Usporedna studija svojstava i mehanizma protiv starenja: resveratrol i kalorijska restrikcija Ⅱ

Učinak resveratrola i CR na ekspresiju mRNA SIRT1, p53 i Foxo3a u tkivima starijih štakora

Stanja oksidativnog stresačesto induciraju ekspresiju i aktivnost SIRT1. SIRT1 modulira funkcije ključnih čimbenika preživljavanja uključujući p53 i Foxo3a [9]. Kako bi se odredio učinak resveratrola i CR na razine mRNA SIRT1, p53 i Foxo3a kod štakora starenja uzrokovanog D-Gal-om, provedeni su kvantitativni RT-PCR testovi. U usporedbi s odgovarajućom negativnom kontrolnom skupinom, razine ekspresije mRNA SIRT1 i Foxo3a bile su značajno smanjene, ali je razina p53 značajno povećana u skupini D-Gal (P < 0.01; Slika 9A i 9B). Nadalje, istovremeni tretman resveratrolom ili CR-om s D-gal u štakora uzrokovao je povećanje razina ekspresije mRNA SIRT1 i Foxo3a, ali je smanjio razine p53 u usporedbi s kontrolnom skupinom modela (P < 0.05). Međutim, u usporedbi s CR tretmanom, razina ekspresije SIRT1 mRNA značajno je povećana u jetrima visoke doze resveratrola plus D-gal skupine, razina ekspresije p53 mRNA značajno je smanjena u jetrima i mozgovima visoke doze resveratrola plus D- gal skupina (P < 0,05).

Kliknite ovdje da biste dobili Cistanche dodatke protiv starenja

Učinak resveratrola i CR na ekspresiju glavnog proteina povezanog sa SIRT1-u moždanom tkivu štakora koji stare

FOXO3a i p53, koje regulira SIRT1, nizvodne su molekule SIRT1. Istovremeno, aktivnost SIRT1 reguliraju njegove uzvodne molekule, na primjer, DBC1 (također poznat kao KIAA1967), AROS (također poznat kao RPS19BP1) i tumor supresor HuR (također poznat kao ELAVL1) [9, 10] . Kako bi se odredio učinak resveratrola i CR na razine proteina p53, FOXO3a, HuR, AROS i DBC1 kod D-Gal-induciranog starenja štakora, provedeni su Western blot testovi. U usporedbi s odgovarajućom negativnom kontrolnom skupinom, razine ekspresije proteina FOXO3a, AROS i HuR značajno su smanjene, ali su razine p53 i DBC1 značajno povećane u D-gal skupini (P < 0.01 ; Slika 10). Nadalje, istovremeni tretman resveratrolom ili CR s D-gal u štakora uzrokovao je povećanje ekspresije proteina FOXO3a, AROS i HuR, ali je smanjio razine p53 i DBC1 u usporedbi s kontrolnom skupinom modela (P < 0,05). Međutim, u usporedbi s CR tretmanom, razina ekspresije HuR proteina bila je značajno povećana, ali je razina DBC1 značajno smanjena u mozgovima visoke doze resveratrola plus D-gal skupine (P <0,05). Nije bilo razlika između resveratrol plus D-gal skupine i CR plus D-gal skupine u razinama ekspresije proteina p53, FOXO3a i AROS (P > 0,05).

Ekspresija FOXO3a i p53 u tkivima mozga i jetre

Status ekspresije FOXO3a i p53 određen je u tkivima mozga i jetre imunohistokemijom. Imunohistokemijska analiza FOXO3a i p53 otkrila je da je ekspresija FOXO3a u tkivima mozga i jetre značajno smanjena, a ekspresija p53 značajno povećana u D-Gal skupini, u usporedbi s negativnom kontrolnom skupinom (P < 0.{{13} }5, slika 11). Štoviše, istovremeni tretman resveratrolom ili CR s D-gal u štakora uzrokovao je povećanje ekspresije FOXO3a, ali je smanjio ekspresiju p53 u usporedbi s kontrolnom skupinom modela (P < 0.05). Međutim, nije bilo razlika između resveratrol plus D-gal skupine i CR plus D-gal skupine u ekspresiji p53 i FOXO3a (P > 0,05).

RASPRAVA

Osnovni kemijski proces koji je u osnovi starenja prvi je unaprijedioteorija starenja slobodnih radikala[11], ioksidativni stresvjeruje se da je primarni faktor u normalnom procesu starenja.Inicijator slobodnih radikala AAPHbio naviknutizazivaju oksidativni streste uspostaviti model oksidativnogstanično starenje izazvano stresomu ljudskim IMR-90 stanicama [12, 13]. Prednosti ove metode su da se AAPH termički razgrađuje nastvaraju radikalebez biotransformacija ili enzima, a brzinaradikalna generacijamože se lako kontrolirati podešavanjem koncentracije inicijatora [12]. Utvrđeno je da AAPHinhibirati proliferaciju ljudskihIMR{0}} stanica na način ovisan o koncentraciji i vremenu. Rezultati su pokazali da je 2 d inkubacija s AAPH (1 mM) značajno povećala postotak pozitivnog omjera SA -Gal, populaciju apoptotskih stanica, smanjila ekspresiju mRNA SIRT1 i inducirala povećanu i spljoštenu morfologiju. To je pokazalo da je oksidativni stres uzrokovan AAPH doveo IMR-90 stanice do starenja. Na temelju ovog modela staničnog starenja, tretman s 10 μM resveratrolom učinkovitije je inhibirao starenje i apoptozu izazvano AAPH nego tretman CR-om.

D-gal životinjski model međunarodno je priznat životinjski model starenja i naširoko se koristi u područjulijekovi protiv starenja. D-gal je fiziološki nutrijent koji se normalno metabolizira pomoću D-galaktokinaze i galaktoza-1-fosfata kod životinja. Međutim, prekomjerna opskrba D-galom, koji se ne metabolizira gore navedenim enzimima, ali se nakuplja u stanicama, dovodi do oksidativnog stresa i oštećenja stanica [14]. Stoga dugotrajna primjena D-gala izaziva promjene koje nalikuju prirodnom starenju kod životinja, poput skraćenog životnog vijeka, kognitivne disfunkcije, neurodegeneracije, oksidativnog stresa, smanjenog imunološkog odgovora i naprednog stvaranja krajnjeg proizvoda glikacije (AGE) [15]. Ova studija je ukazala na uspješnu uspostavu mimetičkog modela starenja, što je dokazano značajnim oštećenjem učenja i pamćenja, proizvodnjom MDA, nakupljanjem lipofuscina, padom T-AOC i SOD i nižom regulacijom aktivnosti telomeraze u mozgu. U međuvremenu, tretmani resveratrolom ili CR-om zaštitili su štakore izazvane D-gal-om od oksidativnog stresa podizanjem aktivnosti antioksidativnih enzima, smanjenjem razina proizvoda peroksidacije lipida i održavanjem ravnoteže oksidativnog i antioksidativnog sustava. U testovima ponašanja i aktivnosti telomeraze, liječenje resveratrolom ili CR-om moglo bi poništiti kognitivno oštećenje izazvano D-galom i aktivnost telomeraze. Štoviše, štakori modela starenja liječeni visokim dozama resveratrola pokazali su relativno značajniji učinak na ponašanje od onih liječenih CR-om.

Slika 11: Imunohistokemijska analiza ekspresije p53 (A, B) i FOXO3a (C, D) u tkivima jetre (A, C) i mozga (B, D) starijih štakora. Povećanje je bilo 20×. NG, negativna kontrolna skupina; MG, kontrolna skupina modela; RESL, skupina niske doze resveratrola; RESH, skupina visoke doze resveratrola; CR, skupina kalorijskih ograničenja

Studije su pokazale da bi CR, smanjenje od 10-40 posto unosa hranjive prehrane, moglousporavaju starenje i produljuju životni vijek, stoga je jedna uobičajeno korištena razina CR-a (40-postotno smanjenje unosa hrane) primijenjena na štakore skupine CR u ovoj studiji. Unatoč tome, neka su istraživanja pokazala da nema blagotvornog učinka CR na dugovječnost u prirodno ostarjelih primata [16]. Slično, iako se pokazalo da liječenje resveratrolom izaziva učinke slične CR-u naenergetski metabolizami metabolički profil u pretilih ljudi [17], nije poboljšao metaboličku funkciju u nepretilih žena s normalnom tolerancijom glukoze [18]. Razlog za razlike između ovih studija nije jasan, ali bi moglo biti da CR i resveratrol djeluju na obnavljanje homeostaze kod metabolički ugroženih pojedinaca, a manje kod zdravih pojedinaca, što je mogućnost u skladu s poznatim funkcijama SIRT1 u studijama na životinjama [19]. Stoga su modeli štakora izazvani D-gal-om primijenjeni za usporedbu aktivnosti resveratrola ili CR-a protiv starenja, umjesto modela prirodno ostarjelog štakora.

SIRT1, (NAD plus )-ovisna deacetilaza, privukla je veliku pozornost zbog svojih višestrukih uloga u produljenju životnog vijeka, otpornosti na stres i smanjenju apoptoze [20, 21]. Akumulirajuće studije snažno impliciraju da je SIRT1 ključna meta resveratrola i CR [22]. Postoji ogroman broj nizvodno molekula SIRT1, uključujući p53, Foxo1, Foxo3, Foxo4 i E2F1, koje regulira SIRT1. Istovremeno, aktivnost SIRT1 reguliraju njegove uzvodne molekule, na primjer, p53, HIC1, E2F1, DBC1, HuR i AROS. Akutni nedostatak hranjivih tvari aktivira transkripcijski program na promotoru SIRT1 kojim upravljaju transkripcijski faktori Foxo3a i p53. Kako p53 potiskuje ekspresiju gena SIRT1, njegovo uklanjanje pomoću Foxo3a aktivira transkripciju SIRT1 [23]. DBC1 i AROS nedavno su opisani kao izravni negativni i pozitivni regulatori aktivnosti SIRT1, HuR pokazuje učinak smanjenja razine ekspresije SIRT1 u ostarjelim stanicama koje stare [9, 10].

CRusporava starenje i produljuje srednji i maksimalni životni vijeku raznim vrstama, uključujući štakore, miševe, ribe, muhe, crve i kvasac. Međutim, takvi rigorozni programi prehrane kod osoba koje žive slobodno pokrenuli su etička i metodološka pitanja [24]. Trenutno bi produljenje zdravstvenog vijeka moglo biti važnije od jednostavnog produljenja životnog vijeka. Nedavna istraživanja sugeriraju da je resveratrol jedan od najsnažnijih pokretača aktivnosti SIR2 među svim biljnim polifenolima [25], te da utječe na dugovječnost putem sličnih mehanizama kao što se vidi u ograničenju kalorija. Ovi rezultati su pokazali da CR i resveratrol imaju slične aktivnosti obnavljanja razine ekspresije mRNA SIRT1, povećavajući ekspresiju proteina FOXO3a, AROS i HuR i smanjujući razine p53 i DBC1. U međuvremenu, više linija uvjerljivih dokaza ukazuje na korisne učinke resveratrola na neurološke, jetrene i kardiovaskularne sustave.

MATERIJALI I METODE

Kultura stanica, stres i tretmani

Ljudski diploidni fibroblastni soj IMR-90 dobiven je od ATCC. Stanice su uzgajane u minimalnom esencijalnom mediju (MEM) (Gibco, UK) s dodatkom 10 posto fetalnog goveđeg seruma (FBS) (Gibco) na 37 stupnjeva u 5 posto CO2. Nakon što je postignuta konfluencija, stanice su nasađene u 6-pločice za kulture s jažicama. Dan kasnije, stanice su tretirane 48 sati s 1 mM 2,2′-azobis (2-amidinopropan) dihidrokloridom (AAPH) (Sigma, SAD) razrijeđenim u MEM plus 10 posto FBS. Inkubacija od 48 sati s inicijatorom slobodnih radikala AAPH uspostavlja model staničnog starenja izazvanog oksidativnim stresom [12, 13]. Kontrolne stanice su inkubirane samo u mediju kulture. Nakon tretmana AAPH, IMR-90 su isprani hladnom fosfatnom puferskom slanom otopinom (PBS) pH 7,4 i inkubirani sa svježim medijem za kulturu ili medijem za kulturu koji sadrži resveratrol (skupina resveratrola) ili MEM dopunjen s 3 posto FBS (skupina CR) za dodatnih 48 h prije žetve.

SA -gal aktivnost bojenja

Provjeravana je pojava biomarkera starenja (smanjenje proliferativnog potencijala i povećanje SA-gal-bojenja) [26] od dana nakon tretmana. Zatim su stanice obojene prema uputama proizvođača kompleta za bojenje SA-gal (CST, SAD). Nakon bojenja, pregledano je najmanje 300 stanica u nekoliko polja i izbrojane su pozitivne SA-gal stanice. Ovi pokusi ponovljeni su tri puta, a rezultati su prikazani kao srednje vrijednosti sa standardnim odstupanjima (SD). Kako bi se izbjeglo nespecifično bojenje koje je moguće zbog konfluentnosti stanica, SA-gal histokemijsko bojenje je izvedeno sa subkonfluentnim stanicama.

Analiza skenirajućom elektronskom mikroskopijom

Stanice su uzgajane na pokrovnim stakalcima u 6-pločicama za kulture s jažicama kako je gore opisano. Nakon što su resveratrol i CR tretirani, pokrovna stakalca su uklonjena s ploča, zatim su stanice fiksirane u 2,5 postotnom fosfatnom puferiranom glutaraldehidu i naknadno fiksirane u 1 postotnom puferiranom osmij tetroksidu. Fiksirani uzorci uronjeni su u t-butilni alkohol nakon dehidracije kroz stupnjevani niz etanola. Uzorci su osušeni zamrzavanjem iz t-butilnog alkohola, zatim obloženi isparavanjem zlatom pomoću automatskog finog premaza (JFC-1600, JEOC, Japan) i ispitani pomoću skenirajućeg elektronskog mikroskopa (JEOL, JSM{{11} }LV, Japan).

Apoptotička analiza

Nakon inkubacije s resveratrolom ili CR, sve su stanice sakupljene s tripsinom i dvaput isprane s PBS-om, nakon čega su ponovno suspendirane u 400 µL pufera za vezanje aneksina V. Zatim su stanice obojene prema uputama proizvođača pribora za otkrivanje apoptoze stanica Annexin V-FITC (BestBio, Kina). Protočni citometar FACSCalibur (Becton-Dickinson, San Jose, CA) korišten je za detekciju fluorescencije, a postotak apoptotičkih stanica izračunat je internim softverskim sustavom FACSCalibura. Približno 104 stanice su analizirane za svaki trag.

Postupci na životinjama

Muški albino Wistar štakori, težine približno 200 ± 10 g, dobiveni su iz Centra za eksperimentalne životinje Medicinskog fakulteta Tongji, Sveučilišta znanosti i tehnologije Huazhong (SCXK 2010-0009). Životinje su bile aklimatizirane 2 tjedna prije doziranja u Eksperimentalnom životinjskom centru Sveučilišta kineske medicine Hubei, tijekom kojeg su vremena imale slobodan pristup hrani i vodi ad libitum. Nakon aklimatizacije odabrano je 50 štakora i podijeljeno u pet skupina po deset. Životinje su držane prema nacionalnim smjernicama i protokolima koje je odobrilo Institucionalno etičko povjerenstvo za životinje (IAEC).

Štakori skupine I (negativna kontrolna skupina) primali su samo nosač (1 mL/kg tjelesne težine 0.9 posto fiziološke otopine) tijekom 6 tjedana. Štakori skupine II (model kontrolne skupine) primali su D-gal (200 mg/kg tjelesne težine, Sigma Chemical, St. Louis, MO) tijekom 6 tjedana. Grupa III (skupina s niskom dozom resveratrola) štakori su primali D-gal i resveratrol (50 mg/kg tjelesne težine) otopljene u 5 posto dimetil sulfoksida (DMSO) tijekom 6 tjedana. Grupa IV (skupina s visokom dozom resveratrola) štakori su primali D-gal i resveratrol (100 mg/kg tjelesne težine). Štakori grupe V (skupina CR) primali su D-gal i CR (hranjeni dijetom koja je imala 40 posto manje kalorija od štakora hranjenih ad libitum [27]) tijekom 6 tjedana. D-gal je davan intraperitonealno, dok je resveratrol davan oralno tijekom cijelog trajanja eksperimenta. Štakori su žrtvovani posljednjeg dana tretmana, zatim su krv, serumi i organi odmah sakupljeni za biološki test ili pohranjeni na -80 stupnjeva za kasniju upotrebu.

Testovi ponašanja

Morrisov test vodenog labirinta osmišljen je za procjenu sposobnosti prostornog učenja i pamćenja štakora nakon 6 tjedana nakon ozljede [28]. Morrisov test vodenog labirinta sastojao se od 4-dnevnog učenja i treninga pamćenja i ispitivanja sondom 5. dana. Životinje su trenirane u kružnom bazenu (155 cm u promjeru) s vizualnim znakovima. Platforma za bijeg (9.0 cm u promjeru) bila je uronjena 1.0 cm ispod površine vode u bazenu, koja je održavana na 25 ± 2 stupnja. Lokacija platforme ostala je u središtu sjeverozapadnog kvadranta tijekom 4--dnevnog perioda obuke. Svakog dana štakori su trenirani za jedan jutarnji blok i jedan poslijepodnevni blok. Štakor je slobodno plivao dok nije pronašao platformu unutar 120 s. Ako ne uspije, postavlja se na platformu 10 s. Zabilježena je latencija bijega (pronalazak potopljene platforme za bijeg) i brzina plivanja. Proba sa sondom napravljena je uklanjanjem platforme i dopuštanjem svakom štakoru da slobodno pliva 120 s unutar bazena. Broj prelazaka platforme u obučenom kvadrantu (gdje je platforma uklonjena) zabilježen je pomoću računalnog video sustava. Verzija vodenog labirinta s vidljivom platformom nije izvedena nakon što je uočena značajna razlika u brzini plivanja između štakora tretiranih D-galom i nosačem.

Detekcija bioloških pokazatelja povezanih s oksidativnim stresom

Razine MDA, SOD i T-AOC u krvi i tkivima određene su fotometrijski u skladu s protokolom proizvođača upotrebom komercijalno dostupnih setova za enzimske testove (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing City, NR Kina). Svi eksperimenti opisani u ovom odjeljku izvedeni su u tri primjerka kako bi se dobila srednja vrijednost i SD.

Razina lipofuscina određena je Sohal metodom [29]. Ukratko, izvagali smo 200 mg cerebralnog korteksa, dodali 2 ml ekstrakta kloroform-metanol (2:1), homogenizirali i filtrirali, zatim isprali ostatak s ekstraktom, sjedinili filtrate, dodali ekstrakt u 5 ml i mjeri intenzitet fluorescencije na fluorescentnom spektrometru. Valna duljina emisije bila je 435 nm, a valna duljina ekscitacije bila je 365 nm. Spektrofluorometar je standardiziran da daje otklon od 50 na gore navedenim valnim duljinama s 1 ug/ml otopine kinin bisulfata u 0,1 M H2SO4. Rezultati su izraženi kao relativne fluorescentne jedinice/ml kloroforma/g težine mokrog tkiva.

Detekcija TE aktivnosti

Za ekstrakciju telomeraze približno 30 mg tkiva isprano je dva puta u ledeno hladnom PBS-u i na kraju homogenizirano u oko 150 ml PBS-a. TE aktivnost je mjerena korištenjem TE ELISA kompleta prema uputama proizvođača (Nanjing Sen Beijia Biological Technology Co., Ltd., Nanjing, Kina). Granice osjetljivosti testova bile su 0,8 IU/L za TE.

RT-PCR analiza

Razine ekspresije mRNA SIRT1, Foxo3 i p53 u tkivima jetre i mozga analizirane su pomoću RT PCR analize. Ukupna RNA ekstrahirana je pomoću Trizola, a njihova količina i čistoća procijenjene su ultra mikrospektrofotometrom (Thermo Fisher Scientific, SAD) na temelju mjerenja apsorbancije na 260 i 280 nm. Nakon kvantifikacije, cDNA je sintetizirana korištenjem FastQuant RT kompleta (Tiangen Biotech, Peking, Kina) prema uputama proizvođača. Razine ekspresije mRNA SIRT1, Foxo3, p53 mjerene su pomoću RT-PCR pomoću TIANGEN SuperReal PreMix Plus (Tiangen Biotech, Peking, Kina) sa specifičnim početnicama (Tablica 2). Kvantitativni PCR u stvarnom vremenu proveden je s LightCycler PCR sustavom od 480 stupnjeva (Roche, Basel, Švicarska) koristeći 20 μL kao ukupni volumen svake reakcije. PCR amplifikacija započela je 15 minuta denaturacije na 95 stupnjeva, a zatim je slijedilo 40 ciklusa od 95 stupnjeva tijekom 10 s, 59–63 stupnja (temperatura žarenja) tijekom 20 s i 72 stupnja tijekom 30 s, te konačna inkubacija na 72 stupnja 5 min. Dobiveni broj praga ciklusa svakog gena (Ct vrijednost) normaliziran je u zbroj relativnih promjena prema jednadžbi 2-∆∆CT metode [30].

Tablica 2: Popis početnika

Western blot analiza

Razine ekspresije proteina p53, FOXO3a, HuR, RPS19BP1 i DBC1 u tkivima mozga analizirane su korištenjem Western blotting analize. Ukupni protein moždanog tkiva ekstrahiran je pomoću RIPA pufera za lizu (Beyotime, Kina) prema uputama proizvođača. Koncentracije proteina određene su korištenjem BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Kina). 5 mg proteina odvojeno je korištenjem 12 postotnog SDS-poliakrilamidnog gela i preneseno na PVDF membranu (0.45 μm, Millipore, SAD). Mrlje su blokirane s 5 posto nemasnog mlijeka u TBS-u, zatim inkubirane preko noći na 4 stupnja s odgovarajućim razrjeđenjem primarnih protutijela: anti-p53 (SC- 6243, Santa Cruz Biotechnology), anti-FOXO3a (#12829, Cell Tehnologija signalizacije), anti-HuR (#12582, tehnologija stanične signalizacije), anti-AROS (Ab201091, abcam), anti-DBC1 (#5857, tehnologija stanične signalizacije), anti- - djelovanje (AC004, ABclonal tehnologija) . Nakon ispiranja membrana kako bi se uklonio višak primarnih protutijela, membrane su inkubirane 1 sat na sobnoj temperaturi s odgovarajućim sekundarnim protutijelima u razrjeđenju 1:2000-1:5000 (AC004 ili AS003, ABclonal Technology). Membrane su isprane 3 puta i zatim vizualizirane pomoću Pierce ECL Western Blotting supstrata (Thermo Scientific). -akcija je korištena kao interna kontrola.

Imunohistokemija

Uzorci tkiva su fiksirani u 10 postotnom neutralnom puferiranom formalinu unutar 1 sata nakon kirurškog uklanjanja i ugrađeni u parafin korištenjem standardnih postupaka. Zatim su fiksirani uzorci uklopljeni u parafin izrezani na 5-µm debele dijelove, koji su deparafinizirani u ksilenu, rehidrirani u etanolu i tretirani mikrovalnom radi pronalaženja antigena. Odgovarajuće razrijeđena primarna antitijela, anti-p53 (SC-6243, Santa Cruz Biotechnology) i anti-FOXO3a (#12829, Cell Signaling Technology), inkubirana su 60 minuta na sobnoj temperaturi u vlažnoj komori. Stakalca su zatim isprana u PBS-u i nakon toga inkubirana sa sekundarnim protutijelima protiv anti-zečjih protutijela i vizualizacija HRP-a (koncentracija 1:300, #074-1506, KPL). Zatim su stakalca isprana i rezovi su razvijeni u otopini enzim-supstrata diaminobenzidina (DAB, Sigma). Slike imunohistokemijski obojenih rezova snimljene su Olympusovim digitalnim mikroskopom (IX-73P1F, Olympus, Japan).

Statistička analiza

Rezultati su izraženi kao srednje vrijednosti ± SD za najmanje tri neovisna eksperimenta i analizirani su pomoću softvera SPSS 18.0. Grupne razlike u kašnjenju bijega i brzini plivanja u Morrisovom zadatku treninga u vodenom labirintu analizirane su pomoću dvosmjerne analize varijance (ANOVA) s ponovljenim mjerenjima, a faktori su bili tretman i dan treninga. Ostali podaci analizirani su jednosmjernom ANOVA-om praćenom post-hoc Tukeyevim testom. Vrijednost P manja od 0.05 smatrana je značajnom.

ZAKLJUČCI

Resveratrol i CR pokazali su slične aktivnosti protiv starenja i in vitro i in vivo, što je dokazano njihovom sposobnošću da inhibiraju starenje i apoptozu izazvano AAPH i obnove kognitivno oštećenje povezano sa starenjem uzrokovano primjenom D-gal. Njihovi mehanizmi protiv starenja uključivali su regulaciju aktivnosti TE, smanjenje oksidativnog oštećenja i regulaciju puta SIRT1. Sveukupno, 10 µM resveratrola in vitro i visoke doze resveratrola in vivo pokazali su relativno snažnije djelovanje protiv starenja i stimuliranje razina SIRT1. Ovi rezultati impliciraju potencijal resveratrola kao CR mimetika.

Kratice

AAPH, 2,2'-azobis (2-amidinopropan) dihidroklorid; AMPK, protein kinaza aktivirana adenozin monofosfatom; ANOVA, analiza varijance; AROS, aktivni regulator SIRT1; CR, kalorijska restrikcija; DBC1, izbrisan u raku dojke 1; D-gal, D-galaktoza; FBS, fetalni goveđi serum; Foxo3a, rašljasta kutija 3a; HuR, Hu antigen R; MEM, minimalni bitni medij; PBS, fiziološka otopina fosfatnog pufera; PGC-1 , koaktivator G receptora aktiviran proliferatorom peroksisoma-1 ; RES, resveratrol; SA -gal, -galaktozidaza povezana sa starenjem; SD, standardne devijacije; SIRT1, regulator informacija za utišavanje; TE, telomeraza.

Autorski prilozi

Koncepcija i dizajn istraživanja: Gang Chen; prikupljanje, analiza i interpretacija podataka: Juan Li, Xia Chun Zhang, Yi-Mei Liu; dobivanje financiranja i kritička revizija rukopisa za intelektualni sadržaj: Gang Chen, Ke-Li Chen; pisanje rukopisa: Juan Li. Svi autori su pročitali i odobrili objavljivanje ovog rukopisa. ZAHVALA I FINANCIRANJE

Ovaj je rad financirala China Postdoctoral Science Foundation (2016M601237), projekt Zaklade za prirodne znanosti (81373704, 30873292).

SUKOB INTERESA

Nema sukoba interesa svih autora koji sudjeluju.

REFERENCE

1. Ramis MR, Esteban S, Miralles A, Tan DX, Reiter RJ. Ograničenje kalorične kiseline, resveratrol i melatonin: uloga SIRT1 i implikacije na starenje i povezane bolesti. Mech Aging Dev. 2015.; 146–148: 28–41.

2. Colman RJ, Beasley TM, Kemnitz JW, Johnson SC, Weindruch R, Anderson RM. Ograničenje kalorija smanjuje smrtnost uzrokovanu starošću i smrtnost od svih uzroka u rezus majmuna. Nat Commun. 2014.; 5:3557.

3. Sohal RS, Weindruch R. Oksidativni stres, kalorijska restrikcija i starenje. Znanost. 1996.; 273: 59-63.

4. Testa G, Biasi F, Poli G, Chiarpotto E. Restrikcija kalorija i mimetici restrikcije prehrane: strategija za poboljšanje zdravog starenja i dugovječnosti. Curr Pharm Des. 2014.; 20:2950-77.

5. Lane MA, Roth GS, Ingram DK. Mimetici restrikcije kalorija: novi pristup biogerontologiji. Metode Mol Biol. 2007.; 371:143-9.

6. Baur JA, Pearson KJ, Price NL, Jamieson HA, Lerin C, Kalra A, Prabhu VV, Allard JS, Lopez-Lluch G, Lewis K, Pistell PJ, Poosala S, Becker KG, et al. Resveratrol poboljšava zdravlje i preživljavanje miševa na visokokaloričnoj dijeti. Priroda. 2006.; 444: 337-42.

7. Lagouge M, Argmann C, Gerhart-Hines Z, Meziane H, Lerin C, Daussin F, Messadeq N, Milne J, Lambert P, Elliott P, Geny B, Laakso M, Puigserver P, et al. Resveratrol poboljšava funkciju mitohondrija i štiti od metaboličkih bolesti aktiviranjem SIRT1 i PGC-1alfa. Ćelija. 2006.; 127:1109-22.

8. Howitz KT, Bitterman KJ, Cohen HY, Lamming DW, Lavu S, Wood JG, Zipkin RE, Chung P, Kisielewski A, Zhang LL, Scherer B, Sinclair DA. Aktivatori sirtuina malih molekula produljuju životni vijek Saccharomyces cerevisiae. Priroda. 2003; 425: 191–6.

9. Kwon HS, Ott M. Usponi i padovi SIRT1. Trends Biochem Sci. 2008.; 33: 517-25.

10. Brooks CL, Gu W. Kako SIRT1 utječe na metabolizam, starenje i rak? Nat Rev Rak. 2009.; 9: 123–8.

11. Harman D. Teorija starenja slobodnih radikala. Mutat Re. 1992.; 275: 257-66.

12. Mayo JC, Tan DX, Sainz RM, Lopez-Burillo S, Reiter RJ. Oksidativno oštećenje katalaze izazvano peroksilnim radikalima: funkcionalna zaštita melatoninom i drugim antioksidansima. Free Radic Res. 2003; 37: 543-53.

13. Hubackova S, Krejcikova K, Bartek J, Hodny Z. IL1- i TGF -Nox4 signalizacija, oksidativni stres i odgovor na oštećenje DNK zajedničke su značajke replikativnog, onkogenom i lijekovima induciranog parakrinog starenja 'Bystander' '. Starenje (Albany NY). 2012.; 4:932–51. https:// doi.org/10.18632/aging.100520.

14. Cui X, Zuo P, Zhang Q, Li X, Hu Y, Long J, Packer L, Liu J. Kronična sustavna izloženost D-galaktozi uzrokuje gubitak pamćenja, neurodegeneraciju i oksidativno oštećenje kod miševa: zaštitni učinci R{{ 2}} lipoična kiselina. J Neurosci Res. 2006.; 84:647-54.

Pitajte za više:

E-pošta:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plus 86 15292862950