Određivanje sadržaja pet spojeva u sjemenu Rehmanniae i utvrđivanje njegovog HPLC otiska

Tablica 3 Rezultati testa oporavka (n=6)

2.4 Određivanje uzorka

Šest sakupljenih serija Rehmannia pripremljeno je u skladu s metodom pod "2.2.2" te uzorkovano i određeno prema kromatografskim uvjetima pod "2.1". Rezultati određivanja sadržaja prikazani su u tablici 4. Rezultati pokazuju da je među pet komponenti sadržaj remanijevog glikozida D najveći, u rasponu od 0,460% do {{1 0}}.730%; sadržaj leonuri glikozida je drugi, u rasponu od 0,100% do 0,270%, a sadržaj dviju komponenti u uzorcima iz različitih proizvodnih područja nije značajno različit. U uzorku SX1, osim ehinakozida, sadržaji ostale četiri komponente značajno su viši nego u drugim serijama uzoraka; sadržaji ehinakozida, cistanhezida A i verbaskozida u Rehmannia glutinosa iz različitih proizvodnih područja dosta su različiti i nepravilni.

CISTANCHE HERB SODOBRA KVALITETA KONSISTENCIJE

2.5 Određivanje i procjena sličnosti HPLC otiska Rehmannia glutinosa

Kromatogrami i podaci o određivanju višekomponentnog sadržaja u Rehmannia glutinosa uvezeni su u softver "Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity System (2012 Edition)" i odabran je kromatogram testnog uzorka SX1 kao referentni spektar. Širina vremenskog prozora postavljena je na 0.10 min, a metoda medijana korištena je za generiranje superponiranih spektara i referentnih spektara. Identificirana su ukupno 23 zajednička vrha (vidi sliku 3). Sličnost između otisaka prstiju uzorka Rehmannia glutinosa i referentnog uzorka bila je 0,904~0,950, što ukazuje da su uzorci Rehmannia glutinosa iz različitih proizvodnih područja te između sirove Rehmannia glutinosa i kuhane Rehmannia glutinosa bili slični i imali dobru konzistenciju.

Tablica 4. Rezultati određivanja sadržaja 5 komponenti u sjemenu Rehmanniae/%

13. remaniozid D; 17. leonurid; 19. ehinakozid; 20. kastanozid A; 21. akteozid

Slika 3 Prekrivanje HPLC kromatograma 6 serija sjemena Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) i reference (R)

3 Rasprava

3.1 Odabir kromatografskih uvjeta

U ovoj studiji ispitana su četiri sustava mobilne faze, acetonitril-voda, acetonitril-0.1% otopina mravlje kiseline, metanol-voda i metanol-0.1% otopina mravlje kiseline. Rezultati su pokazali da je pet komponenata imalo dobre učinke odvajanja u acetonitrilnom sustavu; u usporedbi sa sustavom mobilne faze acetonitril-voda, vrhovi glikozida rehmannia glutinosa i matičnjaka u mobilnoj fazi acetonitril-0.1% otopine mravlje kiseline bili su uži i imali su dobru simetriju vrhova. Istodobno, zbog različite ultraljubičaste apsorpcije pet komponenti, sadržaj komponenti jako varira. Kako bi se točnije odredio sadržaj svake komponente i kako bi se osiguralo da je intenzitet apsorpcije pet komponenti ravnomjerno raspoređen u istom kromatogramu, ultraljubičasta apsorpcijarehmanijev glikozid D, glikozid matičnjaka, ehinakozid, cistanhezid A i verbaskozid je analiziran, te je odabrano određivanje varijabilne valne duljine, to jest, 0-24 min, prvi izdvojeni rehmannia glikozid određen je na 203 nm, i 24-40 min, odvojeni ehinakozid, cistanhezid A i verbaskozid određeni su na 330 nm. Osim toga, ova studija također je istraživala ekstrakcijske učinke metanola, 70% otopine metanola, 50% otopine metanola i 50% otopine acetonitrila kao ekstrakcijskih otapala. Rezultati su pokazali da 70% otopina metanola kao ekstrakcijsko otapalo može bolje otopiti komponente koje se ispituju, a ekstrahirani uzorak ima manje nečistoća. Stoga je ova studija odabrala 70% metanol kao ekstrakcijsko otapalo, acetonitril-0.1% otopinu mravlje kiseline kao sustav mobilne faze i koristila je promjenjivu valnu duljinu za određivanje sadržaja pet komponenti u Rehmannia.

3.2 Analiza rezultata određivanja uzorka

Iz rezultata determinacije vidljivo je da su nakon parenja, osim blagog povećanja udjela ehinakozida, značajno smanjeni udjeli ostale četiri komponente, posebice udjeli leonurizida i cistanhezida A; sadržaj rehmannia glikozida D i cistanhezida A u Rehmannia glutinosa iz istog proizvodnog područja bio je neznatno različit, a sadržaj leonurizida, ehinakozida i verbaskozida bio je značajno različit; sadržaj ehinakozida u Rehmannia glutinosa iz proizvodnog područja Henan bio je značajno veći od onog u uzorcima iz proizvodnog područja Shanxi, a sadržaj ostale četiri komponente bio je malo drugačiji. U isto vrijeme, prema HPLC otisku prsta utvrđenom u ovoj studiji, sličnost između 6 serija uzoraka Rehmannia i kontrolnog otiska bila je 0.904~0.950, što ukazuje da je glavna kemikalija komponente 6 serija uzoraka Rehmannia prije i poslije obrade bile su vrlo konzistentne.

Ukratko, metoda određivanja sadržaja i HPLC otisak utvrđeni u ovoj studiji točni su, pouzdani i imaju dobru specifičnost. Mogu se koristiti za karakterizaciju promjena u komponentama i stupnju prerade Rehmannia glutinosa prije i nakon prerade, te pružiti tehničku podršku za kontrolu kvalitete Rehmannia glutinosa. Međutim, nedostaci ove studije su male serije uzoraka i nepotpuna pokrivenost proizvodnih područja, što zahtijeva daljnju analizu i provjeru.

Reference

[1] Odbor kineske farmakopeje. Farmakopeja Narodne Republike Kine: Svezak 1 [S]. Peking: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Istraživanje povijesne evolucije naziva prerađene Rehmannia glutinosa i proučavanje njezine učinkovitosti [J]. Kineska patentna medicina, 2017., 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe, et al. Napredak istraživanja Rehmannia glutinosa i analiza predviđanja njezinih markera kvalitete [J]. Kineska patentna medicina, 2022., 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Napredak istraživanja kemijskog sastava i farmakoloških učinaka Rehmannia glutinosa [J]. Kineska biljna medicina, 2022., 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangl. Napredak istraživanja kemijskih komponenti i farmakoloških učinaka Rehmannia glutinosa［J］.

Istraživanje o procjeni lijekova, 2015., 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei, et al. Analiza kemijskih komponenti svježe Rehmannia glutinosa, sirove Rehmannia glutinosa i kuhane Rehmannia glutinosa pomoću UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Kineska patentna medicina, 2016., 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei, et al. Prepoznavanje uzorka otiska prsta i određivanje višekomponentnog sadržaja različitih prerađenih proizvoda Rehmannia glutinosa［J］. Hubei Agricultural Sciences, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Napredak istraživanja kemijskih komponenti i farmakoloških učinaka Rehmannia glutinosa［J］. Kineska biljna medicina, 2021., 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian, et al. Usporedna studija kemijskih komponenti Rehmannia glutinosa prije i nakon obrade pomoću UHPLC-Q-TOF/MS［J］. Novi kineski lijekovi i klinička farmakologija, 2016., 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan, et al. Dinamičko nakupljanje komponenti nukleozida i aminokiselina u Rehmannia glutinosa na temelju UPLC-TQ-MS［J］. Kineska biljna medicina, 2021., 52(23): 7323-7330.

［11］ Li Yujiao. Studija o tehnologiji obrade i mehanizmu "devet kuhanja na pari i devet izlaganja" Rehmannia glutinosa［D］. Jinan: Sveučilište Shandong, 2023.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan, et al. HPLC Simultano određivanje sadržaja osam komponenti u Rehmannia glutinosa i njezinih različitih prerađenih proizvoda pomoću UPLC analize otiska prsta i određivanja sadržaja komponenti s više indeksa [J]. Kineski medicinski materijali, 2021., 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Procjena kvalitete Rehmannia glutinosa na temelju UPLC otiska prsta i određivanja sadržaja komponenti s više indeksa [J]. Kineski medicinski materijali, 2021., 44 (4): 917-923.