Mehanička studija o poboljšanju kroničnog prostatitisa Cistanche tabletama preko osi STAT3/HIF-1 /glikoliza

 

Sažetak

Ova studija istražuje terapijski mehanizamCistanche tablete (CT)u liječenju kroničnog prostatitisa krozSTAT3/HIF-1 /glikoliza signalna os. Ustanovljen je štakorski model eksperimentalnog autoimunog prostatitisa (EAP) kako bi se procijenila učinkovitost Cistanche tableta. Muški Wistar štakori nasumično su podijeljeni u šest skupina (n=7 po skupini): kontrolna, modelna, skupine s niskom, srednjom i visokom dozom CT-a (197,2, 591,5 odnosno 1774,4 mg/kg/dan) i pozitivna kontrolna skupina (Pusitai, 34,2 mg/kg/dan). Nakon indukcije na modelu, svi tretmani su primjenjivani četiri uzastopna tjedna.

Histološka analiza pomoću bojenja hematoksilinom i eozinom (HE) procijenila je upalu prostate i oštećenje žlijezde. Serumske razine interleukina-8 (IL-8), interleukina-1 (IL-1) i imunoglobulina G (IgG) mjerene su putem ELISA-e. Ekspresija proteina fosforiliranog STAT3 (p-STAT3), HIF-1, višestruke inozitol polifosfat fosfataze 1 (MINPP1) i heksokinaze (HK) u tkivima prostate procijenjena je Western blotom i imunohistokemijom. Neciljana metabolomika korištena je za identifikaciju različitih metabolita i povezanih metaboličkih putova.

Rezultati su pokazali da CT značajno ublažava patološka oštećenja prostate. ELISA je otkrila smanjene razine IL-8, IL-1 i IgG u serumu. Western blot i imunohistokemija pokazali su da CT smanjuje p-STAT3, HIF-1 i HK, dok regulira MINPP1. Metabolomika je identificirala 96 različitih metabolita i otkrila da CT može iskazati svoj terapeutski učinak moduliranjem glikolize i metabolizma arahidonske kiseline.

Zaključak:Cistanche tablete mogu ublažiti upalu i spriječiti napredovanje kroničnog prostatitisa ciljanjem na STAT3, potiskivanjem HIF-1 signaliziranja i reguliranjem glikolitičkog metabolizma.

Ključne riječi: Cistanche tablete; ckronični prostatitis; metabolomika; HIF-1 signalni put; glikoliza

Cistanche Blagotvorno djeluje na prostatu i bubrege

 

 

 

Dodaj cistanche tablete u košaricu

 

 

Usluga podrške Wecistanche-najvećeg izvoznika cistanche u Kini:
E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com
ili

 

 

Uvod

Kronični prostatitis je uobičajeno urološko stanje u muškaraca, karakterizirano disfunkcijom mokrenja, bolnim mokrenjem, hitnošću i perinealnom nelagodom. To je najčešća vrsta prostatitisa koja značajno utječe na kvalitetu života bolesnika. Studije pokazuju prevalenciju od 6,0%–32,9% kod kineskih muškaraca i 2,0%–16,0% u inozemstvu. Trenutačni zapadnjački tretmani oslanjaju se na antibiotike i nesteroidne protuupalne lijekove, ali dugotrajna primjena često dovodi do gastrointestinalnih nuspojava.

Etiologija i patogeneza kroničnog prostatitisa su složene, uključuju imunološku disregulaciju, neuroendokrinu neravnotežu i čimbenike načina života. Imunološke abnormalnosti i metabolička disfunkcija smatraju se ključnim područjima zabrinutosti.

Iz perspektive tradicionalne kineske medicine (TCM), kronični prostatitis povezan je s nedostatkom Qi-ja u bubrezima, nakupljanjem vlage i topline i zastojem krvi.Cistanche tablete, izvedene iz tradicionalne bolničke formulacije [Br. odobrenja Z04000524], temelje se na klasičnoj formuli "Cheng's Bi Xie Fen Qing Yin" u kombinaciji s "Cuscuta pilulom". Ova formula uključuje deset biljaka kao što suCistanche deserticola, Dioskoreja, iPolyporus umbellatus, a tradicionalno se koristi za toniziranje bubrega, osiguranje esencije, poticanje mokrenja i uklanjanje zamućenja.

Kliničke studije su potvrdile da Cistanche tablete učinkovito smanjuju simptome prostatitisa i poboljšavaju kvalitetu života uz dobar sigurnosni profil. Međutim, većina postojećih istraživanja usmjerena je na klinička opažanja, a precizni terapijski mehanizmi ostaju nejasni.

Nedavni dokazi upućuju na to da kronični prostatitis uključuje abnormalnu glikolizu i prekomjernu ekspresiju faktora 1 (HIF-1) koji izaziva hipoksiju, što ga čini potencijalnom metom za liječenje. Štoviše, reguliranje STAT3 puta pojavilo se kao nova strategija u kontroli kronične upale i autoimunih odgovora. Ova studija istražuje terapijski mehanizam Cistanche tableta na temelju in vivo pokusa i metabolomike, s ciljem pružanja novih dokaza za upotrebu biljnih formulacija u kroničnom prostatitisu.

 

Materijali i metode

1. Materijali

Životinje:42 mužjaka Wistar štakora SPF stupnja (190-210 g) kupljena su od Suzhou SPF Biotechnology Co., Ltd. Životinje su smještene u standardnim uvjetima (20±3 stupnja, 55%±5% vlažnosti, 12-satni ciklus svjetlo/tama) i davana im je hrana i voda ad libitum. Studiju je odobrio Institucionalni odbor za etiku životinja (br. odobrenja . 2023112001).

Lijekovi i reagensi:

Cistanche tablete

Pusitai tablete (pozitivna kontrola)

Fiziološka otopina, PBS pufer, potpuni Freundov adjuvans

ELISA kompleti za IL-8, IL-1 i IgG

Antitijela: p-STAT3, HIF-1, MINPP1, HK

Sekundarna protutijela i imunohistokemijski reagensi

Instrumenti:

LC-MS sustavi (trostruki TOF 6600, Agilent 1290 Infinity LC)

Centrifuga velike brzine, homogenizator, čitač mikropločica i precizna vaga

---

2. Metode

2.1 Studija in vivo

2.1.1 Model kroničnog prostatitisa

Eksperimentalni model autoimunog prostatitisa (EAP) induciran je upotrebom homogeniziranog tkiva prostate emulgiranog potpunim Freundovim adjuvansom. Štakori su primili supkutane injekcije 1. i 28. dana na više mjesta (potiljak, prepone i stražnje šape). Kontrolni štakori primili su injekcije fiziološke otopine. Uspjeh modela potvrđen je znakovima ponašanja i histopatologijom.

2.1.2 Grupiranje i tretman

Nakon potvrde modela, štakori su nasumično podijeljeni u šest skupina: kontrolna, modelna, niska, srednja, visoka doza CT-a i Pusitai skupina. CT srednja doza postavljena je prema kliničkom ekvivalentu doziranja. Tretmani su davani oralno jednom dnevno tijekom 28 dana.

2.1.3 Prikupljanje uzoraka

Posljednjeg dana zabilježen je 24-satni unos urina i vode. Nakon eutanazije sakupljena je krv i tkivo prostate. Izračunat je prostatni indeks (težina prostate/tjelesna težina). Tkiva su ili fiksirana u formalinu ili zamrznuta u tekućem dušiku za daljnju analizu.

2.1.4 Opća opažanja

Tijekom modeliranja i tretmana, kod štakora se pratilo ponašanje, stanje dlake i opće zdravstveno stanje.

2.1.5 ELISA za serumske citokine

Razine IL-8, IL-1 i IgG u serumu izmjerene su pomoću ELISA-e prema uputama proizvođača.

2.1.6 Histopatologija (HE bojenje)

Tkiva prostate fiksirana formalinom su uklopljena u parafin i izrezana za HE bojenje. Pod mikroskopom su promatrane upale i oštećenja tkiva.

2.1.7 Imunohistokemija za MINPP1 i HK

Slijeđeni su standardni IHC postupci, uključujući deparafinizaciju, pronalaženje antigena, blokiranje, primarnu i sekundarnu inkubaciju protutijela, DAB bojenje i suprotno bojenje hematoksilinom. Za kvantificiranje pozitivnog bojenja korišten je softver ImageJ.

2.1.8 Western blot za p-STAT3 i HIF-1

Zamrznuta tkiva prostate su lizirana i određene su koncentracije proteina. Nakon prijenosa SDS-PAGE i PVDF membrane uslijedilo je blokiranje, primarna/sekundarna inkubacija protutijela, razvoj ECL-a i denzitometrija pomoću ImageJ.

2.1.9 Statistička analiza

Podaci su analizirani pomoću programa GraphPad Prism 9.5.1. Rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± SD. Korištena je jednosmjerna ANOVA praćena LSD post hoc testom. P<0.05 was considered statistically significant.

 

2.2 Metabolomika seruma

2.2.1 Priprema uzorka

Serum iz kontrolnih, modelnih i CT skupina sa srednjom dozom je odmrznut, pomiješan s hladnom metanol-acetonitril-vodom, sonikiran i centrifugiran. Supernatanti su osušeni i rekonstituirani za LC-MS analizu.

2.2.2 LC-MS uvjeti

Metaboliti su odvojeni pomoću UPLC BEH amidne kolone, sa specifičnim gradijentnim profilom eluiranja. Podaci su dobiveni u modovima pozitivnih i negativnih iona korištenjem IDA moda visoke osjetljivosti.

2.2.3 Obrada podataka

Raw data were converted to .mzML format, processed using XCMS for peak identification, alignment, and normalization. Metabolites with >50% missing values were removed. PCA and PLS-DA were used for multivariate analysis. Significant metabolites were filtered based on VIP >1.0 i str<0.05, and KEGG pathway enrichment was performed.

 

Rezultati i rasprava

Tablete Cistanche značajno su poboljšale histopatološke promjene prostate, smanjile upalne citokine i regulirale ekspresiju ključnih proteina u osi STAT3/HIF-1 /glikoliza. Metabolomika je otkrila modulaciju glikolize i metabolizma arahidonske kiseline, što ukazuje na protuupalne i metaboličke regulatorne mehanizme.

Ovi nalazi podržavaju razvojBiljni dodaci na bazi cistanhekao obećavajuća prirodna terapija za kronični prostatitis, koja nudi višeciljnu regulaciju uz dobru sigurnost.