Autonomna disfunkcija i invaliditet u sindromu kroničnog umora

Sažetak:

Pozadina: mialgični encefalomijelitis/Sindrom kroničnog umora(ME/CFS) je anstečena kompleksna bolest s pacijentima koji pate od kardinalnih simptomaumor, i nakon naporamalaksalost (PEM), kognitivno oštećenje, bol i autonomna disfunkcija. ME/CFS jepotaknuta infekcijom kod većine pacijenata. Početni dokazi potencijalne uloge prirodnogregulatorna autoantitijela (AAB) na beta-adrenergičke (AdR) i muskarinske acetilkolinske receptore (MAChR) u bolesnika s ME/CFS-om dolazi iz nekoliko studija.

Metode: Ovdje smo analizirali korelacijeozbiljnosti simptoma s razinama AAB do vazoregulacijskih AdR, AChR i endotelina-1 tipa Ai B (ETA/B) i receptor angiotenzina II tipa 1 (AT1) u berlinskoj kohorti pacijenata s ME/CFS-om(n = 116) pomoću ELISA. Ozbiljnost bolesti, simptomi i autonomna disfunkcija procijenjeni suupitnici.

Rezultati: Otkrili smo da su razine većine AAB-a značajno povezane s ključnim simptomimaodumori bol u mišićima kod pacijenata s početkom izazvanim infekcijom. Ozbiljnost kognitivnihoštećenje u korelaciji s AT1-R- i ETA-R-AAB i ozbiljnost gastrointestinalnih simptoma salfa1/2-AdR-AAB. Nasuprot tome, pacijenti s ME/CFS-om koji nije izazvan infekcijom pokazali su manjei druge korelacije.

Zaključak: Korelacije specifičnih AAB protiv G-protein-spregnutih receptora(GPCR) sa simptomima pružaju dokaze o ulozi ovih AAB ili odgovarajućih receptorskih putova upatomehanizam bolesti.

Ključne riječi:adrenergički receptori; autoantitijela; mialgični encefalomijelitis;sindrom kroničnog umora; autoimunost; vazoregulacija; G-protein spregnuti receptor,cistanche

Za više informacija:wallence.suen@wecistanche.com

1. Uvod

Mialgični encefalomijelitis/sindrom kroničnog umora (ME/CFS) je stečena bolestkompleksna bolest s kardinalnim simptomima umora, malaksalosti nakon napora (PEM), kognitivnihdisfunkcija i bol [1]. Procijenjena prevalencija je do 0.86 posto, s vrhuncima utinejdžerske godine i srednje godine [2,3]. ME/CFS je u većini slučajeva izazvan infekcijompacijenata [4]. Iako je patogeneza još uvijek nepoznata, postoje brojni dokaziimunološka i autonomna disregulacija [5]. Sve je više dokaza da vaskularna disfunkcija i hipoperfuzija igraju uloguvažnu ulogu u ME/CFS. Smanjena opskrba kisikom u mišićima tijekom vježbanja bila jeprikazano u nekoliko studija na pacijentima s ME/CFS [6,7]. U skladu s tim dolazi do metaboličkih promjenau ME/CFS ukazuju na hipoksiju i ishemiju [8]. Nekoliko je studija pokazalo smanjenjecerebralni protok krvi nakon ortostatskog izazova [9,10]. Dakle, hipoperfuzija, koja jepojačan nakon napora, može uzrokovati mentalni i skeletni umor mišića koji su obilježjaod ME/CFS [11]. Za regulaciju protoka krvi, G-protein-coupled receptors (GPCR) za vazoaktivnehormoni, kao što su kateholamini, acetilkolin, angiotenzin II i endotelin 1, igraju uloguvažna uloga [12]. Regulatorna autoantitijela (AAB) usmjerena na GPCR uključena su upatogeneza mnogih bolesti. Anti-GPCR AAB vežu se za svoje odgovarajuće receptore,što može rezultirati i agonističkim i antagonističkim učincima [13]. Među prvima AAB doOpisani GPCR odnosi se na beta1 adrenergički receptor (AdR) kod dilatacijske kardiomiopatijei na receptor angiotenzina II tipa 1 (AT1-R), posredujući u vazokonstrikciji kao čimbenike rizika zaodbacivanje transplantata bubrega [14,15]. AAB u odnosu na GPCR pronađen je kod mnogih reumatičarabolesti također [16]. Ovaj AAB pripada regulatornoj mreži koja je neregulirana umnoge bolesti [17]. Postoje dokazi da AdR i muskarinski acetilkolinski receptori (M-AChR)-AABigraju ulogu iu ME/CFS-u. Tanaka i sur. su prvi opisali povišene M-AChR-AAB uME/CFS i njihova povezanost s mišićnom slabošću i neurokognitivnim oštećenjem [18]. U prethodnoj studiji pronašli smo povišeni AAB protiv beta2-AdR kao i M3/M4-AChRu podskupini pacijenata s ME/CFS [19]. Bynke i sur. bili u mogućnosti provjeriti ove nalazeotkrivanje povišenih AAB protiv beta1/2-AdR i M3/M4-AChR u serumu, ali ne i ucerebrospinalna tekućina pacijenata s ME/CFS [20]. Razine Beta1/2-AdR-AAB u krvi koreliranesa strukturnim promjenama u mozgu povezanim s modulacijom boli [21]. Nedavno smo pronašliagonistički beta2-AdR-AAB u zdravih kontrola i u pacijenata s ME/CFS, stimulirajućibeta2-AdR na imunološkim stanicama i linijama reporterskih stanica. Važno je da je ova agonistička funkcija bilaoslabljen u ME/CFS [22]. Prilikom izvođenja imunoadsorpcije za uklanjanje AAB izcirkulacije, primijetili smo kratkotrajno kliničko poboljšanje kod većine bolesnika [23,24]. ZaPacijenti s ME/CFS-om koji primaju rituksimab, dokumentirali smo kontinuirani pad prije liječenjapovišene razine beta2-AdR-AAB u osoba koje klinički odgovaraju na liječenje rituksimabom [19]. Cilj ove studije bio je istražiti korelacije između razina vezanja AAB navazoregulacijski GPCR i ozbiljnost kliničkih simptoma u ME/CFS. Kao što AAB odgovaračesto aktiviraju infekcije, razlikovali smo bolesnike s i bezinfekcija potaknula početak ME/CFS. U nedavnom istraživanju otkrili smo povećanu prevalencijuautoimune povezane jednonukleotidne varijante u CTLA4 i PTPN22 u ME/CFSsamo bolesnici s početkom zarazne bolesti [25]. Kateholamini koji se vežu za alfa1/2-AdRna vaskularnim glatkim mišićnim stanicama uzrokuju vazokonstrikciju, dok posreduju u vazodilatacijiputem beta2-AdR. Vezanje angiotenzina II na AT1-R i endotelina-1 na tip endotelina-1A i B receptori (ETA/BR) aktiviraju važne vazokonstrikcijske puteve. oveligandi se povećavaju fizičkim naporom [12]. Receptori aktivirani proteazom (PAR) igraju aulogu u vazoregulaciji tijekom upale. Pokazalo se da aktivacija PAR-1 trombinomizazvati vaskularnu konstrikciju [26,27]. PAR-2 aktiviran tripsinom može posredovati u upaliadhezija stanica na endotel [28]. Acetilkolin može posredovati u vazodilataciji putem M3-Oslobađanje dušikovog oksida ovisno o AChR [29]. Ekspresija M4-AChR opisana je umikrovaskularni sustav mozga [30]. Očekivali smo da ako vazoregulacijske razine AAB igraju aulogu u patomehanizmu ME/CFS-a, trebali bi korelirati s ozbiljnošću ključnogsimptoma i invaliditeta.

2. Materijali i metode

2.1. Pacijenti

U ambulanti je ukupno 116 pacijenata dijagnosticirano zbog imunodeficijencijena Institutu za medicinsku imunologiju na Charité Universitätsmedizin Berlin izmeđuListopad 2016. i svibanj 2017. Dijagnoza ME/CFS u svih bolesnika temeljila se na 2003.Kanadski kriteriji konsenzusa i isključivanje drugih medicinskih ili neuroloških bolesti kojemože uzrokovati umor sveobuhvatnom kliničkom i laboratorijskom procjenom [1]. Svi pacijentiprimili su kardiopulmonalnu obradu prije upućivanja. U slučaju sumnje na reumu,gastrointestinalne ili neurološke bolesti, pacijenti su prije upućivani specijalistimapostavljena je dijagnoza ME/CFS. Studiju je odobrilo Etičko povjerenstvoCharité Universitätsmedizin Berlin (EA4/090/10) u skladu s Deklaracijom iz 1964.iz Helsinkija i njegove kasnije izmjene i dopune. Svi su pacijenti dali informirani pristanak.

2.2. Određivanje razine autoantitijela i laboratorijskih krvnih podataka

CellTrend GmbH, Luckenwalde, Njemačka, analizirao je serumske razine AAB protivalfa1-, alfa2-, beta1-, beta2-, beta3-AdR, M3- i M4-AChR ; AT1-R, ETA-R i ETB-R;PAR1/2. Uzorci pune krvi svakog subjekta ostavljeni su da se zgrušaju na sobnoj temperaturia zatim centrifugiran na 2000× g 15 minuta u rashlađenoj centrifugi. Serum je biopročišćen i pohranjen na−35 ◦C. AAB su izmjereni u uzorcima seruma korištenjem sendvičaELISA pribor (CellTrend GmbH, Luckenwalde, Njemačka). Mikrotitarska 96-jažica od polistirenaploče su obložene receptorskim proteinima pune duljine. Za održavanje konformacijskeepitope receptora, 1 mM kalcijevog klorida je dodan u svaki pufer. Duplikatuzorci seruma razrijeđenog 1:100 inkubirani su na 4◦C 2 h. Nakon pranja koraka, tanjurasu inkubirani 60 minuta s 1:20,000 razrjeđenjem koze obilježene peroksidazom hrenaanti-humani IgG koji se koristi za detekciju. Da bi se dobila standardna krivulja, ploče su bileinkubirana s testnim serumom pacijenta s GPCR AAB-pozitivnim indeksom. ELISA testovi su bilipotvrđeno prema FDA-inim "Uputama za industriju: Validacija bioanalitičke metode".Koncentracija serumskih IgG, IgA, IgM, IgE i IgG potklasa određena je naCharité dijagnostički laboratorij Labor Berlin GmbH.

2.3. Upitnici za ocjenjivanje simptoma

Prisutnost i ozbiljnost simptoma u bolesnika s ME/CFS procijenjeni su na temeljuo kanadskim kriterijima konsenzusa iz 2003. [1,31]. Glavni simptomi umora, bolova u mišićima,imunološki simptomi (srednja vrijednost od 3 simptoma bolnih limfnih čvorova, upale grla i simptoma nalik gripisimptomi) i kognitivno oštećenje (srednja vrijednost od 3 simptoma poremećaja pamćenja,sposobnost koncentracije i mentalni umor) ocijenjeni su između 1 (bez simptoma) i10 (najteži simptomi) od strane pacijenata. Simptomi autonomne disfunkcije bili suprocijenjeno Composite Autonomic Symptom Score 31 (COMPASS 31) [32]. U Dodatku,invaliditet je ispitan korištenjem Bellove ocjene s fokusom na razinu ograničenja u danufunkcioniranje [33] i umor koristeći Chalder Fatigue Score [34]. Svakodnevne tjelesne aktivnostiživot su procijenjeni putem Short Form Health Survey 36 (SF-36) [35]. 

2.4. Statistička analiza

Statističke analize podataka provedene su pomoću IBM SPSS Statistics 22.0 (New York, NY,SAD), GraphPad Prism 6.0 (San Diego, CA, SAD) i R 4.0 (R Foundation for StatisticalRačunarstvo, Beč, Austrija.Svi podaciprikazani su kao medijan i interkvartilni raspon (IQR), srednja vrijednost i standardna devijacija(SD) ili frekvencija (n) i postotak prema potrebi. Usporedbe kvantitativnihparametri između dvije skupine izvedeni su pomoću neparametrijskog Mann–Whitneyjevogtest. Kategorijalni parametri uspoređeni su između podskupina primjenom Pearsonovogχ2-test. Korelacijska analiza provedena je pomoću neparametrijskog Spearmanovog koeficijenta.Zbog višestrukog testiranja primijenjena je Benjamini–Hochberg (BH) korekcija s ciljemkontrolirati stopu lažnih otkrića od 5 posto. Prilagođenp-vrijednosti < 0.05 smatralo se da pružajudokaz za statistički značajan rezultat.

Kliknite ovdje za kupnju Cistanche

3. Rezultati

3.1. Obilježja kohorte

Analizirali smo kohortu od 116 ME/CFS pacijenata radi korelacije razina AAB sozbiljnost simptoma. Karakteristike bolesnika prikazane su u tablici1. Srednja dob bila je43 godine(IQR: 31–50), te prethodni medijan trajanja bolesti u vrijeme analizebio je četiri godine (IQR: 2–9). Ukupno 83 od 116 pacijenata (72 posto) bile su žene, a 86 (74 posto)prijavili početak bolesti izazvan infekcijom. Bolesnici s početkom izazvanim infekcijombili mlađi s medijanom razlike od deset godina (p = 0.005) i prijavili kraću bolesttrajanje (p = 0.022). Nije bilo razlika u težini simptoma, Bellovoj skali invaliditeta,SF-36 fizička funkcija i COMPASS 31-procijenjena autonomna disfunkcija (tablica1) niti uRazine AAB (tablica2) između ovih grupa.

3.2. Korelacija AAB s ukupnim IgG i dobi

Kao što smo već primijetili u prethodnoj studiji [19], većina razina AAB pokazala je apozitivna korelacija s ukupnim IgG i IgG-potklasama, pretežno s IgG1 i IgG3(Tablica S1). Budući da GPCR AAB pripadaju regulatornoj mreži AAB-a, njihova razina možeovise o ukupnim razinama IgG. Nadalje, za neke smo primijetili obrnutu korelaciju s dobiAAB (Tablica S1), kao i između dobi i ukupnog IgG (cijela kohorta: r =−0.2526; p = 0.007, n = 114). Stoga smo izračunali omjere AAB/IgG kako bismo ispravili učinak dobi (Tablica2 i Tablica S2).

3.3. Korelacija AAB s rezultatima kliničkih simptoma

Razine različitih AAB u korelaciji s težinom simptoma (Tablica S3).Nadalje, miprimijećena je pozitivna korelacija alfa1/2-AdR, M4-AChR i ETA-R s bolešćutrajanje (tablica S2). Minimiziranje učinka dobi korištenjem omjera AAB/IgG za korelacijuanalize su općenito dovele do viših procjena korelacije (r) i više korelacija dosegnuto arazina značajnosti (tablica S4). Analizirali smo skupine bolesnika prema vrsti bolestipočetak. Budući da je 74 posto pacijenata prijavilo početak infekcije, ova je skupina bila puno veća odskupina s neinfektivnim početkom. Korelacije težine simptoma s omjerima AAB/IgGstratificirani prema početku bolesti prikazani su kao vrijednosti Spearmanovog koeficijenta korelacijena slici1, a korelacije kliničkih simptoma s apsolutnim razinama AAB prikazane su uSlika S1. Najviše korelacija pronađeno je u bolesnika s početkom samo infekcije,dok je manje i druge korelacije pronađene u onih s početkom koji nije izazvan infekcijom(Tablice S3 i S4)

Slika 1.Korelacije između težine simptoma i omjera AAB/IgG. Korelacijska analiza omjera AAB/IgG sozbiljnost (A) umor, bol u mišićima, rezultati kognitivnih i imunoloških simptoma, fizičko funkcioniranje (SF-36) i Bellrezultat invaliditeta i (B) s poddomenama COMPASS 31. Spearman korelacijski koeficijenti (r) prikazani su za pacijente spočetak izazvan infekcijom (crne trake) i pacijenti bez početka izazvan infekcijom (sive trake). Značajne korelacije prijena BH-ispravak označeni su zvjezdicama (*p < 0.05,="" **="">p < 0.01),="" correlations="" that="" remained="" signifificant="" after="" bh-correction="">označeni su crno-bijelim prugama.U bolesnika s početkom izazvanim infekcijom (n = 86), ozbiljnost umora pozitivno je koreliralas većinom omjera AAB/IgG, uključujući one protiv alfa1/2-AdR, beta1/2/3-AdR,M3/4-AChR, AT1-R, ETA-R i ETB-R, ali ne i PAR-1/2 (slika1A, crne trake). MusJačina boli pokazala je slične korelacije s umorom, osim za beta3-AdR-AAB/IgG.

Fizička funkcija SF-36 pokazala je korelacijski uzorak sličanumori mišićabol sa značajnim negativnim korelacijama (zbog nižih rezultata koji ukazuju na jačeoštećenje) s alfa2-AdR-, beta1/2-AdR- i M4-ACh-AAB/IgG. Nasuprot tome,ozbiljnost kognitivnih simptoma u pozitivnoj korelaciji s AT1-R- i ETA-R-AAB/IgGsamo. Ozbiljnost Bellovog rezultata invaliditeta pokazala je sličnu negativnu korelaciju sAT1-R- i ETA-R-, te s alfa1/2-AdR-AAB/IgG. Za imunološki rezultat, samo anpronađena je inverzna korelacija s PAR1. Chalderov rezultat umora nije bio u korelaciji sAAB/IgG (nije prikazan). Dijagrami raspršenosti za značajne korelacije prikazani su na slikama S2–S5.Nijedna od ovih značajnih korelacija umora i boli u mišićima nije pronađena ubolesnika bez početka izazvanog infekcijom (Slika1A, sive trake). Korelacije izmeđuvećina AAB/IgG i SF{0}} rezultata fizičke funkcije bila je čak suprotna onima pacijenatas početkom izazvanim infekcijom. Međutim, procjene korelacije (r) između AT1-RAAB/IgG i kognitivnih simptoma i između AT1-R- i ETA-R-AAB/IgG iBellovi rezultati bili su slični onima pacijenata s početkom izazvanim infekcijom. Kao ova podskupinabio je puno manji (n = 30), ovo može objasniti nedostatak značaja. Nadalje, pronašli smo aznačajna negativna korelacija ETB-R-AAB/IgG i Bell skora samo u ovoj skupini.Također su pronađeni zanimljivi korelacijski obrasci za AAB/IgG i tri domeneortostatske, gastrointestinalne i pupilomotorne funkcije procijenjene pomoću COMPASS 31upitnik (slika1B). U bolesnika s početkom izazvanim infekcijom, gastrointestinalnisimptomi su pozitivno korelirali s alfa1/2-AdR- i pupilomotornim simptomimas omjerima alfa1-, beta2/3-AdR- i M4-AChR-AAB/IgG. Nasuprot tome, ne-infekcijapokrenuta skupina s početkom pokazala je jake korelacije alfa1/2-AdR- i beta1/2/3-AdRAAB/IgG s ortostatskim simptomima i inverzna korelacija PAR2-AAB/IgG ssekretomotorni simptomi, koji su odsutni u drugoj podskupini. Nismo promatralibilo koja od ovih korelacija s ukupnim IgG (nije prikazano). Bolesnici bez infekcije-pokrenutipočetak je imao značajno duže trajanje bolesti prije ovih analiza (tablica1). Kao i miuočeni viši omjeri alfa1/2-AdR, M4-AChR i ETA-R-AAB/IgG koji se mogu povezatis duljim trajanjem bolesti (Tablica S2), to može utjecati na korelacijealfa1/2-AdR/IgG s ortostatskim simptomima.U bolesnika s početkom izazvanim infekcijom, većina omjera AAB/IgG korelira sumor, bol u mišićima i kognitivni simptomi, kao i Bell rezultat s ETA-R-AAB/IgG,ostao značajan nakon BH-korekcije (tablica3 i slika1). Osim toga, udrugapilomotornih simptoma s M4-AChR-AAB/IgG ostao značajan. Nakon što je bhkorekcija, niti jedna od korelacija primijećenih u bolesnika bez početka izazvanog infekcijomostao značajan.

4. Rasprava

Sve je više dokaza o ulozi vaskularne disfunkcije u ME/CFS-upovezanost s ključnim simptomima [11]. U ovoj studiji pronašli smo nekoliko izvanrednih korelacijavazoregulacijskih AAB s kliničkim simptomima u ME/CFS. Ovisnost izmeđuizmjereni biološki gradijent AAB i ozbiljnost simptoma sugeriraju uzročnostpatomehanička veza.Zbog korelacije prirodnog regulatornog AAB s ukupnim IgG [19] i ovisnost oRazine IgG ovisno o dobi [36], omjeri AAB/IgG korišteni su u našim analizama radi korekcijeutjecaj dobi. Korištenje omjera AAB/IgG umjesto otkrivenih apsolutnih razina AABjače i više korelacija, i višep-vrijednosti su dosegle razinu značaja.U skladu s našom hipotezom o ulozi vazoaktivnog AAB u ME/CFS, otkrili smo darazine alfa1/2- i beta1/2/3-AdR-, M3/4-AChR- i AT1-R-, ETA/BR-AAB/IgGsvi omjeri značajno koreliraju s težinom umora i, s izuzetkombeta3-AdR-AAB/IgG, s bolovima u mišićima. Isti AAB alfa2-AdR-, beta1/2-AdR- iM4-AChR- (ali ne AT1-R-, ETA/BR-) u korelaciji s SF-36 fizičkom funkcijom. Tanakaet al. već opisao razine M-AChR-AAB (bez podataka o podtipu M) uME/CFS biti povezan sa slabošću mišića [18]. Bynke i sur. nije mogao pokazatipovezanost AAB protiv beta1/2-AdR i M3/M4-AChR s raznim zdravstvenimupitnika, ali njihova je kohorta bila prilično mala, a ključni simptomi uključujući umor,bol u mišićima, kognitivni i autonomni simptomi nisu zasebno procijenjeni [20]. Mipronašli su povišeni AAB u odnosu na beta2-AdR, kao i M3 i M4-AChR, u pacijenata s ME/CFS-omu našoj prethodnoj studiji [19]. 

U ovoj studiji nije utvrđena težina simptoma.U bolesnika sa sindromom posturalne tahikardije (POTS), jedno je istraživanje izvijestilo o povišenomrazine AAB u odnosu na alfa1-AdR i M4-AChR u korelaciji s težinom simptoma [37], dok je drugi pokazao povišene razine AAB u odnosu na beta1-AdR- i beta2-AdR nakorelirati s težinom simptoma [38]. Uočili smo jasan obrazac za kognitivno oštećenje, koje je bilo povezanos ETA-R i AT1-R-AAB. Od interesa, ETA/BR-, AT1-R- i dalje alpha1/2-AdRAAB/IgG također je bio u korelaciji s težinom Bell invaliditeta, bilježeći napor uuzrokovane simptome i sposobnost za rad. ETA-R-, AT1-R- i alpha1/2-AdR svi aktiviraju snažnovazokonstriktorni putevi stimulirani fizičkim naporom [12]. Poboljšane razine AT1-RAAB su dobro utvrđen čimbenik rizika za odbacivanje bubrežnog presatka [14]. Kod hipertenzije,opisani su povišeni AT1-R-AAB i alfa1-AdR-AAB što ukazuje na agonističkuučinak na njihove receptore [39]. Nadalje, AT1-R-AAB bili su povezani s vaskularnim starenjemi krutost arterija [40,41]. Uloga ETA-R-AAB opisana je u vezi s autoimunimplućna arterijska hipertenzija i kod sistemskog eritemskog lupusa i kod sistemske scleružica [42,43]. Naš koncept viših ETA-R i AT1-R AAB/IgG u korelaciji s kognitivnimoštećenje zbog vazokonstrikcije u skladu je s nedavnim studijama van Campena i sur.,pokazuje i cerebralnu hipoperfuziju i pad kognitivne funkcije u ME/CFS nakonortostatski stres [9,10]. Pronađeni su zanimljivi korelacijski obrasci za omjere AAB/IgG i gastrointestinalni trakti pupilomotorna funkcija također u skupini s početkom infekcije. Gastrointestinalni simptomi u korelaciji s alfa1/2-AdR-ABB/IgG. Ovaj je nalaz u skladu sstudija koja pokazuje da je kolorektalni motilitet posredovan alfa1-AdR [44]. Pupilomotorsimptomi u korelaciji s alfa1-AdR-, beta2/3-AdR- i M4-AChR-ABB/IgG. Na bhkorekcija, povezanost pupilomotornih simptoma s M4-AChR-ABB/IgG ostala jeznačajan. Ekspresija M4-AChR opisana je u mikrovaskularnom sustavu mozga iendotel rožnice [30,45]. 

Zanimljivo, nismo pronašli značajne korelacije AAB/IgG u odnosu na AdR, AChR iAT1-R/ET-R s umorom, bolovima u mišićima i AdR- i AChR-ABB/IgG sa SF-36 fizikomkalnu funkciju u bolesnika bez početka bolesti izazvanog infekcijom. Međutim, sličnoprocjene za korelacije omjera AAB/IgG prema AT1-R/ETA-R i alpha1/2-AdR s cogNition i Bell Score su pronađeni, koji nisu bili značajni, vjerojatno povezani s trostrukimmanji broj pacijenata u ovoj skupini. Samo u bolesnika s neinfektivnim početkom bolestiznačajne korelacije simptoma ortostatske nepodnošljivosti sa svim AdR-AAB/IgGsu viđeni. Nadalje, inverzna korelacija PAR2-AAB/IgG sa sekretomotornim simptomimanađen. Pokazalo se da PAR2 aktiviran tripsinom posreduje u lučenju sline [46]. GPCR AAB razlikuju se od klasičnih autoantitijela koja se često aktiviraju, komplementirajui može posredovati u upali i uništenju [47]. Nema citotoksičnog učinka niti komplementado sada je prijavljena aktivacija GPCR AAB. GPCR AAB specifično vežuna njihove odgovarajuće receptore, što može imati funkcionalne posljedice. Oboje poticajnoopisani su agonistički i inhibirajući antagonistički učinci [13,15,48]. S obziromagonistička funkcija, nekoliko povezanosti AAB sa simptomima koje smo pronašli suvjerojatan. Povišene razine agonističkog AT1-R/ETA-R AAB mogle bi objasniti povezanosts većom kognitivnom disfunkcijom zbog opisanog učinka na vazokonstrikcijuu nekoliko drugih bolesti [49]. Na sličan način bi se mogla objasniti pojačana aktivnost PAR2manje sekretomotornih simptoma i pojačana aktivnost alfa1-AdR više gastrointestinalnogsimptomi [44]. Mogla bi biti obrnuta korelacija imunološkog rezultata s PAR1-AAB/IgGobjašnjeno nižim razinama PAR1-AAB, što rezultira manjim vaskularnim suženjem [26,27]. Thepovezanost povišenih razina alfa- i beta-AdR-AAB s težim umoromi bol u mišićima kod postinfektivnog ME/CFS-a može ukazivati ​​na pretjerano djelovanje vazokonstriktoraalfa-AdR-AAB ili oslabljena funkcija vazodilatativnog beta2-AdR-AAB. Ranije smopronađena je oslabljena agonistička beta{0}}AdR-AAB funkcija u imunološkoj i reporterskoj staničnoj linijiispitivanja u bolesnika s ME/CFS s višim razinama AAB [22]. AAB protiv beta1-AdR bili supokazalo se da oštećuje vazorelaksaciju posredovanu beta1-AdR-om i beta{2}}AdR-om kod štakora [50]. AdR disfunkcija može posebno igrati ulogu pri naporu s pojačanim otpuštanjemepinefrina i norepinefrina, što dovodi do pojačane vazokonstrikcije i hipoperfuzijes uzastopnim umorom i bolovima u mišićima. Vjerojatno postoje autoimuni mehanizmipostinfektivni ME/CFS [25]. Kako su svi ovi AAB prirodni regulatori, AAB disfunkcijamogu se razviti tijekom infekcije aktivacijom promatrača i rezultirajućom somatskom hipermutacijomu AAB s jačim ili promijenjenim vezanjem antigena na GPCR ili u širenju epitopa.

Ss obzirom na AdR, takav bi scenarij bio u skladu s pacijentima koji često prijavljuju da aninfekcija u stresnoj situaciji, vjerojatno uz aktivaciju izazvanu stresomAdR-a, izazvao početak bolesti.Najnepodudarniji uzorci koje smo uočili između podskupina pacijenata sukorelacije svih AdR-AAB s ortostatskom disfunkcijom u bolesti koja nije potaknuta infekcijomali s umorom, bolovima u mišićima i SF-36 u postinfektivnom ME/CFS. Budući da apsolutni AABrazine, kao i omjeri AAB/IgG, nisu se razlikovali između dviju podskupina pacijenata, toimplicira da nije samo razina AAB-a, već radije funkcija AAB-a ilireceptori su različiti u ovim podskupinama pacijenata. Da bismo dalje pratili ovu hipotezu, ubolesnika s početkom koji nije izazvan infekcijom, funkcija odgovora AdR-AAB možda nećebiti promijenjen, ali korelacije ovdje mogu odražavati adaptivni odgovor. Na primjer, pacijentis bolestima vezivnog tkiva, kao što je Ehlers-Danlosov sindrom (EDS), viši surizik od razvoja ME/CFS. Ovdje je vaskulatura elastičnija, što dovodi do nižeg sistoličkogi dijastolički krvni tlak, tahikardija i često POTS. Bolesnici imaju autonomnidisfunkcija s gastrointestinalnim problemima te poremećena funkcija mokraćnog mjehura. Tamoje dokaz da pacijenti s EDS-om imaju pojačanu vazokonstrikciju zbog adrenergičkihhiper-odziv [51]. Primamljivo je nagađati da je kod ovih pacijenata povišenAdR-AAB odražavaju ovu kompenzatornu prekomjernu aktivnost adrenergičkog sustava. U redus ovim konceptom, u bolesnika s POTS-om, povišene razine AAB u odnosu na alfa1-AdR iM4-AChR u korelaciji s težinom simptoma [37]. Ograničenje ove studije je da nekoliko korelacija više nije bilo vidljivo nakonkorekcija za višestruko testiranje zbog mnogih parametara analiziranih u našoj studiji.

Midali su i ispravljene i neispravljene korelacije kako bi se riješio mogućinepotrebno odbacivanje pravih nalaza pri prilagodbi za višestruko testiranje [52]. Thetumačenje nalaza u kohorti bez početka izazvanog infekcijom temelji se namanji broj bolesnika i neki neznačajni nalazi. Nismo povećalibroj pacijenata s neinfekcijom koja je pokrenula ME/CFS jer nismo htjeli dodatiskupina pacijenata dijagnosticirana i analizirana kasnije. Osim toga, početak bolesti jesami prijavili, a neki pacijenti mogu biti pogrešno klasificirani. Ozbiljnost simptoma javlja sami subjektivna mjera, koja dovodi do široke distribucije. Kao što su poremećaji spavanjaključni simptom i kod ME/CFS-a, a spavanje je povezano s parasimpatičkim sustavom, arezultat spavanja treba procijeniti u daljnjim studijama. Nadalje, nismo analizirali zdravukontrolnu kohortu u ovoj studiji. U prijašnjim i tekućim neobjavljenim studijama stalno smootkrili su da podskupina od približno jedne trećine pacijenata s ME/CFS ima viši AABprotiv beta2-AdR kao i M3/M4-AChR u usporedbi sa zdravim kontrolama [19,20]. Nalaziiz naše nedavne funkcionalne studije sugeriraju da agonistička funkcija beta2-AdR AABmože biti oslabljen i kod pacijenata s ME/CFS-om, unatoč normalnim razinama AAB [22]. Zaključno, naša studija pruža dokaze da AAB i/ili receptorski puteviAdR, AChR kao i AT1-R i ET-R igraju ulogu u ME/CFS-u zbog povezanosti sozbiljnost simptoma. Stoga je moguće da različiti simptomi ME/CFS-a, uključujućiumor, bol u mišićima, kognitivno oštećenje i autonomna disregulacija, mogu biti posredovaniili pogoršana ovim AAB. Potrebne su daljnje studije kako bi se dešifrirao mehanizami specifičnost vezanja ovih GPCR-AAB i njihov učinak na vaskularnu funkcijuME/CFS, i kako se to može prevesti u terapijske koncepte. U slučaju nefunkcionalnogAAB, terapije usmjerene na AAB, poput imunoadsorpcije ili rituksimaba, bibiti opravdani i pokazali su se učinkovitima u podskupini pacijenata s ME/CFS (pregledanou [5]). Daljnje specifično ciljanje disfunkcionalnih ili regulativnih AAB može se razviti kaostrategije liječenja u ME/CFS.

5. Patenti

CellTrend GmbH posjeduje patent za upotrebu antitijela beta-adrenergičkih receptora udijagnoza CFS.

Dopunski materijali:Tablica S1: AAB parakliničke korelacije, Tablica S2: Omjer AAB/IgG parakliničke korelacije, Tablica S3: AAB kliničke korelacije AdR-, AChR- i drugih AAB; početakstratificirani, Tablica S4: Kliničke korelacije omjera AdR-, AChR- i drugih AAB/IgG; početak-slojeviti,Slika S1: Korelacije između težine simptoma i AAB, Slika S2: Korelacije s umoromu bolesnika s početkom izazvanim infekcijom, Slika S3: Korelacije s bolovima u mišićima, kognitivnim iimunološki simptomi u pacijenata s početkom izazvanim infekcijom, Slika S4: Korelacije s Bellovim rezultatom,tjelesno funkcioniranje i simptomi autonomne disfunkcije u bolesnika potaknutih infekcijompočetak, Slika S5: Korelacije u bolesnika bez početka izazvanog infekcijom.

Doprinosi autora:Konceptualizacija, CS metodologija, MS, SL, HF i HH; validacija,MS, HF, SB i FS; formalna analiza, MS; istraga, SB, CK, PG i HH; sredstva, CKi PG; upravljanje podacima, MS, SL i TL; pisanje—priprema izvornog nacrta, MS, HF i CS;pisanje—pregled i uređivanje, SL, FS, SB, AP, CK, PG, TL, GR i HH; vizualizacija, HFi MS; nadzor, CS; projektna administracija, CS; nabava sredstava, CS Svi autori imajupročitao i prihvatio objavljenu verziju rukopisa.

Financiranje:Ovo istraživanje je financirala Zaklada Weidenhammer-Zöbele, MS je primilastipendija Lost Voices Foundation.

Izjava institucionalnog odbora za reviziju:Studija je provedena prema smjernicamaHelsinšku deklaraciju i odobrio Etički odbor Charité Universitätsmedizin Berlin(šifra protokola EA4/090/10, datum odobrenja 11. prosinca 2012.).

Izjava o informiranom pristanku:Informirani pristanak dobiven je od svih subjekata uključenih ustudija.

Izjava o dostupnosti podataka:Podaci predstavljeni u ovoj studiji dostupni su na opravdan zahtjevod odgovarajućeg autora.

Zahvale:Zahvaljujemo Silviji Thiel na podršci bolničkoj njezi i upravljanju podacima. Nadalje, zahvaljujemo svim pacijentima koji su s povjerenjem dali svoje uzorke krvi i pristalisudjelovati u ovom istraživačkom projektu.

Sukob interesa:HH, generalni direktor CellTrend GmbH, ima patent za korištenje betaantitijela na adrenergičke receptore u dijagnozi CFS-a. Svi ostali autori izjavljuju da nema sukoba interesa.Financijeri nisu imali nikakvu ulogu u dizajnu studije; u prikupljanju, analizi ili interpretacijipodaci; u pisanju rukopisa ili u odluci o objavi rezultata.