Učinci sirovog polisaharida iz Cistanche Deserticola na antitijela i podskupinu T stanica virusnog cjepiva protiv slinavke i šapa

Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

ZHANG Ai-Lian; BA Xue-li; WANG Dan-yang; ZHAO Bing

Slinavka i šap (FMD)je bolest uzrokovanavirus slinavke i šapa (FMDV)koja se širi među papkarima, ozbiljno ugrožava zdravlje stoke i uzrokuje velike ekonomske gubitke. Cijepljenje se široko koristi kao učinkovito sredstvo za prevenciju slinavke i šapa i postiglo je zapažene rezultate. Zbog slabe imunogenosti inaktiviranog antigena virusa slinavke i šapa, često je potrebno dodati adjuvans koji će igrati njegovu ulogu [1-2]. Trenutno je adjuvans koji se često koristi u komercijalnim cjepivima protiv slinavke i šapa uljna emulzija ISA-206, koja je aktivator stanica i također može poboljšati humoralni imunološki odgovor, ali su njegove nuspojave relativno velike. Iako postoje mnoge vrste adjuvansa, kao što su obično korišteni adjuvansi (aluminijeve soli, emulzije ulja i vode itd.) i novi adjuvansi (MF59, biljni polisaharidi itd.), adjuvansi koji se koriste za cjepiva protiv slinavke i šapa su još uvijek ograničeni, uglavnom uključujući aluminijev hidroksid, Span, lagano mineralno ulje, itd., svi imaju različite nedostatke, kao što je nezadovoljavajući imunološki učinak ili vrlo toksični i nuspojave [3-4]. Stoga postoji hitna potreba za razvojem visokoučinkovitih i niskotoksičnih novih pomoćnih sredstava za cjepiva protiv slinavke i šapa kako bi se poboljšao imunološki zaštitni učinak cjepiva, što je od pozitivnog značaja zaprevencija i liječenje slinavke i šapa.

Kineska medicinabiljni ima široku perspektivu primjene u prevenciji i liječenju zaraznih bolesti. Kineska biljna medicina ima dugu povijest liječenja bolesti ljudi i životinja. U području istraživanja adjuvansa cjepiva, domaći i strani istraživači ekstrahirali su polisaharide iz raznih kineskih biljnih lijekova kako bi proučili njihove adjuvantne učinke, kao što su polisaharidi ginsenga, polisaharidi astragalusa, polisaharidi tuckahoe, polisaharidi epimediuma itd., i otkrili da su imunološke funkcije ljudi i životinja. Ima dobar učinak promocije i postaje novi kandidat za pomoćno sredstvo [5-7].

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)je biljka obitelji Dang. To je često korišten hranjivi kineski biljni lijek i ljudi ga koriste kao hranjivu hranu za dugotrajnu konzumaciju. Posljednjih godina istraživači su proveli mnogo istraživanja kemijske strukture i farmakološke aktivnosti polisaharida iz Cistanche i otkrili da njegovi aktivni sastojci uglavnom uključuju polisaharide, ukupni feniletanoidni glikozid, alkaloide, itd., među kojima je sadržaj polisaharida relativno visoka i može se prilagoditi. Imunološki sustav djeluje antioksidativno i usporava starenje [8-9].

Cistanche（Cistanche deserticola YCMa）

Preliminarne studije su otkrile da je kombinacija sirovog cistanche desert polisaharida i OVA imuniziranih miševa značajno povećala razinu OVA-specifičnih antitijela, a kompatibilnost s cjepivom protiv gripe može povećati razinu antitijela u cjepivu protiv gripe [10-11]. S obzirom na to, u ovoj studiji korišten je sirovi polisaharid Cistanche deserticola kao kandidatski adjuvans za inaktivirano cjepivo protiv slinavke i šapa, te odabrani adjuvansi topljivi u vodi sa značajnim učinkom na jačanje imuniteta i malim nuspojavama, tako daSirovi polisaharid iz Cistanche deserticola može se učinkovito koristiti kao novi adjuvans za cjepiva protiv slinavke i šapa.

Priprema sredstva

U ovoj studiji,Sirovi polisaharid iz Cistanche deserticola (CDCP)bio je kombiniran savirus slinavke i šapaza pripremu cjepiva. ICR miševi su imunizirani kroz mišićni put. Otkriveni su učinci imunizacije na humoralni i stanični imunološki odgovor miševa i promatrana je njihova sigurnost. Razvoj sigurnog novog adjuvansa za cjepivo protiv slinavke i šapa predstavlja referencu.

Sirovi polisaharid iz Cistanche deserticola

Učinak sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola (CDCP) na razinu protutijela specifičnih za FMDV u serumu

Razina IgG u serumu pokazala je postupni rastući trend 14 dana, 21 dan i 28 dana nakon početne epidemije (Slika 1). 14. i 21. dan nakon početne imunizacije, razina antitijela u skupini koja je primala FMDV-Ag/CDCP bila je značajno viša nego u skupini koja je primala FMDV-Ag adjuvans (P<0.05), and="" there="" was="" no="" significant="" difference="" from="" the="" fmdv="" group="" (p="">0.05). 28 dana nakon početne imunizacije, u usporedbi s FMDV-Ag bez adjuvansa, razina IgG protutijela za FMDV-Ag/CDCP bila je značajno povećana (P<0.05), but="" it="" was="" extremely="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" fmdv/isa-206="" group=""><0.01). the="" antibody="" level="" of="" the="" fmdv-ag="" adjuvant-free="" group="" was="" significantly="" different="" from="" that="" of="" the="" 0.9%="" nacl="" control="" group=""><>

Sirovi polisaharid iz Cistanche deserticola (CDCP) na proliferaciju limfocita slezene

21 dan nakon početne imunizacije, korištena je MTT metoda za otkrivanje proliferacijskog učinka sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola na limfocite slezene. Kao što je prikazano na slici 2, nakon što je in vitro limfocite slezene stimulirao FMDV-Ag, indeks stimulacije limfocita skupine FMDV-Ag/CDCP bio je značajno viši od indeksa FMDV-Ag skupine bez adjuvanta (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-206="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" groups="" (p="">0.05). Nakon stimulacije ConA i LPS-om, može značajno pojačati proliferaciju limfocita slezene (P<>

Učinak sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola (CDCP) na ekspresiju CD4 plus i CD8 plus T stanica

21 dan nakon početne imunizacije, testirani su učinci CDCP i FMDV-Ag na CD4 plus i CD8 plus T stanice u slezeni miševa. Rezultati su prikazani na slici 3-AD. Omjer CD3 plus , CD4 plus , CD3 plus , CD8 plus podskupina T stanica u skupini koja je primala FMDV-Ag/CDCP bio je značajno veći od onog adjuvansa koji je primao FMDV-Ag -slobodna grupa (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-="" the="" difference="" between="" the="" 206="" groups="" was="" not="" significant="" (p="">0.05). Skupina bez adjuvansa FMDV-Ag nije pojačala ekspresiju CD4 plus i CD8 plus T stanica.

Učinak sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola (CDCP) na CD4 plus, CD44 plus i CD8 plus CD44 plus efektorske podskupine T stanica

Kako bi se promatrao učinak sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola na efektorske T stanice, korištena je protočna citometrija za otkrivanje ekspresije CD4 plus, CD44 plus i CD8 plus, CD44 plus u stanicama slezene miševa nakon imunizacije. Rezultati su prikazani na slici 4-AD. Postoci CD4 plus , CD44 plus , i CD8 plus , CD44 plus u skupini koja je primala FMDV Ag/CDCP bili su značajno viši od onih u skupini koja nije primala adjuvans za FMDV-Ag (P<0.05), and="" were="" different="" from="" the="" fmdv/isa-206="" group="" not="" significant="" (p="">0.05).

Učinak sirovog polisaharida iz Cistanche deserticola (CDCP) na rast miševa

After immunizing animals with Crude Polysaccharide from Cistanche deserticola through the muscle route, the growth of the mice was observed during the entire immunization period and the body weight was weighed weekly to observe the granuloma at the injection site (Table 1). After the immunization, the mice did not have hair loss or refusal to eat. The weight of each group of mice increased normally at 14 d, 21 d, and 28 d after immunization, and there was no significant change in body weight between the groups (P>0.05). Miševi u skupini s FMDV Ag/CDCP nisu imali granulome na mjestu injekcije, a miševi uvirus slinavke i šapaskupina cjepiva koja je sadržavala uljni adjuvans ISA 206 imala je granulome na mjestu injekcije.

Adjuvansi se već dugo koriste u raznim cjepivima, mogu pomoći cjepivima da imaju učinak jačanja imuniteta, smanjuju dozu cjepiva i igraju vrlo važnu ulogu u prevenciji i epidemiji zaraznih bolesti [3]. S razvojem novih cjepiva, bilo u području istraživanja veterinarskih cjepiva ili istraživanja cjepiva za ljude, zahtjevi za količinom i kvalitetom adjuvansa cjepiva postaju sve veći. Idealan novi adjuvans trebao bi imati učinkovit stimulirajući učinak na staničnu ili humoralnu imunost organizma, imati dugotrajan i stabilan učinak, smanjiti broj imunizacija, imati manje nuspojava i biti jednostavan za proizvodnju i lak za ubrizgavanje [13]. .

Uvirus slinavke i šapainaktiviranim cjepivima obično se dodaju uljni adjuvansi za poboljšanje imuniteta cjepiva, ali postoje nedostaci kao što je veliki imunološki stres. U usporedbi s uljnim adjuvansima, vodeni adjuvansi jednostavni su za upotrebu, mogu se miješati s antigenima cjepiva u bilo kojem omjeru, ne trebaju emulzifikaciju i lako se ubrizgavaju. Stoga vodeni adjuvansi imaju dobre izglede za primjenu u cjepivima protiv FMDV-a. Kineski biljni polisaharidi imaju dobre imunomodulatorne učinke, u kombinaciji s njihovim prednostima u sigurnosti, pleiotropiji i neovisnosti, te su postali vruća točka u istraživanju novih adjuvansa cjepiva [14]. U području istraživanja adjuvansa cjepiva protiv FMDV-a, neki kineski biljni polisaharidi koriste se u istraživanju novih adjuvansa. Na primjer, polisaharidi astragalusa koriste se kao adjuvansi za cjepiva protiv FMDV. Oralna imunizacija može poboljšati humoralni i stanični imunitet, a niske doze mogu inhibirati zrelost dendritičnih stanica, visoke doze mogu pospješiti njihovu zrelost.

Istraživači su također koristili polisaharide iz Baizua i polisaharide izEucommiakao pomoćna sredstva zavirus slinavke i šapacjepivo kako bi istražili njihove učinke na jačanje imuniteta [15-17]. Zbog velikih razlika u sadržaju aktivnih sastojaka različitih kineskih biljnih lijekova, opsežna pretraga kineskih biljnih lijekova s ​​imunološkim djelovanjem kako bi se pronašli prikladni adjuvansi od velike je važnosti za prevenciju bolesti i ljudsko zdravlje, a također je žarište istraživanja u području vakcinologija. U ovom eksperimentu, aSirovi polisaharid iz Cistanche deserticolaodabran je kao pomoćni kandidat zavirus slinavke i šapacjepiva, te je provedeno eksperimentalno istraživanje adjuvantnog učinka. Prevencija i liječenje zaraznih bolesti uglavnom ovisi o humoralnom imunološkom odgovoru posredovanom B limfocitima i staničnom imunološkom odgovoru posredovanom T limfocitima [18-20].

Jervirus slinavke i šapacjepivo zapravo koristi mišićnu imunizaciju u proizvodnji, mišićni put se koristi za imunizaciju miševa u eksperimentu, a učinak CDCP-a na poboljšanje imuniteta procjenjuje se procjenom učinka CDCP-a na proizvodnju antitijela i podskupova T stanica, te se procjenjuje njegova sigurnost. Preliminarna zapažanja. Rezultati studije pokazali su da sirovi polisaharid Cistanche cistanche može povećati razinu antitijela specifičnih za FMDV 14 i 21 dan nakon imunizacije, a nema značajne razlike između učinka i razine ISA-206 adjuvansa ; razina antitijela 28 dana nakon imunizacije niža je od razine ISA-206 uljnog adjuvanta, što pokazuje daSirovi polisaharid iz Cistanche deserticola može povećati razinu humoralnog imunitetau određenom vremenskom razdoblju nakon imunizacije. Brzina proliferacije limfocita u pozitivnoj je korelaciji s razinom indeksa stimulacije. U MTT eksperimentu,Sirovi polisaharid iz Cistanche deserticola može potaknuti proliferaciju limfocitastimuliran antigenom FMDV, ConA i LPS. U eksperimentu s podskupinom T stanica, CDCP ne samo da može povećati ekspresiju CD4 plus i CD8 plus T stanica, već i povećati razine CD4 plus, CD44 plus i CD8 plus, CD44 plus efektorskih T stanica, i nema značajne razlike iz skupine adjuvansa ISA-206; u sigurnosti U spolnim pokusima utvrđeno je da su miševi u skupini cjepiva koja je sadržavala ISA-206 imali granulome na mjestu ubrizgavanja, dok skupina cjepiva koja je sadržavala CDCP vodeni adjuvans nije pronašla granulome, što je preliminarno pokazalo daSirovi polisaharid iz Cistanche deserticola ima dobru sigurnost. Za dodatnu sigurnost potrebno je provesti relevantne pokuse kako bi se to potvrdilo.

Sirovi polisaharid iz Cistanche deserticolane samo da je pojačao humoralni imunološki odgovor, već je također povećao razinu proliferacije limfocita, promovirao razinu podskupova CD4 plus i CD8 plus T stanica, aktivirao efektorske T stanice, a nakon injekcije nisu pronađeni granulomi na mjestu injekcije. Miševi rastu normalno i nemaju abnormalno ponašanje. Ovi rezultati istraživanja daju osnovu za daljnja istraživanjaSirovi polisaharid iz Cistanche deserticolakao novi adjuvans zavirus slinavke i šapacjepivo i također pružaju korisnu referencu za primjenu polisaharidnih adjuvansa u drugim cjepivima.

Referenca

［1］Diaz-san Segundo F, Median GN, Steinfeldt C, et al. Cjepiva protiv slinavke i šapa［J］. Vet Microbiol, 2017, 206:102-112.

［2］Park JH. Zahtjevi za poboljšana cjepiva protiv epidemija slinavke i šapa［J］. Clin Exp Vaccine Res, 2013, 2(1): 8-18.

［3］Cao Y. Adjuvansi za cjepiva protiv virusa slinavke i šapa: nedavni napredak［J］. Expert Rev Vaccines, 2014., 13(11）:1377-1385.

［4］Parid AS. Cijepljenje protiv virusa slinavke i šapa: strategije i učinkovitost［J］. Expert Rev Vaccines, 2009, 8:347-365.

［5］Licciardi PV, Underwood JR. Lijekovi biljnog podrijetla: nova klasa imunoloških pomoćnih sredstava［J］. Int Immunopharmacol, 2011, 11(3):390-398.

［6］Sun B, Yu S, Zhao D, et al. Polisaharidi kao adjuvansi cjepiva［J］. Vaccine, 2018, 36:5226-5234.

［7］Meng XY, Chu ZF, Zhang JJ, et al. Imunomodulatorne funkcije polisaharida lišća Ginkgo bilobe na vvIBDV cjepivu［J］. ChinaJ Vet Sci, 2019, 39(4):640-645.

［8］Tu PF, Jiang Y, Guo YH, et al. Istraživanje i industrijski razvoj Cistanche［J］. Chin Pharm J, 2011, 46(12):882-887.

［9］Zhang W, Huang J, Wei W, et al. Ekstrakcija, pročišćavanje, karakterizacija i antioksidativna aktivnost polisaharida iz Cistanche tubulosa［J］. Int J Biol Macromol, 2016, 93:448-458.