Usporedba jednog i ponovljenog doziranja protuupalnih mezenhimskih stromalnih stanica ljudske pupkovine u mišjem modelu polimikrobne sepse

Sažetak

Mezenhimalne stromalne stanice (MSC) ublažavaju pretkliničku sepsu i akutnu ozljedu bubrega povezanu sa sepsom (SAAKI), ali klinička ispitivanja MSC s jednom dozom nisu pokazala snažnu učinkovitost. Ova studija istraživala je imunomodulatorne učinke novog MSC proizvoda (CD362-odabrani MSC-i dobiveni iz ljudske pupkovine [hUC-MSCs]) u mišjim modelima endotoksemije i polimikrobne sepse. U početku, miševi su primili intraperitonealni (ip) lipopolisaharid (LPS) nakon čega su slijedile pojedinačne ip doze hUC-MSC ili nosača. Zatim su miševi podvrgnuti podvezivanju cekuma i punkciji (CLP) nakon čega su uslijedile intravenske (iv) doze hUC-MSC nakon 4 sata ili 4 i 28 sati. Analize su uključivale serum/plazma testove biokemijskih indeksa, upalnih medijatora i biomarkera AKI NGAL; višebojna protočna citometrija peritonealnih makrofaga (LPS) i subpopulacija intrarenalnih imunoloških stanica (CLP) i histologija/imunohistokemija bubrega (CLP). 72 sata nakon injekcija LPS-a, hUC-MSC smanjili su upalne medijatore u serumu i omjer peritonealnih makrofaga M1/M2. Ponovljene, ali ne pojedinačne doze hUC-MSC primijenjene 48 h nakon CLP-a dovele su do nižih koncentracija upalnih medijatora u serumu, nižeg NGAL-a u plazmi i poništenja intrarenalnih T-stanica i subpopulacija mijeloičnih stanica povezanih sa sepsom. Analiza hijerarhijskog grupiranja svih 48-h analita u serumu/plazmi pokazala je djelomičnu ko-klasterizaciju hUC-MSC CLP životinja s ponovljenim dozama sa skupinom Sham, ali nije otkrila jasan potpis odgovora na terapiju. Zaključeno je da su ponovljene doze CD362-odabranih hUC-MSC potrebne za modulaciju sistemskih i lokalnih imunoloških/upalnih događaja kod polimikrobne sepse i SA-AKI. Interindividualna varijabilnost i nedostatak učinka primjene jedne doze MSC u modelu CLP u skladu su s dosadašnjim opažanjima iz kliničkih ispitivanja u ranoj fazi.

Ključne riječi

Akutna ozljeda bubrega · Mezenhimalna stromalna stanica · Regenerativna medicina · Sepsa · Upala · Stanična terapija

Kliknite ovdje za kupnju dodatka Cistanche

Uvod

Sepsu karakterizira po život opasna disfunkcija organa zbog nereguliranog odgovora domaćina na infekciju uzrokovanu bakterijskim, gljivičnim, virusnim i parazitskim patogenima [1]. Svake godine sepsa zahvati gotovo 50 milijuna ljudi diljem svijeta, često dovodeći do teških sustavnih posljedica i ozljeda organa, uključujući akutno oštećenje bubrega (AKI), što rezultira približno 11 milijuna smrti [2, 3]. Mezenhimalne stromalne stanice (MSC) multipotentne su stanice s opsežnim imuno-modulatornim svojstvima koje se mogu izolirati iz različitih tkiva [4]. Sada je dobro poznato da MSC nudi potencijalnu terapiju za modulaciju bolesti za sepsu i AKI povezanu sa sepsom (SA-AKI) [5, 6]. Nekoliko nedavnih studija koje su koristile modele ligacije i punkcije cekuma miša i štakora (CLP), lipopolisaharida (LPS) ili fekalnog peritonitisa pokazalo je da sustavna primjena MSC-a ima potencijal smanjiti upalu, spriječiti bakterijsku infekciju i poboljšati popravak ozlijeđenog tkiva u sepse [7–11], uključujući SA-AKI, [10, 12–15] modulacijom ravnoteže između proupalnih i protuupalnih stanja.

Nedavno ispitivanje na zdravim odraslim osobama potvrdilo je da preventivno intravenozno (iv) liječenje s 4 × 106 MSC/kg proizvodi rane imunomodulatorne učinke na odgovor domaćina na LPS [16]. Nadalje, primjena alogene MSC pacijentima sa septičkim šokom (NCT01849237, NCT02421484 i NCT02328612) i sindromom akutnog respiratornog distresa povezanog sa sepsom (NCT01775774) pokazala je dobru sigurnost i podnošljivost u kliničkim ispitivanjima faze 1 [16-19]. Unatoč ovim ohrabrujućim rezultatima, Galstyan i sur. također je izvijestio da jedna doza iv MSC-a nije spriječila smrt od disfunkcije organa povezane sa sepsom, povećavajući mogućnost da će dodatne doze biti potrebne za postizanje značajne kliničke koristi [17]. Nedavno ispitivanje faze 2 bez sepse (NCT01602328) u kojem su pojedinačne doze alogenog MSC-a davane intra-vortikalno pacijentima sa sterilnim AKI-om nakon operacije kardiopulmonalne premosnice također nije pokazalo povoljan učinak na disfunkciju organa i preživljenje pacijenata unatoč obećavajućem predkliničkim rezultatima i rezultatima ispitivanja faze 1 [20]. Može li ponovljeno doziranje tijekom ranog tijeka sepse i drugih akutnih upalnih sindroma povećati ili produžiti učinke MSC-a na modulaciju bolesti ostaje relativno nedovoljno istraženo na pretkliničkim i translacijskim razinama. Nadalje, nepotpuno poznavanje mehanizma djelovanja, odgovora na dozu i optimalnih kliničkih pokazatelja za primjenu MSC u sepsi ograničava potencijal za planiranje uspješnih ispitivanja [5, 21, 22].

U trenutnoj studiji proveli smo pretkliničko ispitivanje protuupalnih učinaka CD362-odabranih MSC-a dobivenih iz ljudske pupkovine (hUC-MSC) na mišjim modelima sepse. Ovaj površinski marker odabran hUC-MSC je novi terapeutski proizvod koji je pokazao dokaze o učinkovitosti na štakorskim modelima bakterijske upale pluća i sepse kada se daje rano nakon pojave bolesti [23, 24]. Kao ispitni medicinski proizvod kliničke razine (IMP), hUC-MSC trenutno prolazi fazu I/II ispitivanja na pacijentima s umjerenim do teškim sindromom akutnog respiratornog distresa (ARDS) uzrokovanim COVID-19 (NCT03042143) i u više autoimune upalne bolesti (POLARIZ). Cilj nam je bio pokazati protuupalni potencijal pojedinačnih doza hUC-MSC-a u mišjim modelima endotoksemije/polimikrobne sepse izazvane LPS-om i CLP-om [25, 26] i, u potonjem, utvrditi je li druga primjena hUC-MSC-a tijekom rani tijek bolesti rezultirao je većim ili češćim povoljnim učincima na sustavnu upalu i ozljedu specifičnu za organe, kao što je primjer SA-AKI.

Cistanche tubulosa

Materijali i metode

1. Stanice

Anti-CD362 plus -odabrani hUC-MSC uzgojeni su iz etičkog tkiva ljudske pupkovine dobivenog od Tissue Solutions Ltd. (Glasgow, UK). Primarna izolacija i ekspanzija kultura CD362 plus hUC-MSC provedene su kako je prethodno opisano [19, 23, 27]. Kriokonzervirane bočice (1 × 107 u 1 mL) anti-CD362 plus -odabranih hUC-MSC odmrznute su i prebačene u 9 mL fosfatno puferirane fiziološke otopine (PBS). Nakon analize živih/mrtvih pomoću tripan plave boje ili automatskog brojača stanica (NucleoCounter® NC-200™, Chemometec A/S, Danska), potrebni broj stanica je peletiran centrifugiranjem na 400 × g tijekom 5 minuta i stanice su resuspendirane u 100 ul sterilne fiziološke otopine za intraperitonealnu (ip) ili iv injekciju.

2. Postupci na životinjama

Svi postupci na životinjama provedeni su prema licenci (br. 255/17) Etičkog odbora za pokuse na životinjama, Sveučilište u Barceloni, i prema odobrenju (AE19125/P082 i AE19125/P066) Regulatornog tijela za zdravstvene proizvode, Irska, i odobreni od strane Etičkog odbora za istraživanje brige o životinjama NUI Galway. Svi su postupci izvedeni u licenciranim objektima za životinje na NUI Galwayu i Sveučilištu u Barceloni.

Za LPS model endotoksemije korišteni su muški C57BL/6 miševi stari 10-12 tjedana iz Charles River Ltd., Kent, UK. Miševima je injicirano ip 5 ug/g LPS (LPS 0111:B4, kataloški br. L2630, Sigma Aldrich, UK) u 100 ul sterilne fiziološke otopine. Miševi su bili smješteni u skupinama od 3-5 miševa/kavezu tijekom studije u kavezima s pojedinačnom ventilacijom. Pojedinačne ip injekcije 2,5 × 105 hUC-MSC ili jednaki volumeni nosača (sterilne fiziološke otopine) primijenjene su 4 sata nakon injekcija LPS-a. Životinje su praćene svaka 4 sata do kraja studije korištenjem tablice za ocjenu nevolje i mjera podrške prema unaprijed utvrđenom protokolu. Humana eutanazija provedena je na definiranoj krajnjoj točki eksperimenta ili ranije ako su životinje premašile unaprijed definirani prag težine. U vrijeme eutanazije, peritonealni eksudati prikupljeni su za analizu protočnom citometrijom pažljivim ubacivanjem 5 mL sterilnog PBS-a u i iz peritonealne šupljine.

Podvezivanje i punkcija cekuma (CLP) provedena je na {{0}} tjedana starih mužjaka C57BL/6 miševa (Charles River Ltd., UK). Miševi su primili buprenorfin {{1{{20}}}}.1 mg/kg (Richter Pharma AG, Austrija) supkutano 25-30 min prije postupka i bili su anestezirani s 1.{{8 }} posto izoflurana (s protokom O2 od 0,5 L/min) na NUI Galway ili s Anesketinom (100 mg/mL; Dechra Veterinary Products SLU, Španjolska) i Rampunom (20 mg/mL; Bayer, Njemačka) na Sveučilištu u Barceloni. Donja polovica trbuha je obrijana i očišćena 4-postotnim klorheksidinom ili povidon-jodom i zarezana 1 cm okomito duž središnje linije. Cekum je eksternaliziran i distalnih 50 posto ligirano pomoću 4.0- 6.0 M šavova. Materijal cekuma je oslobođen 'kroz i kroz' punkcijom 21-mjernom iglom i kapljica fekalne tvari je izlučena prije ponovnog postavljanja cekuma u peritonealnu šupljinu i šivanja mišića i kože. Lažno operirani miševi prošli su identičan postupak, uključujući otvaranje peritoneuma i izlaganje crijeva, ali bez podvezivanja i perforacije cekuma. Miševi su primili 0,5 mL Gelofusina (Braun Melsungen AG, Njemačka) ip instilacijom prije zatvaranja rane. Postoperativna potpora sastojala se od razrijeđenog buprenorfina davanog supkutano (sc) svakih 8-12 h do unaprijed određenih krajnjih točaka (48 ili 72 h za pojedinačne eksperimente). Primjena 1 × 106 hUC-MSC ili ekvivalentnih volumena nosača (sterilne fiziološke otopine) provedena je iv putem repne vene 4 h ili 4 i 28 h nakon CLP. Često praćenje i podrška provedeni su u skladu s etički odobrenim protokolom. Humana eutanazija provedena je na definiranoj krajnjoj točki eksperimenta ili ranije ako su životinje premašile unaprijed definirani prag težine.

Stanične doze za dva životinjska modela korištena za studiju odabrane su na temelju prethodnih izvješća o protuupalnim učincima ljudskih MSC-a u sličnim modelima [9, 13, 14, 28, 29]. Veličine skupina za LPS studiju odabrane su empirijski na temelju relevantnih prethodnih izvješća za ovaj model [30, 31]. Veličine skupina za CLP studiju određene su za primarni ishod NGAL u plazmi 24 sata nakon operacije. Koristeći podatke iz pilot eksperimenta, veličina uzorka od 9 životinja po skupini izračunata je kako bi osigurala 90 posto snage uz pretpostavku razine značajnosti od 5 posto i dvostrani test (http://www.3rs-reduction.co.uk/html /6__snaga_i_uzorak_veličina.html). Za odabir konačne veličine grupe od n=10 primijenjena je očekivana stopa smanjenja od 10 posto.

Ekstrakt cistanče

3. Uzorkovanje krvi i nabava tkiva

Uzorci venske krvi do maksimalnog volumena od 20 μL povremeno su uzimani iz vena repa i lica aseptičnom tehnikom pomoću igala veličine 25-21 i sakupljani su u epruvete s heparinom (VWR International, Dublin, Irska). Uzorak terminalne krvi uzet je punkcijom srca u vrijeme eutanazije. Serum je sakupljen u mikroepruvete sa serumskim gelom i aktivatorom zgrušavanja (Sarstedt, Wexford, Irska). Uzorci plazme i seruma pripremljeni su centrifugiranjem na 10,000×g 10 minuta. Uzorci seruma pohranjeni su na -80 stupnjeva i naknadno analizirani na biokemijske parametre od strane NationWide Laboratories (Lancashire, UK). Slezena, pluća, bubrezi i jetra su secirani odmah nakon eutanazije.

4. Imunotestovi

Koncentracija lipokalina (NGAL) povezana s neutrofilnom želatinazom u plazmi kvantificirana je razvojnim kompletom za mišji Lipocalin-2/NGAL Duo-Set ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MI, SAD) u skladu s protokolom koji je predložio proizvođač (pojedinosti u Dodatnim metodama ). Za multipleksnu kvantifikaciju citokina i kemokina u serumu, bio-Plex Pro mišji citokin standardni 23-plex test (Bio-Rad, Accuscience) korišten je prema uputama proizvođača. Uzorci su analizirani na Bioplex 200 multiplex ELISA sustavu (BioRad, Accuscience).

5. Polukvantitativno ocjenjivanje presjeka bubrežnog tkiva

Obojeni dijelovi bubrega analizirani su na slijepi način svjetlosnim mikroskopom pri povećanju od 40X pomoću mikroskopa svijetlog polja Olympus BX43 (Olympus, Center Valley, PA) i softvera IS TCapture (Tucsen Photonics Co., Fujian, Kina). Za svaki bubreg snimljeno je dvadeset nepreklapajućih polja obojenog presjeka, a pozitivno obojeno područje ocijenjeno je od strane slijepog promatrača za (A) tubularnu dilataciju, odljev i nekrozu (PAS) i (B) ekspresiju NGAL [32] Bodovanje je provedeno na 0-4 polukvantitativnoj skali bodovanja (pojedinosti u Dodatnim metodama). Srednji rezultati izračunati su za svaki bubreg, a konačni rezultati su izraženi kao srednja vrijednost skupine ± SD.

Cistanche prah

Rasprava

Sepsa i njezina česta komplikacija SA-AKI veliki su javnozdravstveni izazov zbog stalnog nedostatka učinkovitih tretmana i razočaravajućih rezultata kliničkih ispitivanja u kasnoj fazi [2, 3]. Nekoliko nedavnih pretkliničkih studija objavilo je rezultate koji pokazuju da MSC različitih izvora i njihovi proizvodi imaju pozitivne učinke na težinu bolesti i preživljenje u modelima sepse i AKI [7, 8, 11-15]. Bez obzira na to, kliničke dobrobiti MSC-a u sepsi i SA-AKI ostaju nedokazane s ograničenim podacima dostupnim kod pacijenata [5]. Do danas su klinička ispitivanja dokumentirala da je jedna doza iv infuzije MSC-a u uvjetima primjene LPS-a, sepse i ARDS-a sigurna i izvediva [16-19], ali ne smanjuje izravno smrtnost od zatajenja organa povezanog sa sepsom [17] . U ovoj smo studiji usporedili učinke intravenske primjene jedne i dvostruke doze posebnog ljudskog MSC terapeutskog proizvoda (CD362- odabrani hUC-MSC) u mišjem CLP modelu polimikrobne sepse. U početku, u skladu s nedavno objavljenim rezultatima za ovaj isti MSC produkt u štakorskim modelima bakterijske upale pluća i sepse [23, 24], potvrdili smo potencijal za ranu primjenu hUC-MSC za modulaciju sistemske upale izazvane LPS-om kod miševa. Međutim, u mišjem CLP modelu polimikrobne sepse, naši su rezultati pokazali da pojedinačne doze hUC-MSC primijenjene iv 4 sata nakon indukcije fekalnog peritonitisa nisu imale jasan koristan učinak na sustavnu upalu ili ozljedu tkiva specifične za organe (bubrežne). Nasuprot tome, primjena druge iv doze hUC-MSC 24 sata kasnije rezultirala je višestrukim signalima poboljšane upale i oštećenja bubrega 48 sati nakon početka sepse. Unatoč tome, korist od preživljenja za režim dvostruke doze nije dokazana. Naši rezultati naglašavaju važnost provođenja in vivo studija terapijskih proizvoda MSC-a na više modela i izvješćivanja o pozitivnim i negativnim pretkliničkim ishodima kako bi se bolje informirali o kliničkom prijevodu i dizajnu ispitivanja. Uzeti zajedno, naši rezultati također pružaju dokaz da se ograničena ili odsutna korist od ranih režima jednokratne doze protuupalnih MSC proizvoda u ispitivanjima sepse može barem djelomično prevladati ponovljenim doziranjem.

U mišjem LPS modelu, jedna, rana doza hUCMSC modulirala je sustavne razine i urođenih i adaptivnih upalnih medijatora tijekom najmanje 72 sata, iako bez očitog učinka na rezultate ozbiljnosti i preživljavanje. Fenotipska analiza peritonealnih makrofaga pružila je dokaze da je primjena hUC-MSC povezana s predviđenim lokalnim imunološkim modulacijskim učinkom – iskrivljenjem makrofaga prema M2 polarizaciji, što je povezano s razrješenjem upalne ozljede i promicanjem popravka tkiva [29, 35] i je vjerojatno da će biti posredovana MSC cross-talk s rezidentnim mijeloidnim stanicama [36]. Doista, nedavne studije su izvijestile da terapijska imunomodulacija pomoću MSC-a u uvjetima sepse može ovisiti o njihovoj fagocitozi od strane mijeloidnih stanica (mononuklearnih fagocita) koje zatim prolaze kroz alternativnu aktivaciju što rezultira proizvodnjom IL-10 i drugih parakrinih anti- upalni medijatori [7, 27, 37]. Iako bi bilo zanimljivo utvrditi jesu li dobrobiti takve imunomodulacije pojačane ponovljenim dozama hUC-MSC nakon primjene LPS-a, zaključili smo da bi eksperimentalni model koji bolje odražava razvoj sepse imao veću kliničku važnost. Stoga, nakon što je potvrđena biološka aktivnost hUC-MSC u miševa primjenom LPS-a, mišji CLP model korišten je za karakterizaciju protuupalnih učinaka povezanih s ponovljenim doziranjem i kvantifikaciju učinaka specifičnih za bubrege hUC-MSC u okruženju polimikrobne sepse. i SA-AKI. U našim rukama, ovaj je model bio povezan s umjereno teškom sepsom (otprilike 70 posto, 50 posto i 40 posto preživljenja u 48, 96 i 168 sati respektivno u neliječenih životinja) bez očitog zatajenja jetre i bubrega. Naša zapažanja za model, uključujući stope smrtnosti i trendove u serumskim jetrenim parametrima i albuminu, u skladu su s vrlo sveobuhvatnim profiliranjem mišjeg CLP-a koje su objavili Li et al. [38], koji također dokumentira smanjenu tjelesnu temperaturu, krvni tlak i broj otkucaja srca tijekom prvih 48 sati nakon CLP-a. Zanimljivo, dok Li et al. dokumentirano povećanje kreatinina u serumu i dušika ureje u krvi 8 i 16 sati nakon CLP-a, njihovi rezultati pokazuju da su ti bubrežni funkcionalni biomarkeri pali na normalnu (ili ispod normalne) razine do 48 sati – možda odražavajući evoluirajuće učinke promijenjenog metabolizma/mišićne mase na ove biomarkere kako model napreduje [38]. U skladu s ovim, analiza seruma/plazme i bubrežnog tkiva nakon 48 sati ukazala je na značajnu sistemsku upalu i odgovor na oštećenje bubrega bez očitih dokaza ishemijskog oštećenja/nekroze. Ove posljednje analize dale su najjasniji dokaz za modulacijski učinak režima dvostruke doze hUCMSC na težinu polimikrobne sepse u usporedbi s primjenom jedne doze koja je, za razliku od nedavno prijavljenih rezultata na CLP modelu štakora [24], bila nerazlučiva. iz skupine CLP liječene fiziološkom otopinom za sve ispitane indekse. Konkretno, klinički relevantan biomarker AKI, NGAL, pokazao se kao vrijedan diskriminator težine sepse i učinka liječenja u ovom modelu i može biti važan biomarker za buduća klinička ispitivanja staničnih terapija sepse i SA-AKI [33, 39]. ].

Naši rezultati o učinku iv MSC-a na preživljenje u malim životinjskim modelima sepse u suprotnosti su s nekim drugim izvješćima [28, 40], ali su, posebice, u skladu s opaženim učincima alogenih MSC-a u kliničkim ispitivanjima na ljudima [5, 16– 18, 41]. U tom smislu, istaknuli bismo potencijalnu ulogu pristranosti u objavljivanju – konkretno, selektivnog objavljivanja rezultata koji odražavaju pozitivne učinke – kao važnog pokretača nerealnih očekivanja za učinkovitost jednodoznih režima MSC-a i drugih naprednih terapija u najranijim stadijima kliničke prijevod [42]. Doista, Sun i sur., u nedavnoj meta-analizi 29 studija na životinjama o učinkovitosti terapija MSC u sepsi, otkrili su značajnu pristranost u objavljivanju i nedostatak jasnoće u vezi s optimalnom dozom stanica među tim pretkliničkim izvješćima [43]. Unatoč tome, također izvještavamo o karakterističnim pozitivnim nalazima koji mogu pomoći u postizanju ciljeva translacije za UC-MSC kod sepse ili drugih sistemskih i organskih upalnih bolesti, kao što su AKI, jetrene ili respiratorne bolesti. U oba modela, ove molekularne promjene ukazuju na složene interakcije hUC-MSC s Th1 i Th2 imunološkim odgovorom. Takvi učinci na aktivaciju T-efektorskih stanica i ravnotežu fenotipa T pomoćnika mogu imati ključnu ulogu u modulaciji akutne faze sepse jer neselektivna, neregulirana aktivacija imunoloških efektora rezultira visokim razinama citokina u cirkulaciji pridonosi zatajenju više organa [44] i, u slučaju T-stanica, može biti praćen široko rasprostranjenom apoptozom i naknadnim imunološkim nedostatkom [45]. Također je pokazano da primjena MSC-a može smanjiti lokaliziranu upalu tkiva reguliranjem homeostaze citokina i smanjenjem prometa imunoloških stanica u organe [44]. U skladu s tim, naša kvantitativna analiza niza populacija intrarenalnih imunoloških stanica 48 sati nakon sepse izazvane CLP-om otkrila je nedostatke izazvane sepsom koji utječu i na urođene i na adaptivne efektore, uključujući gubitak dvostruko negativnih T stanica o kojima je nedavno izvješteno biti rani odgovor na AKI [46]. Značajno je da je za životinje tretirane dvostrukom, ali ne i jednom dozom hUC-MSC, postojao dokaz reverzije intrarenalne deplecije imunoloških stanica. Budući da su slični trendovi primijećeni i u plućima i slezeni, naši rezultati ukazuju na mogućnost ponovljenog iv doziranja MSC-a za široko ublažavanje iscrpljenosti imunoloških stanica iz ne-limfoidnih i limfoidnih organa – aspekt sepse koji je povezan s naknadnom smrtnošću zbog sekundarna infekcija [47, 48]. Na temelju dodatnog opažanja povećane stanične smrti među intrarenalnim CD45 plus stanicama u neliječenih CLP životinja, moguće je da to odražava izravne ili neizravne učinke hUC-MSC na smanjenje mitohondrijske disfunkcije i pro-apoptotičke signalizacije [49-51]. Unatoč tome, bit će potrebni fokusiraniji eksperimenti kako bi se u potpunosti razjasnili mehanizmi pomoću kojih sistemska primjena MSC-a čuva broj mijeloidnih i/ili limfoidnih stanica u sepsi i kako bi se utvrdilo mogu li se oni terapeutski iskoristiti.

Cistanche kapsule

S obzirom na inherentnu varijabilnost, koju mi ​​i drugi promatramo s pojedinačnim ishodima za mišji CLP model, pretpostavili smo da bi analiza hijerarhijskog grupiranja kvantitativnih očitanja za niz cirkulirajućih medijatora povezanih s upalom nakon 48 sati pomogla da se bolje definira poseban "potpis odgovora" među životinjama liječenim MSC-om. Iako se 60 posto skupine s dvostrukom dozom grupiralo u obrazac koji ih je odvajao od većine skupina s jednom dozom i neliječenih i bio bliži lažnoj skupini, nije se mogao identificirati vrlo jasan višeanalitski profil modulacije bolesti. Pristup analize glavnih komponenti (PCA) dao je sličan zaključak (podaci nisu prikazani). Treba priznati da se podaci o životinjama koje nisu uspjele preživjeti do 48 sati ne mogu dobiti i moguće je da bi analize u jednoj ili više ranijih vremenskih točaka mogle pružiti jasnije odvajanje onih koji su odgovorili/ne odgovorili. Unatoč tome, ova analiza naglašava složenost međuindividualnih varijacija koje su svojstvene životinjskim modelima sepse i staničnim terapijama, čak i uz veliku pozornost na načela dobrog eksperimentalnog dizajna [52, 53], i to odražava slične izazove s kojima se suočava klinička primjena nove terapije za sepsu [18, 20, 41, 54, 55].

Treba priznati neka ograničenja studije. Prije svega, usredotočili smo se na istraživanje in vivo učinaka CD{0}}odabranog hUC-MSC jer je ovaj stanični proizvod podvrgnut kliničkim ispitivanjima za druge bolesti uzrokovane upalom uključujući ARDS-19-povezanu s COVID-om. Ovaj dizajn studije onemogućio je dobivanje daljnjeg uvida u usporedne učinke, kod sepse i SA-AKI, staničnih proizvoda testiranih s onima od neselektiranih hUC-MSC ili s MSC-ima dobivenim iz koštane srži ili drugih tkiva. Drugo, budući da su upotrijebljene doze stanica odabrane na temelju prethodnih studija protuupalnih učinaka ljudskih MSC-a na miševima, nije moguće odrediti daje li višestruka primjena većeg ili nižeg broja stanica veću korist. Naposljetku, budući da su veličine skupina za pokuse s CLP modelom bile usmjerene na bavljenje učincima hUC-MSC na sistemski upalni biomarker ozbiljnosti sepse/SA-AKI, moguće je da bi veće veličine skupina jasnije definirale učinke ponovljenih doza na opstanak. Iako ova pitanja dodatno naglašavaju potrebu za sekvencijalnim pretkliničkim eksperimentima koji se što je moguće više pridržavaju ključnih parametara potrebnih za optimalan dizajn kliničkog ispitivanja, rezultati koje ovdje predstavljamo podupiru stalni fokus na režime s više doza protuupalnih MSC-a u sepsi i SA-AKI.

Reference

1. Singer, M., Deutschman, CS, Seymour, CW, Shankar-Hari, M., Annane, D., Bauer, M., Bellomo, R., Bernard, GR, Chiche, JD, Coopersmith, CM, Hotchkiss , RS, Levy, MM, Marshall, JC, Martin, GS, Opal, SM, Rubenfeld, GD, van der Poll, T., Vincent, JL, i Angus, DC (2016.). Treća međunarodna konsenzusna definicija za sepsu i septički šok (sepsa-3). Journal of the American Medical Association, 315(8), 801–810. https://doi.org/10.1001/jama.2016.0287

2. Hoste, EA, Bagshaw, SM, Bellomo, R., Cely, CM, Colman, R., Cruz, DN, Edipidis, K., Forni, LG, Gomersall, CD, Govil, D., Honore, PM, Joannes-Boyau, O., Joannidis, M., Korhonen, AM, Lavrentieva, A., Mehta, RL, Palevsky, P., Roessler, E., Ronco, C., et al. (2015). Epidemiologija akutne ozljede bubrega u kritično bolesnih bolesnika: multinacionalna studija AKI-EPI. Intenzivna medicina, 41(8), 1411–1423. https://doi.org/ 10.1007/s00134-015-3934-7

3. Rudd, KE, Johnson, SC, Agesa, KM, Shackelford, KA, Tsoi, D., Kievlan, DR, Colombara, DV, Ikuta, KS, Kissoon, N., Finfer, S., Fleischmann-Struzek, C ., Machado, FR, Reinhart, KK, Rowan, K., Seymour, CW, Watson, RS, West, TE, Marinho, F., Hay, SI, et al. (2020). Globalna, regionalna i nacionalna incidencija i smrtnost od sepse, 1990-2017: Analiza za istraživanje globalnog opterećenja bolesti. Lancet, 395(10219), 200–211. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(19)32989-7

4. Arutyunyan, I., Elchaninov, A., Makarov, A. i Fatkhudinov, T. (2016). Pupkovina kao potencijalni izvor za terapiju temeljenu na mezenhimalnim matičnim stanicama. Stem Cells International, 2016, 6901286. https://doi.org/10.1155/2016/6901286

5. Fazekaš, B. i Grifn, dr. med. (2020.). Terapije bazirane na mezenhimskim stromalnim stanicama za akutnu ozljedu bubrega: napredak u posljednjem desetljeću. Kidney International, 97(6), 1130–1140. https://doi.org/10. 1016/j.kint.2019.12.019

6. Hickson, LJ, Herrmann, SM, McNicholas, BA, & Grifn, MD (2021). Napredak prema kliničkoj primjeni mezenhimalnih stromalnih stanica i drugih regenerativnih terapija koje moduliraju bolesti: primjeri iz područja nefrologije. Bubreg360, 2 (3), 542–557. https://doi.org/10.34067/kid.0005692020

7. Weiss, ARR, Lee, O., Eggenhofer, E., Geissler, E., Korevaar, SS, Soeder, Y., Schlitt, HJ, Geissler, EK, Hoogduijn, MJ, i Dahlke, MH (2020.). Diferencijalni učinci toplinski inaktiviranih msc s nedostatkom sekretoma i metabolički aktivnih msc u sepsi i alogenoj transplantaciji srca. Matične stanice, 38(6), 797–807. https://doi.org/10.1002/stem.3165

8. Jerkic, M., Gagnon, S., Rabani, R., Ward-Able, T., Masterson, C., Otulakowski, G., Curley, GF, Marshall, J., Kavanagh, BP, & Lafey, JG (2020). Mezenhimalne stromalne stanice ljudske pupkovine djelomično ublažavaju sistemsku sepsu pojačavanjem ubijanja bakterija peritonealnih makrofaga putem indukcije heme oksigenaze-1 u štakora. Anesteziologija, 132 (1), 140–154. https://doi.org/10.1097/ ALN.0000000000003018

9. Wu, KH, Wu, HP, Chao, WR, Lo, WY, Tseng, PC, Lee, CJ, Peng, CT, Lee, MS, i Chao, YH (2016.). Vremenska serija ekspresije signalizacije receptora 4 sličnog cestarini u septičkih miševa liječenih mezenhimalnim matičnim stanicama. Šok, 45(6), 634–640. https://doi. org/10.1097/SHK.00000000000000546

10. Chang, CL, Leu, S., Sung, HC, Zhen, YY, Cho, CL, Chen, A., Tsai, TH, Chung, SY, Chai, HT, Sun, CK, Yen, CH i Yip , HK (2012). Utjecaj apoptotskih mezenhimalnih matičnih stanica dobivenih iz masnog tkiva na ublažavanje oštećenja organa i smanjenje smrtnosti kod sindroma sepse štakora izazvane punkcijom i podvezivanjem cekuma. Journal of Translational Medicine, 10, 244. https://doi. org/10.1186/1479-5876-10-244

11. Hall, SR, Tsoyi, K., Ith, B., Padera Jr., RF, Lederer, JA, Wang, Z., Liu, X. i Perrella, MA (2013.). Mezenhimalne stromalne stanice poboljšavaju preživljavanje tijekom sepse u odsutnosti hem oksigenaze-1: važnost neutrofila. Matične stanice, 31(2), 397–407. https://doi.org/10.1002/stem.1270

12. Zhang, G., Zou, X., Huang, Y., Wang, F., Miao, S., Liu, G., Chen, M., i Zhu, Y. (2016.). Izvanstanične vezikule izvedene iz mezenhimalnih stromalnih stanica štite od akutne ozljede bubrega putem antioksidacije pojačavanjem aktivacije nrf2/are kod štakora. Istraživanje bubrega i krvnog tlaka, 41(2), 119–128. https://doi.org/10. 1159/000443413

13. Luo, CJ, Zhang, FJ, Zhang, L., Geng, YQ, Li, QG, Hong, Q., Fu, B., Zhu, F., Cui, SY, Feng, Z., Sun, XF , i Chen, XM (2014). Mezenhimske matične stanice ublažavaju akutnu ozljedu bubrega povezanu sa sepsom kod miševa. Šok, 41 (2), 123–129. https://doi. org/10.1097/SHK.0000000000000080

14. Condor, JM, Rodrigues, CE, Sousa Moreira, R., Canale, D., Volpini, RA, Shimizu, MH, Camara, NO, Noronha Ide, L., i Andrade, L. (2016.). Liječenje ljudskim mezenhimalnim matičnim stanicama dobivenim iz Whartonovog želea ublažava ozljedu bubrega izazvanu sepsom, ozljedu jetre i endotelnu disfunkciju. Translacijska medicina matičnih stanica, 5(8), 1048–1057. https://doi.org/10.5966/sctm. 2015-0138

15. Zullo, JA, Nadel, EP, Rabadi, MM, Baskind, MJ, Rajdev, MA, Demaree, CM, Vasko, R., Chugh, SS, Lamba, R., Goligorsky, MS, i Ratliff, BB (2015. ). Sekretom endotelnih progenitorskih stanica ugrađenih u hidrogel i mezenhimalnih matičnih stanica daje upute za polarizaciju makrofaga kod endotoksemije. Translacijska medicina matičnih stanica, 4(7), 852–861. https://doi.org/10. 5966/sctm.2014-0111

16. Perlee, D., van Vught, LA, Scicluna, BP, Maag, A., Lutter, R., Kemper, EM, van 't Veer, C., Punchard, MA, Gonzalez, J., Richard, MP , Dalemans, W., Lombardo, E., de Vos, AF, i van der Poll, T. (2018.). Intravenozna infuzija ljudskih masnih mezenhimalnih matičnih stanica modificira odgovor domaćina na lipopolisaharid kod ljudi: randomizirano, jednostruko slijepo, placebom kontrolirano ispitivanje s paralelnim skupinama. Matične stanice, 36(11), 1778–1788. https:// doi.org/10.1002/stem.2891

17. Gennadiy Galstyan, PM, Parovichnikova, E., Kuzmina, L., Troitskaya, V., Gemdzhian, E., & Savchenko, V. (2018). Rezultati pilot randomiziranog ruskog kliničkog ispitivanja mezenhimalnih stromalnih stanica u jednom centru u bolesnika s teškom neutropenijom i septičkim šokom (RUMCESS). Međunarodni časopis Blood Research and Disorders, 5(1), 33. https://doi.org/10.23937/2469-5696/1410033

18. McIntyre, LA, Stewart, DJ, Mei, SHJ, Courtman, D., Watpool, I., Granton, J., Marshall, J., Dos Santos, C., Walley, KR, Winston, BW, Schlosser, K., Fergusson, DA, & Canadian Critical Care Trials Group, & Canadian Critical Care Translational Biology Group. (2018). Stanična imunoterapija septičkog šoka. Kliničko ispitivanje faze I. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 337–347. https://doi.org/10. 1164/rccm.201705-1006OC

19. Matthay, MA, Calfee, CS, Zhuo, H., Thompson, BT, Wilson, JG, Levitt, JE, Rogers, AJ, Gotts, JE, Wiener-Kronish, JP, Bajwa, EK, Donahoe, MP, McVerry , BJ, Ortiz, LA, Exline, M., Christman, JW, Abbott, J., Delucchi, KL, Caballero, L., McMillan, M., et al. (2019). Liječenje alogenim mezenhimalnim stromalnim stanicama umjerenog do teškog sindroma akutnog respiratornog distresa (START studija): randomizirano ispitivanje sigurnosti faze 2a. The Lancet Respiratory Medicine, 7(2), 154–162. https://doi.org/10. 1016/S2213-2600(18)30418-1

20. Swaminathan, M., Staford-Smith, M., Chertow, GM, Warnock, DG, Paragamian, V., Brenner, RM, Lellouche, F., FoxRobichaud, A., Atta, MG, Melby, S., Mehta, RL, Wald, R., Verma, S., Mazer, CD, i istraživači, A.-A. (2018). Alogene mezenhimalne matične stanice za liječenje AKI nakon kardiokirurškog zahvata. Časopis Američkog društva za nefrologiju, 29(1), 260–267. https://doi.org/10.1681/ASN.2016101150

21. Gotts, JE i Matthay, MA (2018). Stanična terapija kod sepse. Korak bliže. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 280–281. https://doi.org/10.1164/rccm. 201710-2068ED

22. Griffin, MD, i Swaminathan, S. (2020). Uredništvo: Inovativni biološki lijekovi i lijekovi za ciljano djelovanje na upalu bubrega. Frontiers in Pharmacology, 11, 38. https://doi.org/10.3389/fphar.2020.00038

23. Horie, S., Masterson, C., Brady, J., Loftus, P., Horan, E., O'Flynn, L., Elliman, S., Barry, F., O'Brien, T. , Lafey, JG i O'Toole, D. (2020). CD362(plus) mezenhimske stromalne stanice dobivene iz pupkovine za npr. coli pneumonija: Utjecaj režima doziranja, prolaza, krioprezervacije i antibiotske terapije. Istraživanje i terapija matičnih stanica, 11(1), 116. https://doi.org/10.1186/s13287-020-01624-8

24. Gonzalez, H., Keane, C., Masterson, CH, Horie, S., Elliman, SJ, Higgins, BD, Scully, M., Lafey, JG, i O'Toole, D. (2020.). CD362(plus) mezenhimalne stromalne stanice dobivene iz pupkovine ublažavaju polimikrobnu sepsu izazvanu ligacijom i punkcijom slijepog crijeva. Međunarodni časopis za molekularne znanosti, 21(21). https://doi.org/10.3390/ijms21218270

25. Lewis, AJ, Seymour, CW, i Rosengart, MR (2016.). Trenutačni mišji modeli sepse. Kirurške infekcije, 17(4), 385–393. https://doi.org/10.1089/sur.2016.021

26. Remick, DG i Ward, PA (2005). Procjena endotoksinskih modela za proučavanje sepse. Šok, 24 (Suppl 1), 7–11. https:// doi.org/10.1097/01.shk.0000191384.34066.85

27. de Witte, SFH, Luk, F., Sierra Parraga, JM, Gargesha, M., Merino, A., Korevaar, SS, Shankar, AS, O'Flynn, L., Elliman, SJ, Roy, D. , Betjes, MGH, Newsome, PN, Baan, CC i Hoogduijn, MJ (2018.). Imunomodulacija terapijskim mezenhimalnim stromalnim stanicama (MSC) pokreće se fagocitozom msc putem monocitnih stanica. Matične stanice, 36(4), 602–615. https:// doi.org/10.1002/stem.2779

28. Zhao, X., Liu, D., Gong, W., Zhao, G., Liu, L., Yang, L., i Hou, Y. (2014.). Ligandi receptora 3 nalik cestarini, poli(I:C), poboljšavaju imunosupresivnu funkciju i terapeutski učinak mezenhimalnih matičnih stanica na sepsu putem inhibicije mir-143. Matične stanice, 32(2), 521–533. https://doi.org/10.1002/stem.1543

29. Nemeth, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, PS, Mayer, B., Parmelee, A., Doi, K., Robey, PG, Leelahavanichkul, K., Koller, BH, Brown, JM, Hu, X., Jelinek, I., Star, RA i Mezey, E. (2009). Stromalne stanice koštane srži ublažavaju sepsu putem reprogramiranja makrofaga domaćina ovisnog o prostaglandinu E(2) kako bi se povećala njihova proizvodnja interleukina-10. Nature Medicine, 15 (1), 42–49. https://doi.org/10.1038/nm.1905

30. Fletcher, AL, Elman, JS, Astarita, J., Murray, R., Saeidi, N., D'Rozario, J., Knoblich, K., Brown, FD, Schildberg, FA, Nieves, JM, Heng , TS, Boyd, RL, Turley, SJ i Parekkadan, B. (2014.). Transplantacije fibroblastičnih retikularnih stanica limfnih čvorova pokazuju snažnu terapijsku učinkovitost kod mišje sepse s visokom smrtnošću. Science Translational Medicine, 6(249), 249ra109. https:// doi.org/10.1126/scitranslmed.3009377

31. Gonzalez-Rey, E., Anderson, P., Gonzalez, MA, Rico, L., Buscher, D. i Delgado, M. (2009.). Matične stanice odraslih ljudi dobivene iz masnog tkiva štite od eksperimentalnog kolitisa i sepse. Gut, 58(7), 929–939. https://doi.org/10.1136/gut.2008. 168534

32. Kaucsar, T., Godo, M., Revesz, C., Kovacs, M., Mocsai, A., Kiss, N., Albert, M., Krenacs, T., Szenasi, G. i Hamar, P. (2016). Omjer lipokalina povezan s neutrofilnom želatinazom urina/plazme osjetljiv je i specifičan marker subkliničke akutne ozljede bubrega u miševa. PLoS One, 11(1), e0148043. https://doi.org/10.1371/journ al.pone.0148043

33. Park, HK, Kim, S., Lee, S.-S., Kim, H.-J., Ahn, H.-S., Song, JY, Um, T.-H., Cho, C .-R., Jung, H., Koo, H.-K., Sim, YS, Song, J.-U., & Park, J.-H. (2015). Pomaže li NGAL u plazmi u predviđanju akutne ozljede bubrega kod pacijenata sa sepsom?: sustavni pregled i meta-analiza. European Respiratory Journal, 46 (suppl 59), PA2148. https://doi.org/10.1183/13993003.congr ess-2015.PA2148

34. Koeze, J., van der Horst, ICC, Keus, F., Wiersema, R., Dieperink, W., Kootstra-Ros, JE, Zijlstra, JG i van Meurs, M. (2020.). Lipokalin povezan s neutrofilnom želatinazom u plazmi pri prijemu u jedinicu intenzivnog liječenja kao prediktor progresije akutne ozljede bubrega. Clinical Kidney Journal, 13(6), 994–1002. https://doi. org/10.1093/ckj/sfaa002

35. Lee, KY (2019). M1 i M2 polarizacija makrofaga: mini-pregled. Medicinsko biološka znanost i inženjerstvo, 2(1), 1–5. https://doi.org/10.30579/mbse.2019.2.1.1

36. Eggenhofer, E., Luk, F., Dahlke, MH, i Hoogduijn, MJ (2014.). Život i sudbina mezenhimalnih matičnih stanica. Frontiers in Immunology, 5, 148. https://doi.org/10.3389/fmmu.2014.00148

37. Luk, F., de Witte, SF, Korevaar, SS, Roemeling-van Rhijn, M., Franquesa, M., Strini, T., van den Engel, S., Gargesha, M., Roy, D. , Dor, FJ, Horwitz, EM, de Bruin, RW, Betjes, MG, Baan, CC i Hoogduijn, MJ (2016.). Inaktivirane mezenhimalne matične stanice održavaju imunomodulacijski kapacitet. Matične stanice i razvoj, 25(18), 1342–1354. https://doi.org/10.1089/scd. 2016.0068

38. Li, JL, Li, G., Jing, XZ, Li, YF, Ye, QY, Jia, HH, Liu, SH, Li, XJ, Li, H., Huang, R., Zhang, Y., i Wang, H. (2018). Procjena kliničkih biomarkera povezanih sa sepsom u modelu septičnog miša. Časopis za međunarodna medicinska istraživanja, 46(6), 2410–2422. https://doi.org/10.1177/0300060518764717

39. Cai, L., Rubin, J., Han, W., Venge, P. i Xu, S. (2010.). Podrijetlo višestrukih molekularnih oblika HNL/NGAL u urinu. Clinical Journal of the American Society of Nephrology, 5(12), 2229– 2235. https://doi.org/10.2215/CJN.00980110

40. Capcha, JMC, Rodrigues, CE, Moreira, RS, Silveira, MD, Dourado, P., Dos Santos, F., Irigoyen, MC, Jensen, L., Garnica, MR, Noronha, IL, Andrade, L. , & Gomes, SA (2020).

41. Schlosser, K., Wang, JP, Dos Santos, C., Walley, KR, Marshall, J., Fergusson, DA, Winston, BW, Granton, J., Watpool, I., Stewart, DJ, McIntyre, LA, Mei, SHJ, & Canadian Critical Care Trials, G., & Canadian Critical Care Translational Biology, G. (2019). Učinci liječenja mezenhimalnim matičnim stanicama na sustavne razine citokina u ispitivanju sigurnosti eskalacije doze faze 1 pacijenata sa septičkim šokom. Critical Care Medicine, 47(7), 918–925. https://doi.org/10.1097/CCM.0000000000003657

42. van Rhijn-Brouwer, FCC, Gremmels, H., Fledderus, JO, i Verhaar, MC (2018.). Značajke mezenhimskih stromalnih stanica i regenerativni potencijal u kardiovaskularnim bolestima: Implikacije za staničnu terapiju. Transplantacija stanica, 27(5), 765–785. https:// doi.org/10.1177/0963689717738257

43. Sun, XY, Ding, XF, Liang, HY, Zhang, XJ, Liu, SH, Bing, H., Duan, XG, i Sun, TW (2020.). Učinkovitost terapije mezenhimalnim matičnim stanicama za sepsu: meta-analiza pretkliničkih studija. Istraživanje i terapija matičnih stanica, 11(1), 214. https://doi.org/ 10.1186/s13287-020-01730-7

44. Laroye, C., Gibot, S., Reppel, L. i Bensoussan, D. (2017.). Sažeti pregled: mezenhimske stromalne/matične stanice: novi tretman za sepsu i septički šok? Matične stanice, 35(12), 2331–2339. https:// doi.org/10.1002/stem.2695

45. Brady, J., Horie, S. i Lafey, JG (2020.). Uloga adaptivnog imunološkog odgovora u sepsi. Eksperimentalna medicina intenzivne skrbi, 8 (Suppl 1), 20. https://doi.org/10.1186/s40635-020-00309-z

46. ​​Martina, MN, Noel, S., Saxena, A., Bandapalle, S., Majithia, R., Jie, C., Arend, LJ, Allaf, ME, Rabb, H., i Hamad, AR (2016. ). Dvostruko negativne alfa-beta T stanice rano reagiraju na Aki i nalaze se u ljudskim bubrezima. Časopis Američkog društva za nefrologiju, 27(4), 1113–1123. https://doi.org/10.1681/ ASN.2014121214

47. Hotchkiss, RS, Tinsley, KW, Swanson, PE, Schmieg Jr., RE, Hui, JJ, Chang, KC, Osborne, DF, Freeman, BD, Cobb, JP, Buchman, TG i Karl, IE (2001. ). Apoptoza izazvana sepsom uzrokuje progresivno duboko smanjenje B i CD4 plus T limfocita kod ljudi. The Journal of Immunology, 166(11), 6952–6963. https://doi.org/10.4049/jimmunol.166.11.6952

48. Condotta, SA, Cabrera-Perez, J., Badovinac, VP, & Grifth, TS (2013). Imunitet posredovan T-stanicama i uloga TRAIL-a u imunosupresiji izazvanoj sepsom. Critical Reviews in Imunology, 33(1), 23–40. https://doi.org/10.1615/critrevimmunol.20130 06721

49. Khosrojerdi, A., Soudi, S., Hosseini, AZ, Eshghi, F., Shafee, A., i Hashemi, SM (2021). Imunomodulatorni i terapeutski učinci mezenhimalnih matičnih stanica na organsku disfunkciju u sepsi. Šok, 55(4), 423–440. https://doi.org/10.1097/SHK.0000000000 001644

50. Nie, P., Bai, X., Lou, Y., Zhu, Y., Jiang, S., Zhang, L., Tian, ​​N., Luo, P., i Li, B. (2021.) . Mezenhimalne matične stanice ljudske pupkovine smanjuju oksidativno oštećenje i apoptozu kod dijabetičke nefropatije aktiviranjem Nrf2. Istraživanje i terapija matičnih stanica, 12(1), 450. https://doi.org/10.1186/s13287-021-02447-x

51. dos Santos, CC, Murthy, S., Hu, P., Shan, Y., Haitsma, JJ, Mei, SH, Stewart, DJ i Liles, WC (2012.). Mrežna analiza transkripcijskih odgovora izazvanih liječenjem eksperimentalne sepse mezenhimalnim matičnim stanicama. American Journal of Pathology, 181(5), 1681–1692. https://doi.org/10.1016/j.ajpath.2012.08.009

52. von Kortzfeisch, VT, Karp, NA, Palme, R., Kaiser, S., Sachser, N. i Richter, SH (2020.). Poboljšanje ponovljivosti u istraživanju na životinjama dijeljenjem ispitivane populacije u nekoliko 'mini-eksperimenata'. Znanstvena izvješća, 10(1), 16579. https://doi.org/10. 1038/s41598-020-73503-4

53. Tanavde, V., Vaz, C., Rao, MS, Vemuri, MC, i Pochampally, RR (2015.). Istraživanje korištenjem mezenhimskih matičnih/stromalnih stanica: metrika kvalitete prema razvoju referentnog materijala. Citoterapija, 17(9), 1169–1177. https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2015. 07.008

54. Pickkers, P., Heemskerk, S., Schouten, J., Laterre, PF, Vincent, JL, Beishuizen, A., Jorens, PG, Spapen, H., Bulitta, M., Peters, WH i van der Hoeven, JG (2012). Alkalna fosfataza za liječenje akutne ozljede bubrega izazvane sepsom: prospektivna randomizirana dvostruko slijepa placebom kontrolirana studija. Intenzivna skrb, 16(1), R14. https://doi.org/10.1186/cc11159

55. Pickkers, P., Mehta, RL, Murray, PT, Joannidis, M., Molitoris, BA, Kellum, JA, Bachler, M., Hoste, EAJ, Hoiting, O., Krell, K., Ostermann, M ., Rozendaal, W., Valkonen, M., Brealey, D., Beishuizen, A., Meziani, F., Murugan, R., de Geus, H., Payen, D., et al. (2018). Učinak ljudske rekombinantne alkalne fosfataze na 7--dnevni klirens kreatinina u bolesnika s akutnom ozljedom bubrega povezanom sa sepsom: randomizirano kliničko ispitivanje. Časopis Američkog medicinskog udruženja, 320(19), 1998. – 2009. https://doi.org/10.1001/jama.2018.14283

Barbara Fazekas1 · Senthilkumar Alagesan2 · Luke Watson2 · Olivia Ng1,2 · Callum M. Conroy1,2 · Cristina Català3 · Maria Velascode Andres3 · Neema Negi1 · Jared Q. Gerlach4 · Sean O. Hynes5,6 · Francisco Lozano3,7,8 · Stephen J. Elliman2 · Matthew D. Grifn1,9,10

1 Institut za regenerativnu medicinu pri CÚRAM Centru za istraživanje medicinskih uređaja, Medicinski fakultet, Nacionalno sveučilište Irske Galway, Galway, Irska

2 Orbsen Therapeutics Ltd., Galway, Irska

3 Institut d'Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer, Barcelona, ​​Španjolska

4 Glycoscience Group, Nacionalni centar za biomedicinsko inženjerstvo, Nacionalno sveučilište Irske Galway, Galway, Irska

5 Disciplina patologije, Medicinski fakultet, Nacionalno sveučilište Irske Galway, Galway, Irska

6 Odjel za histopatologiju, Sveučilišne bolnice Galway, Galway, Irska

7 Servei d'Immunologia, Hospital Clínic de Barcelona, ​​Barcelona, ​​Španjolska

8 Department de Biomedicina, Universitat de Barcelona, ​​Barcelona, ​​Španjolska

9 Odjel za nefrologiju, Grupa za zdravstvenu skrb Sveučilišta Saolta, Sveučilišne bolnice Galway, Galway, Irska

10 Nacionalno sveučilište Irske Galway, REMEDI, Biomedicinske znanosti, Corrib Village, Dangan, Galway H91 TK33, Irska