Ultrazvučno potpomognuta ekstrakcija polisaharida iz Cistanche Tubulosa: Optimizacija procesa, izolacija frakcija, strukturna karakterizacija i učinci protiv zamora

 

Sažetak:Ova studija imala je za cilj optimizirati proces ekstrakcije polisaharida (CP) Cistanche tubulosa i istražiti njihove strukturne karakteristike i učinke protiv umora. Vođeni jednofaktorskim eksperimentima i optimizirani pomoću metodologije odzivne površine, optimalni uvjeti bili su 20 minuta ultrazvučne obrade, omjer otapala i materijala od 20:1 i ultrazvučna snaga od 220 W, što daje 8,55% CP. Kromatografija na celuloznoj koloni naknadno je proizvela jednu neutralnu frakciju (CPN) i tri kisele frakcije (CPA-1, CPA-2, CPA-3). Među njima, CPN je pokazao najveći oporavak (40,3%), najveći sadržaj ugljikohidrata (39,5%) i snažno antioksidativno djelovanje usporedivo s CPA-2; stoga je CPN odabran za dubinsku karakterizaciju. Strukturne analize otkrile su karakteristične polisaharidne funkcionalne skupine, prevladavajuću glukozu i manozu, te dokaze za dvije komponente izrazito različite molekulske mase. In vivo, CPN je značajno produžio vrijeme plivanja s utezima kod miševa, snizio dušik uree u krvi i laktat u serumu i povećao glikogen u jetri, potvrđujući aktivnost protiv umora. Ova otkrića pružaju znanstvenu osnovu za razvoj polisaharida Cistanche tubulosa u funkcionalne proizvode protiv umora i srodne komercijalne primjene.

Ključne riječi: Polisaharidi Cistanche tubulosa; metodologija odzivne površine; proces ekstrakcije; strukturna karakterizacija; protiv umora; nove dobrobiti za CP u funkcionalnoj hrani i nutraceutici

 

Uvod

Cistanche tubulosa (Schenk) Wight,cijenjena ljekovita i jestiva homologna biljka poznata kao "pustinjski ginseng", ima dugu povijest upotrebe u Kini [1]. Njegovi glavni bioaktivni sastojci uključuju polisaharide, feniletanoidne glikozide i iridoide; među njima, polisaharidi pokazuju važne fiziološke funkcije, poput imunomodulatornih [2], antioksidativnih [3], učinaka protiv umora [4] i hipoglikemijskih učinaka [5], pokazujući široke izglede za primjenu u farmaceutskim proizvodima, zdravstvenim proizvodima i funkcionalnoj hrani [6]. Tradicionalne metode ekstrakcije polisaharida (npr. uranjanje u vruću vodu i refluks) često pate od dugog trajanja, niske učinkovitosti, visoke potrošnje energije i potencijalnog oštećenja strukture i aktivnosti polisaharida [7-9]. Osim ekstrakcije toplom vodom [10] i refluksa [11], Teng et al. [12] uspoređivali su ultrazvuk, mikrovalnu i kombiniranu ultrazvučno-mikrovalnu ekstrakciju, otkrivši da je sinergistička ultrazvučno-mikrovalna metoda dala najbolji prinos (11,00%), 1,28% veći od ekstrakcije vrućom vodom, nakon čega slijede samo mikrovalna i ultrazvuk.

Odvajanje i pročišćavanje polisaharida ima za cilj dobiti strukturno definirane i bioaktivne monosupstance ili specifične frakcije visoke čistoće iz sirovih polisaharida koji sadrže proteine, nukleinske kiseline, lipide i druge nečistoće. Ailadan Maimaitiaili [11] je obezbojio i deproteinizirao sirove Cistanche polisaharide s AB-8 makroporoznom smolom, zatim ih odvojio DEAE-650M celulozom koristeći deioniziranu vodu i NaCl gradijent, dobivši jedan neutralni i pet kiselih polisaharida; in vitro, neutralna frakcija je pokazala superiorno antioksidativno djelovanje. Trenutačno se studije bioaktivnosti polisaharida Cistanche uglavnom fokusiraju na antioksidativne, protuupalne učinke i učinke protiv starenja [13], dok su istraživanja protiv umora relativno rijetka.

Kao novija tehnika ekstrakcije prirodnih proizvoda, ekstrakcija potpomognuta ultrazvukom (UAE) nudi kratko vrijeme ekstrakcije, visoku učinkovitost, jednostavnost rada i nikakvo ili nisko zagrijavanje, čime se izbjegava toplinska degradacija komponenti osjetljivih na toplinu i poboljšava prinos i čistoća; naširoko se koristi za biljne polisaharide [14]. Međutim, uvjeti UAE za ekstrakciju polisaharida (CP) Cistanche tubulosa zahtijevaju daljnju optimizaciju kako bi se povećala učinkovitost. Metodologija površine odziva (RSM), učinkovit pristup dizajnu i optimizaciji temeljen na matematičkom modeliranju, omogućuje sveobuhvatnu analizu višestrukih čimbenika i njihovih interakcija kako bi se odredili optimalni parametri.

U ovoj smo studiji upotrijebili RSM za optimizaciju UAE procesa za CP, odvojili i identificirali dobivene sirove polisaharide, usporedili in vitro antioksidacijsku aktivnost frakcija i na temelju najjače antioksidativne aktivnosti procijenili učinke protiv umora in vivo. Cilj je pružiti znanstvenu i tehničku podršku za korištenje resursa Cistanche tubulosa s dodanom vrijednošću i ubrzati prevođenje u funkcionalne proizvode za wellness industriju.

Polisaharidi Cistanche tubulosa: dobrobiti

 

 

 

Popis prednosti Cistanche

 

 

Dobijte visoku količinu polisaharida Cistanche tubulosa

 

 

1 Materijali i metode

1.1 Materijali i instrumenti

Cistanche tubulosa was purchased from the Urumqi dried fruit market; polysaccharides were prepared in-house at Xinjiang Agricultural University. Absolute ethanol, acetone, and ether were analytical grade (Tianjin Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd.). DPPH was from Shanghai Ruji Biotechnology Development Co., Ltd. ABTS and shiitake polysaccharide (purity >98%) bilo je iz Solarbioa (Peking).

Glavna oprema: brusilica XL‑02A (Yechang Machinery Co., Ltd.); HH‑S digitalna vodena kupelj s konstantnom temperaturom (Tvornica medicinskih instrumenata Jiangsu Jintan); JBT/C‑YCL400T/3P(D) ultrazvučni farmaceutski procesor (Jining Jinbait Special Engineering Machinery Co., Ltd.); VP50 jedinica za vakuumsko filtriranje (Beijing Labtech); RE‑52B rotacijski isparivač (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); 80‑1 centrifuga (Jintan Hengfeng Instrument Factory); UV-2550 spektrofotometar (Shimadzu, Šangaj).

Životinje: Pedeset mužjaka SPF Kunming miševa, tjelesne težine 20,00±2,00 g, starosti 3-4 tjedna, nabavljeni od Xinjiang Medical University Laboratory Animal Center (licenca SYXK‑Xin 2024-0001).

 

Polisaharidi Cistanche tubulosa: dobrobiti

 

 

1.2 Metode

1.2.1 Proces ekstrakcije polisaharida

Kriške Cistanche su usitnjene i propuštene kroz sito od 50 mesha. Prah je stavljen u tikvicu s okruglim dnom, pomiješan s 8 volumena 80% etanola, refluksiran na 90 stupnjeva 2 sata i filtriran. Ostatak je osušen na zraku. Destilirana voda dodana je osušenom ostatku i ekstrahirana ultrazvukom; ekstrakt je filtriran, filtrat je zadržan, a ostatak je ponovno ekstrahiran jednom. Dva filtrata su spojena i koncentrirana na jednu četvrtinu izvornog volumena. Tri volumena apsolutnog etanola dodana su u koncentrat, ostavljena stajati na 4 stupnja 12 sati i vakuumski filtrirana da se prikupi talog. Talog je ispran sekvencijalno s apsolutnim etanolom, acetonom i eterom, osušen i izvagan da se dobije sirovi CP.

 

Polisaharidi Cistanche tubulosa: dobrobiti

 

1.2.2 Eksperimenti s jednim faktorom

1.2.2.1 Učinak omjera otapala i materijala na prinos CP

Pripremljeno je pet porcija Cistanche praha (svaka po 4 g). Vrijeme ekstrakcije i ultrazvučna snaga fiksirani su na 20 min i 175 W. Omjeri otapala i materijala od 10:1, 15:1, 20:1, 25:1 i 30:1 (mL:g) testirani su na njihov učinak na prinos CP. Svaki pokus izveden je u tri primjerka.

 

1.2.2.2 Učinak ultrazvučne snage na CP prinos

Pet obroka praha (4 g svaki) ekstrahirano je pri optimalnom omjeru otapala i materijala određenom u 1.2.2.1, s vremenom ekstrakcije fiksiranim na 20 minuta. Ispitane su razine ultrazvučne snage od 125, 150, 175, 200 i 225 W. Izvedeni su trostruki pokusi.

 

1.2.2.3 Učinak ultrazvučnog vremena na CP prinos

Pet obroka praha (4 g svaki) ekstrahirano je pri optimalnom omjeru otapala i materijala (iz 1.2.2.1) i optimalnoj ultrazvučnoj snazi ​​(iz 1.2.2.2). Ispitana su ultrazvučna vremena od 10, 15, 20, 25 i 30 minuta. Svaki uvjet je testiran u tri primjerka.

 

1.2.3 Metodologija površine odziva (RSM)

Na temelju rezultata s jednim faktorom, korišten je Box–Behnkenov dizajn s CP prinosom kao odzivom i ultrazvučnim vremenom, omjerom otapala i materijala i ultrazvučnom snagom kao faktorima. Optimizacija RSM-a provedena je u Design-Expertu 8 s trofaktorskim dizajnom na tri razine (vidi tablicu 1). Eksperimenti su izvedeni u tri primjerka.

 

Polisaharidi Cistanche tubulosa: dobrobiti

 

1.2.4 Određivanje sadržaja polisaharida

Sadržaj polisaharida mjeren je kolorimetrijskom metodom sumporna kiselina–antron [15]. Anthrone (20 g) je otopljen u koncentriranoj sumpornoj kiselini i dopunjen do 100 mL da se dobije otopina od 0,2 g/mL. Odgovarajuća količina CP je otopljena i razrijeđena do 100 mL. Alikvot od 1 mL pomiješan je s 5 mL 0,2 g/mL antron-sumporne kiseline, vorteksiran, ostavljen na sobnoj temperaturi 5 minuta, zagrijavan u vodenoj kupelji od 90 stupnjeva 15 minuta, ohlađen i apsorbancija izmjerena na 585 nm. Glukoza je korištena za pripremu standardne krivulje: Y=0.0081X + 0.0176 (R²=0.9991). Apsorpcija uzorka je zamijenjena krivuljom za izračunavanje sadržaja polisaharida.

 

1.2.5 Izračun prinosa polisaharida

Prinos polisaharida izračunat je prema standardnoj formuli (masa dobivenog polisaharida u odnosu na masu sirovine), korištenjem izmjerenog sadržaja polisaharida.

 

1.2.6 Pročišćavanje polisaharida

Crude CP extract was prepared under the optimized conditions. Following Wang et al. [16], Sevag reagent (chloroform:n‑butanol = 4:1, v/v) was used for deproteinization with vigorous shaking for 10 min, followed by centrifugation; the supernatant was collected and the process repeated three times. Eight volumes of 95% ethanol were added to the filtrate and left at 4 °C for 24 h. After centrifugation (8000 r/min, 10 min), the precipitate was collected and freeze‑dried to obtain crude CP. A 10 mg/mL solution was prepared by dissolving 100 mg crude CP in 10 mL distilled water, centrifuged at 7000 r/min for 10 min to remove insolubles, and filtered through a 0.45 μm membrane. The solution was loaded onto a DEAE‑52 cellulose column and eluted stepwise with distilled water and 0.1, 0.3, and 0.5 mol/L NaCl. Eluates were monitored by anthrone–sulfuric acid assay; fractions with absorbance >1.0 skupljeni su, koncentrirani, dijalizirani, osušeni smrzavanjem i izvagani kako bi se dobile različite frakcije polisaharida. Prinos (Y) je izračunat kao:
Y = (C × V × D) / (m × P)
gdje je C koncentracija polisaharida (mg/mL) pročišćene ciljne otopine, V je volumen (mL), D je faktor razrjeđenja, m je masa sirovog CP (g), a P je sadržaj polisaharida u sirovom CP.

 

1.2.7 Usporedba antioksidativnih aktivnosti frakcija

1.2.7.1 DPPH uklanjanje radikala

Slijedeći Jianga i sur. [17] s izmjenama, 0,2 mmol/L DPPH radna otopina je svježe pripremljena. Otopine frakcija od 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 i 1,0 mg/mL (po 1 mL svaka) pomiješane su s 2 mL DPPH, vorteksirane i inkubirane u mraku na sobnoj temperaturi 30 minuta. Apsorbancija je izmjerena na 517 nm (Ai). Svaki test je utrostručen, a vitamin C (Vc) u odgovarajućim koncentracijama služio je kao pozitivna kontrola. Stopa čišćenja je nacrtana u odnosu na koncentraciju i izračunata prema:
DPPH čišćenje (%)=[1 − (Ai − Aj) / (A0)] × 100
gdje je Ai A(2 mL DPPH + 1 mL uzorka/Vc), Aj je A(2 mL etanola + 1 mL uzorka/Vc), a A0 je A(1 mL vode + 2 mL DPPH).

 

1.2.7.2 ABTS uklanjanje radikala

Slijedeći Xu et al. [18] s modifikacijama, 1 mL uzorka od 0,2-1,0 mg/mL pomiješan je s 4 mL ABTS otopine, vorteksiran i inkubiran u mraku 6 minuta na sobnoj temperaturi. Apsorbancija je izmjerena na 734 nm, u tri primjerka. Vc pri odgovarajućim koncentracijama bila je pozitivna kontrola. Stopa čišćenja je nacrtana u odnosu na koncentraciju i izračunata prema:
ABTS čišćenje (%)=[1 − (Ai − Aj) / (A0)] × 100
gdje je Ai A(1 mL uzorka/Vc + 4 mL ABTS), Aj je A(1 mL uzorka/Vc + 4 mL vode), a A0 je A(1 mL vode + 4 mL ABTS).

 

1.2.8. Strukturna analiza polisaharidnih frakcija

1.2.8.1 Infracrvena spektroskopija s Fourierovom transformacijom (FTIR)

Slijedeći Zhang WenChao i sur. [19] s modifikacijama, 2 mg prethodno obrađenog polisaharida pomiješano je s 200 mg osušenog KBr, samljeveno i prešano u pelete. Spektri su prikupljeni od 400-4000 cm⁻¹ pri rezoluciji od 4 cm⁻¹ s 32 skeniranja.

 

1.2.8.2 Određivanje molekularne težine

Slijedeći Zhang Jiayuan [20] s modifikacijama, 5 mg uzorka otopljeno je u 0,05 mol/L NaCl do 5 mg/mL, centrifugirano i filtrirano kroz membranu od 0,22 μm. Molekularna težina određena je pomoću HPGPC s dvije vodotopive SEC kolone na bazi polimera (8 mm × 300 mm) u seriji, detektor: Waters RI; mobilna faza: 0,05 M NaCl; protok: 0,50 mL/min; temperatura kolone: ​​40 stupnjeva; injekcija: 30 μL. Kalibracijske krivulje bile su:
Lg Mp–RT: y=−0,1359x + 9.4523 (R²=0.9974)
Lg Mw–RT: y=−0,1375x + 9.5035 (R²=0.9976)
Lg Mn–RT: y=−0,1368x + 9.4749 (R²=0.9971)
Molekularne težine su izračunate u skladu s tim.

 

1.2.8.3 Sastav monosaharida

Slijedeći Naxin S i sur. [21], uzorci su obrađeni i analizirani ionskom kromatografijom/HPLC. Standardi (po 5 mg ramnoze, arabinoze, galaktoze, glukoze, ksiloze, manoze, galakturonske kiseline, glukuronske kiseline, glukozamin HCl, galaktozamin HCl; 10 mg fukoze) su otopljeni i dovedeni do 10 mL, zatim razrijeđeni do niza koncentracija. Za kromatografiju je korišten sustav Thermo U3000 s stupcem Agilent ZORBAX Eclipse XDB‑C18 (4,6 mm × 250 mm, 5 μm); mobilna faza: acetonitril:fosfatni pufer (12 g/L KH2PO4, pH podešen na 6,8 s 2 M NaOH)=17:83 (v/v), izokratski; protok 0,8 mL/min; stupac 30 stupnjeva ; detekcija 250 nm; injekcija 10 μL.

 

1.2.9 Eksperimenti protiv zamora polisaharidnih frakcija

1.2.9.1 Grupiranje i administracija životinja

Etičko odobrenje br. 2023048. Nakon 3 dana privikavanja, 50 miševa randomizirano je u pet skupina (n=10): slijepa kontrola; pozitivna kontrola (polisaharid shiitake 300 mg/kg); frakcija niske doze (150 mg/kg); frakcija srednje doze (300 mg/kg); visokodozna frakcija (600 mg/kg). Frakcije i kontrole davane su sondom 15 dana; miševi su imali slobodan pristup hrani i vodi.

 

1.2.9.2 Test plivanja s utezima

Pet sati nakon zadnje gavaže, olovni uteg jednak 7% tjelesne težine pričvršćen je na svaki rep miša. Miševi su plivali u spremniku dubine 60 cm na 30±2 stupnja. Vrijeme od uranjanja do trenutka kada je glava ostala uronjena 10 s bez ponovnog izranjanja zabilježeno je kao vrijeme iscrpljujućeg plivanja.

 

1.2.9.3 Dušik uree u krvi (BUN)

Nakon plivanja krv je skupljena preko orbitalnog sinusa u heparinizirane epruvete i centrifugirana na 3000 o/min 10 minuta. BUN je mjeren strogo prema uputama za komplet.

 

1.2.9.4 Krvni laktat

Serum (20 μL) je obrađen prema uputama za komplet. Apsorbancija je očitana na 530 nm (1 cm duljine puta) s dvostruko destiliranom vodom kao nulom i izračunata je koncentracija laktata.

 

1.2.9.5 Jetreni glikogen

Neposredno nakon prikupljanja krvi, miševi su eutanazirani dislokacijom cerviksa. Jetra su izrezana, isprana fiziološkom otopinom, osušena i 80 mg tkiva stavljeno je u epruvetu s 3 volumena lužine (pH 8,0). Uzorci su kuhani 20 minuta, ohlađeni, a glikogen je kvantificiran prema uputama za pribor.

 

1.2.10 Analiza podataka

Podaci su analizirani korištenjem SPSS 17.1 i prijavljeni kao srednja vrijednost ± SD (X ± S). Korištena je jednosmjerna ANOVA s testiranjem homogenosti varijance; P < 0,05 smatra se statistički značajnim. Slike su pripremljene u Origin 2021 i GraphPad Prism 9.

Komercijalni prijevod i glavne značajke primjene

Pozicioniranje novih prednosti: Optimizirani neutralni Cistanche polisaharid (CPN) pokazao je dvostruki učinak antioksidansa i učinka protiv umora - produljena izdržljivost, smanjen BUN i laktat, te povećana potpora glikogena u jetri tvrdnje kao što su "podržava izdržljivost", "pomaže u smanjenju umora izazvanog vježbanjem" i "antioksidacijska podrška".

Formati proizvoda: napitci za izdržljivost spremni za miješanje, gelovi, funkcionalne gumene gume i kapsule. Kombinirajte CPN s elektrolitima, B-vitaminima i ugljikohidratima s niskim GI za sportske formulacije; ili s tradicionalnim Cistanche feniletanoidnim glikozidima za sinergističke SKU-ove "energija + oporavak".

Smjernice za obradu: Uvjeti UAE (20 min, omjer otapala 20:1, 220 W) su skalabilni i energetski učinkoviti; DEAE-52 frakcioniranje daje olovno neutralnu frakciju (CPN) s višim udjelom ugljikohidrata i aktivnošću, što omogućuje dosljednu standardizaciju (npr. veći ili jednak 39% ugljikohidrata, HPGPC otisak s bimodalnom Mw).

Sukladnost i potkrijepljenost: Koristite sadašnje rezultate in vivo da potkrijepite tvrdnje o strukturi/funkciji; proširiti pilot pokusima na ljudima koji mjere vrijeme do iscrpljenosti, kinetiku laktata i percipirani napor. Primijenite izjave o čistoj ekstrakciji i otapalu.

Kontrola kvalitete: usvojite trake markera FTIR, omjere monosaharida (pretežno glukoza/manoza) i HPGPC profil molekularne težine kao kriterij otpuštanja. Antioksidativni testovi (DPPH/ABTS) kao provjere aktivnosti u procesu.

 

Afilijacije autora i reference (autoritativni izvor)

DUAN Jihua1, HAN Haixia2,+, ZHAO Wenyan3, JIA Mingxi2, SUN Jingjing2, ZHOU Jixiang2, SONG Suqin4, ZHU Dongliang3*, BAO Xiaowei2*
(1. Xinjiang Sikai Food R&D Center (Co., Ltd.), Changji, Xinjiang 831100; 2. College of Food Science and Pharmacy, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, Kina; 3. Farmaceutski institut za ispitivanje instrumenata, Odjel za logistiku vojne regije Xinjiang, Xinjiang, Urumqi 830052; Sveobuhvatna eksperimentalna stanica Urumqi, Xinjiang Academy of Agricultural Sciences, Xinjiang, Urumqi 830052)

Reference
[1] ZHAO Hongting, XIN Guoxiong, GUO Yuan. Napredak istraživanja Cistanchis sinensis, tradicionalnog kineskog lijeka s istim izvorom hrane i lijeka. Kineska biljna medicina, 2025., 56(09): 3316–3329.
[2] YANG MH, CHEN RH, ZHOU X, et al. Napredak istraživanja farmakoloških učinaka i mehanizma polisaharida. Starch-Stärke, 2024, 76(9–10): 2300168.
[3] MU S, YANG WJ, HUANG G L. Antioksidativne aktivnosti i mehanizmi polisaharida. Chem Biol Drug Des, 2021, 97(3): 628–632.
[4] ZHANG SS, LIU B, YAN GY, et al. Kemijska svojstva i učinak polisaharida protiv umora. J Food Biochem, 2022, 46(1): e14015.
[5] FU Y, WANG LW, JIANG GCA, et al. Antidijabetičko djelovanje polisaharida iz var. Li. Hrana, 2022., 11(10): 1464.
[6] CHEN Changmao, GAZANG Zhaxi, WANG Jie, et al. Napredak istraživanja aktivnih komponenti i farmakološkog mehanizma Cistanchiakisa. Kineska biljna medicina, 2025., 56(12): 4464–4477.
[7] WANG Wenli, ZHANG Jinling, WEI Yaning, et al. Napredak ekstrakcije prirodnih polisaharida, pročišćavanja i bioaktivnosti. Znanost i tehnologija prehrambene industrije, 2022., 43(22): 470–480.
[8] GONG P, WANG SY, LIU M, et al. Metode ekstrakcije, kemijske karakterizacije i biološke aktivnosti polisaharida gljiva: mini pregled. Carbohydr Res, 2020, 494: 108037.
[9] CHEN X, LIU YB, DENG Y, et al. Primarna studija o učinku metoda ekstrakcije na svojstva i aktivnosti polisaharida. Molecules, 2025, 30(1): 148.
[10] JIANG Huabin, LIU Lisha, ZHANG Qing, et al. Istodobno odvajanje i pročišćavanje tubularnih Cistanche feniletanoidnih glikozida i polisaharida tehnologijom membranskog odvajanja. Prehrambena znanost i tehnologija, 2019., 44(07): 229–234.
[11] MAIMAITIAILI Ailadan. Studija o ekstrakciji, odvajanju i pročišćavanju polisaharida iz Herba Cistanche i njihovoj in vitro imunološkoj aktivnosti. Urumqi: Medicinsko sveučilište Xinjiang, 2021.
[12] TENG Liping, MU Long, LUO Feng, et al. Metoda ekstrakcije sirovih polisaharida iz Cistanche tubulosa i njezin učinak na uklanjanje difenilnog radikala. Guizhou Agricultural Sciences, 2011, 39(01): 66–68.
[13] BAI Dongwen. Učinci ekstrakata cvijeta Pedicularis i Cistanche na hipokampus i crijevnu mikrobiotu pod hipoksijom na velikim visinama. Urumqi: Poljoprivredno sveučilište Xinjiang, 2023.
[14] JING YS, ZHANG SL, LI MS, et al. Ekstrakcija, struktura i bioaktivnost polisaharida. Hrana, 2022, 11(14): 2126.
[15] GUO Xiaolei, ZHU Sichao, ZHAI Xufeng, et al. Usporedba metoda antron sulfata i fenol sulfata za određivanje Ganoderma polisaharida. Kineski časopis tradicionalne kineske medicine, 2010., 28(09): 2000–2002.
[16] WANG Senzheng, SUN Yongfang, ZHOU Ye, et al. Optimizacija ekstrakcije, strukturna karakterizacija i učinci polisaharida Wen Curcuma na funkcionalnu konstipaciju. Istraživanje i razvoj prirodnih proizvoda: 1–17.
[17] JIANG Zhixuan, CAI Zifu, DONG Sisi, et al. Kemijska modifikacija polisaharida opuncije i analiza antioksidativnog i hipoglikemijskog djelovanja. Znanost i tehnologija prehrambene industrije: 1–20. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025020006.
[18] XU Qing, YANG Jiang, LI Anding. Usporedba glavnih funkcionalnih komponenti i antioksidativnog djelovanja marakuje različitog podrijetla. Moderna znanost i tehnologija o hrani, 2023., 39(08): 94–102.
[19] ZHANG CW, ZOU YF, ZOU Y, et al. Ultrazvučno potpomognuta ekstrakcija polisaharida iz Paeoniae Radix alba: optimizacija ekstrakcije, strukturna karakterizacija i antioksidativni mehanizam in vitro. Int J Biol Macromol, 2024, 268: 131816.
[20] ZHANG Jiayuan. Izolacija i pročišćavanje polisaharida koprive, strukturna identifikacija i hipoglikemijsko djelovanje. Xi'an: Sveučilište znanosti i tehnologije Shaanxi, 2021.
[21] SUN NX, ZHAO YN, YIN M Y. Ekstrakcija, pročišćavanje, struktura i bioaktivnost polisaharida iz maitake: pregled. J Food Meas Charact, 2023, 17(6): 6200–6213.
[22] WAN Yue, QI Jiying, ZENG Hong, et al. Optimizacija ultrazvukom potpomognute ekstrakcije polisaharida shiitake metodologijom površine odgovora. Biotehnološki vjesnik, 2015, 31(01): 79–85.
[23] LI Li, ZHANG Sai, HE Qiang, et al. Primjena metodologije odzivnih površina u eksperimentalnom dizajnu i optimizaciji. Laboratorijska istraživanja, 2015, 34(08): 41–45.
[24] MA Qvhuan, SHI Xiaofeng, SHEN Wei, et al. Optimizacija ekstrakcije polisaharida iglica cedrovog bora analizom površine odgovora. Kineski časopis tradicionalne kineske medicine, 2018., 33(03): 1106–1110.
[25] ZHAO Jinsong, PENG Jingjing, ZHANG Liang, et al. Usporedna studija o poboljšanju neugodnih okusa u baijiu upotrebom različitih aktivnih ugljena. China Brewing, 2025, 44(09): 179–186.
[26] WU Huiqiong, WU Hailian, XIAO Nan, et al. Pickering emulzije hlapljivog ulja Mosla chinensis sinergistički stabilizirane kompozitnim česticama nanokristalne celuloze/kukuruznog škroba. Znanost i tehnologija prehrambene industrije: 1–27. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025060255.
[27] WU Shuang. Učinak fukoidana na stabilnost Pickering emulzija na bazi proteina. Dalian: Politehničko sveučilište Dalian, 2022.
[28] LIN Ying, ZHENG Meixia, CHEN Changmei, et al. Ultrazvuk potpomognuta dvofazna ekstrakcija polisaharida crnog čaja jasmina i antioksidativno djelovanje. Kemija i bioinženjering, 2025, 42(09): 35–42.
[29] WANG Yihan, XIE Qingyun, TENG Jianwen, et al. Učinci izolacije i pročišćavanja na strukturu polisaharida Tremella i in vitro aktivnost snižavanja lipida. Tehnologija prehrambene industrije, 2025, 46(05): 81–90.
[30] BAN Shidong, ZONG Chunyang, WANG Xiaodan, et al. Optimizacija fermentacije Lactobacillus plantarum Polygonatum za povećanje prinosa polisaharida i in vitro prebiotičku aktivnost. Znanost i tehnologija prehrambene industrije: 1–18. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025030047.
[31] MO Yunfeng, CHEN Zixuan, PENG Junying, et al. Učinci procesa sušenja na svojstva bundevinog praha i antioksidativni kapacitet. Znanost i tehnologija prehrambene industrije: 1–19. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2025040072.