Metoda praćenja i procjene funkcije transplantacije bubrega:(Površinski poboljšana Ramanova spektroskopija)
Mar 26, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com
DIO I.:Korelacija površinski pojačanih Ramanovih spektroskopskih otisaka prstiju urina primatelja transplantacije bubrega s parametrima funkcije bubrega
Zhongli Huang, Shijian Feng & et al.
Rutinsko praćenjetransplantacija bubregafunkcija je potrebna za standardnu njegu u liječenju nakon transplantacije, uključujući česta mjerenja kreatinina u serumu sa ili bez biopsije bubrega. Međutim, invazivnost ovih metoda s potencijalom za klinički značajne komplikacije čini ih manje idealnim. Cilj ove studije bio je razviti neinvazivni alat za praćenjetransplantacija bubregapomoću funkcijePovršinski poboljšano Ramanova spektroskopija(SERS). Uzorci urina i krvi prikupljeni su iztransplantacija bubregaprimatelji nakon operacije. Srebrni SERS na bazi nanočestica (Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija) spektri urina izmjereni su i ocijenjeni analizom parcijalnih najmanjih kvadrata (PLS). The SERS(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)spektri su uspoređeni s konvencionalnim kemijskim markerimabubregpresaditifunkcija za procjenu njegove prediktivne sposobnosti. Ukupno 110transplantacija bubregaprimatelji su uključeni u ovu studiju. Rezultati PLS-a pokazali su značajnu korelaciju s proteinima urina(R2=0,4660, str.<><0.01), and="" urea(r2=""><0.01).furthermore, the="" prediction="" of="" the="" blood="" markers="" of="">transplantacija bubregafunkcija pomoću Urina SERS(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)spektri su označeni R2=0.7628(p<0.01)for serum="" creatinine="" and="" r2="0.6539" for=""><0.01)for blood="" urea="" nitrogen.="" this="" preliminary="" study="" suggested="" that="" the="" urine="">(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)spektralna analiza mogla bi se koristiti kao prikladna metoda za brzu procjenutransplantacija bubregafunkcija.
cistanche tubolosa prednosti: liječenje bolesti bubrega
Transplantacija bubregapredstavlja zlatni standard liječenja za pacijente s bubrežnom bolešću u završnoj fazi (ESRD)!. Faktori donora i primatelja, kirurški i imunološki čimbenici mogu doprinijeti ili uzrokovati oslabljenu funkciju transplantata bilo odmah nakon operacije transplantacije, nazvane odgođena funkcija transplantata, ili u äny drugim vremenskim točkama nakon transplantacije, disfunkcija Allografta obično se otkriva serijskim laboratorijskim testovima koji pokazuju porast kreatinina u serumu (SCr), zajedno s drugim potencijalnim nalazima, uključujući smanjeni volumen urina, i povećanje krvnog tlaka, pyuria i proteinuria°, akutno odbacivanje (AR), akutna cjevasta nekroza (ATN) i toksičnost ciklosporina/takrolimusa neke su od češćih etiologijabubregpresaditidisfunkcija7-9. Ako se ta pitanja ne utvrde na odgovarajući način i riješe, mogu dovesti do trajnog pogoršanjabubregpresaditifunkcija. Dakle, pacijenti sbubregTransplantacijupotrebno je rutinsko praćenje njihovihbubregpresaditifunkciju kao dio post-transplantacijskog upravljanja10-1.
Konvencionalne metode za procjenu funkcionalnog statusa transplantiranih bubrega uključuju kliničku procjenu bolesnika na temelju stanja volumena i izlaza urina, serijska mjerenja SCr-a s procijenjenim stopama glomerularne filtracije (eGFR), pa čak i preglede na bazi izotopa u rijetkim okolnostima2,13. Ako se sumnja na AR, ultrazvuk transplantacije bubrega često se provodi nakon čega slijedi biopsija transplantacije kako bi se potvrdila patološka dijagnoza za odluku plana liječenja. Postupak biopsije može biti neugodan za pacijente i može dovesti do klinički značajnih komplikacija, kao što su krvarenje ili gubitak alografta u najekstremnijim slučajevima. Stoga, neinvazivni klinički alat koji točno određuje kidney transplantacijafunkcija je definitivno poželjna i iz perspektive pacijenta i iz kliničara.
za što se koristi cistanche: poboljšati funkciju bubrega
Ramanska spektroskopija(RS) je specijalizirani i neinvazivni alat koji emitira incidentno lasersko svjetlo kroz uzorak tekućine, što rezultira raspršenim fotonima koji proizvode pomak u valnoj duljini ovisnoj o kemijskom sastavu tekućine'4-17. Intenzitet ramanskog raspršenja proporcionalan je veličini promjene molekularne polarizacije. Prethodno je primjena RS-a(Ramanska spektroskopija)bio je ograničen zbog niske osjetljivosti, visokih troškova i nedostatka pristupačne analize na licu mjesta8. Nedavni tehnološki napredak RS-a iznjedrio je lako dostupan, prenosiv i relativno jeftin RS(Ramanska spektroskopija) uređaj9.Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija(SERS)je podvrsta RS. dizajniran posebno za povećanje osjetljivosti analita niske koncentracije, u kojima obrada uzorka materijalom za poboljšanje značajno pojačava elektromagnetska polja molekula adsorbata koja nastaju uzbuđivanjem lokaliziranih površinskih žudnji (LSP)20. Nekoliko SERS-a(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)opisani su materijali za poboljšanje (npr. koloidni metali i grubi metali, uključujući zlato, srebro i bakar). Ovi metalni pojačivači mogu povećati intenzitet Raman signala do 10to lO ° fold2. Naša prethodna studija pokazala je da su naše domaće koloidne nanočestice od srebra (Ag NP)pouzdan i ponovljiv materijal za poboljšanje SERS-a(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija). Cilj trenutne studije bio je procijeniti izvedivost korištenja SERS-a koji se temelji na Ag NP-u(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)uzoraka urina pacijenata za određivanjetransplantacija bubregafunkcija u usporedbi s konvencionalnim biokemijskim markerima.
cistanche ekstrakt praha
METODA I ŽIVOTINJA
Prikupljanje uzoraka i podataka. Uzorci urina i krvi prikupljeni su izbubregpresaditipacijenti na Odjelu za urologiju bolnice West China na Sveučilištu Sečuan. Ti su uzorci prikupljeni istodobno u roku od 3 dana odbubregpresaditikirurgija. Slijedeći standardni operativni postupak, uzorci krvi poslani su u laboratorij za kliničku biokemiju u Zapadnoj kineskoj bolnici za određivanje dušika u SCr-u i krvi urea dušika (BUN). Uzorke urina prikupili su sami pacijenti pomoću sterilne cijevi od 50 mL. Uzorci urina potom su dostavljeni bolničkom laboratoriju u roku od 8 sati nakon prikupljanja. Cijevi za urin centrifugirane su na 1500×g 10 minuta kako bi se uklonile stanice i krhotine, a samo su rezultirajući nadnaslovi bili pohranjeni u alikvotima na hladnjaku -80 °C prije uporabe. Razine proteina i kreatinina u uzorcima urina određene su u Laboratoriju za kliničku kemiju u Općoj bolnici Vancouver (Vancouver, Britanska Kolumbija, Kanada).
Nanočestice srebra (Ag) i priprema uzorka urina. Ag koloidi pripremljeni su pomoću hidroksilamin hidroklorida i Ag nitrata kako je prethodno opisano23,24. Ukratko, stakleno posuđe korišteno u sljedećim postupcima očišćeno je losionom od kromne kiseline, a zatim je prije uporabe temeljito isprano mili-O vodom., 4,5 mL od 0,1 M Otopina NaOH brzo je dodana u 5 mL otopine hidroksilamina hidroklorida od 6×10-2M, a smjesa se miješala dok se ne stvori homogena suspenzija. Rezultirajuća otopina pomiješana je s 90 mL od 1,11×11×10-3M AgNO, vodenom otopinom na sobnoj temperaturi do prisutnosti mliječno-sive boje. Ova Ag koloidna suspenzija tada je pohranjena u mraku prije uporabe. Kako bi se osigurao dosljedan oblik i veličina Ag NP-a, svi eksperimentalni koraci i procesi su standardizirani. Jednom spremni za uporabu, Ag koloidi su bili peletni centrifugiranjem na 10,000×g za 10 min. Slika Ag nanočestica prijenosne elektronske mikroskopija (TEM) uzeta je s veličinama sintetiziranog Ag NP-a nakon normalne raspodjele srednjeg promjera 35±5 nm (Suppl. Slika 1). Peletni Ag NP zatim su pomiješani s uzorcima urina u omjeru 1:1 u pravokutnoj aluminijskoj ploči (ukupni volumen od 10 μL). Ista serija Ag NP korištena je za jednu rundu SERS-a(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)mjerenje svih uzoraka urina u isto vrijeme kako bi se izbjegla vjerojatna nedosljednost NP Ag. Ponovljena mjerenja (tehnička replikacija) istih uzoraka provedena su istom ili drugom serijom Ag NP. Mješavina Ag koloida/urina zatim se sušila na zraku na sobnoj temperaturi 60 minuta prije SERS-a(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)mjerenje kako bi se olakšala molekularna agregacija. Ako su pripremljeni uzorci prikazali takozvani "efekt prstena kave" ili otvoreno stvaranje kristala (malo slučajeva), ponovno su napravljeni do odsutnosti ovog problema. Važno je napomenuti da se vjeruje da agregacijski agregacijski agensi povećavaju intenzitet signala SERS-a(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija), međutim, Sud se odlučio odreći uporabe takvih sredstava u nadi da će pojednostaviti postupak pripreme uzorka.
korist od ekstrakta cistanche: spriječiti bolesti bubrega
SERS(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)mjerenje. SERS spektri mješavine Ag koloida/urina izmjereni su komercijalnim Ramanovim spektrometrom (AURA, Verisante Technology, Vancouver, BC, Kanada) opremljenim diodnim laserom od 785 nm za ramansku pobudu, slično prototipu o kojem je ranije izvijestio Zhao et al.25,26.Laserska zraka isporučena je u uzorak kroz jedno vlakno promjera jezgre od 200 μm. Sirove signale prikupila je sonda koja se sastojala od središnjeg pobudnog vlakna okruženog sa sto deset vlakana promjera jezgre od 100 um, a zatim isporučena spektrometru. Svaki SERS(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)spektar je dobiven s laserskom snagom pobude od 150 mW i vremenom integracije od jedne sekunde s spektralnom razlučivošću od 8 cm-lin u rasponu valnih brojeva od 500-1800 cm-1. Za svaku osušenu kapljicu ili uzorak izmjerena su tri spektra s uočavanjem cijelog područja uzorka na aluminijskom toboganu, a srednja vrijednost korištena je u naknadnoj analizi podataka. Monitor je također korišten za minimiziranje heterogenosti svakog testa istog uzorka vizualizacijom spektra istovremeno tijekom mjerenja. Ako se vizualizirani spektar uvelike razlikovao jedan od drugoga, tada je dobiveno još 3-6 spektra dok se ne postigne dosljednost.
Analiza podataka. Rezultirajući SERS(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)spektar uzoraka urina u rasponu valnih duljina od 500-1800-1 cm izvađen je oduzimanjem fluorescencijske pozadine pomoću algoritma polinomne ugradnje petog reda27. Za kvantificiranje biokemijskih parametara korištena je djelomična regresija najmanjih kvadrata (PLS) s izostavnom unakrsnom validacijom (LOO-CV)bubregpresaditifunkcija koja uključuje protein urina, kreatinin urina(UCR), urin ureu, SCr i BUN. Koncentracije tih parametara dobivenih analizom biokemije krvi i urina korištene su kao zlatni standard za usporedbu SERS-a(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)analiza urina. Softver TIBCO STATISTICA (Verzija 10, TIBCO SOFTWARE Inc., Palo Alto, CA, SAD) korišten je za PLS regresijsku analizu.
Etičko odobrenje. Ovu studiju (Broj odobrenja: 2019(748))odobrilo je etičko povjerenstvo u bolnici West China sveučilišta Sečuan, a svi sudionici potpisali su informirani pristanak prije prikupljanja uzoraka. Etičko povjerenstvo Sveučilišta Sečuan i bolnice West China potvrdilo je da su sve istraživačke aktivnosti provedene u skladu s relevantnim smjernicama i propisima.
cistanche stabljike
REZULTAT
Ukupno 110bubregpresaditiprimatelji (80 muškaraca i 30 žena; srednja dob kohorte 41,5 godina) sudjelovali su u ovom istraživanju. Rezultati biokemije urina pokazali su da je raspon proteina urina bio 0,05-6,83 g/L, UCR 1,03-22,49 mmol/L, a urina urea 29,6-535,8 mmol/L, biokemijski rezultati krvnih testova pokazali su da je raspon SCr-a bio 39-1461 umol/L i BUN 3,2-25,1 mmol/L. Demografske karakteristike pacijenata i njihovi rezultati testova urina i krvi sažeti su u tablici 1.
Stol 2. Sažmite prethodno prijavljeni SERS(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)vršni položaji i dodjele načina vibracija1.
The SERS(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)spektri mješavina Ag NP/urina mjereni su pod istim uvjetima(1 dan nakon pripreme smjese). The SERS(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)spektri uzoraka otkrili su mnoge dominantne vibracijske trake, što podrazumijeva usku interakciju između Ag koloidnih i urinskih molekula što rezultira poboljšanjem signala. Kao što je prikazano na Sl.1, glavni SERS(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)vrhovi (vibracijski zadaci) urina dodijeljeni su 1285,1004, 702 i 1383 cm-1, što biokemijski odgovara citozinu, urei, kolesterolu i CH3 pojasu, odnosno8. Ostali biokemijski zadaci SERS-a(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)vrhovi prikazani na slici 1 sažeti su u tablici 2. Da biste istražili je li SERS(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)može se koristiti kao neinvazivno sredstvo za procjenu statusabubregTransplantaciju, PLS generirani modeli korišteni su za predviđanje koncentracijabubregpresaditifunkcijski markeri u mokraći i krvi. Na slici 2 prikazani su rezultati PLS analize proteina urina, UCR-a i ureje urina u usporedbi sa SERS-om(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)spektri, respektivno. Kao referenca za sposobnost predviđanja PLS analize, R'>0.67 naznačio je visoku prediktivnu točnost, raspon od 0,33-0,67 umjerenu prediktivnu točnost, R' raspon od 0,19-0,33 nisku prediktivnu točnost i R'<0.19 unacceptable="" variables2.="" the="" urine="" results="" revealed="" an="" r²="0.4660（moderate）" for="" urine=""><0.001）， r²="0.8106（high）for"><0.001）， and="" r²="0.7808（high）" for="" urine=""><0.001）. figure="" 3="" showed="" the="" results="" of="" pls="" analysis="" of="" the="" blood="" scr="" and="" bun="" as="" compared="" to="" the="" urinary="">(Površinski poboljšano Ramanova spektroskopija)spektri, respektivno. Rezultati krvi otkrili su R² = 0.7628(visok) za SCr (p<0.001）and r²="0.6539" （moderate="" to="" high）for=""><0.001）. because="" the="" low="" concentrations="" of="">bubregpresaditibiomarkeri funkcije - normalna funkcija transplantacije nije zabrinjavajuća u kliničkoj skrbi, izračunali smo standardnu devijaciju (SD) njihovih visokih koncentracija prema graničnoj razini. Za protein urina<0.3 g/l,="" the="" calculated="" sd="" was="" 0.33="" g/l,="" and="">0,3 g/L, SD 0,44 g/L.Za UCr<7 mmol/l,="" the="" calculated="" sd="" was="" 1.69="" mmol/l,="" and="">7 mmol/L, SD 1,64 mmol/L.Za urin urea<266 mmol/l,="" the="" sd="" was="" 47.88="" mmol/l,="" and="">266 mmol/L, SD29,57 mmol/L, Serumski biomarkeri uglavnom se koriste zabubregpresaditifunkcija u kliničkoj praksi. Za SCr<110 mmol/l,="" the="" sd="" was="" 87.98="" mmol/l,and="">110 mmol/L, SD 108,21 mmol/L.Za BUN<7.7 mmol/l,="" the="" sd="" was="" 2.15,="" and="">7,7 mmol/L, SD 2,32 mmol/L.
| 
|
| Slika 2. Modeli generirani pls analizom korišteni su za predviđanje koncentracija molekula u mokraći.PLS analiza proteina urina (a), UCR-a (b) i ureje urina (c). Rezultati te pokazali su da je R2 = 0.4660 za protein urina (a) (p) (p<0.001), r2="0.8106" for="" ucr="" (b)=""><0.001), r2="0.7808" for="" urine="" urea="" (c)=""><> | Slika 3. Generirani modeli PLS analize korišteni su za predviđanje koncentracija biomarkera krvi za funkciju transplantacije bubrega.Rezultati su pokazali da je R2 =0.7628 za SCr (a) (p) (p<0.001) and="" r2="0.6539" for="" bun="" (b)=""><0.001),> |
