Visoki P16INK4a, marker stanične senescencije, povezan je s ozljedom bubrega, oštećenjem i ishodom u lupus nefritisu
Mar 24, 2022
CISTANCHE ĆE POBOLJŠATI BOLEST BUBREGA/BUBREGA
UVODLupus nefritis (LN) je teška komplikacija sistemskog eritematosa lupusa (SLE), inicirana taloženjem imunoloških kompleksa ili autoantitijela u glomerularnoj bazalnoj membrani, nakon čega slijedi regrutiranje upalnih stanica."Ozljeda bubregadovodi do nepovratne fibroze, što rezultira gubitkom funkcije bubrega. LN se liječi visokom dozom kortikosteroida i drugih imunosupresivnih sredstava. Trećina oboljelih ipak pokazuje padbubrežna funkcija, s 5%-10% razvija završnu fazuBolest bubregau roku od 10 godina." Stoga se željno traže prognostički markeri koji bi omogućili pravovremenu eskalaciju ili modifikaciju liječenja, kao i novi terapijski ciljevi. Stanična senescencija, potaknuta podražajima kao što su erozija telomera, oksidativni stres i kronična upala, u konačnici dovodi do nepovratnog zastoja rasta nakupljanjem inhibitora kinaze ovisnih o ciklinu (CDK), uključujući pl6Na protein (CDKN2A): glavni zaštitni znak znanosti o staničnim tvarima. Senescentne stanice ostaju metabolički aktivne i prolaze kroz brojne morfološke i fiziološke promjene, uključujući upregulaciju aktivnosti β-galaktozidaze i stjecanje proinflamatornog, profibrotičkog fenotipa senescencije povezanog s senescencijom (SASP)." Iako je bitan u popravku i preuređenju tkiva (npr. Tijekom embriogeneze), stanična senescencija može imati štetne učinke na starenje i kronične bolesti, kao i na rak.' pl6Nk ili β-galaktozidaze pozitivne stanice uočene su u uočene u populaciji i kroničnim bolestima povezanim sa starenjem." pl6Nk ili β-galaktozidaza pozitivne stanice su uočene u kod starijih i kroničnih bolesti povezanih sa starenjem." pl6Nk ili β-galaktozidaza pozitivne stanice su uočene u kod starijih i kroničnih bolesti." pl6Nk ili β-galaktozidaza pozitivne stanice su uočene ububrežnistarenje i određene bolesti bubrega, a bile su povezane s histološkim lezijama ibubrežnioštećenje. Prisutnost pozitivnih stanica β-galaktozidaze u korelaciji s proteinurijom u miševima sklonim MRL/lprlupusu; međutim, stanična senescencija tek treba biti jasno dokazana u pozitivnom LN-u. Ovdje izvještavamo o pojavi pl6ke. stanice u biopsijama bubrega od (n=40) bolesnika s aktivnim LN-om i njegova povezanost sozljeda bubregai funkcionalno oštećenje.
Ključne riječi:funkcija bubrega; bolesti bubrega; biopsije bubrega; ozljeda bubrega; bubrežni
CISTANCHE ĆE POBOLJŠATI DIJALIZU BUBREGA I BUBREGA
METODE:Pacijenti i biopsije bubregaPacijenti su regrutirani na Odjelu za reumatologiju Cliniques Universitaires Saint-Luc (Bruxelles, Belgija). Svi su ispunili revidirane kriterije klasifikacije ACR-a iz 1982. za SLE i imali su LN dokazanu biopsijom. Biopsije bubrega ugrađene u parafin s formalinom (FFPE) bile su rezidualni tjelesni materijal prikupljen u dijagnostičke svrhe između siječnja 1996. i studenoga 2019. Procijenjene vrijednosti brzine glomerularne filtracije (eGFR) izračunate su pomoću formule za suradnju epidemiologije kroničnih bolesti bubrega (CKD-EPI). Pristanak pacijenta nije bio potreban za uporabu rezidualnog tjelesnog materijala, u dogovoru s belgijskim propisima o studijama na ljudima.
Histologija i imunohistokemijaISN/RPS 2003 klasifikacija SLEbubrežnibiopsije, polukvantičinski rezultati skleroze i indeks aktivnosti Nacionalnog instituta za zdravlje (NH) (AI) i indeks kroničnosti (C) izvučeni su iz medicinske dokumentacije. Imunos trening s anti-CD8 (C8/144B, Dako)i anti-p16INK4 (E6H4, Roche Ventana CINtec Histology) i Picrosirius Red (PSR) bojenje izvedeni su na 5μm FFPE serijskim dijelovima. Slajdovi su digitalizirani na skeneru SCN400 (Leica Biosystems, Njemačka) ili Pannoramic Confocal slide scanneru (3DHistech, Mađarska)na×20magnification. Računalno potpomognuta kvantifikacija cijele površine sekcija provedena je pomoću autora V2017.2(Visi Biopharm, Danska). Prikazani rezultati su broj pl6K ili CD8 pozitivnih stanica po μm² tkiva. Polukvantitativni rezultati PSR-a (ljestvica:2-6) su srednji (glomerularni +međuprostorna fibroza) rezultati triju (zaslijepljenih)strijelaca. Dodatne pojedinosti navedene su u internetskim podatnim mentalnim metodama 1, internetska dopunska slika 1.Statističke analizeStatističke analize provedene su na GraphPad Prizm V.9.1.0: Mann-Whitney ili Wilcoxon podudarni par potpisanih testova za usporedbu u dvije skupine, Kruskal-Wallis za usporedbe s više grupa i Spearmanov koeficijent korelacije po redoslijedu ranga.
REZULTATI:p16k4 pozitivne stanice u biopsijama bubrega u bolesnika s aktivnim LN-omProcijenili smo p16Nk protein imunohistokemijom nabubrežnibiopsije uzete pri dijagnozi od 40 bolesnika s aktivnim LN-om, uključujući incidentni nefritis (n = 31) i recidiv (n = 9). Demografski, biološki i klinički podaci sažeti su u internetskoj dopunskoj tablici 1.p16INkA. pozitivne stanice otkrivene su u svemu, ali sa znatnom varijabilnošću između uzoraka: od gotovo nijedne do povremenih raspršenih stanica, do izrazito pozitivnih područja (slika lA, internetska dopunska slika 2A-D). Kvantifikacija pl6staininga potvrdila je heterogenostLN biopsija (raspon: 1,76×10~-260×10~,medijan:14.7×10-stanica/μm)(slika 1B,C). Obojene stanice uključivale su mesangijalne stanice, endotelne stanice ili podocite u glomerulima, parijetalne epitelne stanice u Bowmanovim kapsulama, proksimalne ili distalne cjevaste stanice i intersticijalne stanice (ID slike). Iako je gustoća pl6 pozitivnih stanica(po μmu) bila znatno veća u glomerulima nego u interstitiju (slika 1C), te su vrijednosti(po uzorku)pokazale značajnu pozitivnu korelaciju(r=0,7591, p<0.0001)(online supplemental="" figure="" 3).="" importantly,="" pl6ka="" accumulation="" was="" not="" associated="" with="" patient="" age,="" gender,="" or="" ethnicity="" (online="" supplemental="" figure="">
CISTANCHE ĆE POBOLJŠATI INFEKCIJU BUBREGA/BUBREGA
p16"K4 povezan je s oštećenjem bubrega na početku i 5 godina nakon tretmanap16INKEa pozitivnost bila je značajno povezana s oštećenim osobamabubrežna funkcija: biopsije pacijenata s eGFR-om<60 at="" the="" time="" of="" sampling="" had="" significantly="" higher="" pl6inf-positive="" cells/μm²，="" and="" conversely，="" samples="" with="" high(="">75. percentil)p16a bili su povezani sa znatno nižim osnovnim eGFR-om (slika 2AB). Povezanost s eGFR-om vrijedila je i za glomerularnu i za međuprostornu pl6a (internetska dopunska slika 5A,B). Zanimljivo je da je visoki glomerularni p16 također bio povezan sa znatno većom proteinurijom (omjer mokraćnih proteina i kreatinina), koji uglavnom odražava glamur -nije bio (internetska podatna ozljeda, međuprostorna pl6ka mentalna figura 5C,D). Za razliku od njegove povezanosti s nije bilo povezano sa siromašnimabubrežna funkcija,pl6NK4a parametri sistemskih bolesti kao što su serumski anti-dvolančani DNA antitijela ili C3 razine, ili s KLASIFIKACIJOM ISN/RPS (internetska dopunska slika 6A-D). Nešto (neznatno)veći pl6k primijećen je u biopsijama bolesnika s duljim trajanjem između SLE i LN dijagnoze, te u recidivu u usporedbi s incidentnim nefritisom (online dopunska slika 7A, B). Važno je napomenuti da je analiza samo incidenata LN slučajeva potvrdila povezanost između pl6 i eGFR(internetska podatna-mentalna brojka 7C), što sugerira da ne ovisi samo o trajanju bolesti bubrega. Konačno, visoka p16Nkia u osnovnim biopsijama također je bila povezana s nižim eGFR-om nakon 5 godina nakon tretmana (ali ne i na godinu), što sugerira da može biti prediktivno za loše dugoročno razdobljebubrežnievolucija (slika 2C,D).
Slika 1 p16NK43 pozitivne stanice u biopsijama bubrega od bolesnika s aktivnim LN. (A) p16, CD8 i PSR bojenje FFPE serijskih dijelova iz biopsije LN bubrega. Pregled (lijeve ploče), krupni plan (desno)koji prikazuje p16 pozitivne stanice unutar glomerulusa, periglomerularne CD8 pozitivne stanice i naslage kolagena u Bowmanovoj kapsuli istog glomerulusa i oko nje. (B) Kvantifikacija p16xa (pozitivne stanice/μm²showing stupanj heterogenosti među uzorcima. (C) Kvantifikacija broja p16< （positive="" cells/um²）="" in="" glomerular="" vs="" interstitial="" areas="" of="" the="" same="" samples.p-value:="" wilcoxon="" matched-pair="" signed-rank="" test.="" (d)="" representative="" image="" from="" a="" sample="" showing="" p16-positive="" cells="" within="" glomeruli="" (#),="" in="" bowman's="" capsules="" (filled="" star),="" proximal="" tubules(filled="" arrow),="" distal="" tubules(arrow)="" and="" dispersed="" in="" the="" interstitium="" (arrowhead).ffpe,="" formalin-fixed="" paraffin-embedded;="" ln,="" lupus="" nephritis;="" psr,="" picrosirius="">
p16NK43 povezan je s infiltracijom bubrežnih CD8* T stanica i p16Ma fibrozomPokazano je da su CD8tTlymphocyte prevladavajući tip imunoloških stanica koji se infiltrira u LN bubreg i da je njihova prisutnost povezana sBolest bubregaozbiljnost Otkrili smo da su biopsije visoke pl6 pokazale znatno veću infiltraciju CD8t T stanica (slika 3A). Također su bili značajno povezani s povećanom fibrozom: kolagen
taloženje kako se odražava polukvantitativnim rezultatima PSR bojenja, te skleroza i NH CI rezultati koje daje neuropatolog (slika 3B-D). Nasuprot tome, ocjene NIH AI nisu se značajno razlikovale između p16INK4a s grupa (podaci nisu prikazani). Zanimljivo je da smo u ispitivanju dijelova tkiva primijetili ono što se činilo kao prostorna kodistribucija između jakog pl6k bojenja (koje je obično bilo glomerularno) i grupiranih CD8 pozitivnih stanica (najčešće periglomerularnih)u određenim LN biopsijama (slika IA, mrežna dopunska slika 2). Mi, dakle. kvantificiran broj CD8* T stanica smještenih u radijusu od 30 μm oko svakog glomerulusa, debljinu bowmanove kapsule i broj pl6k pozitivnih stanica unutar nje (online dopunska slika 1). To je učinjeno na svim glomerulima vidljivim na tri serijska dijela, u svim uzorcima. Glomeruli s visokom akumulacijom stanica pozitivnih na pl6K4 pokazala je znatno veće perigo-makularne CD8 T stanice (slika 3E), kao i povećanu debljinu Bowmanovih kapsula, odražavajući glomerularnu fibrozu (slika 3F).
DISKUSIJAOvo je prva demonstracija, u velikom nizu pacijenata, da je pl6Na, glavno obilježje stanične senescencije, povezano s težinom bolesti u LN-u. IHC za pl16 proteina široko se koristi za procjenu senescencije ex vivo, a povezan je s težinom drugihbubrežnibolesti."Pokazalo se da selektivna eliminacija pl6 pozitivnih stanica u mišjim modelima starenja i inducirane nefropatije štoviše ublažava fibrotičke lezije i poboljšavabubrežna funkcija", predlažući ključnu ulogu ububrežnipatogeneza. Zašto se stanična senescencija može pojaviti u LN-u nije poznato. Upalno, oksidativno okruženje LN bubrega može biti izvor staničnog stresa. Nekoliko proinflamatornih čimbenika uključeno je u indukciju senescencije,14 inčanstve interferon-B3koji je povezan sa senescentnim fenotipom mezenhimalnih matičnih stanica koštane srži od pacijenata sa SLE15Iako naša studija naglašava značajnu povezanost između obilja pl6 pozitivnih stanica i LN ozbiljnosti, upotreba dodatnih markera stanične senescencije, u većoj skupini, bit će ključna za potvrdu njegove važnosti u LN-u. Ako i kako stanična senescencija doprinosi progresiji bolesti (ili jednostavno odražava ozljedu tkiva) ostaje za istražiti. Štetan učinak može se izvršiti kroz profibrotski, proinflam-matory sekretom (SASP) tipičan za senescentne stanice. U skladu s ovom hipotezom opisujemo usku prostornu kodistribuciju između pl6Nk pozitivnih stanica, fibroze i infiltracije CD8* T stanica u LN bubrege. Drugi patogeni mehanizam može uključivati nakupljanje funkcionalno nesposobnih stanica, na primjer,bubrežnipreteče(RPC, podskup parijetalnih epitelnih stanica smještenih u Bowmanovoj kapsuli glomerulija)."" Dok zdravi RPC-ovi regeneriraju glomerularne i cjevaste struc-ture zahvaljujući njihovoj sposobnosti da se razmnožavaju i razlikuju-entiate ububrežnistanične podskupine,"senescentni RPC-ovi mogli bi ometati popravak tkiva." Konačno, iako je SASP djelomično-ularno prikladan za uključivanje immumnog sustava (uključujući CD8t T limfocite)'8 za čišćenje senescentnih stanica, potonji može povećati proces inhibiranjem cito liičnog celka." Sugerira se da postojanost senescentnih stanica (zbog silnog ili inhibicije immnog odgovora) daje ravnotežu od pozitivnog do negativnog utjecaja." Daljnji in vitro eksperimenti bit će potrebni kako bi secirala uloga pl6Nk-pozitivnih stanica u patogenezi LN-a. To može imati važne implikacije na terapiju, prva pilot studija s otvorenom oznakom koja koristi senolitičke lijekove dasatinib plus kvercetin (DQ) pokazala je obećavajuće rezultate u idiopatskoj plućnoj fibrozi i dijabetičkoj bolesti bubrega.Konačno povezanost visoke osnovne linije pl6INk4 s oštećenim osobamabubrežna funkcija5 godina nakon liječenja initia tion sugerira da može biti obećavajući prediktor težine bolesti. Bilo bi zanimljivo procijeniti pl6 i njegove povezane markere (fibroza i infiltracija CD8 T stanica)u jednogodišnjim biopsijama praćenja, kao i u većoj skupini, jer evolucija tih markera od osnovne do lijerske kosti može bolje odražavati odgovor na liječenje od bilo koje vremenske točke.
