Ima li totalni glikozid cistanche učinke na olfaktor?

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Učinak totalnih glikozida cistanhe na stanice olfaktornog omotača štakora i njihovu sekreciju neurotrofnih čimbenika

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Ozljeda leđne moždine (SCI) je ozbiljna ozljeda središnjegživčani sustav, što čini {{0}}.2 posto —0.5 posto ukupne traume. Kod prijeloma kralježnice, 16-40 posto je komplicirano ozljedom leđne moždine, često ostavljajući tešku invalidnost, što dovodi do poteškoća u svakodnevnom životu koje utječu na kvalitetu života pacijenata i predstavljaju veliko opterećenje za obitelj i društvo.Mirisniensheathing cell (OECs) posebna su vrsta živčanog ljepila. Plazma stanice mogu migrirati u mozak samirisniživčane aksone i može lučiti mnoge faktore rasta kao što su NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptid-Y i S-100. Zbog ovih karakteristika odmirisniomotača stanica, OEC se smatraju jednim od obećavajućih sjemenskih stanica za transplantaciju stanica za popravak SCI. Trenutno se liječenje SCI u području rehabilitacijske medicine uglavnom temelji na sveobuhvatnoj rehabilitaciji. Kako bi se pronašla učinkovitija metoda, provedeno je sljedeće istraživanje o učinkucistancheukupnoglikozidina OEC-ovima:

Ukupni glikozid Cistanche za olfaktorne ovojnice stanica

1 Materijal i metode

1.1 Eksperimentalni materijali

Wistar štakor (osigurao Centar za životinje Sveučilišta unutarnje Mongolije);cistancheukupnoglikozidi, medij DMEM/F12, fetalni teleći serum (FCS), poli-D-lizin, arabinozid (Ara-C), tripsin, D-Hanks otopina, zečji anti-p75NGFR (Santa Cruz), ELISA komplet (Promega), stanični inkubator (Thermo-HEPA klasa 100), mikroskop s invertnim faznim kontrastom (Olympus CKX41, Japan), ultra-čisti radni stol (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Tvrtka, SW-CJ-2FD), enzim analizator naljepnica (Wellscan MKH), protočni citometar itd.

1.2 Metode istraživanja

1.2.1 OEC kultura, pročišćavanje i identifikacija: Wistar štakori su žrtvovani dekapitacijom i namočeni u vinu 5 minuta. Prednji dio lubanje je otvoren da se otkrijemirisnižarulja. Dvamirisnilukovice su potpuno uklonjene pod disekcijskim mikroskopom. Operite u D-Hanks otopini; izrezatimirisnibulbu s mikrokirurškim škarama, dodajte 2 ml 0.25 posto pankreatina i inkubirajte na 37 stupnjeva 20 minuta; dodajte D MEM/F12 medij kulture koji sadrži 10 posto telećeg seruma u epruvetu centrifuge od 2 ml. Probava je prekinuta u sredini; bus pipeta je aspirirala nepotpuno probavljeno tkivo pri 800 okretaja u minuti i centrifugirala 5 minuta, odbacila supernatant; konačno upotrijebio kondicionirani medij (20 posto FCS plus 20|i, mol/LForskolin plus 20|ig/mlBPE plus DMEM /F12) Napravite ga u lx 107 ml jednostanične suspenzije, inokulirajte u tikvicu za kulturu stanica obloženu polilizinom, stavite u inkubatoru na 37 stupnjeva, 5 posto CO2, a zatim dodati Arac. Pročišćavanje je provedeno na 36 sati. Koristite zečje anti-p75E i FITC-om obilježeno kozje anti-zečje IgG sekundarno protutijelo za imunohistokemijsku identifikaciju stanica i promatranje fluorescentnim mikroskopom.

1.2.2 Koristite MTT i protočnu citometriju za određivanje učinkacistanche ukupni glikozidinamirisniovojnice stanica: inokulirajte uzgojene i pročišćenemirisnioblaganje stanica u 96-ploču s jažicama na 1X106 i dodajtecistanche ukupni glikozidi(koncentracije djelovanja su Ijig/ml, 10 mg/ml, 100 mg/ml), izmjerite OD vrijednost i izmjerite staničnu protočnu citometriju nakon 24 sata djelovanja. Postavite kontrolnu grupu iCistanche ukupni glikozidirazličite koncentracijske skupine: Skupina A (Kontrolna skupina): medij kulture koji sadrži serum koristi se kao negativna kontrola; Grupa B (cistanche ukupni glikozidiskupina niske koncentracije: lig/ml); Skupina C (cistanche ukupni glikozidi srednje koncentracije Skupina: L10jxg/MK); Grupa D (cistanche ukupni glikozidiskupina visoke koncentracije: 100|xg/mlo): 15 štakora u svakoj skupini.

1.2.3 Određivanje sadržaja neurotrofnog faktora u supernatantu pomoću ELISA: inokulirajte uzgojene i pročišćenemirisnioblaganje stanica u 6-ploču s jažicom na 1x106, dodajcistanche ukupni glikozidi(ista koncentracija kao gore) nakon 24 sata i djelovati 24 sata, a supernatant sakupiti odvojeno, spremljeno na -80 dugo. Sadržaj faktora rasta živaca u tekućini određen je ELISA metodom.

1.3 Statistička analiza

Podaci u ovoj studiji tretirani su kao podaci mjerenja, a dobiveni podaci izraženi su kao srednja vrijednost ± standardna devijacija, a za statističku analizu korišten je statistički softver SPSS 11.0. Dobiveni podaci analizirani su analizom varijance, a P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 rezultata

2.1 Učinakcistancheukupni glikozidi namirisniovojnice stanica

2.1.1 Rezultati određivanja metode metil oksazolil tetrazola (MT): Skupina A: 0.617±0.149; Skupina B: 0.589±0.147; Skupina C: 0.761±0.138; Skupina D: 0.732±0.234. Usporedba izmeđuCistanche ukupni glikozidi group (B) and Control group (A), P>0.05, razlika nije bila značajna;Cistanche ukupni glikozidi10 mg/ml, 100 mg/ml koncentracijska skupina (C, D) u usporedbi s kontrolnom skupinom (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Rezultat određivanja protočne citometrije prikazan je na slici 1. U usporedbi s kontrolnom skupinom,cistanche ukupni glikozidipostotak apoptotskih stanica bio je veći od kontrolne skupine, a postotak apoptotskih stanica niži od kontrolne skupine.

2.2 Rezultati imunoenzimskog testa (ELISA).

Rezultati ispitivanja pokazali su da je sadržaj neurotrofnog faktora (GDNF) porijeklom iz glijalne stanične linije: prije doziranja: 302,1±16,6 pg/ml, skupina A: 340,5±13,2 pg/ml; skupina B: 333,2±23,6 pg/ml; Skupina C: 355,2±17,6 pg/ml; Grupa D; 379,2±15,3 pg/ml. U usporedbi s prethodnom primjenom, sadržaj GDNF-a bio je značajno povećan; u usporedbi s kontrolnom skupinom (A), sadržaj GDNF-a uCistanche ukupni glikozidiSkupina koncentracije od 100 mg/ml (D) bila je značajno povećana.

3 Rasprava

Poteškoće u regeneraciji aksona jedan su od glavnih razloga teškog oporavka nakon ozljede leđne moždine. OEC imaju ulogu u regeneraciji aksona središnjih neurona koje je drugim vrstama stanica teško zamijeniti. Posljednjih godina istraživanja omirisniomotač stanica postao je vruća točka.Mirisniovojnice su posebna vrsta glija stanica koje imaju karakteristike Schwannovih stanica i astrocita. Potječu izmirisnibazalne membrane i široko su raspoređeni po površinimirisnisluznica,mirisniživac, imirisnižarulja. Ima sposobnost dijeljenja i regeneracije za cijeli život i može pratitimirisniaksoni živaca migriraju u mozak. Aksoni odmirisniživac može proći kroz spoj između perifernog živčanog sustava i središnjeg živčanog sustava svakih 30-60 dana, ponovno izrasti umirisniomotač i uspostavljaju sinaptičke veze4.Mirisnistanice koje oblažu ovojnicu mogu lučiti mnoge faktore rasta kao što su NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptid-Y i S-100. Studije su pokazale da čimbenik rasta živaca (NGF) može spriječiti atrofiju neurona crvene jezgre kralježnice i ojačati kortikospinalni trakt Sprout i promicati regeneraciju živčanog puta leđne moždine crvene jezgre; i neurotrofni čimbenik izveden iz mozga (BDNF) i neurotrofin-3 (NT-3) mogu spriječiti apoptozu stanica leđne moždine crvene jezgre kod odraslih štakora s aksotomiziranom ozljedom i spašavanjem umirućih neurona i promicati regeneraciju aksona P. U Dodatku,mirisniensheating stanice također izražavaju druge čimbenike na svojim staničnim membranama, kao što je faktor adhezije živčanih stanica (N-CAM), koji su uključeni u staničnu adheziju i rast aksona. Zbog ovih karakteristika odmirisniomotača stanica, OEC se smatraju jednim od obećavajućih sjemenskih stanica za transplantaciju stanica za popravak SCI.

Kemijske komponenteCistancheuglavnom uključuju feniletanoidne glikozide, iridoide, hlapljive komponente, lignane, polisaharide i alkaloide. Studija je otkrila daCistanchea njegove kemijske komponente djeluju neuroprotektivno. Deng i sur. proučavali su učinak tubuloze B na apoptozu SH-SY5Y neurona induciranu faktorom nekroze tumora (TNF). Rezultati su pokazali da su nakon 100 ug/ neuroni SH-SY5Y nakon 36 sati tretmana TNF-om pomoću L pokazali tipične karakteristike apoptoze, dok je tretman tubulinom B tijekom 2 sata mogao značajno smanjiti apoptozu induciranu TNF-om. Osim toga, studije su također pokazale da feniletanoidni glikozidi mogu inhibirati apoptozu zrnatih stanica malog mozga štakora inhibicijom kaspaze-3 i kaspaze-8, te protiv C57 mišjeg crnila uzrokovanog metil fenil tetrahidropiridinom (MPTP). Oštećenje kvalitetnih dopaminergičkih neurona ima zaštitni učinak. Ne samo to, negoCistanchetakođer može ublažiti različita oštećenja poput ishemije-reperfuzije živčanog sustava. Eksperiment s ozljedom ishemije mozga kod miševa pokazuje da je raspon infarkta od 24h i 48h nakon ishemije u skupini s cerebralnom ishemijom-reperfuzijom 72,98 posto i 60,45 posto u prosjeku. Nasuprot tome,cistancheSkupine velikih, srednjih i niskih doza ukupnih glikozida (250.0mg·kg/d; 125,0mg·kg/d; 62,5mg·kg/d) mogu stvoriti mozak miševa nakon cerebralne ishemije-reperfuzije 24 sata Veličina infarkta smanjena je na 25,94 posto, 25,81 posto i 31,13 posto, a veličina cerebralnog infarkta smanjena je na 22,14 posto, 20,06 posto i 22,27 posto nakon 48 sati. Postojala je značajna razlika između to dvoje, pokazujući značajan inhibitorni učinak na apoptozu neurona.

U ovoj studiji različite koncentracijecistanche ukupni glikozidiprimijenjeni su na OEC-ove. MTT metodom i mjerenjem protočne citometrije potvrđeno je da 10mg/ml100mg/mlcistanche ukupni glikozidimože pospješiti širenjemirisniovojnice stanica. To su pokazali rezultati protočne citometrijecistanche ukupni glikozidimože pospješiti širenjemirisniomotač stanica Uglavnom potiče proliferaciju G1 ciklusamirisnispermija i značajno smanjuje apoptotičke stanice. Stoga,Cistanche ukupni glikozidimože ne samo promicati širenjemirisnioblažući stanice, ali također povećavaju aktivnost stanica i inhibiraju njihovu apoptozu. Imunoenzimski test to dokazujeCistanche ukupni glikozidimože značajno pospješiti lučenje GDNF-a tako štomirisniovojnice stanica. Gore navedeni rezultati daju eksperimentalnu osnovu za kliničku primjenuCistanche ukupni glikozidi.

Reference

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, et al. Čimbenici koji utječu na kvalitetu života bolesnika s ozljedom leđne moždine tijekom rehabilitacije [J]. Kineski časopis za rehabilitacijsku medicinu, 2009., 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. Lamina propria imirisnistanice s omotačem bika pokazuju diferencijalnu integraciju i migraciju i potiču klijanje deferencijalnog aksona u oštećenoj leđnoj moždini[J]. J Neurosci, 2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. stanice olfaktornog omotača: njihova uloga u popravku središnjeg živčanog sustava [J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Multipotencija pročišćenog. transplantirane bazalne stanice glukoze umirisniepitel[J]. J Comp Neurol, 2004, 46914): 457-474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. marostromalna stanica koja eksprimira BDNF; podržavaju ekstenzivan rast aksona na mjestima d ozljede leđne moždine[J]. Exp Neurol, 2005,191(2):344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD, et al. Zaštitni učinak tubuloze B na apoptozu izazvanu TNF-om u neuronskim stanicama [J]. Acta Pharmacol Sin, 2004, 25 (102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.FeniletanoidglikozidiizCistanchessalsa inhibira apoptozu izazvanu 1-metil-4-fenilpiridinijevim ionom u neuronima[J]. J Ethnopharmacol, 2005, 97 (1):59.

[8] Geng X, Song L. Pu X, et al. Neuroprotektivni učinak