Procjena odnosa između visokoosjetljivog C-reaktivnog proteina i funkcije bubrega primjenom Mendelove randomizacije u japanskoj J-MICC studiji

Za više informacija:emily.li@wecistanche.com

Ryosuke Fujii, Asahi Hishida, Takeshi Nishiyama, Masahiro Nakatochi, Keitaro Matsuo, Hidemi Ito, Yuichiro Nishida, Chisato Shimanoe, Yasuyuki Nakamura, Tanvir Chowdhury Turin, Sadao Suzuki4, Miki Watanabe4, Rie Ibusuki, Toshiro Takezaki, Haruo Mikamika, Yohro Za J -MICC studijska grupa plus

1 Odjeli za patofiziološke laboratorijske znanosti, Medicinski fakultet Sveučilišta Nagoya, Nagoya, Japan

2 Odjel za preventivne medicinske znanosti, Fakultet medicinskih znanosti Sveučilišta Fujita Health, Aichi, Japan

3 Odjel za preventivnu medicinu, Medicinski fakultet Sveučilišta Nagoya, Nagoya, Japan

4 Odjel za javno zdravstvo, Graduate School of Medical Sciences Sveučilišta Nagoya, Nagoya, Japan

5 Jedinica za informatiku javnog zdravstva, Odjel za integrirane zdravstvene znanosti, Medicinski fakultet Sveučilišta Nagoya, Nagoya, Japan

6 Odjel za epidemiologiju i prevenciju raka, Aichi Cancer Center, Nagoya, Japan

7 Odjel za epidemiologiju raka, Medicinski fakultet Sveučilišta Nagoya, Nagoya, Japan

8 Odjel za informacije i kontrolu raka, Aichi Cancer Center, Nagoya, Japan

9 Odjel za preventivnu medicinu, Medicinski fakultet, Sveučilište Saga, Saga, Japan

10 Odjel za zdravstvene znanosti, Sveučilište medicinskih znanosti Shiga, Otsu, Japan

11 Odjel za obiteljsku medicinu, Medicinski fakultet Cumming, Sveučilište Calgary, AB, Kanada

12Odjel za međunarodnu otočnu i lokalnu medicinu, Fakultet medicinskih i stomatoloških znanosti Sveučilišta Kagoshima, Kagoshima, Japan

13Cancer Prevention Center, Chiba Cancer Center Research Institute, Chiba, Japan

14 Odjel za gerijatrijsku medicinu, Fakultet medicinskih znanosti, Sveučilište Kyushu, Fukuoka, Japan

15 Laboratorij za javno zdravstvo, Fakultet za hranu i nutricionističke znanosti, Sveučilište Shizuoka, Shizuoka, Japan

16 Odjel za epidemiologiju za javno zdravlje i medicinu, Medicinsko sveučilište prefekture Kyoto, Kyoto, Japan

17 Odjel za preventivnu medicinu, Institut zdravstvenih bioloških znanosti, Fakultet za diplomske studije Sveučilišta u Tokushimi, Tokushima, Japan

18RIKEN centar za integrativne medicinske znanosti, Yokohama, Japan

SAŽETAK

Pozadina: upalasmatra se faktorom rizika zabubregbolest. Međutim, ostaje kontroverzno pitanje je li upalni status uzrok ili ishod kronične bubrežne bolesti. Cilj nam je bio istražiti uzročnu vezu između visokoosjetljivog C-reaktivnog proteina (hs-CRP) i procijenjene brzine glomerularne filtracije (eGFR) korištenjem pristupa Mendelove randomizacije (MR).

Metode:U ovoj studiji analizirano je ukupno 10 521 sudionika Japanske višeinstitucionalne suradničke kohortne studije. Koristili smo pristupe MR-u s dva uzorka (ponderirana inverzna varijanca (IVW), ponderirana medijan (WM) i MR-Eggerova metoda) za procjenu učinka genetski određenog hs-CRP na funkciju bubrega. Odabrali smo četiri i tri jednonukleotidna polimorfizma (SNP) povezana s hs-CRP kao dvije instrumentalne varijable (IV): IVCRP i azijski, na temelju SNP-ova prethodno identificiranih u europskim i azijskim populacijama. IVCRP i Asian objasnili su 3,4 posto, odnosno 3,9 posto varijacije u hs-CRP.

Rezultati:Koristeći IVCRP, genetski određen hs-CRP nije bio značajno povezan s eGFR u IVW i WM metodama (procjena po 1 jedinici povećanja ln(hs-CRP), 0.000; 95 posto interval pouzdanosti [CI], −0.019 do {{10}}.020 i −{{2{{{22 }}}}.003; 95 posto CI, −0.019 do 0.014, redom) . Za Azijate smo pronašli slične rezultate koristeći IVW i WM metode (procjena, {{40}}.005; 95 posto CI, -0,020 do 0,010 i -0,004; 95 posto CI , -0,020 do 0,012, redom). MR-Eggerova metoda također nije pokazala uzročne veze između hs-CRP i eGFR (IVCRP: -0,008; 95 posto CI, -0,058 do 0,042; Azijat: 0,001; 95 posto CI, -0,036 do 0,036).

Zaključci:Naše MR analize s dva uzorka s različitim IV nisu potvrdile uzročni učinak hs-CRP na eGFR.

Ključne riječi:hs-CRP; eGFR; Mendelska studija randomizacije; genetička epidemiologija;upala

Cistanche može poboljšati rad bubrega

UVOD

Sustavna upala smatra se jednim od čimbenika rizika za uobičajene kronične bolesti, uključujući dijabetes melitus,1 hipertenziju,2 kardiovaskularne bolesti,3 i kroničnu bolest bubrega (CKD).4 Općenito, C-reaktivni protein (CRP) se koristi kao biomarker sustavne upale u kliničkim i temeljnim istraživanjima. Iako su prethodne longitudinalne studije ispitivale povezanost između razina CRP-a i kronične bubrežne bolesti u različitim populacijama, dokazi o uzročnosti te povezanosti i dalje su kontroverzni.5–7 Međutim, neki su istraživači pokazali učinak bioloških funkcija usmjerenih na CRP nabubregfunkcija.8,9 Jedan je istraživač također objavio meta-analizu koja sugerira da dodaci vitamina D mogu smanjiti razine cirkulirajućeg CRP-a.10 Uzete zajedno, ove studije sugeriraju da intervencije na CRP-u mogu pomoći u poboljšanjububrežnifunkcija.

U posljednjih nekoliko godina pristup Mendelove randomizacije (MR) privukao je veliku pozornost u genetskoj epidemiologiji. Najveća prednost ove metode je istraživanje uzročnog odnosa između izloženosti (X) i ishoda (Y) iz skupa podataka promatranja koristeći genetske varijante kao instrumentalne varijable (G: IV).11 Razvoj MR analize uzastopno se dogodio nakon identificiranja polimorfizam jednog nukleotida (SNP) u studijama asocijacije na cijelom genomu (GWAS). Kao i kod drugih zdravstvenih ishoda, prethodni GWAS identificirao je SNP-ove povezane s razinama CRP-a, uključujući CRP gen u kromosomu 1.12,13 Zanimljivo je da je poznato da na razine CRP-a u serumu utječu genetski polimorfizmi,14 što ukazuje da SNP-ovi povezani s razinama CRP-a mogu odražavati dugotrajna izloženost višoj=nižoj razini CRP-a. Stoga su SNP-ovi povezani s razinama CRP-a u serumu prikladni za IV kako bi se istražile uzročne veze između CRP-a i nekoliko patofizioloških stanja, a korišteni su u prethodnim studijama MR-a među odraslim osobama u europskim zemljama.15-17

U azijskim zemljama, velike kohortne studije prikupljale su ljudske genome i provodile genotipizaciju u posljednjih nekoliko desetljeća. Nekoliko je istraživača provelo GWAS i pronašlo nove lokuse povezane s razinama CRP-a u azijskim populacijama.18-20 Ove studije omogućuju istraživačima provođenje MR studija korištenjem SNP-ova povezanih s CRP-om u azijskim populacijama, što se čini važnim u smislu etničkih razlika. Stoga smo istražili jesu li genetski određene razine hs-CRP pomoću dva različita IV-a, na temelju SNP-ova identificiranih u europskim i azijskim populacijama, uzročno povezane sbubregfunkcijau japanskoj populaciji koja koristi MR pristupe.

METODE

Mjerenje hs-CRP i eGFR

Uzorci seruma su prikupljeni od svih sudionika. Mjerili smo hs-CRP pomoću nefelometrije pojačane lateksom. Kreatinin u serumu mjeren je u osnovi enzimskom metodom. Neki su instituti mjerili kreatinin u serumu koristeći Jaffffeovu metodu i zatim ga pretvarali u ekvivalentnu vrijednost enzimske metode. eGFR je izračunat pomoću japanske jednadžbe koju je predložilo Japansko društvo za nefrologiju: eGFR (mL= min=1.73 m2 )=194 × serumski kreatinin (mg=dL) −1.{{10}}94 × dob−0,287 (× 0,739 za žene).24

Odabir instrumentalnih varijabli

Popis SNP-ova kandidata za IV prikazan je u tablici 1. Prvo smo odabrali četiri SNP-a (rs3093077, rs1205, rs1130864 i rs1800947) unutar CRP gena koji je korišten kao IV u prethodnim studijama MR-a.15 Ovi SNP-ovi su odabrani kao minimalni podskup za postizanje raznolikosti na CRP genu u europskim populacijama i nazvan IVCRP u ovoj studiji. Zatim smo smatrali da je potrebno odabrati SNP-ove i razviti izvorne IV-ove u azijskoj populaciji jer je IVCRP razvijen na temelju SNP-ova identificiranih kod ljudi europskog podrijetla. Stoga smo pretražili riječ 'CRP' u GWAS katalogu i suzili ga na studije prema sljedećim kriterijima: 1) studija provedena u azijskoj populaciji i 2) studija s fazom otkrića i replikacije. Nakon odabira putem interneta, konačno smo odabrali 13 SNP-ova. Za 151233628, zbog niske kvalitete imputiranja (MAF<0.05 and="" r2="" <="" 0.3),="" this="" snp="" was="" not="" included="" in="" the="" original="" j-micc="" dataset.="" of="" remaining="" 12="" snps,="" 6="" snps="" (rs12133641,="" rs9375813,="" rs2097677,="" rs79802086,="" rs2393791,="" and="" rs1169284)="" were="" excluded="" because="" these="" snps="" were="" not="" signifificantly="" associated="" with="" hs-crp="" in="" our="" dataset="" (p="" >="" 0.0042="0.05=12)." next,="" rs814295="" (gckr)="" and="" rs429358="" (apoe)="" were="" likely="" to="" have="" pleiotropic="" effects="" on="">bubregfunkcija. rs3093059 isključen je zbog velike neravnoteže povezivanja (LD) s rs3093068 u skupu podataka CRP (r2 > 0,9). Konačno, tri SNP-a (rs30933068, rs7553007 i rs7310409) uključena su u našu analizu i nazvana su azijskim (Tablica 2)

REZULTATI

Tablica 1 prikazuje osnovne karakteristike skupova podataka CRP i eGFR. Prosječna dob sudionika nije se značajno razlikovala između skupa podataka CRP (55,5; standardna devijacija [SD], 9,6) i skupa podataka eGFR (55,1; SD, 9,2), a gotovo polovica ispitanika subjekti su bile žene u oba skupa podataka (CRP: 64,7 posto i eGFR: 53,4 posto). Medijan i interkvartilni raspon [IQR] razina hs-CRP i eGFR bio je 0.04 mg=dL (IQR, 0.02–0.08) i 77.2 mL =min=1.73 m2 (IQR, 68.7–86.7).

Povezanosti između instrumentalnih varijabli i osnovnog hs-CRP-a

Two SNPs (rs3093077 and rs1205) in IVCRP were signifificantly associated with ln(hs-CRP), but not for the other two SNPs (rs1130864 and rs1800947) (Table 2). All three SNPs in IVAsian were associated with ln(hs-CRP). Combining these SNPs, both IVCRP and IV Asian had an F-statistic >10 (14,8 odnosno 22,5), što je pokazalo da dva IV-a ispunjavaju kriterij za pretpostavku relevantnosti. Četiri SNP-a u IVCRP-u i tri SNP-a u IVAsian-u objasnili su 3,4 posto, odnosno 3,9 posto varijacije u hs-CRP-u.

Konvencionalna analiza povezanosti između hs-CRP i eGFR

Prije MR analize, proveli smo konvencionalnu statističku analizu za presječnu povezanost između hs-CRP i eGFR. Među 1598 sudionika koji su bili dostupni i za hs-CRP i za eGFR, ln(hs-CRP) je bio snažno povezan s ln(eGFR) (= −0.{{10 }}15; 95-postotni interval pouzdanosti [CI], -0,024 do -0,007; P=3,26 × 10-4 ), nakon prilagodbe za spol, dob i mjesta istraživanja. Dijagram raspršenosti za povezanost između ln(hs-CRP) i ln(eGFR) prikazan je na slici 2.

MR analiza dva uzorka

Koristeći IVCRP, genetski određen hs-CRP nije bio značajno povezan s eGFR u IVW metodi (procjena po 1 jedinici povećanja ln(hs-CRP)=0.000; 95 posto CI, −{ {6}}.019 do 0.020; P {{10}}.97) (Slika 1, crni blokovi ). U skladu s rezultatom u IVW metodi, uzročna veza nije pronađena u WM metodi (procjena po 1 jedinici povećanja ln(hs-CRP)=−0.0{{ 39}}3; 95 posto CI, −0.019 do 0,014, P=0.77) i MR-Egger metoda (procjena po 1 jedinici povećanja ln(hs) -CRP)=−0,008; 95 posto CI, −0,058 do 0,042; P=0,75). Odsječak procijenjen u MR-Egger metodi vjerojatno je nula (procjena, 0,003; 95 posto CI, -0,011 do 0,016; P=0,71). Dijagram raspršenosti pomoću IVCRP-a prikazan je na slici 3A.

Procijenjena uzročna povezanost korištenjem genetskih instrumenata zabilježena u azijskim populacijama (IV Azijat) nije bila značajna, što je bilo u skladu s rezultatom korištenjem IVCRP-a (Slika 1, crveni blokovi). Procjene ln(eGFR) po 1 jedinici povećanja genetski određenog ln(hs-CRP) u IVW i WM metodi bile su −0.005 (95 posto CI, −0.020 do 0.010; P {{10}}.54 ) odnosno −0.004 (95 posto CI, -0,020 do 0,012; P=0,61). Rezultat u MR-Eggeru bio je nedosljedan s dvije druge metode, ali još uvijek beznačajan (procjena, 0,001; 95 posto CI, -0,036 do 0,036; P=0,99). Odsječak u MR-Egger metodi bio je jednak nuli (procjena, -0,001; 95 posto CI, -0,010 do 0,008; P=0,77). Dijagram raspršenosti pomoću IVAsian-a prikazan je na slici 3B.

RASPRAVA

Procijenili smo uzročnost između genetski uvjetovane upale i funkcije bubrega primjenom MR pristupa u japanskoj populaciji. U ovoj studiji koristili smo četiri i tri SNP-a kao različite genetske instrumente (IVCRP i IV Asian). Niti jedna od dvije instrumentalne varijable za hs-CRP nije bila povezana s razinama eGFR u MR analizi dva uzorka. Ovi rezultati sugeriraju da nema značajne uzročne veze između hsCRP i eGFR u ovoj populaciji.

Otkrili smo da IVCRP nije značajno povezan s eGFR, što ukazuje na nepostojanje uzročne veze između genetski uvjetovanihupalai rad bubrega. U ovoj studiji koristili smo četiri SNP-a (rs3093077, rs1205, rs1130864 i rs1800947) unutar CRP gena kao instrumentalne varijable. Prethodno istraživanje je izvijestilo da su ova četiri SNP-a odabrana kao skup označavanja SNP-ova u CRP genu.17 Jedna od prethodnih studija MR-a u bijelaca izvijestila je da genetski određen CRP nije značajno povezan s eGFR-om temeljenim na kreatininu (= 0 0,004; 95 posto CI, -0,01 do 0,02). Zanimljivo je da je ova prethodna studija koristila isti skup SNP (IVCRP) kao u ovoj studiji, a veličina učinka IV na eGFR bila je slična onoj uočenoj u ovoj studiji. Stoga je ova beznačajna povezanost između genetski određenih razina CRP-a i eGFR-a vjerojatno dosljedna među različitim etničkim skupinama.

SNP-ovi u IVCRP-u izvorno su odabrani među pojedincima europskog podrijetla. Štoviše, dobro je poznato da je razina CRP-a u azijskoj populaciji bila niža nego u bijelaca.31 Stoga smo pokušali razviti IV specifičan za azijske ljude i odabrali tri SNP-a povezana s CRP-om (rs3093068, rs7553007 i rs7310409) u prethodnim GWAS-ima u azijskoj populaciji.18-20 Međutim, nisu pronađeni dokazi da je IV azijski bio povezan s eGFR-om u ispitivanoj populaciji.

IV requires the following three key assumptions: 1) relevance assumption (IV is associated with exposure), 2) exclusion restriction assumption (IV affects the outcome only through the exposure), and 3) exchangeability assumption (the effect of outcome is not confounded). Regarding relevance assumption, in this study, we restricted to only three SNPs in the robust selection process, thereby F-statistics of IV Asian was relatively small (F-statistic = 22.5). Although this value barely satisfies the assumption of IV (F-statistic >10), rezultati su vjerojatno bili empirijski provjerljivi za pretpostavku o relevantnosti. Uzimajući u obzir da smo usvojili najbolje značajno povezane SNP-ove kao IV CRP-a, koji nije bio povezan s bubrežnim funkcijama, doprinosi genetski određenog CRP-a na rizik od bubrežne bolesti mogu biti relativno ograničeni u usporedbi s višestrukim čimbenicima rizika ove složene bolesti.32 ,33

Još jedna ključna pretpostavka za MR analizu je pretpostavka o ograničenju isključenja.34 Ovaj metodološki pregled dao je više scenarija koji krše ovu pretpostavku (npr. neadekvatna definicija fenotipa i izloženost koja varira u vremenu). Za scenarije neadekvatne definicije fenotipa i pogreške mjerenja, koristili smo razine hs-CRP kao varijablu izloženosti. Ovo je jasna definicija izloženosti i može dovesti do manje pogreške mjerenja u usporedbi s fenotipizacijom temeljenom na upitniku. Za scenarij prisutnosti LD-a pažljivo smo isključili bilo koji od SNP-ova u LD-u, što se čini da je na odgovarajući način riješilo problem. Scenariji vremenski promjenjive izloženosti i obrnute uzročnosti usko su povezani i obično su zabrinjavajući za retrospektivnu studiju slučaj-kontrola, gdje se podaci o izloženosti prikupljaju nakon dijagnoze ishoda. Kao što je gore navedeno, adekvatno smo se pozabavili ovim problemima ili naša analiza nema značajne mogućnosti da odgovori na te scenarije. Osim ovih scenarija, horizontalna pleiotropija može prekršiti pretpostavku ograničenja isključenja. IV Asian sastojao se od SNP-ova ne samo u CRP genu već i u HNF1A. Iako su prethodne studije sugerirale da SNP u HNF1A može imati druge pleiotropije,35-37 analize osjetljivosti (MR-Egger i WM metode) u ovoj studiji pokazuju da procjena IVW nije bila pristrana prosječnim horizontalnim pleiotropnim učinkom (poznatim kao usmjerena pleiotropija).

Glavna snaga ove studije je da smo koristili IV posebno za azijske populacije. S obzirom na to da je razina CRP-a različita u svakoj populaciji, konstrukcija IV Azijata mogla bi pružiti smislen pristup kauzalnom zaključivanju u azijskoj populaciji. Ova studija također ima ograničenja o kojima treba raspravljati. Prvo, stvorili smo IVAsian u ovoj studiji, ali smo istraživali povezanost samo u japanskoj populaciji. Stoga ostaje nejasno je li ovaj rezultat dosljedan među azijskim skupinama. Potrebne su daljnje studije kako bi se ispitala ova povezanost u drugim azijskim populacijama. Drugo, broj SNP-ova korištenih u IV je bio mali. Oba od dva IV-a zadovoljila su pretpostavku o relevantnosti IV-a u MR-u, ali su bila relativno slaba. S obzirom na relativno nisku varijancu razina CRP-a u krvi i postojanje niza drugih determinanti CRP-a u ljudskom okruženju, kao što su bakterijske infekcije ili druge upalne bolesti koje ne potječu od naslijeđenih razina CRP-a, doprinos genetski određenih razina CRP-a u krvi može biti ograničen u razvoju humane bubrežne bolesti. Potencijalno, što je veći broj SNP-ova u IV, to je veća objašnjena varijanca izloženosti. Naprotiv, s povećanjem SNP-ova u IV, pleiotropni učinci će se također povećati. U nedavnom radu, istraživač je predložio da nema potrebe za isključivanjem SNP-ova s ​​pleiotropnim učincima.37,38 U ovoj studiji, međutim, dali smo prednost odabiru SNP-ova unutar CRP gena u odnosu na eksplanatornu stopu (tj. broj SNP-ova u IV ). U budućim studijama bit će važniji odabir IV. Treće, veličina uzorka studije bila je relativno velika u azijskim populacijama, ali ova veličina uzorka može dovesti do ograničene snage za MR s dva uzorka (eMaterijal 1). Stoga je rezultat potrebno potvrditi u većem skupu podataka. Osim toga, teško je zaključiti da nema uzročnosti između hs-CRP i eGFR jer je procijenjeni koeficijent u konvencionalnoj analizi bio uključen u intervale pouzdanosti MR metoda.

Zaključno, ove MR analize istraživale su uzročnu vezu između hs-CRP i funkcije bubrega. Naše dvije analize MR uzorka s dva različita IV nisu potvrdile uzročni učinak hs-CRP na eGFR u ovoj populaciji.

ZAHVALA

Autori bi željeli zahvaliti Kyoti Ashikawi, Tomomi Aoi i drugim članovima Laboratorija za razvoj genotipizacije, Centra za genomsku medicinu, RIKEN, na pomoći u genotipizaciji. Autori su zahvalni Yoko Mitsuda i Keiko Shibata na Odsjeku za preventivnu medicinu Medicinskog fakulteta Sveučilišta Nagoya na njihovoj tehničkoj pomoći, a također su zahvalni dr. Hideu Tanaki u Gradskom javnom zdravstvenom centru Kishiwada i dr. Nobuyuki Hamajima u Department of Healthcare Administration, Nagoya University Graduate School of Medicine za brigu o studiji J-MICC kao bivši glavni istraživači.

Članovi odbora ovog konzorcija (J-MICC studijska grupa): Kenji Wakai,3 Kenji Takeuchi,3 Asahi Hishida,3 Takashi Tamura,3 Keitaro Matsuo,6,7 Keitaro Tanaka,9 Katsuyuki Miura,10 Yoshikuni Kita,10 Sadao Suzuki, 4 Toshiro Takezaki,12 Hiroki Nagase,13 Haruo Mikami,13 Hiroaki Ikezaki,14 Kiyonori Kuriki,15 Ritei Uehara,16 Kokichi Arisawa,17 i Hiroto Narimatsu19 (Afilijacije u popisu autora, osim 19Odjel za prevenciju raka i kontrolu raka, Kanagawa Cancer Center, Istraživački institut, 1-1-2 Nakaonaga, Asahi-Ku, Yokohama 241-0815 Japan)

Financiranje: Ovu studiju podržali su Grants-in-Aid za znanstvena istraživanja za prioritetna područja raka [grant number: 17015018] i inovativna područja [grant number: 221S0001] i JSPS KAKENHI Grants [grant numbers: 16H06277, 15H02524, 19K21461, i 19K10659] od japanskog Ministarstva obrazovanja, kulture, sporta, znanosti i tehnologije. Ova je studija djelomično podržana financiranjem Japanskog projekta BioBank Japanske agencije za medicinska istraživanja i razvoj od travnja 2015. i Ministarstva obrazovanja, kulture, sporta, znanosti i tehnologije od travnja 2003. do ožujka 2015.

Doprinosi autora (imena moraju biti navedena kao inicijali): Odgovornosti autora bile su sljedeće—KW je nadzirao ovu kohortnu studiju suradnje; RF, AH, TN, KM, H. Ito, Y. Nishida, CS, Yasuyuki Nakamura, TC, SS, MW, RI, T. Takezaki, HM, Yohko Nakamura, H. Ikezaki, MM, KK, NK, DM, KA, SK, MT, T. Tamura, YK, TK, YM, MK, KT, KW i J-MICC Studijska grupa provela je istraživanje na svakom studijskom mjestu; RF organizirani podaci iz svake studije; AH i MN organizirani podaci za genetsku analizu; RF konceptualizirani i analizirani podaci; RF je napisao izvorni nacrt; AH, TN, KM, TC i KW kritički su pregledali rukopis zbog važnog intelektualnog sadržaja; RF je imao primarnu odgovornost za konačni sadržaj, a svi su autori pročitali i odobrili konačni rukopis.

Sukob interesa:Dr. Nakatochi izvještava o potporama Boehringer Ingelheima izvan dostavljenog rada.

REFERENCE

1. Dehghan A, Kardys I, de Maat MP, et al. Genetske varijacije, kreativne razine proteina i učestalost dijabetesa. Dijabetes. 2007.; 56: 872-878.

2. Sesso HD, Buring JE, Rifai N, Blake GJ, Gaziano JM, Ridker PM. C-reaktivni protein i rizik od razvoja hipertenzije. JAMA. 2003;290:2945-2951.

3. Ridker PM, Cushman M, Stampfer MJ, Tracy RP, Hennekens CH. Upala, aspirin i rizik od kardiovaskularnih bolesti kod naizgled zdravih muškaraca. N Engl J Med. 1997;336:973-979.

4. Mihai S, Codrici E, Popescu ID, et al. Mehanizmi povezani s upalom u predviđanju, progresiji i ishodu kronične bubrežne bolesti. J Immunol Res. 2018;2018:2180373.

5. Kubo S, Kitamura A, Imano H, et al. Serumski albumin i visokoosjetljivi C-reaktivni protein nezavisni su čimbenici rizika od kronične bubrežne bolesti kod sredovječnih Japanaca: istraživanje cirkulacijskog rizika u zajednicama. J Aterosklerski tromb. 2016;23:1089-1098.

6. Fox ER, Benjamin EJ, Sarpong DF, et al. Odnos C-reaktivnog proteina i kronične bubrežne bolesti u Afroamerikanaca: Jackson Heart Study. BMC Nephrol. 2010;11:1.

7. Lee JE, Choi SY, Huh W, Kim YG, Kim DJ, Oh HY. Metabolički sindrom, C-reaktivni protein i kronična bubrežna bolest u odraslih osoba bez dijabetesa i hipertenzije. Am J Hypertens. 2007;20:1189-1194.

8. Ross R. Ateroskleroza-upalna bolest. N Engl J Med. 1999;340:115-126.

9. Zhang L, Shen ZY, Wang K, et al. C-reaktivni protein pogoršava epitelno-mezenhimalni prijelaz kroz Wnt= -katenin i ERK signalizaciju u dijabetičkoj nefropatiji izazvanoj streptozocinom. FASEB J. 2019;33:6551–6563.

10. Chen N, Wan Z, Han SF, Li BY, Zhang ZL, Qin LQ. Učinak suplementacije vitaminom D na razinu cirkulirajućeg visokoosjetljivog C-reaktivnog proteina: meta-analiza randomiziranih kontroliranih ispitivanja. Hranjive tvari. 2014;6:2206-2216.

11. Smith GD, Ebrahim S. 'Mendelska randomizacija: može li genetska epidemiologija doprinijeti razumijevanju ekoloških determinanti bolesti? Int J Epidemiol. 2003;32:1-22.

12. Dehghan A, Dupuis J, Barbalic M, et al. Meta-analysis of genome-wide association studies in >80 000 ispitanika identificira više lokusa za razine C-reaktivnog proteina. Cirkulacija. 2011;123:731-738.

13. Ridker PM, Pare G, Parker A, et al. Lokusi povezani s putevima metaboličkog sindroma, uključujući LEPR, HNF1A, IL6R i GCKR, povezani su s C-reaktivnim proteinom plazme: Zdravstvena studija ženskog genoma. Am J Hum Genet. 2008;82:1185-1192.

14. Retterstol L, Eikvar L, Berg K. Studija blizanaca C-reaktivnog proteina u usporedbi s drugim čimbenicima rizika za koronarnu bolest srca. Ateroskleroza. 2003;169:279-282.

15. Prins BP, Abbasi A, Wong A, et al. Istraživanje uzročne povezanosti C-reaktivnog proteina s 32 složena somatska i psihijatrijska ishoda: opsežna unakrsna konzorcijska Mendelova studija randomizacije. PLoS Med. 2016;13:e1001976.

16. Hartwig FP, Borges MC, Horta BL, Bowden J, Davey Smith G. Upalni biomarkeri i rizik od shizofrenije: 2-uzorak Mendelove studije randomizacije. JAMA Psihijatrija. 2017;74:1226-1233.

17. CRP CHD Genetics Collaboration. Suradnička objedinjena analiza podataka o varijantama gena za C-reaktivni protein i koronarnoj bolesti: procjena uzročnosti Mendelovom randomizacijom. Eur J Epidemiol. 2008;23:531-540. 18. Kanai M, Akiyama M, Takahashi A, et al. Genetska analiza kvantitativnih svojstava u japanskoj populaciji povezuje tipove stanica sa složenim ljudskim bolestima. Nat Genet. 2018;50:390-400.

19. Okada Y, Takahashi A, Ohmiya H, et al. Studija povezanosti genoma za razine C-reaktivnog proteina identificirala je pleiotropne povezanosti u lokusu IL6. Hum Mol Genet. 2011;20:1224-1231.

20. Vinayagamoorthy N, Hu HJ, Yim SH, et al. Nove varijante uključujući ARG1 polimorfizme povezane s razinama C-reaktivnog proteina identificirane asocijacijom na cijelom genomu i analizom puta. PLoS jedan. 2014;9:e95866.

21. Hamajima N; J-MICC studijska grupa. Japanska višeinstitucionalna kohortna studija (J-MICC studija) za otkrivanje interakcija gena i okoline za rak. Azijski Pac J Rak Prev. 2007.; 8: 317–323.

22. Takeuchi K, Naito M, Kawai S, et al. Profil studije Japanske multiinstitucionalne kohortne kohorte (J-MICC). J Epidemiol. 2020. doi:10.2188=jea.JE20200147. 23. Pierce BL, Burgess S. Učinkovit dizajn za Mendelove studije randomizacije: procjenitelji instrumentalnih varijabli poduzorka i 2-uzorka. Am J Epidemiol. 2013;178:1177-1184.

24. Matsuo S, Imai E, Horio M, et al. Revidirane jednadžbe za procijenjenu GFR iz serumskog kreatinina u Japanu. Am J Kidney Dis. 2009; 53: 982–992.

25. Burgess S, Butterworth A, Thompson SG. Mendelska randomizacijska analiza s višestrukim genetskim varijantama korištenjem sažetih podataka. Genet Epidemiol. 2013;37:658-665.

26. Bowden J, Davey Smith G, Haycock PC, Burgess S. Konzistentna procjena u Mendelskoj randomizaciji s nekim nevažećim instrumentima korištenjem ponderiranog medijana procjenitelja. Genet Epidemiol. 2016.; 40: 304-314.

27. Bowden J, Davey Smith G, Burgess S. Mendelska randomizacija s nevažećim instrumentima: procjena učinka i otkrivanje pristranosti pomoću Eggerove regresije. Int J Epidemiol. 2015;44:512-525.

28. Hemani G, Bowden J, Davey Smith G. Procjena potencijalne uloge pleiotropije u studijama Mendelove randomizacije. Hum Mol Genet. 2018;27:R195-R208.

29. Staiger D, Stock J. Regresija instrumentalnih varijabli sa slabim instrumentima. Econometrica. 1997;65:557-586. 30. Yavorska OO, Burgess S. Mendelska randomizacija: R paket za izvođenje Mendelove randomizacijske analize korištenjem sažetih podataka. Int J Epidemiol. 2017;46:1734-1739.

31. Kelley-Hedgepeth A, Lloyd-Jones DM, Colvin A, et al. Etničke razlike u koncentraciji C-reaktivnog proteina. Clin Chem. 2008.; 54:1027-1037.

32. Cheng L, Zhuang H, Yang S, Jiang H, Wang S, Zhang J. Razotkrivanje uzročnog učinka C-reaktivnog proteina na rizik od dijabetes melitusa tipa 2: Mendelova studija randomizacije. Prednji Genet. 2018;9:657.

33. C Reactive Protein Coronary Heart Disease Genetics Collaboration (CCGC), Wensley F, Gao P, et al. Povezanost između C reaktivnog proteina i koronarne bolesti srca: Mendelska randomizacija na temelju podataka o pojedinačnim sudionicima. BMJ. 2011;342:d548. 34. VanderWeele TJ, Tchetgen Tchetgen EJ, Cornelis M, Kraft P. Metodološki izazovi u Mendelskoj randomizaciji. Epidemiologija. 2014;25:427-435.

35. Imamura M, Takahashi A, Yamauchi T, et al. Studije povezanosti genoma u japanskoj populaciji identificiraju sedam novih lokusa za dijabetes tipa 2. Nat Commun. 2016;7:10531.

36. Bochud M, Marquant F, Marques-Vidal PM, et al. Povezanost C-reaktivnog proteina i pretilosti u žena. J Clin Endocrinol Metab. 2009;94:3969-3977.

37. Wakil SM, Muiya NP, Tahir AI, et al. Novi lokus osjetljivosti na infarkt miokarda, hipertenziju, dijabetes melitus tipa 2 i dislipidemiju na kromosomu 12q24. Dis markeri. 2014;2014: 291419.

38. Davies NM, Holmes MV, Davey Smith G. Čitanje Mendelovih studija randomizacije: vodič, glosar i popis za provjeru za kliničare. BMJ. 2018;362:k601