Studija o neuroprotektivnom mehanizmu Cistanche i Fomitopsis Pinicola na dopaminergičkim neuronima mezencefalona izazvanim MPP plusom

Studija o neuroprotektivnom mehanizmu Cistanche i Fomitopsis Pinicola na mezencefalnim dopaminergičkim neuronima induciranim s MPP plus

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Naglasci

Fomitopsis Pinicola karakteriziraju antioksidativna, protuupalna i imunostimulirajuća svojstva. U ovoj studiji, primarne kulture dopaminergičkih stanica pripremljene iz embrionalne mišje mezencefale korištene su za određivanjeneuroprotektivniučinci i potencijalni mehanizmi vodenog ekstrakta Fomitopsis Pinicola na degeneraciju dopaminergičkih neurona izazvanu MPP plus. Rezultati su pokazali da vodeni ekstrakt Fomitopsis Pinicola štiti dopaminske neurone od MPP plus. Vodeni ekstrakt Fomitopsis Pinicola pokazao je antioksidativno i protuupalno djelovanje. Mehanizam odneuroprotektivniučinak vodenog ekstrakta Fomitopsis Pinicola može biti povezan s inhibicijom mitohondrijskog oksidativnog stresa. Nedavne studije su pokazale daneuroprotektivniučinak odCistanchečini ga "idealnim kandidatom" za poboljšanje neuroloških bolesti.Cistanchebogat je ehinakozidima. Ekstrakt odcistanchepokazalo se da inducira sintezu čimbenika rasta živaca in vivo i in vitro eksperimentima, potiče izlučivanje povezanih čimbenika u mozgu i poboljšava niz moždanih funkcija povezanih s pamćenjem.

Cistancheimaneuroprotektivniučinci

Sažetak

Cilj: promatratineuroprotektivnimehanizam vodenog ekstrakta Fomitopsis Pinicola na MPP'induciranu apoptozu mezencefaličnih dopaminergičkih stanica in vitro. Metode: Antioksidacijska aktivnost gljiva određena je FRAP metodom. Protuupalno djelovanje gljivica otkriveno je metodom oslobađanja NO izazvanog LPS-om. Mezencefalički dopaminergičkineuroniobilježeni su TH bojanjem da se promatra preživljavanje THirneuroniRezultati: U ispitivanju antioksidativne aktivnosti, Trolox ekvivalentni antioksidativni kapacitet (TEAC) vodenog ekstrakta Fomitonsis Pinicola je utvrđen na (165,80±7,13) umol Trolox/g ekstrakta Tretman vodenim ekstraktima Fomitonsis Pimicola (100, 50, 25 ,12,5 ug/ml) značajno je smanjio stvaranje NO. MPP* je izazvao značajnu kondenzaciju kromatina u jezgrama mezencefaličnih dopaminergičkihneuronis nuklearnom lizom, potencijal mitohondrijske membrane značajno se smanjio, a proizvodnja ROS-a se značajno povećala. U usporedbi s MPPt kontrolnom skupinom, morfološke promjene staničnih jezgri nakon apoptoze poništene su vodenim ekstraktom Fomtitonsis Pinicola. Tretman vodenim ekstraktom Fomitopsis Pinicola (50, 25, 12,5 ug/ml) dramatično je povećao relativni potencijal mitohondrijske membrane u usporedbi s MPP'kontrolom. U usporedbi s MPPt kontrolom, tretman vodenim ekstraktom Fomitonsis Pimicola （50, 25 ug/ml） značajno je smanjio relativno stvaranje ROS-a, Zaključci∶Vodeni ekstrakt Fomitonsis Pinicola pokazao je značajnoneuroprotektivniučinak na mezencefalne dopaminergičke stanice induciran s MPpt, Vodeni ekstrakt Fomitopsis Pinicola pokazao je antioksidativno i protuupalno djelovanje. Mehanizam odneuroprotektivniučinak vodenog ekstrakta Fomitopsis Pimicola može biti povezan s inhibicijom mitohondrijskog oksidativnog stresa.Cistancheglikozidi mogu poboljšati učenje i razinu pamćenja bolesnika s Alzheimerovom bolešću, smanjiti sadržaj malondialdehida (MDA) u moždanom tkivu i povećati glutation peroksidazu (GSH). -Px), aktivnost superoksid dismutaze (superoksid dismutaza, SOD), smanjuju aktivnost acetilkolin esteraze (acetilkolin esteraza, TChE), brzinu apoptoze moždanih stanica i smanjuju nakupljanje kalcija u moždanom tkivu.

Ključne riječi: Fomitopsis Pimicola, dopaminergičkineuroniapoptoza, antioksidans, potencijal mitohondrijske membrane, stvaranje ROS,Cistanche, Neuroprotektivno

Pozadina

Parkinsonova bolestje neurodegenerativna bolest u ljudi, koja ozbiljno utječe na zdravlje više od 6,5 milijuna ljudi diljem svijeta. Prevalencija starijih osoba iznad 65 godina je oko 1 2 posto [1, 2]. Iako točna etiologija i patogeneza odParkinsonova bolestostaje nejasno, dokazano je da je oksidativni stres ključni čimbenik u selektivnoj degeneraciji dopaminergičkihneuroniu nigrostrijatalnom striatumu [3, 4]. Studije su pokazale da prekomjerna proizvodnja reaktivnih kisikovih vrsta (ROS) uzrokuje disfunkciju mitohondrija, uključujući smanjeni potencijal mitohondrijske membrane (△Ψm) i aktivnost kompleksa enzima respiratornog lanca Ⅰ, kao i abnormalnu DNA mitohondrija [5, 6]. Osim toga, osjetljivost i selektivnost nigrostriatalnog puta na oksidativni stres također može dovesti do oštećenja DNK dopaminergičkihneuronikod bolesnika sParkinsonova bolest [7].

Ekstrakt feniletanoidnog glikozida uCistanchedeserticola može značajno poboljšati sastav 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina, MPTP) induciranog PD modela C57 ponašanja miševa, povećati supstanciju nigra tirozin hidroksilaza (tirozin hidroksilaza, TH) do i sadržaj DA u strijatumu bolesnika sParkinsonova bolest.Osim toga,cistancheEkstrakt fenil etanol glikozida ima dobar inhibitorni učinak na pad vitalnosti zrnatih stanica malog mozga u bolesnika sParkinsonova bolesti sprječava MPP plus induciranu apoptozu stanica cerebelarne granuleneuroniinhibicijom aktivacije kaspaze-3 i kaspaze-8. Smrt, ispoljavaju svoj antiapoptotski učinak.

Fomitopsis Pinicola je ljekovita gljiva koja pripada skupinama Polyporaceae i Pseudomonas. Ima ravan, blago gorak okus i ima farmakološke učinke kao što su antioksidacijski, antibakterijski, antitumorski i imunološki učinak [8, 9]. Naše prethodne studije potvrdile su da vodeni ekstrakti Fomitopsis Pinicola imaju zaštitni učinak na apoptozu dopaminergičkih stanica srednjeg mozga fetusa izazvanu MPP plus, što može značajno povećati broj dopaminergičkih stanicaneuronii duljina aksona, i Povećanje aktivnosti mitohondrijskog kompleksa dišnog lanca enzima I[10].

U ovoj studiji koristit ćemo metodu antioksidativne snage reduciranja željeza (FRAP) kako bismo promatrali antioksidativni kapacitet vodenih ekstrakata Fomitopsis Pinicola i promatrali protuupalni učinak oslobađanja NO izazvanog lipopolisaharidom (LPS) u mikrogliji BV2. Učinci kultiviranih dopaminergika srednjeg mozganeuronina morfologiju jezgre, potencijal mitohondrijske membrane i proizvodnju ROS promatrani su in vitro, kako bi se otkrio zaštitni mehanizam endomiceta na dopaminergičkeneuroni.

Materijal

Životinja

Miševi 14-dnevne trudnoće, OF1/SPF, iz Austrijskog laboratorijskog instituta za životinjsku i veterinarsku genetiku, eksperimentirali su s pokusnim životinjama u skladu s Direktivom Europske komisije 86/609/EU.

Ispitni uzorak

Fomitopsis Pinicola proizveden je u Austriji i identificirao ga je profesor Wolf-Dieter Rausch kao Footmitopsis Pinicola. Nakon usitnjavanja Fomitopsis Pinicola, vodeni ekstrakt je dobiven ekstrakcijom vrućom vodom, a sadržaj sirovog polisaharida bio je 8,95 posto.

stanična linija

Stanična linija mišjeg mikroglioma BV2, s Odsjeka za biokemiju Veterinarskog sveučilišta u Beču, u mediju DMEM (Sigma) koji sadrži 10 posto fetalnog goveđeg seruma, 2 posto B27 (Gibco), 2 posto glutamina, 37 stupnjeva 5 posto kulture CO2.

medij stanične kulture

BM (osnovni medij) medij kojemu je DMEM medij dodan s 10 posto fetalnog goveđeg seruma, 30 mM glukoze, 2 mM glutamina, 1 posto streptomicina i 0,5 posto amfotericina.

glavni reagensi i instrumenti

MPP plus je sigma proizvod, čistoća veća ili jednaka 98 posto; primarna i sekundarna antitijela protiv tirozin hidroksilaze (TH) svi su proizvodi američkog Vectastaina.TPTZ(2.46-terpiridin triazin), FeCl3·6H2O, FeSO4·7H2O su proizvodi američkog sigma-Aldricha.DAPI otopina za sušenje. JC-1 otopina za bojenje i C-DCDHF-DA otopina za bojenje svi su proizvodi Invitrogen Molecular Probes. Prvotna koncentracija otopine bila je 1 mg/ml, 1mg/ml i 1M. Fluorescentni mikroskop, tvrtke Nikon iz Japana, model TS-100-F. Spektrofotometar za proizvode Njemačke Pharmacia Biotech, modeli za Novaspec ⅡI.

Cistanchemože spriječitiParkinsonova bolest

metoda

Određivanje antioksidativnog kapaciteta ekstrakata FRAP metodom

Nakon pripreme 30 ml FRAP radne tekućine (300 mmol/L acetatni pufer, 10 mmol/L TPTZ otopine, 20 mmol/L FeCly otopine pomiješane ujednačeno u omjeru volumena 10:1:1), 450 mL FRAP radnog dodana je tekućina s različitim koncentracijama od 60 ul vodenih ekstrakata Fomitopsis Pinicola i 45 ul vode za dvostruko isparavanje. Miješanjem na 37 stupnjeva C izbjegava se svjetlosna reakcija nakon 30 minuta, a zatim se određuju njegove vrijednosti apsorbancije na 593 nm. Ukupni antioksidativni kapacitet svakog ekstrakta kvantificiran je korištenjem Troloxa kao standarda. Za svaki uzorak provedena su tri paralelna ispitivanja. Rezultati su izraženi kao Trolox ekvivalent (TEAC) (mol TEAC/g) po gramu ekstrakta.

Za otkrivanje protuupalnog učinka ekstrakta korišten je test otpuštanja NO

BV2 stanice logaritamske faze inokulirane su u 48-pločice s jažicama u koncentraciji od 1 x 10 stupnjeva stanica/ml. Nakon inkubacije na 37 stupnjeva i 5 posto CO2, dodan je lipopolisaharid (LPS) za stimulaciju, konačna koncentracija je bila 1 ug/ml. Zatim su dodane različite koncentracije ekstrakta, a stanice su uzgajane na 37 stupnjeva pod 5 posto CO, 48 sati, nakon čega je izmjerena koncentracija NO. Prije suđenja. Griessovi reagensi A i B izvađeni su iz hladnjaka na 4 stupnja C i ostavljeni da se uravnoteže na sobnoj temperaturi 30 minuta. Nitritni standardi su serijski razrijeđeni (20, 10, 5, 2,1 i 0,5 uM) kako bi se dobile standardne krivulje. Dodajte 50 µL razrijeđenog standarda i supernatanta uzorka koji se ispituje (4 ponavljanja za svaku koncentraciju), dodajte u 96-ploču s jažicama, zatim dodajte 50

uL otopine A, inkubirati na sobnoj temperaturi 10 minuta u mraku i dodati 50 uL otopine B. Nakon inkubacije od 10 minuta na sobnoj temperaturi u mraku, izmjerena je apsorbancija na 550 nm čitačem mikropločica unutar 30 minuta, a otpuštanje NO u supernatantu izračunato je prema standardnoj krivulji [11]. U isto vrijeme, 10 ul MTT (5 mg/mL u PBS otopini) je dodano u svaku jažicu stanične ploče, i uzgajano na 37 stupnjeva za 5 posto CO, 4 sata. Nakon što je supernatant odbačen, 100 uL DMSO je dodano u svaku jažicu, a apsorbancija je izmjerena na 570 nm nakon potpunog otapanja, kako bi se promatrala stopa preživljavanja stanica.

Kultura i identifikacija primarnih dopaminergičkih stanica srednjeg mozga i liječenje lijekovima

Trudni miševi su žrtvovani i prebačeni u petrijevu zdjelicu koja je sadržavala DPBS pufer, mišji embriji su secirani, međumozak je izoliran, izrezan na male komadiće i sakupljen u DPBS puferu koji je sadržavao 2 ml 0 1 posto tripsina i 2 ml {{ 3}}.02 posto DNaze L Inkubirajte 7 minuta u vodenoj kupelji na 37 stupnjeva, a zatim dodajte 2 ml inhibitora tripsina u koncentraciji od 0.125 mg/ml, centrifugirajte tkiva na 100 xg tijekom 4 minute i odbacite supernatant. Zatim je dodan DMEM medij koji je sadržavao 0,02 posto DNaze I, a odvojene stanice su resuspendirane u BM mediju stanične kulture, nasađene u stanične ploče obrađene polilizinom i uzgojene na 37 stupnjeva, 5 posto CO. 10. dana kulture, 10 μM MPP* je dodan kultiviranim primarnim neuronskim stanicama za tretman, a zatim je 50.25.12.5 ug/ml vodenog ekstrakta Fomitopsis Pinicola dodano za tretman na 37 stupnjeva, 5 posto CO, uzgojeno je 48 sati. Dvanaestog dana kulture, neke su stanice korištene za identifikaciju dopaminergičkih neurona i stanice su fiksirane s 4 posto paraformaldehida na 4 stupnja tijekom 30 minuta, a zatim propusne 30 minuta na sobnoj temperaturi s 0,4 posto Tritona X{{ 33}}. Nakon ispiranja s PBS puferom 3 puta, blokiran je otopinom za blokiranje konjskog seruma 90 minuta, zatim je dodano anti-TH primarno protutijelo preko noći, zatim je dodano biotinilirano sekundarno protutijelo za sobnu temperaturu 90 minuta, i na kraju, 3,3 '-diaminobenzidin (DAB, 5 mg/ml) je razvijen. Stanice pozitivne na TH boju promatrane su pod mikroskopom kao dopaminergički neuroni.

Promatranje nuklearne morfologije

MPP plus i stanice tretirane lijekom fiksirane su s 4 posto paraformaldehida tijekom 30 min, zatim razbijene s 0,4 posto Triton X-100 tijekom 30 minuta, a zatim dodana otopina za bojenje DAPI u konačnoj koncentraciji od 1 ug/ml tijekom 5 minuta na sobnoj temperaturi. Morfologija jezgre promatrana je pod fluorescentnim mikroskopom. Valna duljina ekscitacije bila je 340 nm, a 4 polja su nasumično odabrana za svaku jažicu.

Detekcija potencijala mitohondrijske membrane

MPP plus i stanice tretirane lijekom dodane su u JC-1 dve u konačnoj koncentraciji od 10 ug/ml i inkubirane na 37 stupnjeva 15 minuta. Promjene intenziteta fluorescencije opažene su fluorescentnom mikroskopijom pri 488 nm odnosno 568 nm ekscitacijskog svjetla. Promjena potencijala mitohondrijske membrane mjerena je omjerom intenziteta fluorescencije na 568 nm i intenziteta fluorescencije na 488 nm.

Test proizvodnje ROS-a

MPP plus i stanice tretirane lijekom dodane su u C-DCDHF-DA dve u konačnoj koncentraciji od 10 mM i nakon inkubacije na 37 stupnjeva tijekom 30 minuta, otopina kulture je odbačena, a stanice su dvaput isprane bezbojnim DMEM medijem . Za promatranje promjene intenziteta fluorescencije korištena je fluorescentna mikroskopija. Valna duljina ekscitacije bila je 488 nm, a 4 vidna polja su nasumično odabrana za svaku jažicu. Vrijeme izlaganja stanica ekscitacijskom svjetlu nije bilo dulje od 5 s.

Rezultati

Antioksidativna sposobnost Fomitopsis Pinicola

Fomitopsis Pinicola ima očigledan antioksidacijski učinak, a njegov vodeni ekstrakt ima antioksidativni kapacitet od （165,80±7,13）μmol TEACh ekstrakta.

Protuupalni učinak Fomitopsis Pinicola

Nakon LPS induciranih BV2 stanica, otpuštanje NO je značajno povećano, što se značajno razlikuje od normalne kontrolne skupine. Nakon vodenog ekstrakta Fomitopsis Pinicola, otpuštanje NO je značajno smanjeno, među kojima 100, 50, 25, postojala je značajna razlika između skupine s dozom od 12,5 ug/ml i skupine s LPS-om (Slika 1). Nakon što su stanice BV2 inducirane LPS-om, stopa preživljavanja stanica bila je značajno niža nego kod normalne kontrolne skupine. Nakon djelovanja vodenog ekstrakta Fomitopsis Pimicola, skupina koja je primala dozu od 100 ug/ml imala je značajno smanjenje vitalnosti stanica, a postojala je i značajna razlika u usporedbi sa skupinom koja je primala LPS. Skupina s dozom od 50, 25, 12,5 ug/ml nije imala značajan učinak na vitalnost stanica (Slika 1, Slika 2).

Identifikacija dopaminergičkih neurona srednjeg mozga u fetalnih štakora

Nakon specifičnog TH bojenja uzgojenih neurona srednjeg mozga fetalnog štakora, dopaminergički neuroni pokazali su jasnu smeđe-žutu boju, a bojanje staničnih tijela i aksona bilo je jasno vidljivo, što dokazuje da su dopaminergički neuroni uspješno uzgojeni (Slika 3) .

Slika 1 Učinci vodenih ekstrakata Fomitopsis Pinicola na otpuštanje NO u stanicama BV2

induciran LPS-om

Napomena: u usporedbi s normalnom kontrolnom skupinom, **p < {{0}}.01;="" u="" usporedbi="" s="" lps="" grupom,="" ##p="">< 0,01,="" #p=""><>

Slika 2. utjecaj vodenog ekstrakta Fomitopsis Pinicola na stopu preživljavanja stanica BV2

Napomena: u usporedbi s normalnom kontrolnom skupinom, **p < 0.01;="" u="" usporedbi="" s="" lps="" grupom,=""><>

Slika 3 TH - obojenje neurona mezencefalona DA s oznakom

Učinak Fomitopsis Pinicola na morfologiju jezgre DAPI,4',6-diamidino-2-fenilindol je fluorescentno sredstvo koje prodire kroz staničnu membranu i neobično se veže za DNK. Rezultati ovog eksperimenta pokazali su da su jezgre dopaminergičkih neurona u normalnoj kontrolnoj skupini ostale gotovo netaknute, a kromatin je bio ujednačen. MPP plus kontrolna skupina pokazala je značajnu kondenzaciju kromatina, lizu nuklearne membrane i nuklearnu lizu. Nakon djelovanja vodenog ekstrakta Fomitopsis Pinicola morfologija jezgre bila je relativno netaknuta, a karakteristike apoptoze smanjene (Slika 4).

Učinak Fomitopsis Pinicola na potencijal mitohondrijske membrane

Nakon indukcije MPP plus, potencijal mitohondrijske membrane dopaminergičkih neurona značajno se smanjio, što se značajno razlikovalo od onoga kod normalne kontrolne skupine (P<0.01). after="" the="" action="" of="" the="" aqueous="" extract="" of="" fomitopsis="" pinicola,="" the="" mitochondrial="" membrane="" potential="" decreased="" after="" mpp+="" induction.="" there="" was="" a="" significant="" increase="" in="" mitochondrial="" membrane="" potential="" in="" the="" 50,="" 25,="" and="" 12.5ug/ml="" dose="" groups="" compared="" with="" the="" mpp+="" control="" group=""><0.01,><0.05)(figure>

Učinak Pseudomonas Sinensis na proizvodnju ROS

Nakon indukcije MPP plus, proizvodnja ROS dopaminergičkih neurona značajno je povećana. što se značajno razlikovalo od onog u normalnoj kontrolnoj skupini (P<0.01). after="" the="" action="" of="" the="" aqueous="" extract="" of="" fomitopsis="" pinicola,="" the="" ros="" increased="" after="" mpp+induction.="" the="" reduction="" of="" ros="" production="" in="" the="" 50="" and="" 25="" ug/ml="" dose="" groups="" was="" significantly="" different="" from="" the="" mpp+control="" group=""><0.01)(figure 6,="" figure="">

Slika 4. Prikaz DAPI fluorescentnog bojenja neurona u mezencefaliku

Slika 5 Učinak vodenog ekstrakta Fomitopsis Pinicola na mitohondrije izazvane MPP plus

membranski potencijal mezencefaličnih DA neurona

Napomena: U usporedbi s normalnom kontrolnom skupinom, **P < {{0}},01;="" u="" usporedbi="" s="" mpp="" plus="" kontrolnom="" grupom,="" #="" #="" p="">< 0,01,="" #="">

0.05.

Slika 6. C-DCDHF-DA fluorescentno bojenje DA neurona u mezencefaliku

Slika 7 učinci vodenih ekstrakata Fomitopsis Pinicola na mezencefalni DA izazvan MPP plus

proizvodnja ROS neurona

Napomena: u usporedbi s normalnom kontrolnom skupinom, **P < {{0}}.01;="" u="" usporedbi="" s="" mpp="" plus="" kontrolnom="" skupinom,="" #="" #="" p=""><>

Zaključak

Gubi se degeneracija dopaminergičkih neurona (DA neurona) u srednjem mozgu, a Lewyjevo tjelešce u citoplazmi rezidualnih neurona glavno je obilježjeParkinsonova bolest.Klinički simptomi uglavnom uključuju statički tremor, bradikineziju, hipermiotoniju, nestabilnost držanja i dr. Trenutno, liječenje odParkinsonova bolestjoš uvijek dominira nadomjesna terapija dopaminom. Iako može poboljšati simptome bolesnika, ne sprječava razvoj bolesti. Dugotrajna primjena uzrokovat će brojne nuspojave [12], stoga je istraživanje novih terapijskih pristupa imperativ. Studije su pokazale da su oksidativni stres i oksidirane razine dopamina važni uzroci selektivnog oštećenja dopaminergičkih neurona [13], a za neke prirodne antioksidanse kao što su kvercetin, kurkumin, polifenoli čaja i dr. potvrđeno je da su dopamin uzrokovani živčanim tvarima. Oštećenje neurona ima očite zaštitne učinke [14-16], stoga je obećavajuće probirati lijekove za liječenjeParkinsonova bolestiz tradicionalnih kineskih lijekova s ​​antioksidativnim farmakološkim učincima.

U ovoj studiji, FRAP je korišten za otkrivanje antioksidativnog kapaciteta vodenih ekstrakata Fomitopsis Trolox Pinicola, koristeći (6-hidroksi-2,5,7,8-tetrametilkroman)2- karboksilna kiselina) pokazalo se da ima značajne antioksidativne učinke. Protuupalni učinak vodenih ekstrakata otkriven je Pinicolawas Fomitopsis d pomoću lipopolisaharida induciranog otpuštanja BV2 mikroglije NO metodom, i nije bilo značajnog učinka na vitalnost stanica pri koncentracijama ispod 100 ug/ml, što ukazuje na to da glijalne stanice imaju značajne anti- upalne učinke i nemaju značajan učinak na preživljavanje stanica.

Oksidativni stres odnosi se na neravnotežu između proizvodnje i eliminacije radikala bez kisika u tijelu. To je rani događaj u procesu neuronske degeneracije-apoptoze. Istraživanja su pokazala da je moždano tkivo bogato fosfolipidima i nezasićenim masnim kiselinama, a obje su osjetljive na oksidativni stres. U bolesnika sParkinsonova bolest, Malondialdehid, indeks lipidne peroksidacije, u striatumu je značajno povećan, dok je koncentracija višestruko nezasićenih. masne kiseline su se značajno smanjile [17], smanjio se sadržaj glutationa (GSH), a funkcija mitohondrijskog kompleksa dišnog lanca enzima I bila je narušena [18,19]. MPP plus je metabolit neurotoksičnog agensa MPTP u tijelu, koji može generirati slobodne radikale u tijelu, inhibirati funkciju mitohondrija, uništiti DA neurone u substanciji nigri i razviti simptomeParkinsonova bolestu životinjskim modelima. NO je također uključen u mehanizam oštećenja MPP plus. Prekomjerni NO difundira u DA neurone, koji mogu nitrozirati sa sulfhidrilnim mjestom enzima i inhibirati aktivnost mitohondrijskog kompleksa respiratornog lanca enzima I [20,21].

Rezultati ove studije pokazali su da nakon što je MPP plus inducirao primarno kultivirane DA neurone, jezgra je pokazala očitu apoptozu, potencijal mitohondrijske membrane se smanjio, a proizvodnja ROS-a značajno porasla, što ukazuje da MPP plus može inducirati apoptozu DA neurona inhibicijom mitohondrijskog oksidativnog stresa. vodeni ekstrakt Fomitopsis Pinicola a može poboljšati morfologiju dopaminergičkih neurona nakon MPP plus indukcije, povećati potencijal mitohondrijske membrane i smanjiti proizvodnju ROS-a, što ukazuje da vodeni ekstrakt Fomitopsis Pinicola inhibira oštećenje DA neurona srednjeg mozga oštećenih živčanim agensima, što može biti povezan s njegovom antioksidacijom i inhibicijom proizvodnje NO, te štiti neurone inhibicijom mitohondrijskog oksidativnog stresa.

Reference

1. Khan AU, Akram M, Daniyal M, et al. Svijest i trenutno znanje o Parkinsonovoj bolesti: Neurodegenerativni poremećaj. Int J Neurosci 2018, 8: 1-64.

2. Klingelhoefer L, Reichmann H. Parkinsonova bolest kao multisistemski poremećaj. J Neural Transm (Beč) 2017, 124: 709-713.

3. Choi DH, Cristóvão AC, Guhathakurta S, et al. Oksidativni stres 1-posredovan NADPH oksidazom dovodi do smrti dopaminskih neurona kod Parkinsonove bolesti. Antioxid Redox Signal 2012, 16: 1033-1045.

4. Asaithambi A, Ay M, Jin H, et al. Fosforilacija protein kinaze D1 (PKD1) potiče preživljavanje dopaminergičkih neurona tijekom 6-OHDA-induciranog oksidativnog stresa. PLoS One, 2014, 9: e96947.

5. Berndt N, Bulik S, Holzhütter HG. Kinetičko modeliranje mitohondrijskog energetskog metabolizma neuronskih stanica: Utjecaj aktivnosti reducirane -ketoglutarat dehidrogenaze na proizvodnju ATP-a i generiranje reaktivnih vrsta kisika. Int J Cell Biol 2012, 2012: 757594.

6. Yan MH, Wang X, Zhu X. Mitohondrijski defekti i oksidativni stres kod Alzheimerove bolesti i Parkinsonove bolesti. Free Radic Biol Med 2013, 62: 90-101.

7. Guo C, Sun L, Chen X, Zhang D. Oksidativni stres, oštećenje mitohondrija i neurodegenerativne bolesti. Neural Regen Res 2013, 8: 2003-2014.

8. Hao L, Sheng Z, Lu J, et al. Karakterizacija i antioksidativno djelovanje izvanstaničnih i unutarstaničnih polisaharida iz Fomitopsis Pinicola. Carbohydr Polym, 2016, 141: 54-59.

9. Shah F, Mali T, Lundell TK. Polyporales Brown Rot Species Fomitopsis Pinicola: Profili aktivnosti enzima, proizvodnja oksalne kiseline i Fe3 plus - smanjenje izlučivanja metabolita. Appl Environ Microbiol, 2018, 84: e02662-17.

10. Guo SS, Wolf D. Studija neuroprotektivnih učinaka vodenog ekstrakta Fomitopsis Pinicola na dopaminergičke neurone in vitro. Chin J Pharmacovigil 2018, 15: 582-586.

11. Khaled Radad, Rudolf Moldzio, Wolf-Dieter Rausch. Toksičnost Minociklin štiti dopaminergičke neurone od dugotrajnog rotenona. Can J Neurol Sci 2010, 37: 81-85.

12. Rizek P, Kumar N, Jog MS. Najnovije informacije o dijagnozi i liječenju Parkinsonove bolesti. SVIBANJ 2016., 188: 1157-1165.

13. Crotty GF, Ascherio A, Schwarzschild MA. Ciljanje urata za smanjenje oksidativnog stresa kod Parkinsonove bolesti. Exp Neurol 2017, 298: 210-224.

14. Ay M, Luo J, Langley M, et al. Molekularni mehanizmi koji leže u osnovi zaštitnih učinaka kvercetina protiv mitohondrijske disfunkcije i progresivne dopaminergičke neurodegeneracije u staničnoj kulturi i MitoPark transgenim mišjim modelima Parkinsonove bolesti. J Neurochem 2017, 141: 766-782.

15. Wang MS, Boddapati S, Emadi S, et al. Kurkumin smanjuje citotoksičnost izazvanu alfa-sinukleinom u modelu stanica Parkinsonove bolesti. BMC Neurosci 2010, 11: 57.

16. Weinreb O, Amit T, Mandel S, et al. Neuroprotektivni molekularni mehanizmi (-)-epigalokatehin-3-galata: reflektivni ishod njegovih antioksidativnih, kelirajućih i neuritogenih svojstava željeza. Genes Nutr 2009, 4: 283-296.

17. Dawson TM, Ko HS, Dawson VL. Genetski životinjski modeli Parkinsonove bolesti. Neuron 2010, 66: 646-61.

18. Bodis-Wollner. Retinopatija u Parkinsonovoj bolesti. J Neural Transm (Beč) 2009, 116: 1493-1501.

19. Hisahara S, Shimohama S. Toxin-inducirani i genetski životinjski modeli Parkinsonove bolesti. Parkinson's Dis. 2010, 2011: 951709.

20. Yang S, Liu T, Li S, et al. Komparativna proteomska analiza mozgova miševa koji prirodno stare. Neuroscience 2008, 154: 1107-1120.

21. Gautier CA, Corti O, Brice A. Mitohondrijske disfunkcije u Parkinsonovoj bolesti. Rev Neurol (Pariz) 2014, 170:339-343.