Xinjiang Cistanche polisaharidi: sposobni za čišćenje reaktivnih kisikovih vrsta i slobodnih radikala

sažetak

Proučavano je antioksidativno djelovanje polisaharida Cistanche deserticola in vitro. Uzimanje askorbinske kiseline kao kontrole, uzimanje Fentonove reakcije za proizvodnju hidroksilnih radikala, reakcija autooksidacije dopamina za proizvodnju superoksidnih anionskih radikala, reakcija natrijevog hipoklorita s vodikovim peroksidom za proizvodnju singletnog kisika, difenil gorki hidrazinski radikali kao eksperimentalni model, učinci polisaharida Cistanche deserticola na superoksidne anionske radikale, hidroksil radikali DPPH · slobodni radikal (difenil gorki hidrazin radikal), učinak hvatanja singletnog kisika. Rezultati su pokazali da polisaharidi iz Cistanche deserticola imaju očite učinke hvatanja gore navedenih slobodnih radikala, a učinak hvatanja bio je u pozitivnoj korelaciji s koncentracijom polisaharida.

Ključne riječi :Cistanche deserticola; polisaharid; Slobodni radikal

1 . Uvod

Tijelo kontinuirano proizvodi različite reaktivne kisikove slobodne radikale (ROS) u procesu oksidativnog metabolizma životnih aktivnosti, koji su međuprodukti oksidacijsko-redukcijske reakcije aerobnog metabolizma.Istraživanja su pokazala da će višak slobodnih radikala napasti životne makromolekule i razne organele, uzrokujući različita oštećenja na molekularnoj razini, razini stanica, tkiva i organa, ubrzavajući proces starenja tijela i izazivajući bolesti poput tromboze, dijabetesa, ateroskleroze, tumora itd.. [1]. Zbog toksičnosti kemijski sintetiziranih antioksidansa za ljudsko tijelo, potraga za prirodnim antioksidansima visoke učinkovitosti i niske toksičnosti koji mogu ukloniti slobodne radikale kisika postala je vruća tema istraživanja u poljima medicine, hrane, kemijskog inženjerstva i drugim poljima posljednjih godina.

Cistanche deserticola (Y.C...)je rijetka kineska tradicionalna medicina i poznata je kao "pustinjski ginseng" [2]. Cistanche deserticola mapolisaharid je jedna od glavnih bioaktivnih komponenti Cistanche deserticola, ali nema izvješća o tome ima li polisaharid Cistanche deserticola učinak hvatanja slobodnih radikala. U ovom radu, učinci čišćenja polisaharida Cistanche deserticola na superoksidni anionski radikal, hidroksilni radikal, DPPH · slobodni radikal i singletni kisik određeni su spektralnom analizom kako bi se procijenilo njegovo antioksidativno djelovanje i pružila znanstvena osnova za puni razvoj i korištenje ovog prirodnog resursa.

Kineska biljka cistanche

2. Eksperimentalni dio

2.1 Instrumenti i reagensi

UV-2401 UV-vidljivi spektrofotometar (Shimadzu, Japan); LumatLB9507 ultraosjetljivi cijevni luminometar (Njemačka

BertholdTechnologies); RE-52CS rotacijski isparivač (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); HW-SY elektronska termostatska vodena kupelj (Jintan Xinhang Instrument Factory); PHS-3C pH metar (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 pećnica za vakuumsko sušenje (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: kupljeno od Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, SAD), dopamin (Kineski institut za kontrolu farmaceutskih i bioloških proizvoda), FeSO4, EDTA, vitamin C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3 itd., sve su to domaći analitički reagensi. Eksperimentalna voda je destilirana ionskom izmjenom.

2.2 Eksperimentalna metoda

2.2.1 Metoda ekstrakcije polisaharida Cistanche deserticola

Uzmite 30 g praha Cistanche deserticola i stavite ga u čunjastu tikvicu od 500 mL. Uronite ga u petrol eter (60-90 stupnjeva), eter i vruću otopinu 80% etanola (30 stupnjeva) na 6 sati, a ostatak se ispari da se otapalo osuši. Namočite ostatak filtera u vodi u omjeru 1:10 24 sata, zagrijte na 30 stupnjeva i ekstrahirajte 100 minuta. Nakon ekstrakcije, centrifugirajte da dobijete supernatant. Nakon što se supernatant koncentrira pod sniženim tlakom, istaloži se s 95% etanolom 3 puta volumena. Ostavlja se 24 sata na 4 stupnja. Nakon centrifugiranja skuplja se i taloži. Nakon sušenja u vakuumu može se dobiti sirovi polisaharid Cistanche deserticola. Izvažite 1,00 g sirovog polisaharida, otopite ga u vodi i stavite u odmjernu tikvicu od 50 mL na pripravnost.

Pustinjski ginseng - antioksidans

Kliknite ovdje za pregled Cistanche proizvoda u prahu

【Tražite više】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.2.2 Ispitivanje sposobnosti vezivanja polisaharida Cistanche deserticola za O2 · slobodne radikale

Sposobnost čišćenja polisaharida Cistanche deserticola na O-2 · testirana je proizvodnjom slobodnih radikala superoksida (O-2 ·) iz autooksidacije dopamina [3]. Dodajte 3,0 mL 0,1 mmol/LpH=10.12 otopine karbonatnog pufera, 3,0 mL vode i 0,5 mL otopine uzorka polisaharida različitih koncentracija u epruvetu za sušenje s vagom redom. Nakon prethodnog zagrijavanja u vodenoj kupelji od 30 stupnjeva tijekom 5 minuta, dodajte 1,0 mL 2,0 mmol/L dopamina prethodno zagrijanog u vodenoj kupelji od 30 stupnjeva, odmah promiješajte i odmjerite vrijeme, držite reakciju na 30 stupnjeva 5 minuta i odmah zaustavite reakciju s 2 kapi 10 mol/L HCl. Koristite pufersku otopinu kao referencu, izmjerite apsorbanciju (uzorak A) na 221 nm, zamijenite uzorak (slijepa slika A) s 0,5 mL vode u skupini slijepe probe, a zamijenite uzorak s 0,5 mL askorbinske kiseline u kontrolnoj skupini, izmjerite svaki uzorak tri puta paralelno i uzmite prosječnu vrijednost. O-2 · stopa uklanjanja (%)=(prazno - uzorak)/prazno × 100%

2.2.3 Ispitivanje sposobnosti hvatanja polisaharida Cistanche deserticola na · OH slobodne radikale

Desert live cistanche-Antioksidans

Sustav EDTA-Fe (Ⅱ) - metilensko plavo - H2O2 korišten je za ispitivanje sposobnosti čišćenja polisaharida Cistanche deserticola na hidroksilnom radikalu. Načelo je da EDTA-Fe (Ⅱ) reagira s vodikovim peroksidom da proizvede · OH slobodne radikale, što smanjuje karakteristični vrh apsorpcije otopine metilen plavog na 660 nm.

Dodajte 1,0 mL 5 mmol/L otopine LFeSO4, 1,2 mL 5 mmol/L LEDTA otopine, 2,0 mL 0,03 mol/L NaH2PO4-Na2HPO4 (pH=7.4) puferske otopine i 1,3 mL 20 mmol/L otopine vodikovog peroksida u niz epruveta od 10 mL sa čepovima, dobro protresite, dodajte 0,7 mL 0,2 mmol/L otopine metilen plavog, a zatim dodajte 1,0 mL otopine za testiranje i vitamin C1.0 različitih koncentracija, razrijedite do 10,00 mL s vodom, dobro promiješajte, držite na 37 stupnjeva 30 minuta i izmjerite vrijednost apsorbancije svake otopine na 660 nm. Slijepa skupina zamijenila je otopinu uzorka vodom. Svaki se uzorak mjeri tri puta paralelno i uzima se prosječna vrijednost. · Stopa uklanjanja OH radikala uzorka (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × U formuli od 100%: A0 -- vrijednost apsorbancije neoštećene cijevi; A1 - vrijednost apsorbancije oštećene cijevi; A2 -- Fotometrijska vrijednost nakon dodavanja uzorka.

2.2.4 Ispitivanje DPPH · sposobnost čišćenja polisaharida Cistanche deserticola

Uzmite 0,1 mL otopine polisaharida Cistanche deserticola i dodajte je u 5,0 mL DPPH · otopine, brzo promiješajte i ostavite 10 minuta na sobnoj temperaturi,

Odredite njegovu promjenu apsorbancije na valnoj duljini od 517 n [4]. Svaki se uzorak mjeri tri puta paralelno i uzima se prosječna vrijednost. Brzina klirensa uzorka DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × U formuli od 100%: A0 -- vrijednost apsorbancije DPPH · (1,9 mLDPPH ·+0.1mL50% etanola) bez uzorka; A - vrijednost apsorbancije uzorka nakon reakcije s DPPH ·; B -- vrijednost apsorbancije slijepog uzorka (uzorak 0,1 mL+1.9 mL 50% etanola).

2.2.5 Ispitivanje polisaharida Cistanche deserticola za uklanjanje singletnog kisika 1O2

Jednolinijski kisik (1O2) nastaje kemijskom reakcijom NaClO i H2O2 na 37 stupnjeva [5]. Otopina koja se koristi za određivanje 1O2 je 100 μL2,8 mmol/L otopina NaClO, 400 μL 5 mmol/NaOH otopina, 300 μL 10 mmol/H2O2 otopina i 50 μL 1 mmol/L/Luminol otopina. Tijekom reakcije reakcijska otopina se dodaje otopini uzorka, a instrument za kemiluminiscenciju automatski bilježi proces reakcije u isto vrijeme. Uzmite NaClO-H2O2-NaOH-Luminol kao slijepu kontrolu. Započnite reakciju i dodajte reakcijsku otopinu u epruvetu s uzorkom iz boce za pohranu instrumenta za kemiluminiscenciju prema količini određenoj postupkom. Zatim se intenzitet kemiluminiscencije reakcijske smjese bilježi na papiru za snimanje svakih 5 s, svaki se uzorak mjeri tri puta paralelno i uzima se prosječna vrijednost.

Stopa klirensa izračunava se prema sljedećoj formuli: stopa klirensa (%)=(kontrolni intenzitet svjetla - uzorak intenziteta svjetla)/kontrolni intenzitet svjetla × 100%

3 Rezultati i rasprava

3.1 Učinak čišćenja polisaharida Cistanche deserticola na O-2 ·

Prednosti cistanche tubulosa-Antiooksidans

Kemijsko svojstvo O-2 · je aktivno, što može natjerati masne kiseline na biofilmu da proizvode peroksid, a zatim uništavaju stanice [6]. U ovom radu korištena je dopaminska metoda za određivanje sposobnosti čišćenja O2 ·. Sposobnost čišćenja Cistanche deserticola za O2 · prikazana je na slici 1. Rezultati su pokazali da polisaharid Cistanche deserticola može inhibirati O2 · proizveden autooksidacijom dopamina, te se povećava s povećanjem koncentracije unutar izmjerenog raspona koncentracija (0-8 mg/mL), ali je sposobnost čišćenja bila niža od one askorbinske kiseline.

3.2 Učinak čišćenja polisaharida Cistanche deserticola · OH

·OH je jedan od najaktivnijih radikala bez kisika u aktivnim vrstama kisika. Može reagirati s gotovo svim biološkim makromolekulama u živim stanicama i može dovesti do biokemijskih procesa kao što su peroksidacija lipida, polimerizacija proteina, depolimerizacija, lomljenje nukleinskih kiselina itd. u tjelesnom tkivu, uzrokujući bolesti tkiva i stanica, dovodeći do pojave raznih bolesti i ubrzavajući starenje organizma [7]. Sposobnost čišćenja polisaharida Cistanche deserticola na · OH prikazana je na slici 2. Rezultati su pokazali da je polisaharid Cistanche deserticola imao dobar učinak čišćenja na · OH, a povećavao se s povećanjem koncentracije.

3.3 Sposobnost čišćenja polisaharida Cistanche deserticola na DPPH ·

DPPH · (difenil gorki hidrazin radikal) je stabilan slobodni radikal, koji je ljubičast u organskim otapalima i ima jaku apsorpciju blizu 517 nm. Nakon dodatka antioksidansa uklanja se dio slobodnih radikala, što slabi apsorpciju, po čemu se može procijeniti antioksidativno djelovanje ove tvari [8]. Vidi sliku 3 za DPPH · sposobnost čišćenja polisaharida Cistanche deserticola. Eksperimentalni rezultati pokazali su da je sposobnost čišćenja polisaharida Cistanche deserticola na DPPH · u pozitivnoj korelaciji s njegovom koncentracijom, a sposobnost čišćenja veća je od one askorbinske kiseline.

3.4 Sposobnost čišćenja polisaharida Cistanche deserticola do 1O2

Jednolinijski kisik je pobuđeni molekularni kisik s aktivnim kemijskim svojstvima. Budući da nespareni elektroni teže sparivanju, slobodni radikali pokazuju aktivnija kemijska svojstva [9]. Sposobnost čišćenja polisaharida Cistanche deserticola do 1O2 prikazana je na slici 4. Eksperimentalni rezultati su pokazali da je sposobnost čišćenja polisaharida Cistanche deserticola niža od one askorbinske kiseline u rasponu od 0-4,0 mg/mL, a sposobnost čišćenja polisaharida Cistanche deserticola bila je veća od one askorbinske kiseline kada je koncentracija bila veća od 4,0 mg/mL.

 

4. Zaključak

Antioksidativno djelovanje polisaharida Cistanche deserticola in vitro je detaljno proučavano kroz različite reaktivne sustave bez kisikovih radikala.Iz eksperimentalnih rezultata može se vidjeti da unutar eksperimentalnog raspona koncentracija, ekstrakt polisaharida Cistanche deserticola ima učinke čišćenja na O2 ·, · OH, DPPH · i 1O2, a učinci čišćenja su različiti za različite sustave.Rezultati su to pokazaliPolisaharid Cistanche deserticola je učinkovit egzogeni prirodni antioksidans, koji je vrijedan daljnjeg istraživanja, razvoja i sveobuhvatne upotrebe.

Cistanche 200 mg-Antiooksidans

referenca

[1] Ling Guanting. Antioksidativna hrana i zdravlje [M]. Peking: Chemical Industry Press, 2004.1-58.

[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei, et al. Alkalna ekstrakcija i kemijska analiza polisaharida iz Cistanche deserticola [J]. Poljoprivredna i prehrambena znanost i tehnologija, 2008,2 (3): 32-34.

[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. Autooksidacija dopamina [J]. Journal of Hebei Normal University, 1997, 21 (4): 387-389.

[4] Zhang Zeqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Studija o antioksidativnoj aktivnosti Fangfeng polisaharida [J]. Kineska medicina, 2008,31 (2): 268-271.

[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Kunsheng. Studija o antioksidativnoj aktivnosti lentinana [J]. Istraživanje i razvoj hrane, 2008, 29 (4): 56-60.

[6] Mo Jian. Uvod u medicinsku biologiju slobodnih radikala [M]. Peking: Izdavačka kuća People's Health, 1989.21-25.

[7]FrederickVL.FreeRadicals[J].ClinicalChemistry,1993,65(12):374-377.

[8]MatsudaM, NagahamaY, SatoTetal.DMYisSpecificDMDomainGeneRequiredforMaleDevelopmentintheMedakaFish[J].Nature,2002,30:559-563.

[9] KanofskyJR.SingletOxygenProductionbyLactoperoxidase[J].JournalofBiologicalChemistry,1983,258(10):5991-5993.