Strategija protiv iritacije protiv retinola temeljena na genetskoj analizi korejske populacije: genetski vođen pristup odozgo prema dolje

Ključne riječi: retinol; retinoid;kozmetika; protiv iritacije; genetski prilagođeni; polimorfizam jednog nukleotida

Kliknite ovdje za više informacija o Cistanche tretmanu protiv starenja

1. Uvod

Retinoidi, obitelj spojeva izvedenih iz vitamina A koja uključuje i sintetske i prirodne spojeve, intenzivno su proučavani i korišteni u različitim biomedicinskim primjenama kao što suliječenje raka(akutna mijeloična leukemija), cervikalna neoplazija, ikožni poremećajiu proteklih nekoliko desetljeća. Široka primjena retinoida, posebice retinoične kiseline, temelji se na znanstvenoj premisi daretinoična kiselinauključen je u brojne biološke putove u prirodi pokrećući interakcije između nuklearnih receptora koji kontroliraju ekspresiju gena [1-5]. Jedna od najupečatljivijih primjena retinoida je dermatološki pristup, zajedno s farmaceutskim lijekovima i kozmetičkim proizvodima. Budući da su retinoidi prvi put korišteni za liječenje akni 1940-ih, objavljena je njihova terapeutska učinkovitost protiv kožnih poremećaja kao što su aktinična keratoza, psorijaza i ihtioza [6]. Budući da su mnoge znanstvene studije i kliničke studije pokazale terapeutsku učinkovitost tretinoina (all-trans retinoične kiseline) na fotostarenje, potaknut je razvoj derivata retinoida za upotrebu kao kozmetičkih sastojaka. Kozmetički retinoidi, koji uključuju retinil palmitat, retinil acetat, retinol i retinal, intenzivno su ispitivani na komercijalnom tržištu otkako je retinoična kiselina zabranjena u kozmetičkim proizvodima globalnim propisima kao što je Aneks II 375 (EC 1223/2009). Neke su studije otkrile da su ovi kozmetički retinoidi također učinkoviti u liječenju fotostarenja, čije patološke karakteristike uključuju sitne i grube bore, hrapavost kože i abnormalnu pigmentaciju, pa čak tvrde da su snažni kao tretinoin [7].

Međutim, retinoidi uzrokuju iritaciju i neke nuspojave karakterizirane eritemom, ljuskanjem, pečenjem i svrbežom, koji se također nazivaju retinoidni dermatitis [8]. Neke su studije istraživale mehanizam iritacije i sugerira se da su različiti mehanizmi uključeni u iritaciju izazvanu retinoidima, što uključuje opsežnu i prožimajuću upalu karakteriziranu otpuštanjem citokina i infifiltracijom imunoloških stanica [9], te poremećaj kožne barijere karakteriziran genetskom neravnotežom faktora povezanih s rožnatom ovojnicom (CE) [10,11]. Osim toga, za fototoksičnost retinoida i njegovih razgrađenih nusproizvoda zbog njegove nestabilnosti pod UV zrakama i toplinom naširoko se smatra da doprinosi iritaciji izazvanoj retinoidom [12]. Međutim, ova zapažanja su nedovoljna za temeljito objašnjenje iritacije izazvane retinoidima i do danas nije postignut jasan zaključak. Iz tog razloga, trenutni proizvodi na bazi retinola obično imaju "zamornu" protuupalnu formulu, koja se općenito i univerzalno koristi u općim komercijalnim proizvodima. Stoga još nije uspostavljena strategija protiv iritacije protiv retinola koja se temelji na snažnoj znanstvenoj pozadini.

Genetski pristup može biti još jedno rješenje za uspostavljanje strategije protiv iritacije protiv retinola. Genetske varijacije opsežno su proučavane kako bi se otkrili geni povezani s učinkovitošću lijekova i nuspojavama [13]. Nelson i sur. pokazalo je da lijekovi predviđeni poznatim genetskim vezama čine samo 2.0 posto lijekova u pretkliničkoj fazi, iako se udio povećava na 8,2 posto u odobrenim lijekovima [14]. To implicira da bi fokusiranje na ciljeve otkrivene genetskim studijama dramatično povećalo šanse za uspješan razvoj lijekova, kao što je pokazano s lijekovima za kolesterol ili reumatoidni artritis [15-18].

Liječenje retinolom izaziva promjene u ekspresiji transkripcijskih faktora povezanih sa staničnim rastom [19] i strukturnim proteinima [11]. Konkretnije, različiti proteini bili su uključeni u iritaciju izazvanu retinolom, što uključuje citokine povezane s upalom (MCP-1, TNF-a, interferoni i interleukini) [9], receptor retinoične kiseline (RARG) [ 20], prolazni receptor potencijalnog vaniloida 1 (TRPV1) [21] i GPCR koji aktivira mastocite (MRGPRX2) [22]. Međutim, većina genetskih studija bila je ograničena na jedan gen ili put, a sveobuhvatni mehanizam retinoidnog dermatitisa tek treba razjasniti. Stoga je provedena analiza "gena kandidata" za iritaciju izazvanu retinoidima kako bi se otkrili anti-iritansi protiv retinoidnog dermatitisa, a rezultati iste će se dodati trenutnom skupu ciljnih gena za proučavanje retinoidnog dermatitisa.

2. Materijali i metode

2.1. Studirati dizajn

Ova je studija osmišljena kao što je prikazano na slici 1. Ukratko, fenotipizacija iritacije izazvane retinolom provedena je iz prve kliničke procjene 173 Korejca. Kroz genetsku analizu, pregledani su genetski markeri, te su ispitani antiiritansi i formule. Nakon toga, mala pilot studija (n=7) i velika klinička procjena (2., n=91) ​​provedene su kako bi se potvrdila antiiritativna učinkovitost novorazvijene formule.

Slika 1. Dizajn studije. Gornji dijagram (flagram toka) prikazuje cjelokupan postupak studije. Donja tablica prikazuje tri glavna testa na ljudima. Retinol1IU se odnosi na 3×10-5 posto w/u formulaciji.(2500IU=0.075 posto w/w;3300IU=0.1 posto w/ w;5000IU=0.15 posto w/w).

2.2. Fenotipizacija iritacije izazvane retinolom

bili su obaviješteni o sastojcima kreme prije eksperimenta, a sudionici koji su iskusili iritaciju kože na bilo koji sastojak kreme, osim retinola, isključeni su iz eksperimenta. Detaljan postupak opisan je u Popratnim informacijama.

2.3. Mikroniz polimorfizma jednog nukleotida (SNP).

Genomska DNK ekstrahirana je iz uzoraka sline pomoću QIAmp Mini Prep Kit (QIAGEN, Germantown, MD, SAD). Genotipizacija je provedena korištenjem čipa Global Screening assay verzija 2 prema protokolu Illumina Infifinium High-Throughput Screening (HTS) testa (Illumina, San Diego, CA, SAD). Intenzitet zrna dobiven je korištenjem iScan® instrumenta i kasnije korišten za dobivanje podataka o genotipu korištenjem GenomeStudio® softvera (Illumina, San Diego, CA, SAD).

Kontrola kvalitete podataka o genotipu preferirano je obavljena pod sljedećim uvjetima: Među genotipiziranim uzorcima isključene su jedinke sa stopom javljanja genotipa nižom od 98 posto. Za genotipizirane varijante, isključeni su SNP-ovi sa stopama poziva nižim od 98 posto, manjim frekvencijama alela nižim od 1 posto, odstupanjem od Hardy-Weinbergove ravnoteže (HWE p-vrijednost < 1 × 10-6) i oni koji imaju više od dva alela. Među 173 genotipizirane jedinke, 159 je prošlo QC kriterije i odabrano je za daljnju analizu.

2.4. Procjena iritacije

Dvije vrste krema, odnosno kontrolna krema s 5000 IU retinola i krema na bazi formule protiv iritacije (AF) s 5000 IU retinola, primijenjene su na sedam pojedinaca (tri muškarca i četiri žene) u pilot studiji. Pojedinci su prije spavanja nanosili kreme na lice na sljedeći način: jednu kremu na jednu polovicu lica, a drugu na drugu polovicu lica. Ispitanici su bili slijepi prema kremi koja je sadržavala formulu protiv iritacije (jednokratno slijepo ispitivanje). Nakon tri dana primjene, subjekti su zamoljeni da prestanu s primjenom na 4 dana. Crvenilo kože i transepidermalni gubitak vode (TEWL) mjereni su kromametrom (CR-400, Konica Minolta, Osaka, Japan) odnosno Tewameter® (TM 300 E, Courage plus Khazaka electronic GmbH, Köln, Njemačka). Za mjerenje praga pritiska boli (PPT) proizveden je i korišten algometar s promjerom sonde 1 mm u kombinaciji s cilindrom. Prije mjerenja, lica ispitanika su očišćena i aklimatizirana 20 minuta u klimatiziranoj prostoriji (temperatura 23 ± 2°C; relativna vlažnost zraka 50 ± 10 posto).

Uzimajući u obzir da iritacija izazvana retinoidima izaziva iznimno širok raspon tipova i ozbiljnosti iritacije, čini se da tradicionalne smjernice za mjerenje iritacije koje se uglavnom usredotočuju na eritem, a koje predlažu smjernice Frosh i CTFA [23], ne kvalificiraju ili kvantificiraju te iritacije učinkovito. Stoga smo redizajnirali smjernice za samoprocjenu iritacije kože, kao što je prikazano u tablici S1 (vidi dopunske materijale). Ova samoprocjena provedena je u maloj pilot studiji i 2. velikoj kliničkoj procjeni.

2.5. Priprema stanica i in vitro eksperiment

Detaljne informacije o pripremi stanica i in vitro eksperimentalnim postupcima navedene su u Dodatnim informacijama. Ukratko, keratinociti, fifibroblasti, mastociti i TRPV{{0}} HEK-ovi s prekomjernom ekspresijom uzgajani su korištenjem vlastitih protokola kulture i eksperimenata. Analizirani su RT-PCR, otpuštanje -heksosaminidaze i influks kalcija. 2.6. Statistička analiza Statistička analiza provedena je pomoću SNP-a i Variation Suit (SVS) v8.9.0 (Golden Helix, Bozeman, MT, SAD) i PLINK 1.90 (Cambridge, MA, SAD) [24]. Za analizu gena kandidata, ekstrahirani su SNP-ovi unutar gena kandidata (uključujući promotorsku regiju -2 kb i nizvodnu regiju 500 bp). Statistička značajnost asocijacija i omjeri izgleda određeni su testom asocijacije genotipa s aditivnim modelom. Prije izračuna poligenske ocjene rizika, ispitana je neravnoteža povezivanja (LD), a SNP-ovi su odabrani korištenjem Haploview 4.2 (Cambridge, MA, SAD). [25]. Za analizu su korišteni aleli koji su pokazali povećanu sklonost iritaciji izazvanoj retinolom. Rezultat poligenskog rizika izračunat je kao ponderirani zbroj omjera izgleda za svaki alel [26]. Pretprocesiranje ulaznih podataka, generiranje nasumičnog podskupa sudionika za ponovnu provjeru valjanosti i izračun rezultata poligenog rizika provedeni su korištenjem prilagođeno napisanog koda u R v.4.0.3. Za vizualizaciju podataka korišten je GraphPad Prism v7.04 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Stupci pogrešaka čije su vrijednosti izvedene dijeljenjem svake standardne devijacije s kvadratnim korijenom broja uzoraka prikazani su na slikama.

U analizi stope pojavljivanja iritacije na temelju dihotomnog pitanja (je li krema s retinolom iritantna: D/N), proveden je hi-kvadrat test kako bi se ispitala statistička značajnost.

3. Rezultati i rasprava

3.1. Predlaganje ciljnih gena za probir antiiritansa na iritaciju izazvanu retinolom

3.1.1. 1. klinička procjena—lokalna primjena retinola i analiza njegovih nadražujućih svojstava

Istraživali smo nadražujuća svojstva retinola i njegov odnos s osjetljivošću kože kod 173 osobe iz Koreje. Primjenjivali su retinol 3 dana, nakon čega je uslijedio odmor od 4 dana u tjednu tijekom 3 tjedna, pri čemu se svaka koncentracija retinola postupno povećavala svaki tjedan (2500 IU u 1. tjednu, 3300 IU u 2. tjednu i 5000 IU u 3. tjedan). Zatim smo analizirali upitnik primljen nakon eksperimenta kako bismo istražili čimbenike povezane s iritacijom izazvanom retinolom.

Veći udio sudionika u skupini s osjetljivom kožom izvijestio je da su iskusili iritaciju u usporedbi s grupom s neosjetljivom kožom (Slika 2a). Također se pokazalo da su osobe koje pripadaju skupini osjetljive kože imale oko tri puta veću vjerojatnost da će u prošlosti imati iskustva s prestankom korištenja kozmetičkih proizvoda zbog iritacije kože (Slika 2b). Među onima s prošlim iskustvima iritacije, većina pojedinaca odgovorila je da su osnovni kozmetički proizvodi izazvali iritaciju, nakon čega su slijedili proizvodi za sunčanje, sredstva za čišćenje i kozmeceutski proizvodi (Slika 2c). Veći udio pojedinaca koji su u prošlosti imali iritaciju kože zbog proizvoda s retinolom odgovorili su da su imali iritaciju u ovom eksperimentu u usporedbi s onima koji nisu iskusili iritaciju pri korištenju proizvoda s retinolom u prošlosti (Slika 2d). Ovaj je rezultat otkrio da se iritacija izazvana retinolom često javlja ovisno o pojedincu, što podupire hipotezu da genetski čimbenici mogu utjecati na osjetljivost na retinol. Ranije studije pokazale su da genetske varijacije značajno utječu na bioraspoloživost retinola i retinoida, što potvrđuje da genetski čimbenici također mogu upravljati iritacijom izazvanom retinolom [27,28].

Vrsta iritacije izazvane upotrebom retinola uvelike se razlikuje među pojedincima. Ipak, peckanje je bilo najčešće, koje je činilo oko tri četvrtine iritacija, a praćeno je peckanjem, svrbežom i eritemom (Slika 2e).

(c) Udio pojedinaca koji osjećaju iritaciju pri korištenju osnovnih kozmetičkih proizvoda. (d) Udio pojedinaca s prošlim iskustvom iritacije na proizvode koji sadrže retinol. (e) Vrste iritacije koje su pojedinci iskusili tijekom korištenja lokalnih proizvoda koji sadrže retinol; * p-vrijednost < 0.05; *** p-vrijednost < 0,001; ns, nije značajno.

3.1.2. Analiza gena kandidata za iritaciju izazvanu retinolom

Kako bismo otkrili genetske varijante povezane s osjetljivošću kože na retinol, odabrali smo 14 gena kandidata koji su dobro poznati po svojim funkcijama u metabolizmu retinoida i osjetljivosti kože (Tablica S2). Referirali smo se na prethodnu transkriptomsku analizu 3D rekonstituirane kože pod tretmanom senzibilizatora [29].

Ukupno 319 SNP-ova lociranih unutar gena kandidata odabrano je i korišteno za analizu asocijacije korištenjem aditivnog modela. Trideset SNP-ova bilo je značajno povezano s iritacijom izazvanom retinolom, od kojih nijedan nije prethodno prijavljen (p < 0.05; Tablica 1). Detaljno, ukupno 12 SNP-ova pronađeno je u RARB, tri u EGFR, tri u CD44, dva u IL18, dva u IL4R i četiri u BCL2. Ostala četiri gena, CD86, RXRB, MMP10 i COL6A2, uključivala su pojedinačne SNP-ove. Otkriveni SNP-ovi pripadali su 10 gena, od kojih su dva geni povezani s retinolom, a preostalih osam povezano je s općom osjetljivošću kože prema ranijim studijama. Među 10 gena odabrali smo tri najvažnija gena u smislu iritacije kože: COL6A2, EGFR i IL-4R.

Pokazalo se da COL6A2, koji kodira jedan od tri alfa lanca kolagena tipa VI koji se nalazi u većini vezivnih tkiva, regulira sastavljanje dermalnog matriksa i pokretljivost fifibroblasta [30], te doprinosi remodeliranju tkiva i zacjeljivanju rana [31,32]. Ovaj defekt dovodi do stvaranja keloida [33] i abnormalnih fenotipova kože [34]. Receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR) važan je regulator funkcije epidermalne barijere. Pokazalo se da signalizacija EGFR-a inhibira sposobnost rožnate ovojnice i remeti funkciju barijere uskog spoja u epidermalnim keratinocitima [35,36]. Osim signaliziranja EGFR-a, vjeruje se da drugi širok raspon čimbenika kao što je ADAM17 (dezintegrin i metaloproteinaza 17) [37] i TRP kanal [38] također utječu na funkciju epidermalne barijere koja je sustavno povezana s EGFR-om.

U posljednjih nekoliko desetljeća, funkcije i uloge interleukina 4 (IL-4) i njegovog receptora, IL-4R, opsežno su istražene. Kao ključni regulator u humoralnom i adaptivnom imunološkom sustavu, IL-4, koji se prvenstveno izlučuje iz mastocita i Th2 stanica, inducira diferencijaciju Th2 stanica i stimulira B stanice. Iako njegova uloga nije jasno shvaćena, mnoge su studije ukazale na to da IL-4 može potaknuti opsežne pro- i upalne procese, dok se pokazalo da njegov nedostatak uzrokuje alergijske bolesti, Alzheimerovu bolest i tumore [39]. Duž iste osi za imunološki odgovor povezan s IL-4-, IL-4R se sveprisutno izražava na različitim imunološkim stanicama u urođenom i adaptivnom imunološkom sustavu. IL-4R je zajednički receptor za IL-4 i IL-13 [40]. Za razliku od IL-4, koji izravno utječe na Th2 diferencijaciju, IL-13 je također odgovoran za aktivaciju mastocita, koji kontroliraju funkciju eozinofila, te ima imunosupresivne i protuupalne učinke na makrofage potiskivanjem proupalnih citokina i kemokini [41].

3.2. Pristup odozgo prema dolje: Provjera antiiritansa in vitro

3.2.1. Geni povezani s popravkom tkiva, COL6A2 i EGFR

Na temelju odabranih gena, pregledali smo antiiritanse koji bi mogli modulirati molekularnu patogenezu, kao što je kontrola ekspresije ciljnih gena.

Raniji izvještaji otkrili su da retinoidi izazivaju fiziološke i morfološke promjene u kožnoj barijeri [8,42,43]. Uočeno je da tretman kožnog tkiva retinoičnom kiselinom ex vivo i in vivo povećava transepidermalni gubitak vode (TEWL), a nekoliko je studija otkrilo da je ovaj poremećaj funkcije kožne barijere posredovan neuravnoteženim obrascem ekspresije rožnate ovojnice i zategnute kože. spojni geni. Snižena regulacija filagrina (FLG), lorikrina i CLDN1, te pojačana regulacija CLDN2, CLDN4 i značajno drugačija ekspresija gena članova obitelji serpina primijećena je u ranijoj studiji, za koju se smatra da je glavni uzrok iritacije izazvane retinoidima [10,11]. \Pretpostavili smo da su osobe s genetskim varijacijama u COL6A2 i EGFR sklonije slabljenju funkcije kožne barijere retinolom, što dovodi do iritacije izazvane retinolom (Slika 3a). Također smo smatrali da je osim kolagena VI, kolagen IV također važan čimbenik u epidermalnoj bazalnoj membrani i procesu zacjeljivanja rana, iako njegova točna uloga u tkivu kože ostaje nejasna [44]. Pretpostavili smo da nedostatak ili abnormalnost kolagena VI i IV dovodi do osjetljivosti na iritaciju izazvanu retinolom, a prekomjerna ekspresija obje vrste kolagena mogla bi ublažiti slabljenje kožne barijere izazvano retinolom. Među različitim tvarima, primijetili smo da je glukozamin povećao ekspresiju COL6A2 i COL4A2 za 1.5-put odnosno 1.{24}}put (Slika 3a, srednji panel). Modulatorna uloga glukozamina na COL6A2 i COL4A2 nije prije bila prijavljena, što implicira da su ova opažanja znanstveno važna.

U slučaju EGFR-a, pažljivo smo razmotrili prethodna istraživanja koja pokazuju da retinoična kiselina izaziva prekomjernu ekspresiju akvaporina 3 (AQP3) putem EGFR/ERK puta u ljudskim keratinocitima [45]. U prvom izvješću primijetili smo da ne samo retinoična kiselina, već i retinol inducira ekspresiju AQP3 približno dvostruko u fibroblastima (Slika 3a desna ploča). Učinak slabljenja prekomjerne ekspresije AQP3 pomoću niacinamida (nikotinamida) sličan je onome koji je pronađen u ranijoj studiji. Među različitim tvarima, trehaloza i eupatilin oslabili su prekomjernu ekspresiju AQP3 izazvanu retinolom. Eupatilin (5,7-dihidroksi-3',4',6-trimetoksiflavon), vrsta flavonoida pronađenog u Artemisa asiatica, navodno poboljšava funkciju barijere kože u patološkim uvjetima in vivo [46].

Osim toga, istražili smo ekspresiju FLG-a, koji je glavni pokazatelj funkcije barijere kože. Slično prethodnim in vivo studijama [47], primijetili smo da je retinol značajno smanjio ekspresiju FLG-a za približno 45 posto, a to smanjenje je poništeno niacinamidom, glukozaminom i sukralfatom (Slika S1a, vidi Dopunske materijale).

Zajedno, glukozamin, trehaloza i sukralfat mogu ublažiti poremećaj kožne barijere izazvan retinolom modulirajući ekspresiju COL6A2, AQP3 i FLG.

3.2.2. Upalni gen: IL-4R

Zatim smo pokušali identificirati antiiritanse povezane s upalnim genima. Na temelju naših rezultata genetske analize pokazalo se da osobe koje su sklone iritaciji izazvanoj retinolom obično imaju SNP markere za IL-4R, ali ne i IL-4. Prvo smo istražili modulira li liječenje retinolom ekspresiju IL-4 ili IL-4R u mastocitima, što je također primarni pokretač upale povezane s IL-4-. Retinol je inducirao prekomjernu ekspresiju IL-4R 1.74-puta. Iako retinol nije inducirao prekomjernu ekspresiju IL-4 (Slika S1b, vidi dopunske materijale), primijećeno je da ektoin učinkovito smanjuje ekspresiju IL-4 mastocita, što se poklapa s ranijim studijama koji su tvrdili protuupalne učinke ektoina u nekim modelima bolesti kao što su IBD (upalna bolest crijeva) i alergijska bolest dišnih puteva [48,49]. Preciznije, ranije studije su pokazale da ektoin može normalizirati ekspresiju IL-4 u upali pluća izazvanoj CNP-om (ugljikovim nanočesticama) u in vivo modelu, podupirući naše eksperimentalne rezultate [50].

Krocin, glukozamin i ektoin ublažili su prekomjernu ekspresiju IL-4R izazvanu retinolom u mastocitima, sa smanjenjem od 37,03 posto, 41,97 posto, odnosno 82,59 posto. Ektoin (1,4,5,6-tetrahidro-2-metil-4-pirimidinkarboksilna kiselina), prirodni spoj koji se nalazi u nekoliko halofilnih bakterija, pokazalo se da modulira mnoge citokine i kemokine u upalnim uvjetima, iako uloga ektoina u poboljšanju ekspresije IL-4R još nije razjašnjena. Naša opažanja nude nove uvide u funkciju ektoina. Prethodno istraživanje naše grupe pokazalo je da je ektoin u optimalnoj koncentraciji od 100 ppm pokazao najveći protuupalni učinak u odnosu na učinke retinoida i zanemarivu citotoksičnost u in vitro eksperimentu na stanici (podaci nisu prikazani). Također smo izmjerili brzinu otpuštanja -heksosaminidaze mastocita, što je pokazatelj degranulacije mastocita (Slika 3b, desna ploča). Ektoin nije smanjio otpuštanje -heksosaminidaze izazvano retinolom u retinolu od 400 ppm, iako je smanjio otpuštanje -heksosaminidaze izazvano retinolom u retinolu od 200 ppm. Zajedno se može zaključiti da ektoin može ublažiti upalu povezanu s IL-4 i IL-4R uzrokovanu retinolom. Uzimajući u obzir prethodna istraživanja da ektoin intervenira u aktivaciji EGFR kod upale pluća izazvane CNP [50], čini se da je ektoin također koristan za poremećaj kožne barijere izazvan retinolom.

3.2.3. Neurogena upala, adiponektin i TRPV1

Jedna značajka iritacije izazvane retinolom kod pacijenata izrazito osjetljivih na retinoide su reakcije slične alergijama kao što su brzo žarenje i peckanje, svrbež, brzi difuzni edem i osip. Studija je otkrila da retinoidi, uključujući retinol i retinoičnu kiselinu, aktiviraju TRPV1 [21]. Stoga pretpostavljamo da je iritacija izazvana retinolom, osobito ako se odmah pojavi unutar nekoliko minuta, posredovana aktivacijom TRPV1 pomoću retinola.

Slika 3. Analiza ekspresije mRNA za pregled antiiritansa koji bi mogli modulirati molekularnu patogenezu povezanu s iritacijom. (a) Ispitivanje molekularne patogeneze povezane s poremećajem kožne barijere Shematski dijagram za pristup genetskoj modulaciji za retinol (ROL-induciran poremećaj kožne barijere. (lijevo) Relativna mRNA ekspresija COL4A2 i COL6A2 kada su fifibroblasti tretirani glukozaminom (sredina) i relativna mRNA ekspresija AQP3 (keratinocit, desno). (b) Ispitivanje molekularne patogeneze povezane s upalom (pokrenutom mastocitima). Relativna mRNA ekspresija IL-4R kada je RBL-2H3 tretiran s 1 0 µM retinol i različiti kandidati. (c) Neurogena upala posredovana TRPV1 izazvana retinolom i antagonističkim učinkom 4-t-butilcikloheksanola i omega-9; Tri uvjeta za kombinaciju: (1) 4-t-butilcikloheksanol 25 µM i omega-9 5 µM, (2) 4-t-butilcikloheksanol 50 µM i omega-9 10 µM, i (3) 4- t-butilcikloheksanol 100 µM i omega-9 20 µM, BC, 4-t-butilcikloheksanol; OA, omega-9 oleinska kiselina; Prikazana je skala od 50 µm (bijela); * p < 0,05; ns, nije značajno; prikazana je traka s greškama; ppm, dijelovi na milijun.

TRPV1, neselektivni kation aktiviran različitim fizikalno-kemijskim podražajima, naširoko je proučavan, posebice njegova uloga u koži. [51-54] Iako se TRPV1 nije pojavio u prethodnoj genetskoj analizi, treba napomenuti da se adiponektin (ADIPQ) pojavio u nekim modelima analize s niskom do umjerenom statističkom značajnošću. Ranija studija korejske populacije pokazala je da se čini da je fenotip "osjetljive" kože povezan s nedostatkom adiponektina, što posljedično pridonosi povećanju regulacije TRPV1 [55]. Stanice HEK293 s prekomjernom ekspresijom TRPV1- tretirane su retinolom, a aktivacija TRPV1 potvrđena je snimanjem influksa kalcija. Uočili smo da retinol može aktivirati TRPV1 na način ovisan o dozi (slika S1c, vidi dopunske materijale). Pri koncentracijama iznad 50 µM, čini se da je agonistički učinak na TRPV1 dosegao plato. Na temelju prethodne studije, istražili smo mogu li 4-t-butilcikloheksanol i omega-9 oleinska kiselina antagonizirati aktivaciju TRPV1 induciranu retinolom. Kao što se i očekivalo, obje tvari mogu antagonizirati TRPV1, dok je pri niskim dozama omega-9 oleinska kiselina bila jača od 4-t-butilcikloheksanola (slika S1d, vidi dopunske materijale). Kombinacija ova dva materijala pokazala je blagi sinergistički učinak na inhibiciju TRPV1 pomoću retinola. Tri različite koncentracije kombinacije 4-t-butilcikloheksanola i omega-9 pokazale su smanjenu aktivaciju TRPV1 induciranu retinolom, 28,25 posto, 43,73 posto, odnosno 68,50 posto. Ulaz kalcija u stanice posredovan aktivacijom TRPV1 opažen je pod fluorescentnom mikroskopijom (Slika 3c). Zaključno, potvrdili smo da iritacija izazvana retinolom također može biti povezana s neurogenom upalom posredovanom aktivacijom TRPV1 u in vitro modelu, a 4-t butilcikloheksanol i omega-9 oleinska kiselina mogu se koristiti za ublažavanje neurogene upala antagonizirajući TRPV1.

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950