različitim udjelima, uključujući manozu (Man), ramnozu (Rha), galakturonsku kiselinu (GalUA), glukozu (Glc), galaktozu (Gal) i arabinozu ( Ara). Osim navedenih šest monosaharida, u CDP-C se pojavljuje i ksiloza (Xyl). Osim toga, CDP-C sadrži veći udio GalUA od druge dvije frakcije.

Čistoće i sadržaj proteina CDP-a prikazani su u tablici 1. Tablica 1 pokazuje da CDP-A ima najveću čistoću, koja iznosi 75,57 posto, dok su čistoće CDP-B i CDP-C 74,72 posto odnosno 68,92 posto. Sadržaj proteina CDP-A, CDP-B i CDP-C je 1,27 posto, 1,24 posto, odnosno 1,05 posto.

Stol 1.Čistoća i sadržaj proteina u CDP-ima. Podaci su srednje vrijednosti ± SEM od tri ponavljanja.

FT-IR spektri ugljikohidrata koriste se za određivanje njihovih strukturnih značajki i obično se koriste za kvalitativnu analizu organskih funkcionalnih skupina, posebno za OH, CO i C=O [39]. FT-IR spektri CDP-a prikazani su na slici 1C. Svaki spektar pokazuje snažan i širok maksimum rastezanja oko 3293 cm−1 za OH vibracije istezanja, kao i slabi apsorpcijski vrh na 2939 cm−1 za CH vibracije rastezanja. Apsorpcijski pojas na 1650 cm−1 uzrokovan je C=O asimetričnom vibracijom istezanja. Široki apsorpcijski pojas na 1418 cm−1 pripisuje se deformirajućoj vibraciji CH veze. Svaki pojedini polisaharid ima specifičnu traku u području 1000-1200 cm−1, kojom dominira vibracija prstena preklapana s vibracijom rastezanja (C-OH) bočnih skupina i vibracijom (COC) glikozidne trake. Apsorpcija na 1036 cm−1 ukazuje na piranozni oblik šećera. Apsorbancija od gotovo 829 cm−1 sugerira povezanost -glikozida u molekularnoj strukturi CDP-a. Kao što je prikazano na slici 1 C, apsorpcijski pojas CDP-C na 1650 cm−1 jači je od CDP-A i CDP-B, što znači da je sadržaj C=O u CDP-C veći od one u CDP-A i CDP-B. Ovaj je rezultat u skladu s rezultatima na slici 1 A, koji otkriva da je udio GalUA u CDP-C veći od onih u CDP-A i CDP-B.

3.2. Antioksidativno djelovanje CDP-a

3.2.1. Određivanje hidroksilnih radikala

Među reaktivnim vrstama kisika, hidroksilni radikal je najreaktivniji i uzrokuje ozbiljno oštećenje susjednih biomolekula [40]. Za hidroksilni radikal postoje dvije vrste antioksidacijskih mehanizama: jedan je čišćenje već stvorenog hidroksilnog radikala, a drugi je suzbijanje stvaranja hidroksilnog radikala. Za potonje, hidroksilni radikal nastaje reakcijom Fe (II) kompleksa s vodikovim peroksidom. Antioksidativne aktivnosti CDP-a mogu vezati metalne ione, koji ne reagiraju s H2O2 i proizvode hidroksilni radikal, već keliraju s CDP-ima i tvore metalni kompleks. Metalni kompleks ne može dalje reagirati s H2O2 dajući hidroksilni radikal [41-43]. Stoga CDP-ovi pokazuju učinke hvatanja hidroksilnih radikala.

Slika 2 A prikazuje kapacitete čišćenja CDP-a na hidroksilnom radikalu na način ovisan o koncentraciji. Stopa čišćenja CDP-A, CDP-B i CDP-C je 29,56 posto, 33,44 posto, odnosno 38,22 posto. CDP-C pokazuje veću aktivnost hvatanja hidroksilnih radikala. Uzimajući u obzir da CDP-C sadrži veći udio GalUA od CDP-A i CDP-B, antioksidansi CDP-a mogu biti povezani ne samo sa svojstvom vezivanja metalnih iona, već i sa sadržajem GalUA, Ara i Gal [{{15 }}].

3.2.2. Određivanje superoksidnog anionskog radikala

Superoksidni anionski radikal je toksična vrsta koja nastaje brojnim biološkim i fotokemijskim reakcijama i time uzrokuje oštećenje tkiva [47]. Iako je superoksidni anion relativno slab oksidans, igra važnu ulogu u stvaranju drugih jačih reaktivnih oksidativnih vrsta, kao što su singletni kisik i hidroksilni radikal [48]. Slika 2 B prikazuje odnos između koncentracija i kapaciteta čišćenja CDP-a na superoksidnim anionskim radikalima. Kako se koncentracija povećava, CDP-C pokazuje veći kapacitet čišćenja od CDP-B i CDP-A.

3.2.3. Određivanje radikala DPPH

DPPH, jedan od stabilnih spojeva s dušikovim središtem koji posjeduje slobodni radikal bez protona s karakterističnom apsorpcijom na 517 nm, značajno se smanjuje pri izlaganju hvatačima protonskih radikala, stoga se naširoko koristi za procjenu aktivnosti hvatanja slobodnih radikala antioksidansa. Dobro je prihvaćeno da su DPPH slobodni radikali koje antioksidansi hvataju zahvaljujući njihovoj sposobnosti doniranja vodika. Antioksidansi prenose ili elektrone ili atome vodika na DPPH radikal i formiraju DPPH-H, koji je ne-radikalska formacija [49].

Ispitani su ukupni učinci čišćenja DPPH svih uzoraka, a rezultati su prikazani na slici 2 C. Sposobnosti čišćenja CDP-a na DPPH radikalu ovise o koncentraciji. Kako se koncentracija povećava s 1.0 na 5.0 mg/mL, sposobnost čišćenja CDP-C raste s 52,5 posto na 58,7 posto, više od CDP-B (s 34,2 posto na 56,8 posto). posto ) i CDP-A (s 12,5 posto na 52,8 posto ). Učinak CDP-C čišćenja DPPH može biti povezan s karbonilnim skupinama u GalUA.

3.2.4. ABTS analiza radikala

ABTS analiza radikala često se koristi za mjerenje ukupne antioksidativne snage snažnog antioksidansa testnih uzoraka [50]. Učinci čišćenja ABTS svih uzoraka prikazani su na slici 2 D. Sposobnosti čišćenja CDP-a na ABTS radikalima ovise o dozi. IC50 za CDP-A, CDP-B i CDP-C su oko 4,0 mg/mL, 2,5 mg/mL odnosno 1,2 mg/mL. Rezultati pokazuju da CDP-i posjeduju aktivnost čišćenja ABTS-a.

Ukratko, antioksidacijska aktivnost CDP-C bila je veća od CDP-A i CDP-B. Izvijestio je da su neke farmakološke aktivnosti polisaharida povezane s GalUA[51]. U ovom eksperimentu, udio GalUA u CDP-C bio je veći od onog u CDP-A i CDP-B, CDP-C je odabran za istraživanje hepatoprotektivnog učinka protiv kronične bolesti jetre izazvane alkoholom.

3.3. Učinci CDP-C na vitalnost HepG2 stanica

Mjerenje vitalnosti stanica uobičajen je način procjene učinkovitosti prirodnih lijekova [52]. Na temelju rezultata da CDP-C posjeduje najveću antioksidacijsku aktivnost, procijenjeni su učinci CDP-C na vitalnost HepG2 stanica. Rezultati su prikazani na slici 3. Liječenjem alkoholom izazvano značajno smanjenje vitalnosti HepG2 stanica. Ali CDP-C može znatno poboljšati stope preživljavanja u usporedbi s negativnom skupinom. Kao što je prikazano na slici 3, vitalnost stanica ne pokazuje točan način ovisan o koncentraciji s CDP-C. Nasuprot tome, kada koncentracija CDP-C dosegne 3.00 mg/mL, vitalnost HepG2 stanica dramatično opada. Razlog smanjenja stanične vitalnosti mogao bi biti taj što je niska koncentracija CDP-C bila korisna za preživljavanje HepG2 stanica. Međutim, kada je koncentracija polisaharida u mediju kulture bila dovoljno visoka da promijeni mikrookruženje stanica, vitalnost stanica HepG2 bila je inhibirana.

3.4. Farmakološki učinci CDP-C

3.4.1. Učinci CDP-C na serološke indekse

Zlouporaba alkohola čini gotovo 4 posto svih stopa smrtnosti, što je postalo ozbiljan društveni problem u svijetu. U ljudskom tijelu alkohol se metabolizira u jetri nakon što se apsorbira kroz sluznicu želuca i tankog crijeva [53-55]. Alkoholne bolesti jetre obično se javljaju nakon godina zlouporabe alkohola [56]. Uobičajena patološka stanja kao što su masna jetra, hepatitis, fibroza i ciroza [57], ili čak i kancerogene bolesti kao što su hepatocelularni karcinom i rak debelog crijeva [58], opažaju se kod poremećaja jetre povezanih s alkoholom. Stoga je alkohol tipičan hepatoksik i naširoko se koristi kao induktor oštećenja jetre u znanstvenim istraživanjima [59]. Uzimajući u obzir da su bolesti jetre izazvane alkoholom često uzrokovane alkoholnim pićima i aditivima u hrani, a ne industrijskim etanolom, stoga je Er Guo-tou white spirit korišten za uspostavljanje modela ozljede jetre kod ICR miševa u ovoj studiji. Biciklol je uobičajeni agens koji se koristi za liječenje kronične ozljede jetre, pa je korišten za postavljanje modela pozitivne kontrole.

Jetrene stanice sadrže veće koncentracije ALT u citoplazmi i mitohondrijima. Zbog različitih oštećenja jetrenih stanica, curenje citosola uzrokovat će povećanje ALT-a u serumu. Stoga je poticanje ALT-a pokazatelj staničnog curenja i funkcionalnih poremećaja jetre [60]. Stoga se razina ALT u serumu obično postavlja kao pokazatelj za procjenu zdravlja jetre [61]. Iz sličnih razloga, -GTP, ACP i TG također se koriste kao pokazatelji za procjenu zdravstvenog stanja jetre [62].

U ovoj studiji, hepatoprotektivna aktivnost CDP-C procijenjena je određivanjem razina ALT, ACP, -GTP i TG. Rezultati su prikazani na sl. 4 A, B, C i D. Četiri serumska pokazatelja drastično poboljšana liječenjem od alkohola u negativnoj skupini. Ali CDP-C može ublažiti ove promjene izazvane primjenom alkohola. Međutim, ne pokazuju svi serološki indeksi ovisnost o dozi s CDP-C. Na slikama 4 A i B, CDP-C u niskoj koncentraciji ima značajan učinak na obnovu ALT i ACP, ali učinak CDP-C u najvišoj koncentraciji nije bio značajan. U stvari, mnogi prirodni proizvodi su korisni za zdravlje u malim dozama, ali su štetni za zdravlje u visokim dozama [60]. Razlog bi mogao biti taj što će prekomjerno uzimanje polisaharida utjecati na normalan metabolizam organizma, pa npr.nepovoljno utjecati na zdravlje organizma. Međutim, detaljan mehanizam treba dodatno istražiti.

3.4.2. Učinci CDP-C na jetrene pokazatelje

Organizmi podložni oksidativnom stresu obično su razvili antioksidativni obrambeni mehanizam, a SOD je tipičan antioksidativni sustav temeljen na enzimima [63]. SOD katalizira dismutaciju superoksidnog aniona u O2 i H2O2 [64]. GST, topljivi protein koji se nalazi u citosolu, također ima važnu ulogu u detoksikaciji jetre. Iz gore navedenih razloga, SOD i GST postaju indikatori hepatotoksičnosti izazvane alkoholom. MDA i TG u jetri također se koriste kao pokazatelji hepatotoksičnosti [65].

U ovoj studiji, učinci CDP-C na funkciju jetre prikazani su na slici 5. Slike A, B, C i D pokazuju učinke CDP-C na SOD, MDA, GST, odnosno TG. Ove četiri slike pokazuju da miševi tretirani alkoholom značajno smanjuju razine SOD i GST, te povećavaju razine MDA i TG, ali CDP-C očito može ublažiti ovu promjenu. Slično fenomenima opisanim u odjeljku 3.4.1, jetreni pokazatelji također nisu bili ovisni o dozi s CDP-C. Razlog za to može biti sličan mehanizmu prikazanom u odjeljku 3.4.1. Prethodne studije su pokazale da bi učinci polisaharida na SOD i katalazu mogli biti povezani s indukcijom genske ekspresije SOD i katalaze [66]. Međutim, potrebna su daljnja istraživanja kako bi se razjasnio hepatoprotektivni mehanizam CDP-C i odnos između njegove strukture i funkcije.

3.5. Histopatološki učinci CDP-C na miševe inducirane alkoholom

Na temelju histopatoloških promatranja na presjecima jetre, naivna skupina pokazala je normalnu staničnu arhitekturu s različitim jetrenim stanicama i bez histoloških abnormalnosti (slika 6 A). Za usporedbu, davanje alkohola uzrokovalo je ozbiljno oštećenje jetre kod miševa negativne skupine. Isječci jetre pokazali su taloženje masnoće u hepatocitima, nekrozu i oticanje hepatocita, stvaranje vakuola u stanicama, a stanične su granice također nestale (slika 6 B). Dijelovi jetre miševa kojima je davan biciklol (Slika 6 C), s različitim dozama CDP-C (Slika 6 DF) pokazali su očito obnavljanje onih distorzija koje su se pojavile u negativnoj kontrolnoj skupini. Ovi rezultati potvrdili su da je alkohol izazvan određenom mjerom distorzije u hepatocitima negativne kontrolne skupine. Međutim, CDP-C je vratio te promjene.

Dobro je prihvaćeno da je hepatoprotektivni učinak polisaharida povezan s njihovim antioksidativnim djelovanjem [67, 68]. Dokazano je da je visok sadržaj uronske kiseline koristan za antioksidativne učinke polisaharida [44, 45]. Također je potvrđeno da polisaharidi bogati Gal i Ara imaju veće antioksidativne učinke [46]. Međutim, velikim molekularnim polisaharidima teško je izravno ući u epitelne stanice crijeva. Za CDP-C (s molekularnom težinom od 1300 kDa), nije lako izravno ući u tijelo i igrati hepatoprotektivnu ulogu. Objavljena izvješća otkrila su da su molekularne težine polisaharida smanjene nakon želučane i crijevne probave [69]. Stoga smo pretpostavili da se CDP-C može razgraditi u polisaharide niske molekularne težine i apsorbirati u crijevnim epitelnim stanicama. Reducirajući krajevi polisaharida mogu se povećati zbog razgradnje glikozidnih veza [69, 70]. Prema monosaharidnom sastavu CDP-C, ti razgrađeni polisaharidi niske molekulske mase trebali bi sadržavati GalUA, Ara i Gal. Stoga ovi polisaharidi niske molekularne težine, koji posjeduju reducirajuće krajeve i sadrže GalUA, Ara i Gal, mogu igrati ulogu zaštite jetre u tijelu. Međutim, detaljan mehanizam treba dodatno istražiti.

4. Zaključci

Prema analizama sastava monosaharida i FT-IR spektra, sve tri frakcije CDP-a sadržavale su Man, Rha, GalUA, Glc, Gal i Ara. CDP-C je sadržavao veliki udio GalUA. CDP-C je imao najveće antioksidativno djelovanje. Rezultati i in vitro i vivo istraživanja pokazali su da CDP-C posjeduje hepatoprotektivno djelovanje protiv kronične ozljede jetre izazvane alkoholom. Temeljni mehanizam bio je povezan s moduliranjem relativnih aktivnosti enzima, smanjenjem MDA i TG u jetri. Fiziološka aktivnost CDP-C mogla bi se povezati s GalUA. Ova otkrića daju nove uvide u farmakološke ciljeve C. deserticola u prevenciji alkoholne bolesti jetre.

Cistanche herbaštitijetraipoboljšava imunitet.

Za više informacija kliknite ovdje.