Sažetak

Cilj:Istražiti molekularni mehanizam kojim seBushen Kaixuan Tongluo formula na bazi Cistancheima zaštitni učinak na bubrege kod miševa s dijabetičkom bolešću bubrega (DKD) reguliranjem signalnog puta cikličkog adenozin monofosfata (cAMP).

Metode:Trideset mužjaka db/db miševa bez specifičnih patogena (SPF) hranjeno je adaptivno 3 tjedna. Miševi s nasumičnim razinama glukoze u krvi repne vene većim od ili jednakim 11,1 mmol·L⁻¹ i omjerom mikroalbumin/kreatinin u mokraći većim ili jednakim 30 mg·g⁻¹ smatrani su uspješno modeliranima. Modelirani miševi nasumično su raspoređeni u pet skupina (n=6 po skupini): skupina modela, skupine s niskom, srednjom i visokom dozom Bushen Kaixuan Tongluo formule (7, 14 i 28 g·kg⁻¹·d⁻¹) i skupina s irbesartanom (20 mg·kg⁻¹·d⁻¹). Šest db/m miševa korišteno je kao slijepa skupina.

Liječenje je trajalo 12 tjedana intragastričnom primjenom. Praćeno je opće stanje, tjelesna težina i pokazatelji bubrežne funkcije. Nakon intervencije izmjerena je glukoza u krvi natašte (FBG). Automatski biokemijski analizator korišten je za procjenu kreatinina u serumu (SCr), dušika ureje u krvi (BUN), mikroalbumina u mokraći (uALB), omjera albumin-kreatinin (ACR), aspartat aminotransferaze (AST), alanin aminotransferaze (ALT), ukupnog kolesterola (TC), triglicerida (TG), leptina (LEP), glikoziliranog serumskog proteina (GSP) i inzulina (INS).

Histopatologija bubrežnog tkiva procijenjena je pomoću HE, PAS i Massonovog trikromnog bojenja. Imunohistokemija (IHC) detektirala je ekspresiju protein kinaze A (PKA) i cAMP odgovor element-vezujući protein (CREB). Western blot analizom analizirane su razine PKA, fosforiliranog PKA (p-PKA), CREB, fosforiliranog CREB (p-CREB) i Bcl-2. PCR u stvarnom vremenu korišten je za procjenu ekspresije mRNA PKA, CREB i Bcl-2.

Rezultati:U usporedbi s slijepom skupinom, modelna skupina pokazala je letargiju, smanjenu aktivnost i značajno povećanu tjelesnu težinu (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

U usporedbi s modelnom skupinom, skupine liječene formulom pokazale su poboljšano opće stanje i trend pada tjelesne težine. BUN, uALB, ACR, TC, GSP i INS značajno su smanjeni (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

Histopatološka analiza otkrila je da je modelna skupina pokazala klasične značajke DKD-a kao što su zadebljanje bazalne membrane glomerula, širenje mezangijalnog matriksa i taloženje kolagena u tubulointersticiju. Ove patološke promjene su ublažene u svim terapijskim skupinama.

Rezultati IHC-a pokazali su značajno smanjenu ekspresiju p-PKA i p-CREB u skupini modela (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

Western blot je pokazao da su razine p-PKA/PKA, p-CREB/CREB i Bcl-2 značajno smanjene u skupini modela (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

PCR u stvarnom vremenu potvrdio je nižu regulaciju PKA, CREB i Bcl-2 mRNA u skupini modela (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Zaključci:TheBushen Kaixuan Tongluo formula na bazi Cistanchepoboljšava rad jetre i bubrega, ispravlja poremećaje metabolizma lipida i glukoze kod db/db miševa. Njegov zaštitni učinak na bubrege povezan je s pojačanom regulacijomcAMP/PKA/CREB signalni put, koji smanjuje fibrozu bubrega i oksidativni stres, štiteći tako funkciju bubrega.

 

 

 

 

Bushen Kaixuan Tongluo formula na bazi Cistanche zapoboljšanje rada jetre i bubrega

Kliknite na sliku za više detalja

Ključne riječi

Dijabetička bolest bubrega (DKD);
Bushen Kaixuan Tongluo Formula;
Cistanche;
cAMP signalni put;
Tradicionalna kineska medicina (TCM)

 

Lijek na bazi cistanhe

 

Pozadina

Dijabetička bolest bubrega (DKD), jedna od najtežih mikrovaskularnih komplikacija dijabetesa, vodeći je uzrok završnog stadija bubrežne bolesti (ESRD) u cijelom svijetu. Njegova rastuća prevalencija predstavlja značajan izazov za sustave javnog zdravstva. Značajke DKD-a uključuju progresivnu ekspanziju glomerularnog mezangijalnog matriksa, tubulointersticijsku fibrozu i postojanu proteinuriju. Patogeneza uključuje složene interakcije između poremećaja metabolizma glukoze i lipida, oksidativnog stresa i abnormalne aktivacije različitih signalnih putova.

Trenutačna prva linija liječenja primarno uključuje inhibitore renin-angiotenzinskog sustava (RAS), koji pomažu smanjiti glomerularnu hipertenziju i odgoditi ranu proteinuriju. Međutim, oni su manje učinkoviti u bolesnika s utvrđenom tubulointersticijskom fibrozom, s 30-40% progresijom do ESRD-a.

Stoga je istraživanje novih mehanizama DKD-a i pronalaženje učinkovitih, sigurnih terapijskih ciljeva od hitnog kliničkog i znanstvenog interesa. Tradicionalna medicina nudi višeciljanu regulaciju s manje nuspojava, što ju čini prikladnijom za dugotrajnu primjenu kod kronične bolesti bubrega. TheBushen Kaixuan Tongluo formula na bazi Cistancheje empirijski potvrđena biljna mješavina za DKD, koja je u prethodnim kliničkim ispitivanjima pokazala da poboljšava simptome i odgađa napredovanje bolesti.

Međutim, njegov molekularni mehanizam, posebice njegova interakcija s ključnim signalnim putovima, ostaje slabo shvaćen. Dokazi upućuju nacAMP/PKA/CREBput može ublažiti bubrežnu fibrozu, ali povezane studije su ograničene. Ova se studija usredotočuje na ovaj put kako bi se razjasnilo kako toFormula na bazi Cistanchepoboljšava DKD.

 

Materijali i metode

1. Životinje

30 mužjaka db/db miševa (starih 7 tjedana, SPF stupanj, tjelesna težina: 37,58±0,62 g)

6 db/m miševa iste dobi (tjelesna težina: 24,38±0,35 g)

Dobavljač: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Licenca: SCXK (Su) 2020-0009 i SYXK (Jing) 2020-0033

Etičko odobrenje: BUCM2024041506-2090

2. Biljni sastav

Formula Bushen Kaixuan Tongluo uključuje (u gramima):
Cistanche(zamjenjuje sirovi Astragalus) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officinalis 20, Rosa laevigata 20, Euryale ferox (pržena) 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea opposita 20.

Sve bilje potvrdio je ovlašteni ljekarnik i pripremile su ih izvarkom vode, reducirale pod vakuumom i osušile raspršivanjem da bi se formirao prah. Konačna koncentracija bila je 1,43 g·mL⁻¹ sirovog bilja.

3. Reagensi i instrumenti

(Pogledajte izvorni tekst za detaljne popise.)

 

Eksperimentalni dizajn

Evaluacija modela

Nakon 3 tjedna prilagođenog hranjenja, miševi s nasumično odabranom glukozom u krvi većom ili jednakom 11,1 mmol·L⁻¹ i ACR-om većim ili jednakim 30 mg·g⁻¹ smatrani su uspješnim DKD modelima.

Grupiranje i doziranje

Prazna skupina (db/m): voda

Grupa modela: voda

Niska doza: 7 g·kg⁻¹·d⁻¹

Srednja doza: 14 g·kg⁻¹·d⁻¹

Visoka doza: 28 g·kg⁻¹·d⁻¹

Skupina irbesartana: 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

Trajanje: 12 tjedana uz slobodno hranjenje i piće.

---

Prikupljanje i analiza uzoraka

Urin:Sakupljano tijekom 24 sata, centrifugirano i pohranjeno na –20 stupnjeva

Krv:Sakupljeno orbitalnom ekstrakcijom, centrifugirano i pohranjeno na –80 stupnjeva

Bubrezi:Podijeljeno za patologiju (fiksiran formalinom), protein (tekući dušik) i ekspresiju gena (zamrznuto)

---

Metode otkrivanja

Biokemijska analiza:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP i uALB

Histopatologija:HE, PAS, Masson bojenje

IHC:ekspresija proteina p-PKA i p-CREB

Western Blot:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -aktin

PCR u stvarnom vremenu:mRNA ekspresija PKA, CREB i Bcl-2

---

Tablica 1. Prajm sekvence

Gen	Naprijed Primer (5′–3′)	Obrnuti primer (5′–3′)	Duljina (bp)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95