Ukupni glikozidi iz stabljika Cistanche Tubulosa ublažavaju ponašanja slična depresiji
Mar 27, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Li Fan, Ying Peng, Jingwen Wang, Ping Ma, Lijuan Zhao, Xiaobo Li *
SAŽETAK
Pozadina:Kao najčešće korištenibiljka za detoksikaciju bubregau tradicionalnoj kineskoj medicini, osušene sočne stabljike Cistanche tubulosa (Schenk) Wight (CT) pokazale su se učinkovitima u liječenju depresije. Međutim, komponente antidepresiva i njihov temeljni mehanizam ostaju nejasni.
Svrha:Istražiti aktivne komponente CT-a protiv depresije, kao i potencijalne mehanizme. Dizajn i metode studije: Bihevioralni testovi očaja korišteni su za procjenu antidepresivnih aktivnosti polisaharida, oligosaharida i različitih frakcija obogaćenih glikozidima izdvojenih iz CT-a, kao i tipičnih metabolita crijevne mikrobiote uključujući 3-hidroksifenilpropionsku kiselinu ({{2 }}HPP) i hidroksitirozola (HT). Nadalje, učinci bioaktivnih frakcija i metabolita na modele kroničnog nepredvidljivog blagog stresa (CUMS) istraženi su višestrukim farmakodinamičkim i biokemijskim analizama. Promjene u histologiji debelog crijeva i crijevnoj barijeri uočene su bojenjem i imunohistokemijskom analizom. Mikrobne značajke crijeva i metabolizam triptofan-kinurenina istraženi su korištenjem 16S rRNA sekvenciranja i western blottinga.
Rezultati:Ukupni glikozidi (TG) dramatično su ublažili ponašanja slična depresiji u usporedbi s različitim odvojenim frakcijama, odražavajući se u sinergističkim učincima feniletanoida i iridoidnih glikozida na hiperaktivaciju osovine hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda (HPA), teške neuro- i periferne upale, i nedostatke 5-hidroksitriptamina (5-HT) i neurotrofnog faktora koji potiče iz mozga u hipokampusu. Štoviše, TG je ublažio upalu niskog stupnja u debelom crijevu i poremećaj crijevne barijere, a brojnost nekoliko bakterijskih rodova u visokoj je korelaciji s HPA osi i upalom u CUMS štakora. Dosljedno, ekspresija indoleamina 2, 3-dioksigenaze 1 (IDO1) u debelom crijevu značajno je smanjena nakon primjene TG, praćena supresijom metabolizma triptofan-kinurenina. S druge strane, HT je također pokazao izražen antidepresivni učinak poboljšanjem funkcije HPA osi, otpuštanjem proupalnih citokina i metabolizmom triptofan-kinurenina, dok nije mogao u velikoj mjeri prilagoditi poremećenu crijevnu mikrobiotu na isti način kao TG. Iznenađujuće, superiorniji od fluoksetina, TG i HT mogu dodatno poboljšati disfunkciju hipotalamo-hipofizno-gonadalne osovine i abnormalni metabolizam cikličkih nukleotida.
dobrobiti cistanche salsemogao daljepoboljšati disfunkciju.
Uvod
Depresija je kronični, ponavljajući i potencijalno po život opasan mentalni poremećaj koji pogađa do 20 posto svjetske populacije (Nabavi i sur., 2017.). Trenutno, iako su brojni antidepresivi odobreni, nuspojave su zabrinjavajuće. Značajno je da je dugotrajno liječenje selektivnim inhibitorima ponovne pohrane serotonina (SSRI) kao što je fluoksetin, glavni farmakološki agens za depresiju, pogoršalo probleme kao što je kronična seksualna disfunkcija (Bijlsma et al., 2014.); to je privuklo sve veću pozornost otkriću novih antidepresiva iz prirodnih biljaka (Wang et al., 2019). U teoriji tradicionalne kineske medicine (TCM), nedostatak yanga u bubrezima rezultira karakteristikama performansi sličnim kliničkim simptomima depresije kao što su osjećaj potištenosti, gubitak interesa i sentimentalnost (Yang et al., 2020.), potičući misli za ublažavanje ponašanja sličnih depresiji toniziranjem bubrežnog janga. Slučajno, mnoge biljke za toniranje bubrega imaju prednost poboljšanja seksualne funkcije (Wu et al., 2015.). Takve studije navode nas da obratimo pozornost na potencijalnu primjenu Cistanches Herba, koja je najčešće korištena biljka za tonificiranje bubrega-yang u TCM-u i učinkovita je u liječenju muške seksualne disfunkcije (Wang et al., 2020.), u smislu razvoja antidepresiva. Cistanches Herba, službeno zabilježena kao osušene sočne stabljike Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight (CT) i Cistanche deserticola (YC Ma) u Kineskoj farmakopeji (Wang et al., 2017.), koristi se u Kini i drugim istočnoazijskim zemljama. od 15. stoljeća za liječenje stanja kao što su nedostatak yanga bubrega, impotencija i ženska neplodnost. Suvremene farmakološke studije pokazuju da Cistanches Herba ima višestruke bioaktivnosti, poput jačanja imuniteta, neuroprotekcije, antioksidativnih učinaka, učinaka protiv starenja i umora (Wang i sur., 2017.). Neuroprotektivna svojstva Cistanches Herba upućuju na njen terapeutski potencijal u kognitivnim bolestima kao što su moždani udar, depresija i Alzheimerova bolest (Wang et al., 2020.). U našoj prethodnoj studiji otkrili smo da ekstrakt CT-a ublažava ponašanje nalik depresiji kod štakora kroničnog nepredvidivog blagog stresa (CUMS) (Li et al., 2018.). Dosadašnja kemijska analiza CT-a pokazala je da njegov glavni sastav uključuje feniletanoidne glikozide, iridoidne glikozide, polisaharide i oligosaharide (Jiang i Tu, 2009.), međutim, tip spoja koji ima dominantnu ulogu u njegovom antidepresivnom učinku ostaje nejasan.
Brojne studije potvrdile su da fiziološko djelovanje crijeva (osobito komenzalne mikrobiote) igra važnu ulogu u razvoju depresije i može regulirati neuroendokrini, autonomni živčani sustav i imunološki sustav (Yang i sur., 2020.). Štoviše, odnos koji povezuje metabolizam triptofana, crijevnu mikrobiotu i depresiju postupno je privukao veliku pažnju. Promijenjena crijevna mikrobiota može aktivirati put triptofan-kinurenin, posljedično smanjujući perifernu i cerebralnu dostupnost triptofana, što rezultira nedostatkom 5-HT (Agus i sur., 2018.). Naša prethodna studija pokazala je da feniletanoidni glikozidi u CT-u općenito imaju nisku bioraspoloživost i mogu se brzo metabolizirati u 3-hidroksi-fenil propionsku kiselinu (3-HPP) i hidroksitirozol (HT) pomoću crijevne mikrobiote (Li et al., 2016). Osim toga, objavljeno je da CT ekstrakt obnavlja homeostazu crijevne mikrobiote u CUMS štakora (Li et al., 2018). Na temelju takvog istraživanja zaključili smo da bi dvosmjerna interakcija fitokemikalija i crijevne mikrobiote mogla upravljati antidepresivnim učincima specifičnih bioaktivnih komponenti CT-a. Točnije, spojevi se mogu transformirati u metabolite koji se mogu apsorbirati (kao što su 3-HPP i HT) u gastrointestinalnom traktu pomoću crijevne mikrobiote, a zatim ispoljiti antidepresivne učinke. S druge strane, strukturne promjene crijevne mikrobiote izazvane bioaktivnim komponentama mogu istovremeno igrati vitalnu ulogu u djelovanju antidepresiva.
Materijali i metode
Materijali
Svi standardi korišteni za kemijsku analizu nabavljeni su od Dursta (Sichuan, Kina). 3-HPP, HT, fluoksetin i imipramin kupljeni su od Aladdina (Šangaj, Kina). Komplet za kvantitativno određivanje BCA proteina kupljen je od Bostera (Wuhan, Kina). Nanjing Jiancheng (Nanjing, Kina) osigurao je 5-HT, BDNF, faktor nekroze tumora-alfa (TNF-), interleukin-1beta (IL-1) i interferon-gama (IFN- ) setovi za imunoenzimski test (ELISA). Kortikosteron (CORT), adrenokortikotropni hormon (ACTH) i kortikotrofin-oslobađajući hormon (CRH) ELISA kompleti kupljeni su od Multi Sciences (Hangzhou, Kina). Kompleti ELISA za ciklički adenozin monofosfat (cAMP), ciklički gvanozin monofosfat (cGMP), testosteron (T) i gonadotropin-otpuštajući hormon (GnRH) kupljeni su od Enzyme-linked Biotechnology (Šangaj, Kina). Kompleti za ELISA triptofan i kinurenin dobiveni su od Small Molecule Antibodies (Bordeaux, Francuska). Primarna/sekundarna protutijela uključujući zonula occludens 1 (ZO-1), indoleamin 2, 3-dioksigenazu 1 (IDO1), -aktin i HRP kozji anti-zečji IgG (H plus L) kupljena su od Proteintecha (Wuhan, Kina). Svi ostali reagensi analitičkog stupnja ili više čistoće nabavljeni su od komercijalnih dobavljača.
dodatak ekstraktu cistanche
Priprema različitih frakcija odvojenih od CTE
CT je prikupljen u studenom 2015. u Hetianu, Xinjiang, Kina, a autentičnost je potvrdio prof. Xiaobo Li. Uzorak vaučera (20151108) pohranjen je na Farmaceutskom fakultetu šangajskog sveučilišta Jiao Tong.
Zdrobljeni uzorci ekstrahirani su tri puta destiliranom vodom (1:10, w/v) tijekom 2 sata na 80~90 ◦C kako bi se dobio CTE (prinos je bio 57,1 posto). CTE je otopljen u destiliranoj vodi i zatim polagano miješan s etanolom (1:4, v/v) i stavljen na 4 ◦C 24 h. Zatim su talog i supernatant sakupljeni centrifugiranjem na 4000 okretaja u minuti tijekom 20 minuta. Ukupni polisaharidi (TP; iskorištenje je bilo 5,7 posto) dobiveni su ispiranjem sa 80 postotnim etanolom i deproteinizacijom sa Sevage reagensom tri puta iz sakupljenog taloga. Preostali supernatant je zatim kromatografiran preko D101 mikroporozne kolone smole i eluiran destiliranom vodom i 40 postotnim etanolom. Isprane frakcije vode i 40 posto etanola sadržavale su ukupne oligosaharide (TO; prinos je bio 35,1 posto) i ukupne glikozide (TG; prinos je bio 12,1 posto). TG je dalje eluiran destiliranom vodom i 5 posto, 10 posto i 40 posto etanola ponovno kroz mikroporoznu smolu D101, a eluirane frakcije od 5 posto i 40 posto etanola bili su ukupni iridoidni glikozidi (TG-IrG; prinos je bio 2,7 posto) i ukupnih feniletanoidnih glikozida (TG-PhG; prinos je bio 8,7 posto), redom.
Kemijska analiza
Prvo, glavni kemijski sastojci različitih frakcija odvojenih od CTE karakterizirani su pomoću UPLC-QTOF-MS. Drugo, relativni sadržaji ukupnih ugljikohidrata i glikozida određeni su UV-Vis metodom. Treće, glavne komponente (ehinakozid, verbaskozid, izoverbaskozid, 8-epiloganska kiselina i genipozidna kiselina) kvantificirane su validiranom HPLC metodom. Detaljni parametri i validacija metode prikazani su u Dodatnim materijalima.
Slika 1. Dijagram toka pokusa na životinjama
Tablica 1 Subjekti i doziranje za miševe ili štakore u svakoj skupini.
Pokusi na životinjama
Specifični rasporedi pokusa na životinjama prikazani su na slici 1. Sve pokusne životinje bile su smještene i aklimatizirane 1 tjedan prije pokusa u Laboratory Animal Center šangajskog sveučilišta Jiao Tong (Šangaj, Kina), pod kontroliranom sobnom temperaturom (25 ± 2 ◦C; 55 ± 10 posto relativne vlažnosti) s ciklusom svjetlo-tama 12:12 h. Ovo istraživanje je provedeno u skladu sa Smjernicama za njegu i korištenje laboratorijskih životinja SJTU. Objekte i protokole za životinje odobrio je Odbor za etiku životinja SJTU (br. A2019008).
Stotinu i pedeset mužjaka ICR miševa (težine 18-20 g, starosti 6 tjedana) kupljeno je od Shanghai Slack Biotechnology Company (Šangaj, Kina) i nasumično podijeljeno u 10 skupina (n=15/skupina). Ispitanici i doze za miševe s očajem u ponašanju u svakoj skupini prikazani su u tablici 1. Doze CTE-a i njegove odvojene frakcije izračunate su sljedećom formulom: doza=4.55 g/kg.d.tm × prinos, što je utvrđeno prema tri proračuna ekvivalentne doze za ljude na temelju površine tijela. Doze pozitivnog lijeka imipramina i metabolita crijevne mikrobiote (3-HPP i HT) postavljene su u skladu s prethodnim studijama (Gupte i sur., 2016.; Pablos i sur., 2019.). Nakon intragastrične primjene jednom dnevno tijekom 7 dana, test otvorenog polja (OFT), test ovjesa repa (TST) i test prisilnog plivanja (FST) provedeni su 8., 9. odnosno 10. dana. Specifične metode testova ponašanja navedene su u Dopunskim materijalima.
Sedamdeset i dva mužjaka Sprague-Dawley štakora (težine 160-180 g, starosti 6 tjedana) kupljena su od Shanghai Slack Laboratory Animal Company (Šangaj, Kina). Prije formalnih eksperimenata, svi štakori su bili podvrgnuti testu preferiranja saharoze (SPT) nakon odgovarajućeg treninga. Štakori su podijeljeni u 8 skupina (n=9/skupina) u skladu s njihovom sklonošću saharozi (dodatna slika S1). Subjekti i doze za štakore u svakoj skupini prikazani su u tablici 1. Doze su postavljene prema koeficijentu konverzije između miša i štakora na temelju njihovih učinkovitih doza kod miševa s očajnim ponašanjem. A doza lijeka pozitivne kontrole fluoksetina bila je u skladu s prethodnom studijom (Hou et al., 2017.). Sve su skupine primile niz kroničnog nepredvidivog blagog stresa (CUMS), osim kontrolne skupine. Stresori su primjenjivani kontinuirano i nasumično tijekom 4 tjedna (vidi dodatnu tablicu S1 za detalje). Hrana i voda bile su slobodno dostupne kontrolnim štakorima, koji su ostali neometani u drugoj prostoriji, osim za testove ponašanja. Subjektima je primijenjen intragastrično 1 h prije CUMS postupka tijekom 4 tjedna. Nakon 28 dana kontinuiranog stresa i primjene lijeka, OFT, SPT i FST su učinjeni 29., 31., odnosno 33. dana. Specifične metode bihevioralnih eksperimenata prikazane su u Dopunskim materijalima.
Tablica 2. Sadržaj ehinakozida, verbaskozida, izoverbaskozida, 8-epiloganske kiseline i genipozidne kiseline u svakoj frakciji.
Uzimanje uzoraka i biokemijska analiza
Nakon testova ponašanja, štakori natašte su anestezirani s pentobarbital natrijem, te je skupljena puna krv da se dobiju uzorci seruma. Nakon perfuzije srca fiziološkom otopinom, sadržaj hipokampusa, debelog crijeva i cekuma je sakupljen i pohranjen u -80 ◦C. Distalni segmenti debelog crijeva su uklonjeni i fiksirani u 4 postotnom paraformaldehidu. Razine CORT, CRH, ACTH, TNF-, IL-1, IFN-, cAMP, cGMP, T, GnRH, triptofana i kinurenina u serumu, 5-HT, BDNF i TNF- u hipokampusu, a TNF- i IFN- u debelom crijevu izmjereni su prema uputama priloženim uz odgovarajući komplet ELISA.
Histologija, imunohistokemija i Western-blotting analiza
Za promatranje patoloških promjena u tkivu debelog crijeva korišteno je bojenje hematoksilinom i eozinom (H&E) te Alcian blue-periodic acid-Schiff (AB-PAS). Osim toga, provedene su imunohistokemijske procjene ovih dijelova kako bi se promatrala ekspresija proteina ZO-1 u epitelnim stanicama debelog crijeva (Ding et al., 2020.). Pojedinosti o pripremi uzorka i Western-blot testu za određivanje ekspresije IDO1 proteina u debelom crijevu i hipokampusu također su opisane u Dopunskim materijalima.
Analiza profila sastava crijevne mikrobiote
Visokopropusno sekvenciranje 16S rRNA izveo je MajorBio Co., Ltd. (Šangaj, Kina), a detaljna metoda i obrada podataka prikazani su u Dodatnim materijalima.
Statistička analiza
Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna pogreška srednje vrijednosti (SEM). Jednosmjerna analiza varijance (ANOVA) korištena je za usporedbu više skupina pomoću softvera SPSS 20.0. Razlika se smatra značajnom pri p < 0,05.="" korelacije="" između="" crijevnih="" mikroba="" i="" određenih="" fizioloških="" čimbenika="" povezanih="" s="" depresijom="" analizirane="" su="" pomoću="" spearmanova="" korelacijskog="" koeficijenta="" na="" temelju="" analize="" toplinske="">
Rezultati
Kemijska analiza različitih frakcija izdvojenih iz CTE
Glavne komponente karakterizirane su pomoću UPLC-QTOF-MS (dodatna tablica S2 i slika S2), a identificiran je ukupno 21 sastojak, uključujući 16 sastojaka feniletanoidnih glikozida, 2 sastojka fenolnih glikozida u CTE, TG i TG- PhG; i 3 sastojka iridoidnih glikozida u CTE, TG i TG-IrG. Sveukupno, relativni sadržaji ukupnih ugljikohidrata u TP i TO bili su 60,3 posto odnosno 80,8 posto. Relativni sadržaji ukupnih glikozida u TG bili su 87,7 posto. Sukladno tome, feniletanoidni i iridoidni glikozidi činili su 86.7 posto, odnosno 53,4 posto TG-PhG i TG-IrG. Sadržaj ehinakozida, verbaskozida, izoverbaskozida, 8-epiloganske kiseline i genipozidne kiseline u svakoj frakciji prikazan je u tablici 2, a HPLC kromatogram i podaci o validaciji metode navedeni su u dodatnoj tablici S3 i na slici S3.
Slika 2. Učinci različitih frakcija odvojenih od CTE i tipičnih metabolita pomoću crijevne mikrobiote na FST, TST, OFT u miševa.
Učinci različitih frakcija odvojenih od CTE-a i tipičnih metabolita pomoću crijevne mikrobiote na testove očaja u ponašanju kod miševa
Kao što je prikazano na slici 2, u usporedbi s kontrolnom skupinom, miševi podvrgnuti 7-dnevnoj primjeni imipramina (pozitivna kontrola) pokazali su značajno smanjenje vremena nepokretnosti u FST-u i TST-u i nisu pokazali značajan učinak na ukupnu prijeđenu udaljenost u OFT-u. . Slične promjene također su primijećene u skupinama CTE, TG i HT, što ukazuje da su CTE, TG i HT imali antidepresivno djelovanje i da učinci nisu bili povezani s ekscitabilnošću. Stoga su TG i HT bili dominantna bioaktivna frakcija koju je crijevna mikrobiota odvojila od CTE-a i tipičnih metabolita. Zanimljivo je da nisu pokazane značajne promjene u vremenu nepokretnosti u FST nakon primjene TG-PhG i TG-IrG u usporedbi s kontrolama, ili u TST nakon primjene TG-PhG, što ukazuje da bi prisutnost feniletanoida i iridoidnih glikozida mogla biti bitan u antidepresivnoj aktivnosti CTE.
Tablica 3 Učinci različitih frakcija obogaćenih glikozidima i HT na FST, SPT i OFT u CUMS štakora.
Farmakodinamički učinci i biokemijske promjene različitih frakcija obogaćenih glikozidima i HT na CUMS štakorima
Kao što je prikazano u tablici 3, štakori podvrgnuti 28 dana CUMS paradigmi pokazali su značajna smanjenja (p < 0.001)="" u="" preferiranju="" saharoze="" u="" spt-u,="" ukupnoj="" prijeđenoj="" udaljenosti,="" i="" broj="" uzgoja="" u="" oft-u,="" kao="" i="" značajno="" povećanje="" (p="">< 0,01)="" ukupnog="" vremena="" nepokretnosti="" u="" fst-u="" u="" usporedbi="" s="" kontrolama,="" što="" ukazuje="" na="" indukciju="" fenotipova="" sličnih="" depresiji="" u="" cums="" štakora.="" depresivni="" nastupi="" bili="" su="" poništeni="" u="" skupini="" flx="" (pozitivna="" kontrola).="" slično="" tome,="" liječenje="" cte,="" tg,="" tg-phg,="" tg-irg="" i="" ht="" rezultiralo="" je="" vraćanjem="" sklonosti="" saharozi="" na="" normalne="" razine="" kod="" cums="" štakora,="" koje="" su="" bile="" 102,7="" posto,="" 94,1="" posto,="" 89,8="" posto,="" 91,9="" posto="" i="" 94,3="" posto="" od="" kontrole,="" odnosno.="" dosljedno="" u="" skupinama="" fst,="" cte="" i="" tg="" pokazale="" su="" najočiglednije="" učinke,="" a="" vrijeme="" nepokretnosti="" doseglo="" je="" 103,3="" posto,="" odnosno="" 93,4="" posto="" onih="" u="" kontrolnoj="" skupini,="" dok="" su="" vremena="" nepokretnosti="" skupina="" tg-phg,="" tg-irg="" i="" ht="" upravo="" je="" dosegao="" 62,1="" posto,="" 73,2="" posto="" i="" 69,9="" posto="" onih="" iz="" kontrolne="" skupine.="" slična="" značajna="" povećanja="" (p="">< 0,05)="" primijećena="" su="" u="" ukupnoj="" prijeđenoj="" udaljenosti="" i="" broju="" uzgoja="" u="" oft-u="" nakon="" primjene="" cte,="" tg="" i="" ht,="" a="" liječenje="" tg-phg="" i="" tg-irg="" imalo="" je="" tendenciju="" prema="" reviziji="" broja="" uzgoja="" kod="" cums="" štakora.="" rezultati="" su="" pokazali="" da="" je="" tg="" dominantna="" bioaktivna="" antidepresivna="" frakcija="" odvojena="" od="" cte,="" a="" feniletanoidni="" i="" iridoidni="" glikozidi="" bili="" su="" nezamjenjivi="" u="" ispoljavanju="" njegovog="" antidepresivnog="" učinka.="" štoviše,="" dokazano="" je="" da="" je="" ht="" jedan="" od="" aktivnih="" metabolita="" tg="" in="">
Dosljedno, bolovanje od CUMS značajno je povećalo razine CORT, CRF, ACTH, TNF-, IL-1 i IFN- u serumu i TNF- u hipokampusu štakora u usporedbi s onima iz kontrolne skupine (p< 0.05),="" resulting="" in="" significant="" reductions="" (p="" <="" 0.05)="" in="" the="" levels="" of="" hippocampal="" 5-ht="" and="" bdnf="" (fig.="" 3).="" except="" for="" a="" non-significant="" difference="" in="" the="" level="" of="" hippocampal="" bdnf="" between="" flx="" and="" cums="" groups,="" the="" above-mentioned="" alterations="" in="" cums="" rats="" could="" be="" significantly="" reversed="" (p="" <="" 0.05)="" after="" administration="" of="" fluoxetine,="" cte,="" tg,="" and="" ht,="" indicating="" that="" cte,="" tg,="" and="" ht="" showed="" ameliorative="" effects="" on="" the="" hyperactivation="" of="" hpa="" axis,="" severe="" peripheral="" and="" neural="" inflammation,="" and="" deficiencies="" in="" 5-ht="" and="" bdnf.="" likewise,="" tg-irg="" and="" tgphg="" treatment="" significantly="" reduced="" the="" levels="" of="" serum="" cort,="" tnf-α,="" ifn-γ,="" and="" hippocampal="" tnf-α,="" and="" increased="" the="" level="" of="" hippocampal="" 5-ht="" in="" cums="" rats="" (p="" <="" 0.05).="" significant="" decreases="" (p="" <="" 0.05)="" in="" the="" levels="" of="" serum="" crf="" and="" acth="" were="" also="" observed="" in="" the="" tg-irg="" group="" compared="" with="" cums="" group.="" interestingly,="" the="" levels="" of="" serum="" cort,="" tnf-α,="" acth,="" and="" crf="" in="" tg-phg="" and="" tg-irg="" groups="" were="" significantly="" higher="" than="" those="" in="" the="" tg="" group="" (p="" <="" 0.05),="" and="" the="" levels="" of="" hippocampal="" 5-ht="" and="" bdnf="" exhibited="" the="" opposite="" expression="" pattern="" (p="" <="" 0.05).="" these="" results="" showed="" that="" the="" effects="" of="" tg-phg="" and="" tg-irg="" on="" the="" hyperactivity="" of="" the="" hpa="" axis,="" peripheral="" and="" neural="" inflammation="" and="" shortage="" of="" 5-ht="" were="" clearly="" inferior="" to="" tg,="" indicating="" that="" phenylethanoid="" and="" iridoid="" glycosides="" might="" exert="" synergistic="" effects="" on="" the="" above-mentioned="" multiple="">
TG i HT reguliraju HPG osovinu i metabolizam cikličkih nukleotida u CUMS štakora
Izmjerene su razine T, GnRH, cAMP i cGMP te omjer cAMP i cGMP (cAMP/cGMP) u serumu podvrgnutom CUMS-u, a rezultati su prikazani u Tablici 4. Koncentracije T, GnRH, cAMP, i cAMP/cGMP u serumu bili su značajno smanjeni, a razina cGMP-a bila je značajno povećana (p < 0.05)="" u="" cums="" skupini="" u="" usporedbi="" s="" kontrolama,="" što="" ukazuje="" da="" je="" podvrgavanje="" cums-u="" rezultiralo="" supresija="" hpg="" osi="" i="" disfunkcija="" metabolizma="" cikličkih="" nukleotida.="" u="" usporedbi="" sa="" skupinom="" cums,="" nije="" bilo="" značajnih="" promjena="" u="" skupini="" flx.="" iznenađujuće,="" nakon="" liječenja="" tg="" i="" ht,="" značajno="" povećanje="" (p="">< 0.05)="" prikazano="" je="" u="" razinama="" serumskog="" t,="" gnrh,="" camp="" i="" camp/cgmp,="" dok="" je="" razina="" serumskog="" cgmp="" bila="" značajno="" smanjena="" (p="">< 0,05).="" ovi="" rezultati="" su="" pokazali="" da="" tg="" i="" ht="" reguliraju="" hpg="" osovinu="" i="" metabolizam="" cikličkih="" nukleotida,="" što="" je="" bilo="" izrazito="" bolje="" od="" pozitivne="" kontrole="">
Slika 3. Učinci različitih frakcija obogaćenih glikozidima i HT na razine CORT, ACTH, CRF, TNF-, IL-1, IFN- u serumu i 5-HT, BDNF, TNF- u hipokampusu CUMS štakora.
TG i HT ublažavaju upalu niskog stupnja u debelom crijevu i poremećaj crijevne barijere u CUMS štakora
Bojanje H&E korišteno je za procjenu morfološkog oštećenja debelog crijeva i nisu primijećene značajne razlike u debelom crijevu među eksperimentalnim skupinama (slika 4a). Nadalje, također su analizirani učinci TG i HT na upalu u debelom crijevu i poremećaj crijevne barijere (Slika 4b-d). U usporedbi s onima iz kontrolne skupine, broj vrčastih stanica i debljina sloja sluzi smanjeni su u skupini CUMS. Dosljedno, ekspresija proteina ZO-1 i razine IFN-a i TNF-a u debelom crijevu bile su značajno smanjene (p < 0.05)="" i="" povećane="" (p="">< {="" {13}}.05),="" respektivno,="" što="" sugerira="" da="" je,="" iako="" nije="" inducirano="" očito="" histološko="" oštećenje,="" podvrgnuto="" cums-u="" rezultiralo="" upalom="" niskog="" stupnja="" u="" debelom="" crijevu="" i="" poremećajem="" crijevne="" barijere.="" nakon="" liječenja="" fluoksetinom,="" tg="" i="" ht="" povećan="" je="" broj="" vrčastih="" stanica="" i="" debljina="" sloja="" sluzi,="" a="" značajno="" su="" smanjene="" razine="" ifn-a="" i="" tnf-a="" u="" debelom="" crijevu="" (p="">< 0,05).="" osim="" toga,="" tg="" i="" ht="" značajno="" su="" povećali="" (p="">< 0,05)="" ekspresiju="" proteina="" zo-1="" na="" razinu="" sličnu="" onoj="" u="" kontrolnoj="" skupini.="" ovi="" rezultati="" su="" pokazali="" da="" tg="" i="" ht="" mogu="" ublažiti="" upalu="" niskog="" stupnja="" u="" debelom="" crijevu="" i="" poremećaj="" crijevne="" barijere="" u="" cums="">
Tablica 4 Učinci TG, HT ili fluoksetina na hormone povezane s HPG osovinom i indekse povezane s metabolizmom nukleotida u serumu CUMS štakora.
Učinci TG i HT na sastav crijevne mikrobiote
Nakon uklanjanja nekvalificiranih sekvenci, dobiveno je ukupno 1.874.721 efektivnih čitanja. Rezultati alfa raznolikosti (Slika 5a) i beta raznolikosti (Slika 5b) pokazali su da iako se bogatstvo (Chao) i raznolikost (Shannon) crijevne mikrobiote u sadržaju cekuma ne razlikuju, ukupna struktura crijevne mikrobiote u dijagram analize glavnih koordinata (PCoA) pokazao je upečatljivu razliku između kontrolne i CUMS skupine. Štoviše, tretman TG i HT značajno je povećao bakterijsko bogatstvo CUMS štakora i inducirao značajne razlike u dijagramu PCoA u usporedbi s onima CUMS štakora, pokazujući jasne sličnosti s kontrolama, posebno kada je TG testiran.
Taksonomske promjene u mikrobioti dodatno su potvrdile da je TG izvršio dramatičan regulatorni učinak na sastav crijevne mikrobiote. Nakon primjene TG, brojnost većine izmijenjenih svojti u CUMS štakorima je preokrenuta na razinu sličnu onoj u kontrolnoj skupini. Značajno smanjenje (14,2 posto, p < 0.05)="" i="" obogaćivanje="" (53,6="" posto,="">< 0.05)="" in="" the="" abundances="" of="" the="" phylum="" firmicutes="" and="" bacteroidetes="" were="" observed="" in="" the="" tg="" group="" compared="" with="" cums="" group="" (fig.="" 5c),="" respectively.="" consistently,="" at="" the="" family="" level="" (supplementary="" table="" s4),="" tg="" decreased="" the="" abundances="" of="" ruminococcaceae="" (phylum="" firmicutes)="" and="" peptococcaceae="" (phylum="" firmicutes)="" by="" 33.9%="" and="" 82.9%,="" respectively,="" compared="" with="" cums="" group="" (p="" <="" 0.05).="" conversely,="" significant="" enrichments="" in="" the="" abundances="" of="" family="" erysipelotrichaceae="" (phylum="" firmicutes,="" 78.4%,="" p="" <="" 0.05)="" and="" muribaculaceae="" (phylum="" bacteroidetes,="" 77.3%,="" p="" <="" 0.05)="" existed="" in="" tg="" group.="" consistently="" at="" the="" genus="" level="" (fig.="" 5d),="" the="" abundances="" of="" anaerotruncus,="" harryflintia,="" ruminiclostridium_9,="" unclassified_f_ruminococcaceae="" (members="" of="" the="" family="" ruminococcaceae),="" and="" peptococcus="" (a="" member="" of="" the="" family="" peptococcaceae)="" were="" significantly="" decreased="" while="" norank_f_erysipelotrichaceae,="" allobaculum,="" dubosiella="" (members="" of="" the="" family="" erysipelotrichaceae)="" and="" norank_f_muribaculaceae="" (a="" member="" of="" the="" family="" muribaculaceae)="" displayed="" higher="" abundances="" in="" tg="" group="" than="" those="" of="" cums="" group="" (p="">< 0.05).="" in="" addition,="" tg="" decreased="" the="" abundances="" of="" tyzzerella_3,="" acetatifactor,="" and="" norank_f_lachnospiraceae="" assigned="" to="" the="" family="" lachnospiraceae="" (p="" <="" 0.05),="" although="" the="" abundance="" of="" the="" family="" lachnospiraceae="" was="" similar="" across="" all="" experimental="" groups.="" unlike="" tg,="" ht="" decreased="" the="" abundances="" of="" partially="" altered="" taxa="" induced="" by="" cums,="" including="" the="" family="" ruminococcaceae,="" 3="" genera="" (anaerotruncus,="" harryflintia,="" and="" ruminiclostridium_9)="" assigned="" to="" the="" family="" ruminococcaceae="" and="" 2="" genera="" (tyzzerella_3,="" acetatifactor)="" assigned="" to="" the="" family="" lachnospiraceae.="" additionally,="" converse="" variations="" were="" observed="" in="" the="" abundances="" of="" ruminococcaceae_ucg_013="" and="" streptococcus="" in="" the="" ht="" group.="" these="" results="" indicated="" that="" tg="" and="" ht="" exerted="" clear="" differences="" in="" the="" regulation="" of="" gut="" microbiota="" composition,="" and="" the="" effect="" of="" tg="" was="" superior="" to="" that="" of="" tg="" especially="" in="" altering="" the="" genera="" assigned="" to="" the="" family="" erysipelotrichaceae,="" peptococcaceae,="" and="">
Slika 4. Učinci TG, HT ili fluoksetina na morfološke promjene, ekspresiju proteina ZO-1, koncentracije IFN- i TNF- u debelom crijevu CUMS štakora.
Korelacijska analiza promijenjenih mikrobnih rodova na koje utječu TG i HT, hormoni povezani s HPA osovinom, proupalni citokini, 5-HT i BDNF
Kako bi se razjasnile povezanosti između promjena u sastavu crijevne mikrobiote na koje utječu TG i HT, i odgovarajućih osobina povezanih s depresijom, provedena je Spearmanova korelacijska analiza. Kao što je prikazano na slici 6, razine 5-HT i BDNF u hipokampusu bile su samo u značajnoj pozitivnoj korelaciji s norank_f_Muribaculaceae. Inače, jasne korelacije mogle bi se identificirati između izmijenjenih mikrobnih rodova i hormona povezanih s HPA osi. Konkretno, Dubosiella, norank_f_Muribaculaceae, norank_f_ Erysipelotrichacea i Peptococcus bili su snažno povezani s funkcijom HPA osi. Serumski CORT, CRF i ACTH imali su negativne korelacije s Dubosiella, norank_f_Muribaculaceae i norank_f_Erysipelotrichacea, a pozitivne povezanosti s Peptococcusom. Nadalje, Dubosiella i norank_f_ Erysipelotrichacea pokazale su negativnu povezanost s IFN-om debelog crijeva i hipokampalnim TNF-om, dok su slični odnosi postojali u Allobaculum, Harryfinita i serumu i hipokampalnom TNF-u, kao i u noranku _f_Lachnospiracea, te serumski IFN- i TNF- . Nasuprot tome, Peptococcus je bio pozitivno povezan s TNF-om debelog crijeva i TNF-om u serumu. Slično, norank_f_Muribaculaceae bio je pozitivno povezan sa serumskim IFN- i TNF-. Ovi rezultati pokazuju da su promijenjeni mikrobni rodovi, posebno određeni rodovi koji pripadaju obitelji Erysipelotrichaceae, Peptococcaceae i Muribaculaceae, na koje TG posebno utječe, pokazali snažnu povezanost s hormonima povezanim s HPA osovinom i proupalnim citokinima istovremeno, pokazujući kritičnu ulogu crijevne mikrobiote u regulaciji funkcije HPA osi i upale.
cistanche propiedades
TG i HT inhibiraju metabolizam triptofan-kinurenina u CUMS štakora
Utvrđeni su učinci TG i HT na razine triptofana i kinurenina u serumu štakora, kao i ekspresiju IDO1 u debelom crijevu i hipokampusu. Kao što je prikazano na slikama 7 i 8, u usporedbi s onom u kontrolnoj skupini, razina triptofana u serumu bila je značajno smanjena u skupini CUMS, za razliku od povećane razine kinurenina i omjera kinurenina i triptofana (Kyn /Trp) i ekspresiju proteina IDO1 u debelom crijevu i hipokampusu. U usporedbi s CUMS skupinom, serumski Kyn/Trp u FLX skupini bio je značajno smanjen (str< 0.05).="" tg="" and="" ht="" treatment="" resulted="" in="" a="" significant="" increase="" in="" the="" serum="" tryptophan="" level="" in="" cums="" rats="" (p="" <="" 0.05),="" and="" a="" decrease="" in="" the="" levels="" of="" serum="" kynurenine="" and="" kyn/trp="" (p="" <="" 0.05).="" in="" addition,="" tg="" significantly="" inhibited="" the="" expression="" of="" ido1="" protein="" in="" the="" colon="" of="" cums="" rats="" (p="" <="" 0.05),="" while="" a="" non-significant="" difference="" in="" the="" expression="" of="" ido1="" protein="" in="" the="" hippocampus="" was="" observed="" between="" cums="" and="" tg="" groups.="" however,="" the="" effect="" of="" ht="" on="" the="" expression="" of="" ido1="" protein="" in="" the="" colon="" and="" hippocampus="" was="" contrary="" to="" that="" of="" tg,="" indicating="" that="" tg="" and="" ht="" inhibited="" tryptophan-kynurenine="" metabolism="" by="" decreasing="" the="" expression="" of="" ido1="" in="" the="" colon="" and="" hippocampus="" of="" cums="" rats,="">
Slika 5. Analiza raznolikosti, sastava i razlika crijevne mikrobiote u uzorcima cekuma.
Rasprava
U ovoj su studiji dva različita životinjska modela korištena za provjeru bioaktivnih spojeva u CT-u koji po prvi put ublažavaju ponašanja slična depresiji. TP i TO su najvjerojatnije bili neučinkoviti sastojci u CTE, dok je TG pokazao najveći potencijal u liječenju depresije. Dosadašnje studije o CT-u, kao i biljkama Cistanche, uglavnom su bile usmjerene na bioaktivnost feniletanoidnih glikozida s najvećim udjelom, a zanemarivale su važnost iridoidnih glikozida i drugih manje zastupljenih sastojaka. Zanimljivo je da je naša studija pokazala da feniletanoidni i iridoidni glikozidi pokazuju sinergističke učinke na hiperaktivnost HPA osi, teške periferne i neuralne upale i nedostatke hipokampalnog 5-HT i BDNF, što može biti kritični razlog za prednost antidepresiva učinak TG. Ovi rezultati dalje sugeriraju višekomponentne i višeciljane karakteristike biljnih lijekova i podsjećaju nas da sastojci s nižim razinama, čak i sastojci u tragovima, također mogu igrati ključnu ulogu u farmakološkim učincima.
Kronični stres izaziva hiperaktivnost HPA osi, što potiče pojavu depresije, kao i supresiju HPG osi putem smanjenog otpuštanja GnRH i/ili osjetljivosti hipofize na GnRH (Kirby i sur., 2009.). U međuvremenu, cAMP i cGMP su važna međusrednja čvorišta koja se oslanjaju na mnoge neurotransmitere i hormone da ispolje svoje fiziološke učinke (Siawrys et al., 2002.). Nedavne studije dosljedno pokazuju da je pojava nedostatka yanga bubrega usko povezana s disfunkcijom osovine hipotalamus-hipofiza-ciljna žlijezda (Zhang et al., 2019.). U sindromu bubrežno-yang deficijencije također su primijećena značajna smanjenja razina cAMP i cAMP/cGMP u serumu. U ovoj smo studiji otkrili da TG može inhibirati razine CORT, CRF i ACTH u serumu i povećati sadržaj T i GnRH u serumu kod CUMS štakora, što ukazuje na oporavak disfunkcije HPA i HPG osi nakon primjene TG. Uz to, TG je poništio značajno smanjenje razine cAMP/cGMP u serumu kod štakora podvrgnutih CUMS-u. Prema tome, potencijalni temeljni mehanizam CT-a u liječenju depresije i nedostatka yanga bubrega može biti djelomično sličan i zaslužuje daljnje istraživanje. Štoviše, proizvodnja seksualne želje i ponašanja složen je neuralni refleksni proces. Spolni hormoni glavni su izvori središnjeg seksualnog uzbuđenja, a nedostatak spolnih hormona može uzrokovati manju seksualnu želju ili seksualnu disfunkciju (Holloway i Wylie, 2015.). Konkretno, prekomjerna 5-HT inhibira otpuštanje GnRH, što je dominantan razlog za pojavu kronične seksualne disfunkcije nakon dugotrajnog liječenja SSRI-ima (Prasad i sur., 2015.). U našoj studiji, fluoksetin (predstavnik SSRI) nije bio učinkovit u disfunkciji HPG osi. Međutim, iako je TG značajno poboljšao razinu 5-HT u hipokampusu, također su uočene slične promjene u serumskim razinama T i GnRH, čime je poboljšana supresija HPG osi. Ovi rezultati pokazuju jasnu prednost CT-a u liječenju depresije, a intrinzični mehanizam odgovoran za ove učinke treba dalje proučavati.
Sve više dokaza pokazuje da su crijeva potencijalna meta za liječenje kroničnih bolesti korištenjem prirodnih spojeva niske bioraspoloživosti (Zhou et al., 2020.). Nedavna istraživanja (Wei et al., 2019.) pokazala su da liječenje CUMS-om uzrokuje promjene fekalnog mikrobioma i defekte crijevne barijere, što olakšava bakterijsku invaziju na sluznicu debelog crijeva i pogoršava upalne reakcije u debelom crijevu. U skladu s tim izvješćem, naši su rezultati pokazali da je 4 tjedna izloženosti CUMS-u izazvalo opsežno smanjenje broja vrčastih stanica i debljine sloja sluzi u debelom crijevu štakora, kao i početak poremećaja crijevne barijere predstavljenog povećanom propusnošću crijeva, što je određeno mjerenje proteina ZO-1. Osim toga, uočena je povećana ekspresija proupalnih čimbenika (kao što su TNF- i IFN-) u debelom crijevu. U skladu s tim, ovi su nalazi pokazali da iako nije inducirano očito histološko oštećenje, liječenje CUMS-om je pokrenulo upalu debelog crijeva i poremećaj crijevne barijere. Prethodne studije su izvijestile da je CT pokazao poboljšanu učinkovitost u prevenciji DSS-induciranog kolitisa kod miševa (Jia et al., 2014.). Nedosljedno, također se pokazalo da TG ublažava upalu niskog stupnja u debelom crijevu i poremećaj crijevne barijere CUMS štakora, što naglašava njegov potencijal za kliničko liječenje bolesti povezanih s upalom debelog crijeva.
Opsežna istraživanja također su pokazala da je odnos koji povezuje komenzalnu crijevnu mikrobiotu, HPA os i upalu složen i igra ključnu ulogu u razvoju depresije (Misiak, et al., 2020.). Promjene u sastavu crijevne mikrobiote mogu doprinijeti pojačanom otpuštanju citokina i sintezi malih bioaktivnih molekula (Du et al., 2020.). Određeni citokini (kao što je TNF-) mogu proći kroz krvno-moždanu barijeru i moćni su aktivatori HPA osi (Misiak et al., 2020.). S druge strane, hiperaktivacija HPA osi može doprinijeti disbiozi crijevne mikrobiote, kroničnoj upali debelog crijeva i promijenjenoj propusnosti crijeva (Misiak i sur., 2020.). U skladu s prethodnim studijama, modifikacija crijevne mikrobiote lijekovima s TG-om vjerojatno je odgovorna za njezine ublažavajuće učinke na depresiju. Uočili smo da je TG preokrenuo obilje mikrobnih svojti na različitim razinama kod štakora podvrgnutih CUMS-u na razinu sličnu onoj kod kontrola. Posebno je utvrđeno da su glavni promijenjeni rodovi koji pripadaju obitelji Peptococcaceae, Erysipelotrichaceae i Muribaculaceae visoko povezani s HPA osi i upalom. U skladu s našim rezultatima, objavljeno je da obitelji Peptococcaceae, Erysipelotrichaceae i Muribaculaceae igraju važnu ulogu u održavanju cjelovitosti mukozne barijere i pojavi upale (Kankoush, 2015.; Borton i sur., 2017.; Zhang i sur., 2020.). Stoga smo pretpostavili da bi TG mogao ublažiti brojnost nekih rodova koji se pripisuju obitelji Erysipelotrichacea, Peptococcaceae i Muribaculaceae, naknadno ublažavajući upalu niskog stupnja u debelom crijevu, hiperaktivnost HPA osi i poremećaj integriteta mukozne barijere. Zanimljivo je da je u našem istraživanju samo jedan rod pod nazivom nor{11}}f_Muribaculaceae bio u korelaciji s 5-HT i BDNF u hipokampusu. Specifični mehanizam odnosa ostaje nejasan i potrebno ga je dodatno ispitati. Inače, nalazi također sugeriraju da je većini promijenjenih rodova uzrokovanih TG izuzetno teško izravno utjecati na razine 5-HT u hipokampusu. Kako bismo objasnili kako promjene u sastavu crijevne mikrobiote utječu na razinu 5-HT hipokampusa nakon liječenja TG-om, zamršen odnos koji povezuje metabolizam triptofana, HPA os, upalne citokine i 5-HT zaokupio je našu pozornost. Triptofan je esencijalna aminokiselina za ljude i manje od 1 posto koristi se u sintezi proteina, a većinu (preko 90 posto) pretvaraju IDO1 i triptofan 2,3-dioksigenaza 2 (TDO2) u kinurenine i otprilike 5 posto ih pokreće triptofan hidroksilaza niz put serotonina (Duan, et al. 2018). Razina 5-HT u mozgu uvelike ovisi o perifernoj dostupnosti triptofana, s obzirom na to da se triptofan prenosi u mozak putem transportera neutralnih aminokiselina (Duan i sur., 2018.). IDO1, enzim koji ograničava brzinu u prvom koraku kinureninskog puta, prvenstveno je induciran IFN-om i drugim proupalnim citokinima, kao što su IL-1 i TNF- (Kennedy et al., 2017.), za koje se u našoj studiji pokazalo da su povezani s crijevnom mikrobiotom. Kao što je objavljeno, više se triptofana metabolizira kroz kinureninski put, čime se kompetitivno smanjuje pretvorba triptofana u 5-HT, i povezuje se sa smanjenim 5-HT koji se obično nalazi u depresiji (O'Mahony et al., 2015). Stoga su niže razine triptofana i više Kyn/Trp uobičajene i podudaraju se s povećanim rizikom od depresivnog raspoloženja. Nakon primjene TG, prekomjerna ekspresija IDO1 u debelom crijevu bila je inhibirana, što je rezultiralo povećanjem razine triptofana u serumu i smanjenjem Kyn/Trp u serumu, što je otkrilo potencijalnu vezu između crijevne mikrobiote i razine 5-HT hipokampusa na koju utječe TG. U međuvremenu, BDNF, član obitelji neurotrofina, neophodan je za diferencijaciju stanica, preživljavanje neurona, formiranje sinapsi i procese neuroplastičnosti u depresiji (Greenberg et al., 2009). Nedavne studije pokazale su da je BDNF usko povezan s funkcijom barijere crijevne sluznice i crijevnom mikrobiotom (Maqsood i Stone, 2016.). Također, zabilježeno je da promjene u crijevnoj mikrobioti imaju potencijal povećati razinu ekspresije BDNF-a i tako utjecati na razvoj ponašanja nalik depresiji (Du et al., 2020.). Međutim, slično 5-HT varijaciji, bilo je krajnje nemoguće za većinu promijenjenih rodova uzrokovanih TG u našoj studiji da izravno utječu na razine BDNF-a u hipokampusu, a intrinzičnu molekularnu vezu i mehanizam potrebno je dodatno ispitati.
Nasuprot tome, HT, metabolit TG-a iz crijevne mikrobiote, također je pokazao antidepresivni učinak u ovoj studiji, što je u skladu s njegovom povoljnom neuroprotektivnom aktivnošću (Hu et al., 2014.). Ono što je zabrinjavajuće, HT bi također mogao ublažiti proupalne citokine, hormone povezane s HPA i HPG osovinom i hipokampalne 5-HT koncentracije na razinu sličnu onoj u kontrolama kod CUMS štakora, dok je većina izmijenjenih mikrobnih rodova utjecala na HT-om imali su slabu korelaciju s gore navedenim fiziološkim indeksima, što sugerira da crijevna mikrobiota možda nije cilj antidepresivnog djelovanja HT-a. Nadalje, HT je potisnuo prekomjernu ekspresiju IDO1 u hipokampusu, ali ne i debelom crijevu, praćenu povišenim razinama triptofana u serumu. Pojava očitih razlika između TG i HT može biti posljedica izvrsne apsorpcije HT u krvotok i sposobnosti HT da prijeđe krvno-moždanu barijeru (Robles-Almazan i sur., 2018.), što također ukazuje da snažan metabolički kapacitet crijevne mikrobiote posebno je važan u antidepresivnom djelovanju TG, uz njegove fiziološke funkcije. Stoga smo preliminarno dokazali da dvosmjerna interakcija fitokemikalija i crijevne mikrobiote igra ključnu ulogu u liječenju depresije primjenom TG (kao što je prikazano na slici 9).
Cistanche dodaci prehraniigrati aključnu ulogu u liječenju depresije.
Zaključak
Ukratko, TG je bio uglavnom odgovoran za antidepresivno djelovanje CT-a, što se odražava u sinergističkim učincima feniletanoida i iridoidnih glikozida na hiperaktivaciju HPA osi, teške periferne i neuralne upale i nedostatke 5-HT i BDNF u hipokampus. Nadalje, potencijalni molekularni mehanizam antidepresivnog učinka TG postignut je dvosmjernom interakcijom fitokemikalija i crijevne mikrobiote. Osim toga, poboljšanje potisnute HPG osi i abnormalnosti cikličkih nukleotida od strane TG i HT, koji nisu bili regulirani liječenjem SSRI-ima predstavljenim fluoksetinom, ukazalo je na izrazitu prednost CT-a u liječenju depresije. Takve modulacije predstavljaju obećavajuću strategiju za liječenje depresije korištenjem CT-a i sličnih tradicionalnih biljnih lijekova.