Učinci ekstrakta Cistanche Deserticola na erektilni odgovor penisa u kastriranih štakora

Li Gu, Wen Ting Xiong, Yan Lei Zhuang, Jian Shuang Zhang i Xin Liu*

Istraživački centar za prehrambeni i zdravstveni inženjering Državnog ministarstva obrazovanja, Sveučilište Sun Yat-sen, Guangzhou, Kina

Sažetak

Cistanche deserticola (CD) se tisućama godina smatra tonikom za reproduktivnu funkciju. U ovoj studiji istraženi su učinci ekstrakta CD-a na erektilni odgovor penisa. Nakon operacije kastracije, štakori su liječeni intragastrično CD ekstraktom ({{0}}.45, 0.90 i 1,8 g/kg) dnevno tijekom četiri tjedna. Mjeren je erektilni odgovor penisa, a na kraju eksperimenta ispitani su serumski hormoni. Procijenjeno je da je erektilna latencija postala duža, a trajanje erekcije značajno kraće u kastriranih štakora u usporedbi s lažno operiranim kontrolama. Međutim, ekstrakt CD-a skratio je erektilnu latenciju i produžio trajanje erekcije kako bi se smanjili negativni učinci kastracije. U dozi od 0,9 g/kg ekstrakt CD-a regulirao je koncentraciju luteinizirajućeg hormona u serumu na normalnu razinu u kastriranih štakora. Ovi nalazi pokazuju da je CD olakšao erektilni odgovor penisa i donekle modulirao razinu hormona u serumu.

Click cistanche tonic proizvodi

UVOD

Cistanche Hoffmg. Et Link, jedan od rodova obitelji Orobanchaceae, uglavnom je rasprostranjen u sušnim zemljama i pustinjama na sjevernoj hemisferi, kao što su unutarnja Mongolija, Xinjiang i Ningxia autonomne regije Kine, Irana, Indije, Mongolije itd. Cistanche vrste pripadaju višegodišnjim parazitskim biljkama, koje se obično pričvršćuju za korijenje biljaka koje učvršćuju pijesak kao što su Haloxylox ammo dendron, H. persicum, Kalidium foliated i biljke Tamarix itd. (Jiang i Tu 2009.).

Herba Cistanche, stabljika vrste Cistanche, smatra se vrhunskim tonikom i zaslužila je čast "Ginseng pustinje". Među vrstama Cistanche, Cistanche deserticola YC MA naznačena je kao primarni izvorni materijal Cistanche (Stefanova et al. 2011). Međutim, zbog pretjeranog branja posljednjih godina, nedostaju prirodni resursi divlje C. deserticola (CD) koja je sakupljena kao jedna od biljaka klase II kojoj je potrebna zaštita u Kini, stoga druge vrste ovog roda, kao što su C. salsa i C. sinensis, također se koriste kao zamjene u nekim područjima. Od prvog zapisa u Shen Nongovoj kineskoj materijalnoj medicini (drevni farmakološki kompendij), smatralo se da CD tonizira bubreg i osnažuje "Yang" u kliničkoj praksi prema teoriji tradicionalne kineske medicine, za koju se tvrdi da je učinkovit za reprodukciju, razvoj, i funkciju plodnosti. U međuvremenu, CD se također kuhao s ovčetinom, krumpirom ili rižom kako bi se proizvela tonična hrana za liječenje oštećenja izazvanog prenaprezanjem stotinama godina, što sugerira da je siguran za oralno uzimanje (Xiong et al. 2013). Međutim, ove anegdotske upotrebe uglavnom postoje u kineskim inkunabulama, s ograničenim znanstvenim informacijama o kojima se raspravlja u smislu modernih farmakoloških koncepata.

Erektilna disfunkcija (ED) je stanje koje karakterizira ili neadekvatna erekcija penisa ili erekcija koja ne traje dovoljno dugo kod odraslih muškaraca (Cohan i Korenman 2000). Kao odgovor na moderne, sofisticirane, kemijske agense, došlo je do obnovljenog interesa za traženje učinkovitih i sigurnih lijekova iz biljaka za liječenje ED (Adimoelja 2000). Prethodno istraživanje (Liu et al. 2009.) pokazalo je da CD elektuarno ubrzava erekciju penisa kod normalnih štakora, međutim, nije bilo podataka o učinku CD-a na erektilnu disfunkciju.

Kod životinja, kirurška kastracija s bilateralnom orhiektomijom smatra se standardom kastracije za ispitivanje ED-a (Tombal 2005). Stoga je ova studija provedena kako bi se procijenili potencijalni učinci CD-a protiv ED-a ispitivanjem latencije i trajanja erekcije u kastriranih štakora.

MATERIJALI I METODE

Kemikalije i materijali

Echinacoside (purity >98%) and acteoside (purity >98 posto) kupljeno je od Nacionalnog instituta za kontrolu hrane i lijekova (Peking, Kina). Metanol kvalitete HPLC kupljen je od Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAD). Pročišćena voda proizvedena je korištenjem Millipore Milli-Q Integral 3 sustava i Q-POD Milli-Q sustava (Bedford, MA, SAD). Stabljike C. deserticola kupljene su od Shenzhen GURU Biology Co., Ltd (Guangdong, Kina) i samljevene u fini prah uz pomoć pulverizera propuštenog kroz sito od 60 otvora.

HPLC analiza i priprema biljnog materijala

Sadržaj ehinakozida i akteozida u CD prahu određen je prema našoj prethodnoj metodi (Zhao et al. 2011). Zatim se svakih 100 g osušenog praha kuha u 1,5

L vode 1,5 h. Ohladivši se na sobnoj temperaturi, miješana tekućina je centrifugirana na 2000 okretaja u minuti tijekom 10 minuta (Eppendorf 5810R, Njemačka) i talog je ponovno ekstrahiran dva puta pod istim uvjetima. Kombinirani supernatanti koncentrirani su vakuumskim rotacijskim isparivačem (Heidolph laborota 4001-efficient, Njemačka) na 60 stupnjeva, a zatim liofilizirani i dalo je oko 42 posto osušenog ekstrakta u prahu. Prilikom provođenja sljedećeg eksperimenta na životinjama, osušeni ekstrakt je otopljen u pročišćenoj vodi na sobnoj temperaturi.

Pokusne životinje

Odrasli mužjaci štakora Sprague-Dawley (200-220g) dobiveni su iz Medicine Experimental Animal Center provincije Guangdong (Guangzhou, NR Kina), držani u prostorijama s kontroliranom temperaturom s 12-h ciklusima svjetlo/tama na sobnoj temperaturi (22-24 stupnjeva) i konstantnoj vlažnosti (40-70 posto) u SPF (specifični patogeni slobodni) laboratoriju i hranjeni ad libitum. Eksperimentalni postupci bili su u skladu s Nacionalnim zdravstvenim vodičem za njegu i korištenje laboratorijskih životinja.

eksperimentalna procedura

Tjedan dana prije primjene, pedeset mužjaka SD štakora anestezirano je natrijevim pentobarbitalom intraperitonealno (40 mg/kg) (Jung et al. 1999) i nasumično raspoređeno u pet skupina: osim štakora u lažno operiranoj skupini (Sham ), ostali su bilateralno kastrirani preko skrotalnog pristupa (Anderes 2003, Schlatt et al. 2002). U međuvremenu, skupine liječene CD-om primijenjene su intragastrično s 0,45 g/kg (niska doza ekstrakta CD-a, LCD plus Cas), 0,9 g/kg (srednja doza ekstrakta CD-a, MCD plus Cas) i 1,8 g/kg (visoka doza CD ekstrakt, HCD plus Cas) CD ekstrakt, dok su lažne i kastrirane skupine davane samo s odgovarajućom količinom vode. Tjelesna težina mjerena je na početku zahvata, a zatim svaki tjedan. Svi su štakori podvrgnuti laparotomiji odmah nakon smrti radi uklanjanja i posteriornog vaganja sljedećih organa: prepucijalnih žlijezda, sjemenih mjehurića, prostate i mišića levator ani.

Mjerenje erektilnog odgovora penisa

Erektilna funkcija štakora u svakoj skupini procijenjena je prema prethodnim metodama (Ji et al. 2009, Luo et al. 2006). Ukratko, bipolarna elektroda od nehrđajućeg čelika (BL420F Data Acquisition & Analysis System, Tme Technology Co., Ltd, Chengdu, NR Kina) pažljivo je postavljena na penis dok nije bio u erekciji s pulsom električne stimulacije (5 V) 0,2 s. Vrijeme od stimulacije do erekcije zabilježeno je kao erektilna latencija penisa. Kada se promatra erektilni odgovor penisa, elektroda se može izvući iz penisa, a vrijeme u kojem je penis održavao erekciju zabilježeno je kao trajanje erekcije.

Vađenje krvi i analiza hormona u serumu

Štakori su anestezirani natrijevim pentobarbitalom intraperitonealno (40mg/kg) (Jung et al. 1999). Uzorci krvi su uzeti i zgrušani na 4 stupnja tijekom 4 sata, iz kojih je serum sakupljen centrifugiranjem na 4000 okretaja u minuti tijekom 5 minuta na 4 stupnja (Eppendorf 5810 R, Njemačka) i odmah pohranjen u zamrzivač na -20 stupnjeva do daljnje analize . Ukupne razine LH i FSH mjerene su korištenjem komercijalnih kompleta za radioimunotest (RIA) (Beijing North Institute of Biological Technology, Peking, Kina) u skladu s uputama proizvođača (Matsumoto et al. 1986). Na temelju kompetitivne radioaktivne imunološke tehnike, I125-označeni LH (ili FSH) korišten je u testu. Ukratko, 100 µl I125-označenog LH (ili FSH) sredstva je dodano u 100 µl uzorka seruma i inkubirano sa 100 µl pročišćenog zečjeg antitijela na 4 stupnja (ili 37 stupnjeva ) preko noći. Zatim je magareći anti-zečji imunološki separacijski agens dodan kompleksu antigen-antitijelo i centrifugiran (3500 okretaja u minuti, 15 min) da se odvoji slobodni 125I-LH (ili FSH) i vezan za antitijela. Nakon toga je izmjerena radioaktivnost precipitata na brojaču za radioimuno ispitivanje (DMF-96, Zhongcheng electrical technology development Co., Ltd., Hefei, Kina). Granice osjetljivosti LH i FSH testa bile su 1,0 mIU/ml.

STATISTIČKA ANALIZA

Analiza podataka provedena je pomoću softvera SPSS verzija 16.0. Vrijednosti su izražene kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Parametarski podaci analizirani su pomoću analize jednosmjerne analize varijance (ANOVA) praćene post hoc LSD testovima. Neparametrijski podaci analizirani su Kruskal-Wallisovim testom. Razlike su se smatrale statistički značajnim ako je vjerojatnost odstupanja manja od 0.05.

REZULTATI

Kvantitativno određivanje sadržaja ehinakozida i akteozida u CD prahu

Sadržaj ehinakozida i akteozida u CD prahu bio je 1,27±{2}}.01 posto i 0.52±0,003 posto, što je u skladu sa zahtjevima Kineske farmakopeje. HPLC kromatogram CD praha prikazan je na sl. 1.

Sl. 1

HPLC kromatografski profil praha Cistanche deserticola. Vrh 1, ehinakozid; Vrh 2, akteozid. X os, vrijeme zadržavanja; Y os, jedinica apsorbancije. HPLC uvjeti: Watersov HPLC sustav (Binary HPLC pumpa 1525, detektor indeksa loma 2414, fotodiodni niz detektora 2996); stacionarna faza: Symmetry C18(4.6mm×25{{10}} mm, 5 µm, Waters, Milford, MA, SAD); mobilna faza: 0,5 posto (V/V) vodena otopina octene kiseline (A) i metanol (B) sastojak (0 min, A: B=25:75; 10- 30 min, A: B{{16 }}: 60; 30 min, A: B=0: 100); brzina protoka: 1ml/min; valna duljina detekcije: 330 nm; temperatura: 30.

sl.2

Latencija i trajanje erekcije penisa u kastriranih štakora. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD (n=10). ##str<0.01 relative to sham-operated group, **p<0.01 relative to castrated group. Abbreviation (below): Sham, sham-operated group; Cas, castration control group; LCD +Cas (0.45g/kg), MCD +Cas (0.9g/kg) and HCD +Cas (1.8g/kg), three groups of CD extract treated in castrated rats

sl.3

Učinci CD ekstrakta na serumske koncentracije LH u kastriranih štakora. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± SD (n=10). # str<0.05 relative to sham-operated group, * p<0.05 relative to castrated group.

Tjelesne težine i relativna težina pomoćnih organa

Kao što je prikazano u tablici 1, svi štakori imali su sličnu početnu tjelesnu težinu s porastom od 1. do 28. dana. Međutim, srednje vrijednosti u kastriranoj skupini porasle su s 216,8±9,2 g na 251,4±12,7, 283,3±15,1, 306,8±15,4 i 322,2±18,4 g, dobivajući manje na težini u usporedbi s lažno operiranim uzorcima (p<0.05). There were no statistical differences between the sham group and CD treated group.

sl.4

Učinci CD ekstrakta na serumske koncentracije FSH u kastriranih štakora. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ±SD (n=10).

Razina hormona u serumu

Analizirano RIA testom, prosječna koncentracija LH u serumu u kastriranih štakora bila je 2,50±0,34 mIU/ml, pokazujući porast u usporedbi s lažno operiranom kontrolom (p<0.05). However, the value descended about 49.2% in the MCD +Cas group relative to that in castrated control (p<0.05) (fig. 3). Shown in fig. 4, no statistical differences were observed among all groups on FSH concentration.

RASPRAVA

Naši su rezultati pokazali da je kastracija značajno produžila latenciju erekcije penisa i skratila trajanje erekcije, uz značajnu atrofiju pomoćnih organa. Međutim, ekstrakt CD-a je olakšao erektilni odgovor penisa i do određene mjere modulirao razinu LH u serumu kod kastriranih štakora.

Spontanu erekciju uglavnom stimulira i održava androgen putem staničnih, molekularnih i fizioloških mehanizama, uključujući opuštanje kavernoznih glatkih mišića (Traish et al. 2007, Talha et al. 2007.) . Nedovoljna razina testosterona dovodi do smanjenja njegove relaksacije (McClure 1988), što u skladu s tim rezultira impotencijom kod muškaraca (Bivalacqua et al. 2000). Osobito kod štakora, održava se širokim rasponom sistemskih koncentracija testosterona od 10-12 posto, ispod kojih je erektilni odgovor oslabljen na način ovisan o dozi (Armagan et al. 2006). U ovoj studiji, koncentracija testosterona u cirkulaciji bila je preniska da bi zadovoljila granicu osjetljivosti (0,02 ng/ml) kod svih kastriranih štakora (podaci nisu prikazani u rezultatima). Međutim, CD ekstrakt značajno je skratio erektilnu latenciju penisa pri tri doze i produljio trajanje erekcije pri 0,90 g/kg i 1,8 g/kg. Vjerojatno je to posljedica androgenskog učinka CD-a spomenutog u nekim prethodnim studijama (He i sur. 1996a, He i sur. 1996b).

Neki pomoćni organi, poput prostate i sjemenih mjehurića, ovisni su o androgenima, stoga promjene težine mogu odražavati promjene u endokrinom statusu (Trisomboon i sur. 2007., Jang i sur. 2011.). Postojala je granična razina testosterona, ispod koje je metabolizam ovih organa bio inhibiran (Trachtenberg 1985). U našoj je studiji potvrđeno da je kastracija dovela do smanjenja težine pomoćnih reproduktivnih organa zbog nedostatka testosterona.

Testosteron primarno izlučuju Leydigove stanice testisa, a reguliran hipofiznim hormonima, poput luteinizirajućeg hormona (LH) i folikulostimulirajućeg hormona (FSH), koji imaju važnu ulogu u održavanju funkcije penisa kastriranih životinja (Robert et al. 2{ {6}}04). Kako je osovina hipotalamus-hipofiza-gonade (HPG) kontrolni mehanizam zatvorene povratne sprege, niske razine hormona gonade mogu zauzvrat regulirati izlučivanje LH i FSH (Morales et al. 2004). Naša studija je istražila da je razina LH u serumu bila značajno povećana u kastriranih štakora, a zatim je pala na normalne razine ekstraktom CD-a od 0,90 g/kg, što se slagalo s prethodnim zaključkom da je povećana razina LH povezana s većim rizikom od erektilne disfunkcije (Kupelian et al. 2006). U testisima, LH stimulira sintezu i oslobađanje testosterona, čija je povratna kontrola relativno konzistentna, dok FSH izravno djeluje na Sertolijeve stanice za prehranu s povratnim kontrolnim kompleksom (Hellqvist et al. 2008). Ovi su nalazi pružili dodatnu potporu pretpostavci da CD izražava učinak sličan androgenu, koji bi mogao biti uglavnom odgovoran za smanjenje serumskog LH više nego FSH.

U trenutnom promatranju, utjecaj kastracije na razvoj tjelesne težine kod mužjaka štakora bio je sličan nalazima u prethodnoj studiji (Christoffersen et al. 2006), suprotno rezultatima kod ženki štakora (Pantaleão et al. 2010). Ekstrakt CD-a nije uspio značajno poboljšati tjelesnu težinu, što je vjerojatno bilo zbog nedovoljnog trajanja liječenja ili kompleksnih utjecaja na cjelokupno zdravstveno stanje.

Zaključno, kastracija je produljila latenciju erekcije penisa i značajno skratila trajanje, uz povećanje LH u serumu i atrofiju pomoćnih spolnih organa.

Međutim, ekstrakt CD-a olakšao je erektilni odgovor penisa skraćivanjem erektilne latencije i produljenjem trajanja erekcije u kastriranih štakora. Ti su učinci vjerojatno bili posljedica učinka sličnog androgenu, što je potkrijepljeno opažanjem da ekstrakt CD-a normalizira koncentracije LH u serumu, posebno pri dozi od 0.90 g/kg. Međutim, potrebni su dodatni dokazi kako bi se pokazao učinak ekstrakta CD-a protiv ED-a na hipotalamusnoj i limbičkoj razini te bi se ovoj vrijednoj tradicionalnoj medicini u modernom svijetu moglo privući više pažnje.

ZAHVALA

Ovaj je rad podržan potporama Projekta potpore znanosti i tehnologije u autonomnoj regiji Xinjiang Uygur (PR Kina) (200840102-15).

REFERENCE

Adimoelja A (2000). Fitokemikalije i napredak tradicionalnih biljaka u liječenju seksualnih disfunkcija. Int. J. Androl., 23: 82-84.

Anderes KL (2003). Biološka karakterizacija novog, oralno aktivnog antagonista gonadotropin-otpuštajućeg hormona male molekule (GnRH) korištenjem kastriranih i intaktnih štakora. J. Pharmacol. Exp. Ther., 305: 688-695.

Armagan A, Kim NN, Goldstein I i Traish AM (2006). Odnos doza-odgovor između testosterona i erektilne funkcije: Dokazi za postojanje kritičnog praga. J. Androl., 27: 517-526.

Bivalacqua TJ, Champion HC, Hellstrom WJ i Kadowitz PJ (2000). Farmakoterapija erektilne disfunkcije. Trendovi. Pharmacol. Sci., 7: 524-540.

Christoffersen B, Raun K, Svendsen O, Fledelius C i Golozoubova V (2006). Procjena kastriranog mužjaka Sprague-Dawley štakora kao modela metaboličkog sindroma i dijabetesa tipa 2. Int. J. Obes., 30: 1288- 1297.

Cohan P i Korenman SG (2000). Napredak u erektilnoj disfunkciji i hormonskoj funkciji. J. Anti-aging Med., 3: 169-175.

Feldman HA, Goldstein I, Hatzichristou DG, Krane RJ i McKinlay JB (1994). Impotencija i njezini medicinski i psihosocijalni korelati: Rezultati studije starenja muškaraca u Massachusettsu. J. Urol., 151: 54-61.

He W, Shu XF, Zong GZ, Shi ML, Xiong YL i Chen MH (1996b). Studije o jačanju bubrega i Yangu koji podupiru djelovanje Cistanche deserticola YC Ma prije i poslije pripreme. Brada. J. Chin. Mater. Med., 9: 534-537.

He W, Zong GZ, Wu GL i Chen MH (1996a). Istraživanje aktivnih sastojaka Cistanche na učinak sličan androgenu. Brada. J. Chin. Mater. Med., 9: 564-565.

Hellqvist A, Schmitz M i Borg B (2008). Učinci kastracije i liječenja androgenima na ekspresiju FSH- i LH- kod trobodljenog priljepka, Gasterosteus aculeatus. Razlike u povratnim informacijama koje posreduju u odgovoru fotoperiodičnog sazrijevanja? Gen. Comp. Endocr., 158: 178-182.

Jang M, Min JW, In JG i Yang DC (2011). Učinci ekstrakta crvenog ginsenga na pokretljivost sperme epididimisa kod miševa izloženih etanolu. Int. J. Toxicol., 30: 435-442.

Ji DB, Ye J, Li CL, Wang YH i Zhao J (2009). Učinak ekstrakta Cordyceps sinensis protiv starenja. fitoter. Res., 23: 116-122.

Jiang Y i Tu PF (2009). Analiza kemijskih sastojaka vrsta Cistanche. J. Chromatogr. A., 1216: 1970-1979.

Jung GW, Kwak JY, Kim IH, Koo MY, Park JI, Yoon S, Jung DG, Jung SI, Kwon HY i Yoon JH (1999). Uloga faktora rasta u regeneraciji živaca koji sadrže dušikov oksid sintazu (NOS) nakon kavernozne neurotomije u štakora. Int. J. Impot. Res., 11: 227-235.

Kupelian V, Shabsigh R, Travison TG, Page ST, Araujo AB i McKinlay JB (2006). Postoji li veza između spolnih hormona i erektilne disfunkcije? Rezultati studije starenja muškaraca u Massachusettsu. J. Urology, 176: 2584-2588.

Liu ZR, Zhang D, Wu HJ, Li YL, Chen SP i Yang YM (2009). Učinak Cistanche electuary na sintazu dušikovog oksida i hranjenje bubrega Yang. J. Med. & Pharm. Brada. Min., 5: 33-34.

Luo Q, Li Z, Huang X, Yan J, Zhang S i Cai YZ (2006). Polisaharidi Lycium barbarum: zaštitni učinci protiv oštećenja testisa štakora uzrokovanog toplinom i H2O2-prouzročenog oštećenja DNA u stanicama testisa miša i blagotvoran učinak na spolno ponašanje i reproduktivnu funkciju polukastriranih štakora. Life Sci.,79: 613-621.

Matsumoto AM, Karpas AE i Bremner WJ (1986). Kronična primjena ljudskog korionskog gonadotropina u normalnih muškaraca: dokaz da je folikulostimulirajući hormon neophodan za održavanje kvantitativno normalne spermatogeneze kod muškaraca. J. Clin. Endocrinol. Metab.,62: 1184-1192.

McClure RD (1988). Endokrina evaluacija i terapija erektilne disfunkcije. Urol. Clin. N. Am., 15: 53-64.

Morales A, Buvat J, Gooren LJ, Guay AT, Kaufman JM, Tan HM i Torres LO (2004). Endokrini aspekti seksualne disfunkcije u muškaraca. J. Sex Med., 1: 69-81.

Pantaleão TU, Mousovich F, Rosenthal D, Padrón ÁS, Carvalho DP i Costa VMCd (2010.). Učinak serumskih razina estradiola i leptina na funkciju štitnjače, unos hrane i prirast tjelesne težine kod ženki Wistar štakora. Steroidi, 75: 638-642. Robert WH i Robert EB (2004). Hormonska regulacija spermatogeneze. Int. J. Androl., 27: 335-342.

Schlatt S, Kim SS i Gosden R (2002). Spermatogeneza i steroidogeneza u tkivu testisa miša, hrčka i majmuna nakon krioprezervacije i heterotopnog presađivanja na kastrirane domaćine. Reprodukcija, 124: 339-346.

Stefanova NA, Fursova AZ, Sarsenbaev KN i Kolosova NG (2011). Učinci Cistanche deserticola na ponašanje i znakove katarakte i retinopatije kod OXYS štakora s ubrzanim starenjem. J. Ethnopharmacol., 138: 624-632.

Talha M, Bilal G, Gökhan T, Arı Z i Coşkun B (2007). Odnos između razine spolnih hormona i erektilne disfunkcije: Koje pretrage treba raditi rutinski? Yonsei. Med. J., 48: 1015

Tombal B (2005). Odgovarajuća kastracija s agonistima hormona koji oslobađa luteinizirajući hormon (LHRH): Koja je optimalna razina testosterona? Eur. Urol. Suppl., 4: 14-19.

Trachtenberg J (1985). Optimalna koncentracija testosterona za liječenje raka prostate. J. Urologija, 133: 888-890

Traish AM, Goldstein I i Kim NN (2007). Testosteron i erektilna funkcija: od temeljnih istraživanja do nove kliničke paradigme za liječenje muškaraca s nedostatkom androgena i erektilnom disfunkcijom. Eur. Urol., 52: 54-70.

Trisomboon H, Watanabe G, Wetchasit P i Taya K (2007). Učinak dnevnog tretmana s tajlandskom biljkom, Kaempferia parviflora, u Hershbergerovom testu na kastriranim nezrelim štakorima. J. Reprod. Razviti, 53: 351- 356.

Xiong WT, Gu L, Wang C, Sun HX i Liu X (2013). Antihiperglikemijski i hipolipidemijski učinci Cistanche tubulosa kod db/db miševa s dijabetesom tipa 2. J. Ethnopharmacol., 150: 935-945.

Zhao SY, He XY, Jia BG, Peng QY i Liu X (2011.). Proizvodnja akteozida iz Cistanche tubulosa beta-glukozidazom. pak. J. Pharm. Sci., 24: 135-141.

For more information:1950477648nn@gmail.com