Istraživanje terapijskih učinaka i mehanizma izvarka Yishen Tonglonga na benignu hiperplaziju prostate u štakora putem IL-6/STAT3 signalnog puta
Dec 17, 2025
Sažetak
Cilj:Istražiti, putem signalnog puta interleukina (IL)-6/signala i aktivatora transkripcije (STAT)3, poboljšajuće učinke i mehanizam Yiqi Wenshen Tonglong decoction (ovdje skraćeno Yishen Tonglong decoction) na benignu hiperplaziju prostate (BPH) kod štakora.
Metode:Muški Sprague-Dawley (SD) štakori su kastrirani i zatim im je supkutano ubrizgan testosteron propionat da se uspostavi model BPH. Štakori su nasumično raspoređeni u sljedeće skupine (n=12/skupina): model; Yishen Tonglong Decoction skupine niske i visoke doze (15 i 30 g/kg); skupina STAT3 aktivatora (Colivelin, 1 mg/kg); i kombinirana skupina visoke doze Yishen Tonglong decoction (30 g/kg) + Colivelin (1 mg/kg). Dodatnih 12 muških SD štakora služilo je kao lažno operirana skupina. Nakon tretmana specifičnih za skupinu s Yishen Tonglong dekokcijom i/ili Colivelinom, procijenili smo indeks prostate (PI) i omjer estradiola (E2)/testosterona (T); procijenjena histomorfologija prostate i fibroza s hematoksilin-eozinom (HE) i Massonovim trikromnim bojanjem; izmjerena ekspresija Ki-67 imunohistokemijom; kvantificirane razine IL-6 i IL-1 u tkivu prostate i serumu pomoću ELISA testa; i detektirao kolagen I/III i IL-6/STAT3 proteine povezane s putem Western blottinga.
Rezultati:U usporedbi s lažnom, modelna skupina pokazala je izraženu hiperplaziju i fibrozu prostate, sa značajnim povećanjem PI, optičke gustoće Ki-67, tkiva/seruma IL-6 i IL-1, kolagena I/III, IL-6 proteina i p-STAT3/STAT3, uz značajno smanjenje E2/T (svi P < 0,05). U usporedbi s modelnom skupinom, i niske i visoke doze Yishen Tonglong decoctiona ublažile su hiperplaziju i fibrozu, smanjile PI, Ki-67, IL-6, IL-1, kolagen I/III, IL-6 protein i p-STAT3/STAT3, te povećale E2/T (svi P < 0,05). Uvarak s visokim dozama donio je veća poboljšanja od niskih doza (P <0,05). Sam kolivelin je pogoršao hiperplaziju i fibrozu i dodatno povećao PI, Ki-67, IL-6, IL-1, kolagen I/III, IL-6 i p-STAT3/STAT3 dok je smanjivao E2/T (P < 0,05). Istodobna primjena Colivelina smanjila je dobrobiti dekokta visoke doze, značajno pogoršavajući sve gore navedene pokazatelje u usporedbi sa samo dekokcijom visoke doze (P <0,05).
Zaključak:Uvarak Yishen Tonglong ublažava upalu i poboljšava patologiju BPH kod štakora, barem djelomično suzbijanjem aktivacije signalnog puta IL-6/STAT3.
Ključne riječi:IL-6/STAT3 signalizacija; Uvarak Yishen Tonglong; benigna hiperplazija prostate; biljka za liječenje problema s prostatitisom
Dodaci biljci Cistanche
Više detalja o novoj tcm biljci za zdravlje prostate
Uvod
Benigna hiperplazija prostate (BHP) uobičajeno je opstruktivno stanje donjeg urinarnog trakta u muškaraca srednje i starije dobi, karakterizirano epitelnom i stromalnom proliferacijom i povećanjem prostate, što dovodi do oklijevanja, učestalosti i hitnosti mokrenja što značajno narušava kvalitetu života [1,2]. Upala je ključni pokretač patogeneze BPH; potiče epitelnu i stromalnu proliferaciju glatkih mišića i fibrotičko remodeliranje. Antiinfektivne i protuupalne strategije stoga su učinkovite u prevenciji i liječenju BPH [3,4].
IL-6 je pleiotropni proupalni citokin široko izražen u stanicama tkiva. Aktivira STAT3 kako bi pokrenuo upalne programe [5]. Inhibicija aktivacije IL-6/STAT3 smanjuje nizvodne proupalne medijatore, prekida upalne kaskade, umanjuje imunološku infiltraciju i fibrozu povezanu s hipertrofijom i naposljetku usporava napredovanje BPH [6,7]. Stoga je IL-6/STAT3 racionalan terapijski cilj kod BPH.
Yishen Tonglong dekokcija klasična je kineska biljna formula s tradicionalnim funkcijama hranjenja Yina i podržavanja Yanga, toniziranja Qi-ja i bubrega te poticanja cirkulacije krvi s ublažavanjem vlage. Klinički se koristi za disuriju zbog vlažne topline i zastoja krvi s nedostatkom Qi bubrega, a zabilježeno je da ublažava upalu prostate i hiperplastične promjene kod BPH [8]. Osim BPH, on inhibira proliferaciju stanica raka prostate kod ljudi, potiče apoptozu i suzbija invaziju i migraciju [9]. Mrežna farmakologija i molekularno spajanje sugeriraju da ključni ciljevi relevantni za modulaciju bolesti prostate uključuju AKT1, IL-6 i VEGFA, između ostalih [10]. Na temelju ovog teorijskog obrazloženja i prethodnih dokaza, pretpostavili smo da uvarak Yishen Tonglong poboljšava BHP potiskivanjem IL-6/STAT3 signalizacije. Testirali smo ovu hipotezu na modelu BPH štakora.
Materijali i metode
Životinje
Muški štakori SD, SPF stupnja, 200-230 g, stari 6-7 tjedana, dobiveni su od Daoke Pharmaceutical Technology (Guangdong) Co., Ltd. (SCXK [Yue] 2022-0060). Štakori su bili smješteni na manje ili jednako 4 po kavezu u ciklusima svjetlo/tama od 12 sati, 50-60% vlažnosti i 23-25 stupnjeva.
Reagensi i instrumenti
Yishen Tonglong decoction sirovo bilje: Anemarrhena asphodeloides (Zhi Mu), Phellodendron chinense (Huang Bai), Cinnamomum cassia (Rou Gui), pripremljeni korijen Rehmannia glutinosa (Shu Di Huang), Cornus officinalis (Shan Zhu Yu), Dioscorea opposita (Shan Yao), Poria cocos (Fu) Ling), kora Paeonia suffruticosa (Mu Dan Pi), Achyranthes bidentata (Niu Xi), Aconitum carmichaeli obrađen bočni korijen (Fu Zi), Sparganium stoloniferum (San Leng), Curcuma zedoaria (E Zhu), sjeme Prunus persica (Tao Ren), sjeme Vaccaria segetalis (Wang Bu Liu Xing), Alisma plantago-aquatica (Ze Xie). Dobavljeno iz Beijing Tongrentang (Anguo) Chinese Herbal Slices Co., Ltd.
Colivelin (HY-P1061), MCE (SAD).
Testosteron propionat (čistoća 98%, T7260); ELISA kompleti za štakorski IL‑1 (SEKR-0002), E2 (SEKR-0107), T (SEKSM-0003), Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.
HE komplet za bojenje (ab245880), anti-p-STAT3 (ab76315), Massonov komplet (ab150669), anti-STAT3 (ab68153), anti-kolagen I (ab270993), anti-Ki-67 (ab16667), anti-kolagen III (ab184993), anti-IL-6 (ab259341), HRP magareći anti-zečji sekundarni (ab205722), štakorski IL-6 ELISA (ab234570), Abcam (SAD).
Anti-aktin (AF5003), Beyotime (Šangaj).
Parafinski mikrotom HS‑2205 (Olabao, Jinan), KP‑PH100S mikroskop (Shenzhen KEPUS), UMR‑9600 čitač mikropločica (Hangzhou Youmi), PowerPac Basic 1645050 i PROTEAN napajanja (Bio‑Rad, SAD).
BPH model i grupiranje
Štakori su anestezirani natrijevim pentobarbitalom (45 mg/kg, 3% w/v, intraperitonealno), testisi su eksteriorizirani i kirurški uklonjeni. Nakon 3 dana oporavka, štakori su svakodnevno dobivali supkutane injekcije testosteron propionata (5 mg/kg u maslinovom ulju) tijekom 21 dana. Ogromno povećanje i histopatološka hiperplazija potvrdili su uspjeh modeliranja BPH [11]. Lažni štakori su bili podvrgnuti rezu skrotuma bez orhidektomije i dobili su maslinovo ulje.
Priprema i administracija
Jedan recept za dekokciju Yishen Tonglong sadržavao je: Zhi Mu, Huang Bai, Shan Zhu Yu, Shan Yao, Fu Ling, Mu Dan Pi, Wang Bu Liu Xing, Ze Xie (svaki po 15 g); Niu Xi, Shu Di Huang, Tao Ren (svaki po 20 g); Fu Zi, San Leng, E Zhu, Rou Gui (svaki po 10 g). Biljke su dva puta otopljene u vodi, filtrati su spojeni i koncentrirani na 1,5 ili 3,0 g/mL. Colivelin je otopljen u fiziološkoj otopini do 0,1 mg/mL.
Skupine s niskom i visokom dozom dekokcija: sonda 15 ili 30 g/kg (10 mL/kg na 1,5 ili 3,0 g/mL), plus intraperitonealna fiziološka otopina (10 mL/kg).
Grupa s kolivelinom: fiziološka otopina za gavažu (10 ml/kg) plus intraperitonealni kolivelin 1 mg/kg (10 ml/kg od 0,1 mg/ml).
Skupina visoke doze + Colivelin: sonda 30 g/kg dekokcija plus Colivelin 1 mg/kg ip
Lažne i modelne skupine: fiziološka otopina za gavažu i ip fiziološka otopina (10 mL/kg).
Svi tretmani su bili jednom dnevno tijekom 21 dana.
Indeks prostate i E2/T; Zbirka uzoraka
Dvadeset i četiri sata nakon završnog tretmana, štakori su anestezirani (kao gore). Zabilježene su tjelesna masa i mokra težina prostate kako bi se izračunao PI=mokra težina prostate/tjelesna masa. Krv iz abdominalne aorte je sakupljena, centrifugirana (2000 rpm, 15 min) da se dobije serum. E2 i T izmjereni su ELISA testom i izračunat je E2/T; preostali serum je pohranjen na -80 stupnjeva. Otprilike 0,7 g tkiva prostate brzo je zamrznuto u tekućem dušiku za analizu proteina; ostatak je fiksiran, dehidriran, umetnut u parafin i presječen na ~5 μm.
HE i Massonovo bojenje
Nakon deparafinizacije u ksilenu i stupnjevanih etanola (100%, 90%, 80%, 75%) slijedila je hidratacija. Sekcije su obojene HE i Massonovim priborom prema uputama proizvođača (svaka po 3 stakalca), zatim su isprane, dehidrirane, očišćene i postavljene za mikroskopiranje.
Imunohistokemija za proliferaciju stanica
Nakon deparafinizacije/hidratacije, rezovi su tretirani s 3% H2O2, blokirani kozjim serumom i inkubirani preko noći s anti-Ki‑67 (1:150). Za detekciju je korišten SP kit s DAB kromogenom. Slike su snimljene i optička gustoća Ki-67 kvantificirana pomoću ImageJ.
ELISA za IL‑6 i IL‑1 u prostati i serumu
Smrznuto tkivo prostate je usitnjeno, homogenizirano u RIPA puferu i centrifugirano (3000 okretaja u minuti, 20 min) da se dobiju ukupni proteinski lizati. Koncentracije proteina određene su pomoću BCA. Alikvoti (0,2 mL) tkivnog lizata i otopljenog seruma analizirani su na IL-6 i IL-1 pomoću ELISA.
Western Blot za kolagen I/III i proteine putanje IL-6/STAT3
Denaturirani uzorci (100 stupnjeva) su odvojeni pomoću SDS-PAGE i prebačeni u nitrocelulozu. Membrane su podijeljene prema molekularnoj težini za kolagen I, kolagen III, ‑aktin, IL-6, STAT3 i p-STAT3. Nakon 3% blokiranja BSA, primijenjena su primarna protutijela, a zatim sekundarna protutijela konjugirana s HRP-om. Trake su vizualizirane kemiluminiscencijom i kvantificirane pomoću ImageJ.
Statistika
Podaci su analizirani pomoću SPSS 26.0 s jednosmjernom ANOVA i SNK‑q post hoc testovima.
Rezultati
Uspjeh modeliranja BPH: U usporedbi s lažnim, skupina modela pokazala je očita povećanja veličine prostate i histološku hiperplaziju i fibrozu. PI, optička gustoća Ki-67, prostata/serum IL-6 i IL-1, kolagen I/III, IL-6 i p-STAT3/STAT3 bili su značajno povišeni, dok je E2/T bio smanjen (P <0,05).
Terapeutski učinci uvarka Yishen Tonglong: I doze od 15 i 30 g/kg ublažile su povećanje prostate i fibrozu. Ti su tretmani značajno snizili PI, Ki-67, IL-6, IL-1, kolagen I/III, IL-6 protein i p-STAT3/STAT3, te povećali E2/T (P < 0,05). Visoka doza proizvela je bolje učinke od niske doze (P <0,05).
Učinci aktivacije STAT3: Colivelin je pogoršao hiperplaziju i fibrozu prostate i dodatno povećao upalne i fibrotične markere dok je smanjivao E2/T u odnosu na model (P <0,05).
Antagonizam Colivelinom: Istodobno liječenje Colivelinom oslabilo je dobrobiti visoke doze dekokta, podižući upalne/fibrotičke indekse i smanjujući E2/T u usporedbi sa samim dekokcijom visoke doze (P <0,05).
Rasprava
Mehaničko obrazloženje: Os IL-6/STAT3 središnji je upalni put koji je uključen u remodeliranje tkiva prostate. Vezanje IL-6 aktivira JAK/STAT3 signalizaciju, pokrećući transkripciju proupalnih i profibrotskih gena, potičući epitelnu/stromalnu proliferaciju, infiltraciju imunoloških stanica i taloženje izvanstaničnog matriksa. Naši nalazi - poboljšanje s biljnom formulom i pogoršanje s aktivatorom STAT3 - podupiru uzročnu mehaničku vezu pri čemu Yishen Tonglong decoction ublažava BPH prigušivanjem aktivacije IL-6/STAT3.
Perspektiva biljne formule (biljka za liječenje problema s prostatitisom): Biljne komponente pružaju komplementarna djelovanja relevantna za BPH i upalu sličnu prostatitisu:
Čišćenje od vlage i topline i protuupalno: Zhi Mu (Anemarrhena), Huang Bai (Phellodendron), Mu Dan Pi (kora Paeonia), Ze Xie (Alisma).
Qi/tonifikacija bubrega i endokrina modulacija: Shu Di Huang (Rehmannia), Shan Zhu Yu (Cornus), Shan Yao (Dioscorea), Fu Ling (Poria).
Aktivacija krvi i antifibrotski potencijal: San Leng (Sparganium), E Zhu (Zedoary), Tao Ren (jezgra breskve), Wang Bu Liu Xing (Vaccaria).
Zagrijavanje Yanga i poboljšanje mikrocirkulacije: Rou Gui (cimet), Fu Zi (akonit, prerađen).
Potpora tetiva/kosti i cirkulacija u zdjelici: Niu Xi (Achyranthes).
Ova sinergija može kolektivno smanjiti upalne citokine (IL-6, IL-1), proliferaciju (Ki-67) i fibrozu (kolagen I/III), u skladu sa supresijom signalizacije IL-6/STAT3 opaženom u Western blotovima. Porast E2/T ukazuje na djelomičnu rebalans spolno-steroidnog miljea, što također može utjecati na dinamiku rasta prostate.
Klinički prijevod i ograničenja: Iako su ovi pretklinički podaci obećavajući za BPH i potencijalno za upalu sličnu prostatitisu, ekstrapolacija na ljude zahtijeva oprez. Pretvorba doze, kontrola kvalitete pripravaka s više biljaka i interakcije između biljaka i lijekova zahtijevaju daljnja istraživanja. Bez obzira na to, dokazi usmjereni na put (dobrobit s dekokcijom, šteta s aktivacijom STAT3 i očitavanja puta) jačaju teoretsku osnovu za kliničko istraživanje ovog pristupa baziranog na bilju liječenju problema s prostatitisom i BPH.
Zaključak
Yishen Tonglong decoction ublažava hiperplaziju prostate i fibrozu u BHP štakora inhibicijom IL-6/STAT3 aktivacije i smanjenjem upalne i profibrotičke signalizacije, s učinkovitošću ovisnom o dozi. Ova otkrića daju mehaničku potporu njegovoj tradicionalnoj upotrebi i suvremeni, temeljen na putu, razlog za daljnji razvoj kao terapije bazirane na bilju za BPH i stanja povezana s prostatitisom.
Reference
[1–13] Kako je navedeno u izvornom tekstu.
