Određivanje pet komponenti u Rehmannia Glutinosa i utvrđivanje HPLC otiska prsta

Sažetak:Metoda određivanja sadržaja pet komponenti uRehmannia glutinosa, naime,remanozid D, Leonurin,ehinakozid,cistanhezid Aiverbaskozid, te je uspostavljen otisak prsta Rehmannia glutinosa visoke izvedbe tekućinskom kromatografijom (HPLC) kako bi se osigurala znanstvena osnova za kontrolu kvalitete Rehmannia glutinosa. Korištena je kolona Shiseido CAPCELL PAK C18, s acetonitrilom-0.1% otopinom mravlje kiseline kao mobilnom fazom, gradijentom eluacije, temperaturom kolone od 30 stupnja, određivanjem varijabilne valne duljine i brzinom protoka od 1,0 mL/min. HPLC otisak Rehmannia glutinosa analizirao je "Kromatografski sustav za procjenu sličnosti otiska prsta kineske medicine (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0), RSD testa preciznosti, testa ponovljivosti i testa stabilnosti bio je 0.12%~1.58%, a prosječna stopa oporavka uzorka bila je 96.5% ~98,6%; utvrđeni HPLC otisak bakterije Rehmannia glutinosa identificirao je 23 zajednička vrha, a sličnost između uzorka bakterije Rehmannia glutinosa i kontrolnog otiska bila je 0.904~0.950. Rezultati sugeriraju da su uspostavljena metoda određivanja sadržaja i HPLC otisak prikladni za procjenu kvalitete Rehmannia glutinosa i identifikaciju sirove Rehmannia glutinosa i kuhane Rehmannia glutinosa, s visokom točnošću i dobrom ponovljivošću, te mogu pružiti tehničku podršku za kontrolu kvalitete Ljekovite tvari Rehmannia glutinosa.

Ključne riječi:Rehmannia glutinosa; određivanje sadržaja; otisak prsta; ocjena kvalitete

NOVA BILJA CISTANCHE SAEHINAKOZID,CISTANCHESIDE AIVERBASKOZIDE

Rehmannia glutinosaje svježi ili osušeni gomolj korijena biljke Scrophulariaceae Rehmannia glutinosa Libosch. Zbog različitih načina obrade uglavnom se dijeli na svježu remaniju, sirovu remaniju i kuhanu remaniju [1-2]. Glavna proizvodna područja su Henan, Shanxi, Shaanxi itd. zemlja. Među njima, sirova rehmannia glutinosa ima učinke uklanjanja topline i hlađenja krvi, njeguje yin i potiče proizvodnju tekućine, a uglavnom se koristi za liječenje topline u krvi, toplih toksina i mrlja, itd.; kuhana rehmannia glutinosa ima učinke hranjenja krvi i yina, obnavljanja esencije i obnavljanja koštane srži, a uglavnom se koristi za liječenje nedostatka krvi, kloroze itd. Palpitacije, nemir itd.[1-2]. Imaju različita svojstva i okuse, ali oba pripadaju meridijanima jetre i bubrega. Rehmannia glutinosa sadrži složene kemijske komponente, uglavnom uključujući iridoide, ionone, feniletanol glikozide, flavonoide itd. [3-5].

Nakon što se Rehmannia glutinosa obradi različitim metodama obrade, vrste, sadržaji i udjeli kemijskih komponenti u svakom prerađenom proizvodu uvelike variraju, što rezultira značajnim razlikama u njezinoj farmakološkoj aktivnosti [6-10]. prema

Povezane studije [11-12] pokazuju da su se u procesu promjene Rehmannia glutinosa iz "sirovog" u "kuhani", sadržaji kemijskih komponenti kao što su katalpol, matičnjak, stahioza i aminokiseline značajno smanjili, a sadržaji fruktoze, 5-hidroksimetilfurfurala itd. Značajno su povećani sadržaji , izorebaskozida itd. Trenutno, kontrola kvalitete sirove i kuhane rehmannia glutinosa uglavnom koristi sadržaj katalpola i rehmanniasida D kao pokazatelja procjene. Pokazatelji sustava ocjenjivanja relativno su jedinstveni, što otežava sveobuhvatnu kontrolu kvalitete rehmannia glutinosa. Osim toga, studije su pokazale da se sadržaj rehmannia glutinosa D mijenja prije i nakon obrade. Mali je i ima slabu specifičnost u karakterizaciji promjena sastava nakon obrade i stupnja obrade [12-13].

Stoga, kako bi se cjelovitije procijenila kvaliteta Rehmannia glutinosa, ova je studija utvrdila odnos između rehmanniasida D i Yimua u Rehmannia glutinosa.

Metode određivanja sadržaja pet uobičajenih komponenti, uključujući glukozid, ehinaceazid, cistanheozid A i verbaskozid, i uspostavljen HPLC otisak prsta Rehmannia glutinosa za analizu sadržaja glavnih komponenti u Rehmannia glutinosa iz različitih proizvodnih područja te prije i poslije prerade, u svrhu pružanja informacija za kontrolu kvalitete Rehmannia glutinosa. Tehnička podrška.

Instrumenti, reagensi i ispitivani lijekovi

Agilent 1260 tekućinski kromatograf visoke učinkovitosti (detektor je niz dioda); elektronička analitička vaga promjenjivog raspona (METTLER TOLEDO); digitalni ultrazvučni čistač (Shanghai Ultrasonic Instrument Factory, KH-500DE). Metanol (Sinopharm Group) je analitički stupanj; acetonitril (Merck) je kromatografski stupanj; voda je Watsons flaširana voda. Referentna tvar Rehmannia glutinosa D (broj serije RFSD8401909016, čistoća 98,0%), referentna tvar leonurus glikozid (broj serije RFS-Y22002208010, čistoća 98,0%) i referentna tvar cistanhezid A (serija broj RFS-R05002009014, čistoća 96,0%) svi su kupljeni od Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.; Referentna tvar ehinakozid (broj serije 111670-201907, čistoća 91,8%) i referentna tvar verbaskozid (broj serije 11530-201914, čistoća 95,2%) kupljeni su od kineskih Instituta za inspekciju hrane i lijekova. Uzorci Rehmannia (SX1~SX4, HN1 i HN2) prikupljeni su iz različitih proizvodnih područja (vidi tablicu 1), od kojih su SX4 i HN2 obrađeni na pari od strane SX1 odnosno HN1, a SX2 i SX3 prikupljeni su iz istog proizvodnog područja. Sve je uzorke identificirao kao autentične Song Pingshun, glavni praktičar kineske medicine Instituta za kontrolu droga provincije Gansu.

Tablica 1 Podaci o uzorcima sjemena Rehmanniae

2.1 Kromatografski uvjeti

Korištena je kolona Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 mm×4,6 mm, 5 μm), kao mobilna faza A korišten je acetonitril, a kao mobilna faza B 0,1% otopina mravlje kiseline Uvjeti gradijenta eluiranja bili su: 0-3 min, 1%A; 3-9 min, 1%A→5%A; 9-24 min, 5%A→35%A; 24-35 min, 35%A→65%A; 35-40 min, 65%A→90%A. Detekcija varijabilne valne duljine (0-24 min, 203 nm; 24-40 min, 330 nm). Volumen injekcije bio je 15 μL referentne otopine i 20 μL otopine uzorka.

2.2 Priprema otopine

2.2.1 Priprema referentne otopine

Uzmite odgovarajuće količine gornjih pet referentnih tvari, dodajte 70% metanola kako biste pripremili miješanu referentnu otopinu s masenom koncentracijom od 0,4 mg/mL.

2.2.2 Priprema ispitne otopine

Izvažite oko 1.0 g Rehmannia praha (propuštenog kroz sito br. 2), točno izvažite, stavite u začepljenu čunjastu tikvicu, točno dodajte 25 mL 70% metanola, zatvorite, izvažite, ultrazvučno tretirajte (snaga 300 W, frekvencija 50 kHz) 30 minuta, pustiti da se ohladi na sobnu temperaturu, ponovno izvagati, nadoknaditi izgubljenu masu 70% metanolom, filtrirati i uzeti filtrat da se dobije.

2.3 Metodološka istraživanja

2.3.1 Istraživanje specifičnosti

Uzmite miješanu referentnu otopinu pod "2.2.1" i ispitnu otopinu (uzorak SX1) pod "2.2.2", te ubrizgajte i izmjerite u skladu s kromatografskim uvjetima pod "2.1". Rezultati pokazuju da kromatogram uzorka Rehmannia predstavlja kromatografski maksimum s istim vremenom zadržavanja kao referentni standardi Rehmannia glutinosa D, Leonurin, Echinacoside, Cistanche deserticola A i Verbascoside (vidi sliku 1), što ukazuje da ova metoda ima jaku specifičnost.

2.3.2 Istraživanje linearnog odnosa

Dodajte 70% metanola u miješanu referentnu otopinu, razrijedite 5 puta, 10 puta, 25 puta, 50 puta, 100 puta i 250 puta, te ubrizgajte i izmjerite u skladu s kromatografskim uvjetima pod "2.1". Standardne krivulje nacrtane su s masenom koncentracijom svake reference kao vodoravnom osi (x) i odgovarajućom površinom kromatografskog vrha kao okomitom osi (y). Rezultati su prikazani u tablici 2, pokazujući da svaka komponenta ima dobar linearni odnos unutar odgovarajućeg raspona masene koncentracije.

1. remaniozid D; 2. leonurid; 3. ehinakozid; 4. kastanozid A;5. akteozid

Slika 1. Kromatogrami ispitivanja specifičnosti

Tablica 2. Linearni odnos 5 komponenti sjemena Rehmanniae

2.3.3 Precizno istraživanje

Uzmite ispitnu otopinu (uzorak SX1) pod "2.2.2" i provedite test injekcije u skladu s kromatografskim uvjetima pod "2.1". Ubrizgajte uzorak 6 puta kontinuirano, zabilježite površinu vrha svake komponente i izračunajte RSD površine vrha rehmannia glutinosa D, glikozida matičnjaka, glikozida ehinaceje, glikozida cistanhe A i verbaskozida u ispitnom uzorku da bude 0. 46%, 0.12%, 0.85%, 0.48%, odnosno 0.82%, što ukazuje da instrument ima dobru preciznost.

2.3.4 Studija ponovljivosti

Šest uzoraka istog uzorka korijena Rehmannia (SX1) pripremljeno je paralelno prema metodi u "2.2.2" i ubrizgano i određeno prema kromatografskim uvjetima u "2.1". RSDs sadržaja glikozida korijena remanije D, glikozida matičnjaka, glikozida ehinacee, glikozida cistanke A i verbaskozida u šest uzoraka iznosio je 0,46%, 0,69%, 1,42%, {{ 12}}.48% odnosno 1.58%, što ukazuje da metoda ima dobru ponovljivost.

2.3.5 Studija stabilnosti

Uzmite ispitnu otopinu (uzorak SX1) pod "2.2.2" i ubrizgajte i izmjerite u skladu s kromatografskim uvjetima pod "2.1" na 0 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 1{{ 15}} h, 12 h, 18 h, odnosno 24 h. RSD područja vrha rehmannia glutinosa D, glikozida matičnjaka, ehinakozida, cistanhe glikozida A i verbaskozida iznosi 0.94%, 1.04%, 0.73% 0,83%, odnosno 0,71%, što pokazuje da testna otopina ima dobru stabilnost unutar 24 sata.

2.3.6 Stopa iskorištenja uzorka

{{0}}.5 g uzorka korijena Rehmannia (SX1) s poznatim sadržajem 5 komponenti točno je izvagano u začepljenu konusnu tikvicu i dodano je 6 paralelnih obroka te je dodano 5 referentnih otopina određenih koncentracija odnosno. Uzorci su pripremljeni prema metodi pod "2.2.2", a uzorci su injektirani i izmjereni prema kromatografskim uvjetima pod "2.1". Izračunata je stopa iskorištenja, a rezultati su prikazani u tablici 3. Prosječna stopa iskorištenja uzorka za svaku komponentu bila je 96,5%~98,6%, a RSD je bio 0,73%~1,52%, što pokazuje da metoda ima dobru točnost.