Promjene antioksidacijskog djelovanja tijekom fermentacije enzima

Poglavlje 4 Promjene antioksidacijskog djelovanja tijekom fermentacije enzima

Voće je bogato hranjivim tvarima i dolaze u mnogim sortama. Proizvodnja tvari tijekom fermentacije složena je i raznolika, a postoje mnoge studije o njihovimantioksidacijska aktivnost. Ljudi uvijek istražuju i otkrivaju, traže hranu koja je korisnaljudsko zdravlje, tako su enzimi postali vruća tema posljednjih godina. Tradicionalni postupak proizvodnje enzima je dobivanje enzima prirodnom fermentacijom voća i povrća. Na temelju prethodnih istraživanja, ovaj članak dodaje 4 korisne bakterije fermentacije. Ova bakterija također postoji u enzimu. Nakon dodatnog dodavanja bakterija mijenjaju se broj i vrsta mikroorganizama u procesu fermentacije. Kakav će učinak imati ovu promjenu na njegovo antioksidacijsko djelovanje? U prethodnom poglavlju uzeli smo jabuke kao primjer za detaljno objašnjenje. Usporedba antioksidacijske aktivnosti eksperimentalne skupine i kontrolne skupine u različitim koncentracijama enzima pokazala je da je antioksidacijsko djelovanje enzima u eksperimentalnoj skupini veća od one u kontrolnoj skupini. Intenzitet antioksidacijske aktivnosti također odražava pouzdanost enzima na određeni način.

Novo biljke Cistanche s jakom antioksidacijskom snagom

 

Podržavajuća usluga Wecistanche-a-najveći izvoznik Cistanchea u Kini:
E -pošta: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950

 

Ovo poglavlje dodaje uobičajene plodove kruške i citrus u originalni eksperiment, te prati i otkriva promjene u njihovimantioksidacijska aktivnostTijekom fermentacije. Na temelju smanjenja troškova, kroz eksperimente, nadamo se da ćemo sveobuhvatnije odražavati biološku aktivnost enzima nakon dodavanja bakterija i pružiti određenu teorijsku osnovu i podršku podataka za proizvodnju mikrobnih enzima by Umjetna inokulacija sojeva.

 

 

 

4.1 Materijali i metode

4.1.1 Materijali

(1) Eksperimentalni materijali

Operite svježe jabuke, kruške i citrusno voće sterilnom vodom u sterilnim uvjetima, sušite ih prirodno na sterilnom operacijskom stolu, ogulite ih i narežite ih za kasniju upotrebu. Dodajte bijeli šećer i plodove u steriliziranu staklenu staklenku u omjeru mase od 1: 1. Aktivirajte bakterije potrebne za eksperiment i inokulirajte ih u enzim u skladu s optimalnom shemom (ovaj korak je izostavljen za kontrolnu skupinu), zatvorite je i stavite na hladno i suho mjesto. Uzmite uzorke u različitim vremenskim razdobljima fermentacije na sobnoj temperaturi da biste dobili svu enzimsku tekućinu koja sadrži voćnu pulpu i filtrirate je. Uzmite supernatant kao eksperimentalni uzorak i koristite ga za mjerenje relevantnih podataka nakon centrifugiranja na 10, 000 RPM u centrifugi velike brzine 15 minuta. Vrijedno je napomenuti da se u procesu izrade enzima, kako bi se izbjeglo nepotrebno onečišćenje, sve naše operacije provodile u sterilnim uvjetima.

(2) Glavni instrumenti

Instrumenti potrebni za eksperiment isti su kao 3.1.1 (2).

 

4.1.2 Metode

(1) Promjene ukupnog sadržaja fenola tijekom fermentacije

450 μl otopine uzorka dodano je destiliranom vodom kako bi se dodao volumen 46 ml, a zatim je dodano 1ml foli-fenol reagensa. Dobro promiješajte i reagirajte 3min. Tada je dodano 3 ml 20% NACO3. Smjesa je potresana u vodenoj kupelji s konstantnom temperaturom u trajanju od 25 stupnjeva 2h. Destilirana voda korištena je kao prazna kontrola. Apsorbancija A izmjerena je na 760Nm spektrofotometrom. Za svaki tretman provedene su tri replike. Ukupni sadržaj fenola izračunat je prema jednadžbi standardnih krivulja.

(2) Promjene smanjenja snage tijekom fermentacije

Dodajte 45 0 μl uzorka na 2,5 ml fosfatnog pufera s koncentracijom 0. 2Mol/L i pH vrijednošću od 6,6, a zatim dodajte 2,5 ml kalijevog fericijanida (w/v) s masom 1%, React u 5 {{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{°. (w/v) S masnom koncentracijom od 10%, centrifugira se u 3000 okr/min 10 minuta, izvadite i odmah povucite 2,5 ml supernatanta u volumetrijsku tikvicu, dodajte 2,5 ml destilirane vode i 0,5 ml feričnog klorida (w/v) s masnom koncentracijom 0,1%. Koristite destiliranu vodu kao praznu kontrolu i izmjerite apsorbanciju A na valnoj duljini 700Nm sa spektrofotometrom. Izvršite 3 replike za svaki tretman. Snaga smanjenja snage određuje se na temelju vrijednosti apsorpcije.

 

(3) Promjene sposobnosti uklanjanja radikala superoksida aniona tijekom fermentacije
Postavite 4,5 ml 0. {{1 0}} 5 mol/l pH 8,2 TRIS-HCL međuspremnik u konstantnoj temperaturnoj vodenoj kupelji i prilagodite temperaturu na 25 stupnjeva. Nakon 20 minuta, dodajte 1 ml otopine uzorka enzima i 0,4 ml otopine pirogalola s molarnom koncentracijom od 25 mmol/L. Dobro promiješajte i stavite u vodenu kupelj od 25 stupnjeva 5 minuta. Dodajte 1,0 ml 8 mol/L HCl da biste prekinuli reakciju. Koristite Tris-HCL međuspremnik kao referencu i upotrijebite spektrofotometar za mjerenje apsorpcije A pri 299 nm za izračunavanje brzine uklanjanja. Prazna kontrolna skupina koristi 1 ml otapala umjesto uzorka. Brzina uklanjanja radikala superoksida aniona izračunava se prema Formuli 4.1: brzina uklanjanja radikala superoksida aniona (%)=(a 1- a2)/a1 × 100 (4.1) gdje: A1 je apsorbancija prazne kontrolne skupine; A2 je apsorbancija otopine uzorka enzima eksperimentalne skupine.

 

(4) Promjene sposobnosti uklanjanja hidroksilnih radikala tijekom fermentacije

 

Dodajte vodu u 45 0 μl otopinu uzorka u 2 ml, a zatim je dodajte u 1,4 ml vodikovog peroksida s koncentracijom molarne mase od 6 mmol/l, a zatim dodajte 0,6 ml natrijevog salicilata s koncentracijom molarne mase od 20 mm/2 i 2 ml mml, a 2 ml. 1H. Nula s destiliranom vodom i izmjerite apsorbanciju A na valnoj duljini 562Nm sa spektrofotometrom. Za svaki tretman provedene su tri replike. Brzina uklanjanja hidroksilnog radikala izračunata je prema Formuli 4.2: brzina uklanjanja hidroksilnog radikala (%)=[(a {1- a2)/a1] × 100 (4.2) gdje je: a1 prosječna apsorpcija praznog; A2 je prosječna apsorpcija otopine uzorka.

 

(5) Promjene sposobnosti uklanjanja slobodnih radikala DPPH tijekom fermentacije
Točno prebacite 2 ml otopine uzorka enzima u 1 0 ML volumetrijsku tikvicu, a zatim dodajte 2 ml 80% dpph etanol vodene otopine u volumetrijsku tikvicu, s koncentracijom molarne mase od 2 × {5}} mol/l. Dobro promiješajte i ostavite da stoji na sobnoj temperaturi 30 minuta. Uzmite 80% otopinu etanola kao referencu i izmjerite apsorbanciju uzorka na valnoj duljini od 517 nm, što je zabilježeno kao A1. Pomiješajte 2 ml otopine DPPH i 2 ml 80% otopine etanola i izmjerite njihovu apsorbanciju na istoj valnoj duljini, koja je zabilježena kao A0. Pomiješajte 2 ml otopine enzima i 2 ml 80% otopine etanola i izmjerite njihovu apsorbanciju na istoj valnoj duljini, koja je zabilježena kao A2. Za svaki tretman provedene su tri replike. Izračunajte brzinu uklanjanja slobodnih radikala DPPH prema formuli 4.3:
DPPH stopa uklanjanja slobodnih radikala (%) {{{0}} [{1- (a 1- a2)/a 0] × 100 (4.3) gdje je: A1 prosječna Apsorbance ROSCOUS ETHANOL ETHANOUS; A2 je apsorbancija 2 ml enzimske otopine i 2 ml 80% miješane otopine etanola; A0 je apsorbancija 2 ml DPPH otopine i 2 ml 80% miješane otopine etanola.

(6) Promjene sposobnosti uklanjanja slobodnih radikala ABTS tijekom fermentacije
Otopina uzorka od 8 μl nadopunjena je u 10 μl fosfatnim puferom (5 mmol/L pH 7,4), a zatim ravnomjerno miješana s 10 ml pomiješane otopine kalijevog sulfata i ABT -a da reagira na reakcijskoj temperaturi od 30 stupnjeva i reakcijskom vremenu od 5 min. Nula otopina destiliranom vodom i izmjerite apsorbanciju A na valnoj duljini od 734 nm pomoću spektrofotometra. Za svaki tretman provedene su tri replike. Brzina čišćenja slobodnih radikala ABTS izračunata je prema Formuli 4.4:
ABTS brzina uklanjanja slobodnih radikala (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (4.4) gdje: a1 je apsorbancija prazne kontrolne skupine; A2 je apsorbancija eksperimentalne skupine uzorka.