Uvarak Tongluo Digui liječi oštećenje bubrega kod dijabetičkih štakora potičući autofagiju podocita

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

HAN Jiarui, ZHANG Yage, SHI Xiujie, PENG Zining, XING Yufeng, PANG Xinxin

Sažetak

CILJ:

Istražiti učinke dekokcije Tongluo Digui na ozljedu bubrega i autofagiju podocita izazvanu streptozotocinom u dijabetičkih štakora.

METODE:

Muški štakori Sprague-Dawley nasumično su podijeljeni u šest skupina: normalni, model, Tongluo Digui decoction (visoka, srednja i niska doza) i valsartan. Streptozotocin je ubrizgan intraperitonealno kako bi se replicirao dijabetički životinjski model. Nakon 8 tjedana, proteinurija je procijenjena da se uspostavi model dijabetičke nefropatije. Tretmani su primjenjivani svakodnevno intragastričnim putem. 16 tjedana nakon gavaže odredili smo 24-satnu koncentraciju proteina u mokraći, glukozu u krvi, kreatinin u serumu i koncentraciju dušika iz uree. Zatim su štakori žrtvovani, a bubrezi su sakupljeni i obojeni periodičnom kiselinom-Schiff da se procijene patološke promjene u glomerulima, uključujući glomerularne podocite transmisijskom elektronskom mikroskopijom. Western blot analiza korištena je za određivanje ekspresije nefrina, podocina, p62, beclin-1, LC3Ⅱ/Ⅰ i p-mTOR/mTOR proteina u tkivima bubrega.

REZULTATI:

U usporedbi s modelnom skupinom, dekokcija Tongluo Digui bila je povezana sa smanjenjem koncentracije proteina u 24-satnom urinu, glukoze u krvi, hemoglobina A1c, kreatinina u serumu, koncentracije dušika iz uree, ukupnog proteina u serumu i albumina. Istodobno, smanjeno je mezangijsko mezenterijsko širenje i spajanje nastavaka stopala, glomerularna bazalna membrana nije bila značajno zadebljana, a povećan je broj podocita i broj autofagosoma u podocitima. Nadalje, ekspresija proteina nefrina, podocina, LC3Ⅱ i beclin-1 proteina u tkivu bubrega bila je regulirana na gore, dok je ekspresija proteina p62 bila regulirana naniže, a fosforilacija mTOR inhibirana.

ZAKLJUČAK:

Uvarak Tongluo Digui može inhibirati napredovanje dijabetičke nefropatije inhibicijom mTOR fosforilacije, čime se povećava autofagija radi zaštite podocita i smanjuje proteinurija.

Ključne riječi:Dijabetičke nefropatije; autofagija; podocit; Uvarak Tongluo Digui

dobrobiti stabljike cistanchezabubrežna funkcija

UVOD

Dijabetička nefropatija (DN) jedna je od teških mikrovaskularnih komplikacija dijabetesa, pri čemu 30 posto -40 posto dijabetičara pati od bolesti bubrega. S porastom učestalosti dijabetesa, DN je postao glavni uzrok završnog stadija bubrežne bolesti u cijelom svijetu.1 To je težak ekonomski teret i za obitelji i za društvo.

Oštećenje podocita je važan uzrok progresije DN. Kao terminalno diferencirana stanica, autofagija igra važnu ulogu u održavanju fiziološke funkcije podocita.2,3 U normalnom fiziološkom stanju postoji visok stupanj autofagije unutar podocita koji uklanja oštećene proteine ​​i organele.4 Međutim, kod dijabetičara okolišu, autofagija podocita je inhibirana, što sugerira da autofagija podocita igra važnu ulogu u patogenezi DN.5 DN pripada kategorijama "Xiao Ke", "Guan Ge" i "edema" u tradicionalnoj kineskoj medicini. Teorija tradicionalne kineske medicine je da zastoj krvi iYin nedostataknajvažniji su uzroci DN-a.6 Stoga bi liječenje DN-a trebalo pospješiti cirkulaciju krvi i hraniti yin, a za to je uspostavljen Tongluo Digui decoction. Prethodno smo otkrili da je dekokcija Tongluo Digui imala povoljan učinak liječenja DN-a. U ovoj studiji, cilj nam je bio koristiti streptozotocinom (STZ) induciran tip 1 DN model štakora kako bismo procijenili učinak dekokcije Tongluo Digui na oštećenje bubrega, autofagiju i mTOR signalni put. Također smo istražili temeljni molekularni mehanizam dekokcije Tongluo Digui u odgađanju napredovanja DN-a i pružili dokaze za kliničku prevenciju i liječenje DN-a.

MATERIJALI I METODE

Životinje

Sprague-Dawley štakori bez specifičnih patogena (SPF) [n=60, mužjaci, (150 ± 10) g; potvrda o kvalifikaciji broj: SCXK (Yu) 2017-0001] kupljeni su od Henan Experimental Animal Center (Zhengzhou, Kina). Standardni ciklus osvjetljenja (14 sati svjetla, 10 sati noć), temperatura u zatvorenom prostoru (23 ± 2) stupnja, vlažnost (40 posto -50 posto), smještaj (tri životinje po kavezu) i hranjenje (sterilizirana hrana i korištena je voda za piće). Eksperiment je dovršen u Laboratoriju Centra za oslikavanje stanica Henan bolnice tradicionalne kineske medicine (Zhengzhou, Kina). Svi pokusi provedeni su prema vodiču za njegu i korištenje laboratorijskih životinja koji je objavio Nacionalni institut za zdravlje.

Droge

Kapsule valsartana (Val) kupljene su od Novartis Pharma Schweiz AG (X2307 CN-b, Peking, Kina). Tongluo Digui uvarak sastoji se od Shuichija (Hirudo) 12 g, Guijie (Carapax et Plastrum Testudinis) 30 g, Dihuanga (Radix Rehmanniae) 20 g, Huangqija (Radix Astragali Perparata) 20 g, Dangguija (Radix Angelicae Sinensis) 30 g, Zexie (Rhizoma) Alismatis) 10 g, Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) 15 g, Gancio (Radix Glycyrrhizae) 6 g. Kinesko bilje kupljeno je od bolnice tradicionalne kineske medicine Henan (Zhengzhou, Kina).

Eksperimentalni dizajn

Štakori su nasumično podijeljeni u šest skupina, od kojih se svaka sastojala od 10 štakora: kontrolna skupina (Ctrl), skupina DN modela (STZ), DN model s Val tretiranom skupinom (Val), DN model s Tongluo Digui decoction skupinom s visokom dozom tretmana (HTL) , DN model sa skupinom za liječenje Tongluo Digui dekokcijom sa srednjom dozom (MTL) i DN model sa skupinom za liječenje s niskom dozom Tongluo Digui decoction (LTL). Šest skupina štakora je žrtvovano 16 tjedana nakon što su sakupljeni sonda i bubrezi.

Val (10 mg·kg－1·d－1) i Tongluo Digui dekokcija u tri različite doze davani su putem sonde jednom dnevno tijekom 16 tjedana. Primijenjene doze temeljile su se na jednadžbi pretvorbe doza lijeka između životinja i ljudi. Doza za štakore (mg/kg)=doza za odrasle ljude (mg/kg) × faktor konverzije (6,25). Skupine s visokom, srednjom i niskom dozom Tongluo Digui decoctiona dobile su želučanu sondu od 5,4, 2,7 i 1,35 g·kg － 1·d － 1, redom. Štakori su vagani tjedno. 24-h urina prikupljen je korištenjem metaboličkih kaveza na kraju 0, 12 i 24 tjedna. Nakon završetka tretmana (24 tjedna), štakori su anestezirani supkutanom injekcijom kloralhidrata, a uzorci bubrega i krvnog tkiva sakupljeni su i pohranjeni na -80 stupnjeva. Štakori su imali slobodan pristup normalnoj prehrani laboratorijskih životinja i čistoj vodi (osim kako je opisano u nastavku).

biljka cistanča

Uspostava DN modela

STZ (Sigma, St. Louis, MO, SAD) korišten je za izazivanje dijabetesa kao što je prethodno opisano.7 Svih 60 štakora imalo je ograničen pristup vodi 12 sati prije pokusa. Od toga je 50 štakora dobilo jednu intraperitonealnu injekciju STZ 60 mg/kg otopljenog u citratnom puferu (0,1 mol/L, pH 4,5). Dijabetes je potvrđen mjerenjem koncentracije glukoze u krvi 72 sata nakon injekcije STZ. Životinje s koncentracijom glukoze većom ili jednakom 16,7 mmol/L tri uzastopna dana smatrane su dijabetičarima. Nakon 8 tjedana, štakori su smješteni u odvojene metaboličke kaveze, a urin je skupljan 24 sata za mjerenje mikroalbumina u mokraći (UAE). DN model je potvrđen dobivanjem UAE većeg ili jednakog 30 mg/24 h.

Biokemijski pokazatelji

Procjene seruma i urina korištene su za procjenu bubrežne funkcije životinja. Štakorski urin procijenjen je pomoću metaboličkog kaveza. Uzorci krvi štakora dobiveni su metodom rezanja repa.8 Uzorci seruma i urina zamrznuti su na -80 stupnjeva do upotrebe. Kreatinin u serumu, dušik uree u krvi, albumin i koncentracije proteina u mokraći mjereni su radioimunotestom. Razine hemoglobina A1c (HbA1c), C-peptida i inzulina mjerene su pomoću kompleta HbA1c ELISA (Crystal Chem INC, Elk Grove Village, IL, SAD), kompleta C-peptid Elisa (Kainuo Bio Ltd., Peking, Kina) i inzulina Elisa kit (Merck Millipore Co., Ltd., Bed ford, MA, SAD) prema uputama proizvođača. Mokraćna kiselina, ukupni serumski protein (TP), albumin (ALB), alanin aminotransferaza (ALT) i aspartat aminotransferaza (AST) u štakora određeni su automatskim biokemijskim analizatorom.

Histopatološki pregled

Bubrežno tkivo fiksirano formalinom umetnuto je u parafin, izrezano na rezove debljine 3-4 μm i obojeno periodnom kiselinom-Schiff (PAS). Morfološke promjene u tkivu bubrega, uključujući proliferaciju mezangijalnih stanica, staničnu infiltraciju i promjene mezangijalnog matriksa, ispitane su za svaki obojeni presjek svjetlosnim mikroskopom (NIKON D3100) (× 400).

Transmisijski elektronski mikroskop

TEM je korišten za promatranje morfologije podocita i mezangijalnih stanica u tkivu bubrega. Svježe tkivo bubrega podijeljeno je u blokove (< 1="" mm3="" ),="" were="" quickly="" fixed="" in="" 2%="" phosphate-buffered="" glutaraldehyde="" for="" at="" least="" 2="" h,="" washed="" three="" times="" with="" pbs,="" fixed="" in="" 1%="" osmium="" tetroxide="" for="" 2="" h,="" and="" then="" embedded="" in="" acetone="" wrap="" after="" dehydration.="" specimens="" were="" sliced="" in="" 50-60="" nm="" ultrathin="" sections,="" double-stained="" with="" 3%="" uranyl="" acetate="" and="" lead="" citrate,="" and="" then="" examined="" under="" a="" tem="" (jeol-jem-1400="" plus,="" japan="" electron="" optics="" laboratory,="">

Western blot analiza

Ukupni protein ekstrahiran je iz bubrežnog tkiva puferom za lizu proteina (Solarbio Biotech, Peking, Kina). Koncentracije proteina u supernatantu testirane su BCA test kitom (Solarbio Biotech, Peking, Kina, PC0020). Uzorci koji su sadržavali 40 ug proteina odvojeni su elektroforezom u 12 postotnom SDS-poliakrilamidnom gelu (SDS PAGE) (Applygen, Peking, Kina, B1004), a zatim prebačeni na nitroceluloznu filtarsku membranu (Solar bio Biotech, Peking, Kina). Nakon blokiranja s 5 posto obranog mlijeka na sobnoj temperaturi tijekom 2 sata, -aktin (Proteintech, broj artikla: 60008-1-lg), LC3II/I (Ab cam, broj artikla: ab48394), P62 (Proteintech, broj artikla: 18420-1-AP), beclin-1 (protein tech, broj stavke: 11306-1-AP), p-mTOR (CST, broj stavke: #5536), mTOR (CST, broj stavke: # 2983), nefrin (Abcam, broj stavke: ab58968) i podocin (svaki protein, broj stavke: 20384 -1-AP) dodani su i inkubirani na 4 stupnja preko noći. Ova smjesa je zatim isprana pet puta s TBS plus 0,05 posto Tween-20 (Solar bio Biotech, Peking, Kina) (TBS-T) 5 minuta prije dodavanja sekundarnog antitijela (1∶2000) prije inkubacije na sobnoj temperaturi 1 h, ispiranjem pet puta s TBST po 5 minuta, podvrgavanjem razvijanju boje s pojačanom kemiluminiscencijom (ECL, Millipore, Billerica, MA, SAD) i izlaganjem pomoću softvera ImageJ za analizu sivih tonova trake.

Statistička analiza

Podaci su analizirani korištenjem SPSS softvera (IBM SPSS Statistics for Windows, verzija 23.0. 2014, Armonk, NY, SAD). Razlike između skupina testirane su jednosmjernom analizom varijance nakon koje je slijedio Tukeyev test. Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija. P < 0,05="" smatra="" se="">

luteolin

REZULTATI

Zaštitni učinak dekokcije Tongluo Digui na DN bubrege štakora

Biokemijski pokazatelji kao što su glukoza u krvi, glikirani hemoglobin, serumski kreatinin, koncentracija dušika u urei u krvi i {{0}}satna koncentracija proteina u mokraći mjereni su 16 tjedana nakon sonde. (Stol 1). Rezultati su pokazali da su u usporedbi s normalnom skupinom, glukoza u krvi, glikirani hemoglobin, serumski kreatinin, koncentracija dušika ureje u krvi, 24-satna koncentracija proteina u mokraći, TP i ALB bili značajno viši u modelnoj skupini (P < {{="" 7}}.01),="" što="" ukazuje="" da="" je="" modelna="" skupina="" imala="" oslabljenu="" funkciju="" bubrega.="" u="" val="" skupini="" smanjene="" su="" i="" koncentracija="" kreatinina="" u="" serumu="" i="" koncentracija="" proteina="" u="" 24-satnom="" urinu="" (p="">< 0,05).="" štoviše,="" u="" skupini="" s="" visokom="" dozom="" dekokta="" tongluo="" digui="" primijećeno="" je="" značajno="" smanjenje="" koncentracije="" glukoze="" u="" krvi,="" hba1c,="" serumskog="" kreatinina="" i="" dušika="" iz="" uree,="" kao="" i="" 24-satnog="" izlučivanja="" mokraćom="" (p=""><0,01). ovi="" su="" učinci="" bili="" ovisni="" o="" dozi.="" nije="" bilo="" značajnih="" razlika="" u="" razinama="" mokraćne="" kiseline,="" inzulina,="" alt="" i="" ast="" u="" svakoj="" skupini="" štakora.="" uzevši="" zajedno,="" naši="" nalazi="" su="" pokazali="" da="" je="" dekokcija="" tongluo="" digui="" ublažila="" oštećenje="" bubrega="" i="" poboljšala="" bubrežnu="" funkciju="" kod="" dn="" štakora="" na="" način="" ovisan="" o="">

Promjene u DN bubrežnoj patologiji štakora procijenjene su PAS bojenjem nakon tretmana dekokcijom Tongluo Digui (Slika 1). U usporedbi s normalnom skupinom, primijećen je značajan porast u glomerularnim mezangijskim stanicama i mezangijskoj stromi zajedno s proširenjem mezangijalnog područja u modelnoj skupini. Glomerularno mezangijsko područje povećalo se u svakoj od tri razine doze dekokcije Tongluo Digui iu Val skupini. Nadalje, ove četiri terapijske skupine imale su smanjenu širinu mezangijskog matriksa u usporedbi s modelnom skupinom, a glomerularno mezangijsko područje u skupini koja je primala visoku dozu Tongluo Digui decoction bilo je manje nego u Val skupini. Ovi su nalazi pokazali da je dekokcija Tongluo Digui odgodila napredovanje DN glomerularnih lezija.

Učinak dekokcije Tongluo Digui na ozljedu glomerularnih podocita u DN štakora

Western blot analiza korištena je za određivanje ekspresije proteina markera podocita nefrina i podocina (Slika 2). U usporedbi s normalnom skupinom, ekspresija oba proteina u modelnoj skupini bila je značajno smanjena (P < 0.01),="" što="" ukazuje="" na="" oštećenje="" podocita.="" osim="" toga,="" ekspresija="" nefrina="" i="" podocina="" bila="" je="" pojačano="" u="" skupinama="" koje="" su="" primale="" dekokciju="" tongluo="" digui="" u="" usporedbi="" s="" modelnom="" skupinom="" (p=""><>

Učinak dekokcije Tongluo Digui na autofagiju glomerularnih podocita kod DN štakora

Promjene u autofagosomima u glomerularnim podocitima opažene su pod TEM (Slika 3). Rezultati su pokazali autofagosome u glomerularnim podocitima normalne skupine. Autofagosomi podocita su bili odsutni u modelnoj skupini, a nestali su i nožni procesi podocita. U tri skupine s dozom Tongluo Digui decoction i skupini s valsartanom, promatrali smo autofagosome glomerularnih podocita, što je sugeriralo da Tongluo Digui decoction pojačava autofagiju podocita u DN štakora. Western blot korišten je za otkrivanje ekspresije proteina P62, beclin-1 i LC3 Ⅱ povezanih s autofagijom (Slika 4). U usporedbi s normalnom skupinom, ekspresija beclin-1 i LC3Ⅱ u skupini modela bila je značajno smanjena (P < 0.01),="" dok="" je="" ekspresija="" p62="" bila="" značajno="" povećana="" (p="">< 0.01).="" ovi="" nalazi="" su="" pokazali="" da="" je="" autofagija="" bila="" oslabljena="" u="" dn="" štakora.="" u="" usporedbi="" s="" modelnom="" skupinom,="" skupina="" koja="" je="" primala="" visoku="" dozu="" uvarka="" tongluo="" digui="" imala="" je="" naviše="" reguliranu="" ekspresiju="" beclin-1="" i="" lc3ⅱ="" (p="">< 0,05),="" zajedno="" s="" niže="" reguliranom="" ekspresijom="" p62.="" zajedno,="" ovi="" rezultati="" su="" pokazali="" da="" zaštitni="" učinak="" tongluo="" digui="" decoctiona="" na="" bubrege="" kod="" štakora="" s="" dn="" može="" biti="" povezan="" s="" pojačanom="" autofagijom="" u="" bubrežnim="">

Uvarak Tongluo Digui pojačava autofagiju glomerularnih podocita kod DN štakora inhibicijom fosforilacije mTOR

Inhibicija fosforilacije mTOR pojačava autofagiju (Slika 5). U usporedbi s normalnom skupinom, fosforilacija mTOR-a u modelnoj skupini bila je pojačana (P < 0.01),="" dok="" je="" u="" skupinama="" koje="" su="" primale="" dekokciju="" tongluo="" digui="" bila="" inhibirana="" (p=""><0,05). to="" je="" sugeriralo="" da="" dekokcija="" tongluo="" digui="" pojačava="" autofagiju="" podocita="" inhibicijom="" aktivacije="" mtor="" signalnog="" puta.="" prethodne="" studije="" pokazale="" su="" da="" autofagija="" štiti="" podocite="" i="" poboljšava="" rad="">

RASPRAVA

DN uglavnom karakteriziraju znakovi i simptomi kao što su prisutnost proteina u mokraći, visoka razina glukoze u krvi, polidipsija, polifagija i poliurija. Simptomi su slični onima tradicionalne kineske medicine, kao što su "Xiao Ke", "Guan Ge" i "edem". Pojava i razvoj DN neodvojivi su od patološke osnove nedostatka yina i zastoja krvi.6 Razvojem nedostatka yina i zastoja krvi bubreg se postupno oštećuje, čime dolazi do gubitka proteina u urinu, što dalje dovodi do stvaranja mikrotromba i fibroza bubrega. Bolesnici s DN-om neizbježno pate od završnog stadija bubrežne bolesti.11

Uvarak Tongluo Digui utemeljio je Zhang Binghou, poznati liječnik kineske tradicionalne medicine, a na temelju njegovog dugogodišnjeg iskustva u liječenju DN.12, 13 Uvarak Tougluo Digui sastoji se od Shuichija (Hirudo), Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis), Dihuang (Radix Rehmanniae), Huangqi (Radix Astragali Perparata), Danggui (Radix Angelicae Sinensis), Ze Xie (Rhizoma Alismatis), Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei), Gancio (Radix Glycyrrhizae). Među njima, Shuizhi (Hirudo) i Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) su monarch lijekovi, za koje vjerujemo da igraju ulogu u hranjenju Yina i promicanju cirkulacije krvi u DN. Guijia (Carapax et Plastrum Testudinis) poboljšava tjelesni imunitet i sekrecijsko stanje te odgađa starenje.14 Shuizhi (Hirudo) ima antikoagulantne, antitumorske, protuupalne i antifibrotičke učinke među ostalim farmakološkim djelovanjima i može poboljšati bubrežne patološke promjene u DN značajno smanjuju serumski kreatinin i koncentracije dušika iz uree u krvi, te smanjuju izlučivanje proteina mokraćom.15,16 U DN, ozljeda podocita igra važnu ulogu u barijeri filtracije glomerularne bazalne membrane i u stvaranju proteinurije.17 Nefrin i podocin su proteini pore-membrane na površini podocita. Dva proteina međusobno djeluju kako bi formirali kompleks koji igra ključnu ulogu u funkciji barijere glomerularne filtracije.18 Abnormalna distribucija ekspresije proteina dovodi do različitih stupnjeva proteinurije.19 U ovoj studiji, STZ-inducirani tip 1 DN štakori pokazali su porast kod izlučivanja bjelančevina mokraćom i oslabljene funkcije bubrega tijekom 24 sata. Štoviše, PAS bojanje pokazalo je da se broj mezangijalnih stanica i mezangijalnog matriksa povećao u skupini modela, što ukazuje da je model uspješno uspostavljen. Različite doze dekokcije Tongluo Digui smanjile su koncentracije proteina u 24-satnom urinu i kreatinina u serumu i poboljšale bubrežnu patologiju DN štakora sa smanjenim mezangijalnim stanicama i matriksom. Western blot analiza pokazala je da je ekspresija nefrina i podocina u Tongluo Digui decoction skupini bila viša u usporedbi s onom u modelnoj skupini, što ukazuje da ova formula odgađa napredovanje DN u štakora štiteći podocite.

Autofagija je put za razgradnju lizosomalnih proteina u stanicama i igra ključnu ulogu u uklanjanju oštećenih ili prekomjerno izraženih proteina koji održavaju homeostazu i cjelovitost stanice.20 Autofagija je sastavni dio homeostaze lizosoma podocita u dijabetesu, a pojačana autofagija može smanjiti ozljede podocita .5 Nakon specifičnog izbacivanja gena Atg5 povezanog s autofagijom u podocitima, miševi su postupno pokazali sveprisutnu agregaciju proteina, oštećenje mitohondrija i aktivnost autofagije u podocitima; podociti su se oštetili, a nožni nastavak je nestao i spojio se, što je ukazivalo na održanu autofagiju. Održavanje normalne funkcije podocita je važno.21,22 U ovoj smo studiji istražili učinak dekokcije Tongluo Digui na autofagiju u glomerularnim podocitima koristeći TEM i Western blot analizu. TEM je pokazao da se broj autofagosoma podocita u svakoj skupini koja je dozirala dekokciju Tongluo Digui povećao u usporedbi s modelnom skupinom. Štoviše, Western blot je pokazao ekspresiju proteina LC3, beclin-1 i p62 povezanih s autofagijom. U usporedbi s modelnom skupinom, ekspresija LC3Ⅱ i beclin-1 značajno je povećana u skupini koja je primala dekokciju Tongluo Digui, dok je ekspresija proteina p62 značajno smanjena. Ovi nalazi su pokazali da je dekokcija Tongluo Digui povećala razinu autofagije u glomerularnim podocitima.

Ciljni protein rapamicina (mTOR) jedan je od glavnih regulatora autofagije.23 Široko je rasprostranjen u korteksu bubrega i meduli i igra ulogu u razvoju oštećenja DN podocita.24,25 U situacijama visoke glukoze i stresa, mTOR se aktivira i fosforilira, što dovodi do fosforilacije njegovih nizvodnih ciljeva i inhibicije autofagije. Liu i suradnici 26 pokazali su da se mTOR inhibitor, rapamicin, specifično veže za mTOR kinazu i inhibira aktivnost mTOR-a, pojačava autofagiju podocita i štiti funkciju bubrega. Otkrili smo da je fosforilacija mTOR-a bila pojačana u modelnoj skupini i da je dekokcija Tongluo Digui inhibirala ovaj proces, što je sugeriralo da dekokcija Tongluo Digui pojačava autofagiju u podocitima i može inhibirati aktivaciju signalnog puta mTOR-a.

Ukratko, dekokcija Tongluo Digui može inhibirati autofagiju u podocitima, zaštititi glomerularne podocite, održati integritet membrane glomerularne filtracije, smanjiti 24-satno izlučivanje proteina urinom i odgoditi progresiju DN inhibicijom aktivacije mTOR. Ova otkrića daju uvid u daljnje razumijevanje zaštitnog učinka dekokcije Tongluo Digui kod DN, međutim, temeljni mehanizam koji je uključen tek treba razjasniti.

što je cistancheza bolesti bubrega

REFERENCE
1 Tesch GH. Dijabetička nefropatija - je li to imunološki poremećaj? Clin Sci 2017; 131(16): 2183-2199.
2 Li JJ, Kwak SJ, Jung DS, et al. Biologija podocita u dijabetičkoj nefropatiji. Kidney Int Suppl 2007; (106): S36-S42.
3 Liu N, Xu L, Shi Y, Zhuang S. Autofagija podocita: potencijalni terapeutski cilj za sprječavanje progresije dijabetičke nefropatije. J Diabetes Res 2017; 2017(4): 1-6.
4 Mizushima N, Komatsu M. Autofagija: obnova stanica i tkiva. Ćelija 2011; 147(4): 728-741.
5 Tagawa A, Yasuda M, Kume S, et al. Poremećena autofagija podocita pogoršava proteinuriju kod dijabetičke nefropatije. Dijabetes 2016; 65(3): 755-767.
6 Sun C, Xie QY, Meng QG. Studija o zakonu distribucije TCM sindroma dijabetičke nefropatije. Peking Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao 2015.; 38(4): 266-270.
7 Szkudelski T. Mehanizam djelovanja aloksana i streptozotocina u B stanicama gušterače štakora. Physiol Res 2001; 50(6):537-546.
8 Dang WY, Hou LY, Wu HM, Yan XM, Zheng XF, Hao J. Učinkovitost dekokcije Qingre Lishi Yishen na glomerularnu fibrozu imunoglobulinske A nefropatije u modelu štakora. J Tradit Chin Med 2019; 39(4): 516-523.
9 Lu MK, Gong XG, Guan KL. mTOR u funkciji podocita: je li rapamicin dobar za dijabetičku nefropatiju? Stanični ciklus 2011; 10(20): 3415-3416.
10 Hartleben B, Godel M, Meyer-Schlesinger C, et al. Autofagija utječe na osjetljivost na glomerularnu bolest i održava homeostazu podocita u starim miševima. J Clin Invest 2010; 120(4): 1084-1096.
11 Sun GD, Li CY, Cui WP, et al. Pregled biljne tradicionalne kineske medicine za liječenje dijabetičke nefropatije. J Diabetes Res 2016; 2016: 5749857.
12 Zhao WJ, Cai Z, Meng Y, et al. Primjena Zhang Binghouove Yin metode hranjivog bubrega u liječenju kronične bolesti bubrega. Peking Zhong Yi Yao 2016.; 35(4): 341-343.
13 Duan YF, Zhang HB. Predstavljanje iskustva primjene profesora Zhang Binghoua. Xin Zhong Yi 2012.; 44 (4): 147-149.
14 Yu XJ, Chen SH, Lu GY. Pregled istraživanja o farmakodinamici kornjačevine "Ziyin Bushen". Dang Dai Yi Xue 2009; 15(10): 15-17.
15 Pang XX, Tong Y, Li HP, Han JR. Napredak istraživanja pijavice i njezinih ekstrakata u liječenju dijabetičke nefropatije. Guang Ming Zhong Yi 2019.; 34(1): 168-171.
16 Zhang ZL, Dong H. Napredak istraživanja pijavice i njezinih aktivnih sastojaka u liječenju dijabetičke nefropatije Zhong Xi Yi Jie He Yan Jiu 2018.; 10(02): 106- 110.
17 Dai H, Liu Q, Liu B. Napredak istraživanja o mehanizmu smanjenja podocita kod dijabetičke nefropatije. J Diabetes Res 2017; 2017: 2615286.
18 Martin CE, Jones N. Nefrinsko signaliziranje u podocitu: ažurirani pogled na regulaciju signala na dijafragmi s prorezom i šire. Front Endocrinol (Lausanne) 2018; 9: 302.
19 Jaakko P, Karl T. Molekularni sastav barijere glomerularne filtracije. Biochem Bioph Res Co 2010; 396(1): 164-169.
20 Noboru M, Beth L, Ana Maria C, Klionsky DJ. Autofagija se bori protiv bolesti putem stanične samoprobave. Priroda 2008.; 451(7182): 1069.
21 Lenoir O, Jasiek M, Henrique C, et al. Endotelna stanica
i autofagija podocita sinergistički štite od glomeruloskleroze izazvane dijabetesom. Autofagija 2015.; 11(7): 1130-1145.
22 Ilatovskaya DV, Levchenko V, Lowing A, Shuyskiy LS, Palygin O, Staruschenko A. Ozljeda podocita u dijabetičkoj nefropatiji: implikacije aktivacije TRPC kanala ovisne o angiotenzinu Ⅱ. Sci Rep 2015; 5: 17637.
23 Rabanal-Ruiz Y, Otten EG, Korolchuk VI. mTORC1 kao glavni ulaz u autofagiju. Eseji Biochem 2017; 61 (6): 565-584.
24 Kim YC, Guan KL. mTOR: farmakološka meta za regulaciju autofagije. J Clin Invest 2015; 125(1): 25-32.
25 Li XY, Wang SS, Han Z, et al. Triptolid obnavlja autofagiju kako bi ublažio dijabetičku fibrozu bubrega putem miR-141-3p/PTEN/Akt/mTOR puta. Mol Ther Nucleic Acids 2017; 9: 48-56.
26 Liu L, Yang L, Chang B, Zhang J, Guo Y, Yang X. Zaštitni učinci rapamicina na staničnu autofagiju u bubrežnom tkivu štakora s dijabetičkom nefropatijom preko mTORS6K1-LC3 Ⅱ signalnog puta. Ren Fail 2018.; 40(1): 492-497.