Cjepiva izazivaju visoko unakrsno reaktivan stanični imunitet na varijantu SARS-CoV-2 Omicron
Mar 24, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com
Jinyan Liu1*, Abishek Chandrashekar1*, Daniel Sellers1*, Julia Barrett1, Michelle Lifton1, Katherine McMahan1, Michaela Sciacca1,
Haley VanWyk1, Cindy Wu1, Jingyou Yu1, Ai-ris Y. Collier1, Dan H. Barouch1,2*
1 Beth Israel Deaconess Medical Center, Boston, MA, SAD;
2 Ragon institut MGH, MIT i Harvard, Cambridge, MA, SAD
Pokazalo se da visoko mutirana varijanta SARS-CoV-2 Omicron (B.1.1.529) izbjegava značajan dio odgovora neutralizirajućih protutijela izazvanih trenutnim cjepivima koja kodiraju WA1/2020 Spike imunogen1, što dovodi do povećanih probojnih infekcija i smanjena učinkovitost cjepiva. Stanični imunološki odgovori, posebno CD8 plus T-stanični odgovori, vjerojatno su ključni za zaštitu od teške SARS-CoV-2 bolesti2-6. Ovdje pokazujemo da je stanični imunitet izazvan trenutnim cjepivima protiv SARS-CoV-2 vrlo unakrsno reaktivan protiv varijante SARS-CoV-2 Omicron. Pojedinci koji su primili cjepiva Ad26.COV2.S ili BNT162b2 pokazali su trajne CD8 plus i CD4 plus T-stanične odgovore koji su pokazali opsežnu unakrsnu reaktivnost protiv Delta i Omicron varijanti, uključujući središnje i efektorske memorijske stanične subpopulacije. Medijan odgovora specifičnih za Omicron CD8 plus T stanica bio je 82-84 posto od WA1/2020-specifičnih odgovora CD8 plus T stanica. Ovi podaci sugeriraju da trenutna cjepiva mogu pružiti znatnu zaštitu od teške bolesti s varijantom SARS-CoV-2 Omicron unatoč značajnom smanjenju odgovora neutralizirajućih protutijela.
cistanche dobrobiti za zdravlje: poboljšava imunitet
Nedavne studije pokazale su da su neutralizirajuća protutijela (NAbs) izazvana cjepivom značajno smanjena na visoko mutiranu varijantu SARS-CoV-2 Omicron, što je rezultiralo brzim globalnim širenjem, uključujući probojne infekcije kod potpuno cijepljenih osoba1. Kako bismo procijenili unakrsnu reaktivnost staničnih imunoloških odgovora izazvanih cjepivom protiv varijante SARS-CoV-2 Omicron, procijenili smo odgovore CD8 plus i CD4 plus T stanica kod 51 osobe koja je cijepljena adenovirusnim vektorom Ad26. COV2.S cjepivo7 (Johnson & Johnson; N=20) ili BNT162b2 cjepivo8 na bazi mRNA (Pfizer; N=31).
Nakon cijepljenja BNT162b2, primijetili smo visoke WA1/2020-specifične NAb odgovore u 1. mjesecu, nakon čega je uslijedio nagli pad do 8. mjeseca, kao što je i očekivano9,10 (Slika 1a). Nakon cijepljenja Ad26.COV2.S, bilo je značajno nižih inicijalno nižih WA1/2020-specifičnih NAb odgovora u 1. mjesecu, ali ti su odgovori bili trajniji i trajali su 89, 11 mjeseci (Slika 1a). Međutim, za oba cjepiva primijećena su minimalna križnoreaktivna Omicron-specifična NAb (slika 1a), što je u skladu s nedavnim podacima u nedostatku dodatnog pojačanja1. Odgovori antitijela specifičnih za vežuću domenu receptora (RBD) procijenjeni su ELISA-om i pokazali su slične trendove, s minimalnim unakrsno reaktivnim antitijelima specifičnim za vezivanje Omicron (Slika 1b). Za razliku od odgovora antitijela, odgovori specifičnih za Spike procijenjeni pomoću skupni peptidni IFN-g ELISPOT testovi pokazali su značajnu unakrsnu reaktivnost na Omicron (prošireni podaci, slika 1). Zatim smo procijenili Spike-specifične CD8 plus i CD4 plus T-stanične odgovore testovima bojenja unutarstaničnih citokina. Ad26.COV2.S inducirao je medijan Spike-specifičnog IFN-g CD8 plus odgovora T stanica od 0.061 posto, 0.062 posto i {{ 72}}.051 posto u odnosu na WA1/2020, Delta, odnosno Omicron, u 8. mjesecu nakon cijepljenja (slika 2a). BNT162b2 je izazvao medijan Spike-specifičnog IFN-g CD8 plus odgovora T stanica od 0.028 posto i 0,023 posto u odnosu na WA1/2020 i Omicron, u 8. mjesecu nakon cijepljenja (slika 2a). Ovi podaci sugeriraju da su odgovori specifični za Omicron CD8 plus T stanice bili 82-84 posto unakrsno reaktivni s WA1/2020-specifičnim odgovorima CD8 plus T stanica. Specifični za šiljak IFN-g CD4 plus odgovori T stanica izazvani Ad26.COV2.S bili su medijan od 0,026 posto, 0,030 posto i 0,029 posto u odnosu na WA1/2020, Delta i Omicron, respektivno, a prema BNT162b2 bio je medijan od 0,033 posto odnosno 0,027 posto u odnosu na WA1/2020 i Omicron, što također ukazuje na značajnu unakrsnu reaktivnost odgovora CD4 plus T stanica (slika 2b). Znatna unakrsna reaktivnost Omikrona također je primijećena za T-stanične odgovore specifične za TNF-a i IL-2 koji luče CD8 plus i CD4 plus (prošireni podaci, slika 2).
Linearna regresijska analiza pokazala je da su odgovori specifičnih za Omicron CD8 plus T stanice u korelaciji s WA1/2020-specifičnim odgovorima CD8 plus T stanica za cjepivo Ad26.COV2.S za obje vremenske točke (R=0.78, P<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">
Naši podaci pokazuju da Ad26.COV2.S i BNT162b2 izazivaju široko reaktivni stanični imunitet protiv varijanti SARS-CoV-2 uključujući Omicron. Konzistentnost ovih opažanja kroz dvije različite tehnologije platforme cjepiva (virusni vektor i mRNA) sugerira mogućnost generalizacije ovih nalaza. Opsežna unakrsna reaktivnost odgovora CD8 plus i CD4 plus T stanica specifičnih za Omicron u oštrom je kontrastu s izrazito smanjenim odgovorima neutralizirajućih i vezujućih protutijela specifičnih za Omicron. Ovi su podaci u skladu s prethodnim studijama koje pokazuju veću unakrsnu reaktivnost staničnih imunoloških odgovora izazvanih cjepivom u usporedbi s humoralnim imunološkim odgovorima protiv varijanti SARS-CoV-2 Alpha, Beta i Gamma12. 82-84 posto unakrsne reaktivnosti odgovora CD8 plus T stanica na Omicron u skladu je s teoretskim predviđanjima temeljenim na mutacijama Omicrona6.
Pretkliničke studije su pokazale da CD8 plus T stanice doprinose zaštiti od SARS-CoV-2 kod rezus makakija, posebno kada su odgovori antitijela suboptimalni5. Trajni odgovori CD8 plus i CD4 plus T stanica također su prijavljeni nakon infekcije i cijepljenja2- 4,6,9,11,13,14. S obzirom na ulogu CD8 plus T stanica u uklanjanju virusnih infekcija, vjerojatno je da stanična imunost značajno doprinosi zaštiti cjepivom od teške bolesti SARS-CoV-2. Ovo bi moglo biti osobito relevantno za Omicron, koji izbjegava značajan dio odgovora antitijela. Naši podaci sugeriraju da trenutna cjepiva mogu pružiti znatnu zaštitu od teških bolesti uzrokovanih varijantom SARS-CoV-2 Omicron unatoč smanjenom odgovoru neutralizirajućih protutijela i povećanom proboju infekcija.
cistanche prah
metode
Proučavajte populaciju
Uzorci pojedinaca koji su primili cjepivo BNT162b2 dobiveni su iz biorepozitorija uzoraka Beth Israel Deaconess Medical Center (BIDMC). Uzorci pojedinaca koji su primili Ad26.COV2.S dobiveni su iz studije COV1001 (NCT04436276). Obje studije odobrio je institucionalni revizijski odbor BIDMC. Svi su sudionici dali informirani pristanak. Pojedinci su bili isključeni iz ove studije ako su imali povijest infekcija SARS-CoV- 2, primili druga cjepiva protiv COVID-19 ili primili imunosupresivne lijekove. Test neutralizirajućih antitijela na pseudovirus
Pseudovirusi SARS-CoV-2 koji eksprimiraju reporterski gen luciferaze korišteni su za mjerenje protutijela koja neutraliziraju pseudovirus. Ukratko, pakiranje konstruira psPAX2 (Program resursa i reagensa za AIDS), reporterski plazmid luciferaze pLentiCMV Puro-Luc (Addgene) i pcDNA3 koja eksprimira šiljasti protein.1-SARS-CoV-2 SΔCT bili su ko- transficirani u stanice HEK293T (ATCC CRL_3216) s lipofektaminom 2000 (ThermoFisher Scientific). Pseudovirusi varijanti SARS-CoV-2 generirani su korištenjem soja WA1/2020 (Wuhan/WIV04/2019, GISAID pristupni ID: EPI_ISL_402124), varijanta B.1.1.7 (Alfa, GISAID pristupni ID: EPI_ISL_601443), B.1.351 varijanta (Beta, GISAID pristupni ID: EPI_ISL_712096), B.1.617. 2 (Delta, GISAID pristupni ID: EPI_ISL_2020950), ili B.1.1.529 (Omicron, GISAID ID: EPI_ISL_7358094.2). Supernatanti koji sadrže pseudotipove virusa sakupljeni su 48 sati nakon transfekcije; pseudotipovi virusa pročišćeni su filtracijom s filtrom od 0.45-µm. Kako bi se odredila neutralizacijska aktivnost ljudskog seruma, stanice HEK293T-hACE2 zasijane su u 96-ploče s kulturom tkiva pri gustoći od 1,75 × 104 stanica po jažici preko noći. Pripremljena su trostruka serijska razrjeđenja uzoraka seruma inaktiviranih toplinom i pomiješana s 50 ul pseudovirusa. Smjesa je inkubirana na 37 stupnjeva 1 sat prije dodavanja HEK293T-hACE2 stanicama. Nakon 48 h, stanice su lizirane u Steady-Glo Luciferase Assay (Promega) prema uputama proizvođača. SARS-CoV-2 neutralizacijski titri definirani su kao razrjeđenje uzorka pri kojem je primijećeno smanjenje od 50 posto (NT50) u relativnim svjetlosnim jedinicama u odnosu na prosjek kontrolnih jažica virusa.
Enzimski imunološki test (ELISA)
Antitijela specifična za vezivanje SARS-CoV-2 receptor-vezne domene (RBD) u serumu procijenjena su ELISA-om. 96-pločice s jažicama obložene su s 2 ug/mL SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta), B.1.351 (Beta), ili B.1.1.529 (Omicron) RBD protein u 1 × Dulbecco fosfatno puferiranoj fiziološkoj otopini (DPBS) i inkubirano na 4 stupnja preko noći. Nakon inkubacije, ploče su isprane jednom puferom za ispiranje (0,05 posto Tween 20 u 1 x DPBS) i blokirane s 350 μL otopine kazeinskog bloka po jažici tijekom 2 do 3 sata na sobnoj temperaturi. Nakon inkubacije, blok otopina je odbačena i ploče su osušene upijanjem. Serijska razrjeđenja toplinski inaktiviranog seruma razrijeđenog u kazeinskom bloku dodana su u jažice, a ploče su inkubirane 1 sat na sobnoj temperaturi, prije još 3 ispiranja i 1-satne inkubacije s 1:4000 razrjeđenjem anti- ljudska IgG hren peroksidaza (HRP) (Invitrogen, ThermoFisher Scientific) na sobnoj temperaturi u mraku. Ploče su isprane 3 puta i u svaku jažicu dodano je 100 µL otopine SeraCare KPL TMB SureBlue Start; razvoj ploče zaustavljen je dodavanjem 100 μL otopine SeraCare KPL TMB Stop po jažici. Apsorbancija na 450 nm, s referencom na 650 nm, zabilježena je VersaMax čitačem mikropločica (Molecular Devices). Za svaki uzorak, titar ELISA krajnje točke izračunat je pomoću 4-prilagođavanja logističke krivulje parametra za izračunavanje recipročnog razrjeđenja seruma koje daje korigiranu vrijednost apsorbancije (450 nm-650 nm) od 0,2. Prijavljeni su titri interpoliranih krajnjih točaka.
ekstrakt cistanche deserticola: poboljšava imunitet
Enzimski imunološki (ELISPOT) test.
ELISPOT ploče su obložene mišjim antihumanim IFN-monoklonskim antitijelom iz MabTech-a u količini od 1 µg/jažici i inkubirane preko noći na 4 stupnja. Ploče su isprane s DPBS i blokirane s R10 medijem (RPMI s 10 posto toplinski inaktiviranog FBS-a s 1 posto 100x penicilin-streptomicina, 1 M HEPES-a, 100 mM natrijevog piruvata, 200 mM L-glutamina i 0,1 posto 55 mM 2-Merkaptoetanol) 2-4 h na 37 stupnjeva. SARS-CoV-2 združeni S peptidi iz SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) ili B.1.1.529 (Omicron) (21st Century Biochemicals) pripremljeni su i nasađeni u koncentraciji od 2 µg/jažici, a 100000 stanica/jažici je dodano na ploču. Peptidi i stanice su inkubirani 15-20 h na 37 stupnjeva. Svi koraci nakon ove inkubacije izvedeni su na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane ELISPOT puferom za ispiranje i inkubirane 2-4 h s biotiniliranim mišjim anti-humanim IFN-monoklonskim protutijelom tvrtke MabTech (1 µg/mL). Ploče su isprane drugi put i inkubirane 2-3 h s konjugiranim kozjim anti-biotinskim AP od Rockland, Inc. (1,33 µg/mL). Nakon konačnog ispiranja uslijedilo je dodavanje Nitor-plave otopine supstrata tetrazolijevog klorida/5-bromo-4-kloro 3 'indolil fosfata p-toluidin soli (NBT/BCIP kromagen) tijekom 7 minuta. Kromagen je odbačen, a ploče su isprane vodom i osušene na tamnom mjestu 24 sata. Ploče su skenirane i izbrojane na Cellular Technologies Limited Immunospot Analyzer.
Test bojenja unutarstaničnih citokina (ICS).
Odgovori CD4 plus i CD8 plus T stanica kvantificirani su testovima obojenja unutarstaničnih citokina (ICS) stimuliranim peptidima. Skupovi peptida sadržavali su peptide 15 aminokiselina koji se preklapaju s 11 aminokiselina koje obuhvaćaju SARS-CoV-2 WA1/2020, B.1.617.2 (Delta) ili B.1.1 .529 (Omicron) Spike proteini (21st Century Biochemicals). 106 jažica mononuklearnih stanica periferne krvi resuspendirano je u 100 µL R10 medija dopunjenog CD49d monoklonskim protutijelom (1 µg/mL) i CD28 monoklonskim protutijelom (1 µg/mL). Svaki uzorak je procijenjen lažnim (100 µL R10 plus 0,5 posto DMSO; pozadinska kontrola), peptidima (2 µg/mL) i/ili 10 pg/mL forbol miristat acetata (PMA) i 1 µg/ml ionomicina (Sigma- Aldrich) (100 uL; pozitivna kontrola) i inkubirana na 37 stupnjeva 1 h. Nakon inkubacije, 0,25 µL GolgiStopa i 0,25 µL GolgiPluga u 50 µL R10 dodano je u svaku jažicu i inkubirano na 37 stupnjeva tijekom 8 sati, a zatim je držano na 4 stupnja preko noći. Sljedećeg dana, stanice su isprane dva puta s DPBS, obojene aqua živom/mrtvom bojom 10 minuta i zatim obojene unaprijed određenim titrom monoklonskih protutijela protiv CD279 (klon EH12.1, BB700), CD4 (klon L200, BV711), CD27 (klon M-T271, BUV563), CD8 (klon SK1, BUV805), CD45RA (klon 5H9, APC H7) 30 minuta. Stanice su zatim isprane dva puta s 2 posto FBS/DPBS pufera i inkubirane 15 minuta s 200 µL BD CytoFix/CytoPerm Fixation/Permeabilization otopine. Stanice su isprane dva puta s 1X Perm Wash puferom (BD Perm/WashTM Buffer 10X u kompletu CytoFix/CytoPerm Fixation/ Permeabilization kit razrijeđen MilliQ vodom i propušten kroz filtar od 0,22 µm) i intracelularno obojene monoklonskim antitijelima protiv IFN- (klon B27; BUV395), i CD3 (klon SP34.2, Alexa 700), 30 min. Stanice su isprane dva puta s 1X Perm Wash puferom i fiksirane s 250 uL svježe pripremljenog 1,5 postotnog formaldehida. Fiksirane stanice su prebačene u 96-ploču s okruglim dnom i analizirane pomoću BD FACSymphony™ sustava. Podaci su analizirani pomoću FlowJo v9.9.
dodatak cistanche:poboljšati imunitet
Reference
1. Cele S, Jackson L, Khan K, et al. SARS-CoV-2 Omicron ima opsežan, ali nepotpun bijeg Pfizer BNT162b2 izazvao neutralizaciju i zahtijeva ACE2 za infekciju. medRxiv 2021.
2. Dan JM, Mateus J, Kato Y, et al. Imunološka memorija na SARS-CoV-2 procijenjena do 8 mjeseci nakon infekcije. Znanost 2021;371.
3. Sette A, Crotty S. Adaptivni imunitet na SARS-CoV-2 i COVID-19. Ćelija 2021;184:861-80.
4. Goel RR, Painter MM, Apostolidis SA, et al. mRNA cjepiva potiču trajno imunološko pamćenje na SARS-CoV-2 i varijante koje izazivaju zabrinutost. Znanost 2021;374:abm0829.
5. McMahan K, Yu J, Mercado NB, et al. Korelati zaštite od SARS-CoV-2 kod rezus makakija. Nature 2021;590:630-4.
6. Grifoni A, Weiskopf D, Ramirez SI, et al. Ciljevi odgovora T stanica na SARS-CoV-2 Coronavirus kod ljudi s COVID-19 bolešću i neizloženih pojedinaca. Ćelija 2020;181:1489-501 e15.
7. Sadoff J, Gray G, Vandebosch A, et al. Sigurnost i učinkovitost jednodoznog cjepiva Ad26.COV2.S protiv Covida-19. N Engl J Med 2021;384:2187-201.
8. Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, et al. Sigurnost i učinkovitost BNT162b2 mRNA Covid-19 cjepiva. N Engl J Med 2020.
9. Collier AY, Yu J, McMahan K, et al. Diferencijalna kinetika imunoloških odgovora izazvanih Covid-19 cjepivima. N Engl J Med 2021;385:2010-2.
10. Falsey AR, Frenck RW, Jr., Walsh EE, et al. SARS-CoV-2 Neutralizacija s BNT162b2 cjepivom Doza 3. N Engl J Med 2021.
11. Barouch DH, Stephenson KE, Sadoff J, et al. Trajni humoralni i stanični imunološki odgovori 8 mjeseci nakon cijepljenja Ad26.COV2.S. N Engl J Med 2021;385:951-3.
12. Alter G, Yu J, Liu J, et al. Imunogenost cjepiva Ad26.COV2.S protiv varijanti SARS-CoV-2 kod ljudi. Nature 2021; 596:268-72.
13. Poon MML, Rybkina K, Kato Y, et al. Infekcija SARS-CoV-2 stvara tkivno lokalizirano imunološko pamćenje kod ljudi. Znanstvena imunologija 2021; 6: eabl9105.
14. Vidal SJ, Collier AY, Yu J, et al. Korelati neutralizacije protiv SARS-CoV-2 varijanti koje izazivaju zabrinutost prema serumima rane pandemije. J Virol 2021;95:e0040421.
prednosti suplementa cistanche:poboljšati imunitet