Učinak oksidativnog stresa i interleukina-1 unakrsnog razgovora na kroničnu upalu u EAP štakora i intervencija Anemone Tomentosa
Dec 09, 2025
Sažetak
Ciljevi: Istražiti ulogu oksidativnog stresa i interakcije interleukina-1 (IL-1) u kroničnoj upali prostate kod eksperimentalnog autoimunog prostatitisa (EAP) štakora i razjasniti mehanizam kojim Anemone tomentosa liječi EAP štakore. Metode: Trideset Wistar štakora nasumično je raspoređeno u pet skupina (svaka n=6): normalna, model, Anemone tomentosa s niskom dozom, Anemone tomentosa sa srednjom dozom i Anemone tomentosa s visokom dozom. Nakon intervencije lijekom, Western blotting je korišten za otkrivanje proteina TLR-4, IRAK1 i pNF-κB p65 u tkivu prostate. Serumska superoksid dismutaza (SOD), glutation peroksidaza (GSH‑Px) i malondialdehid (MDA) mjereni su pomoću kompleta za testiranje. Upalni citokini, uključujući interleukin-1 i interleukin-10, mjereni su ELISA-om. Rezultati: U usporedbi s normalnom skupinom, ekspresija proteina TLR‑4, IRAK1 i pNF‑κB p65 u prostati model skupine bila je značajno povećana (P <0,01). Razine SOD i GSH-Px u serumu bile su smanjene (P < 0,01), dok su razine MDA i interleukina-1 povećane (P < 0,01). U usporedbi s modelnom skupinom, intervencija Anemone tomentosa značajno je smanjila ekspresiju proteina TLR-4, IRAK1 i pNF-κB p65 u prostati EAP štakora (P < 0,01). Serumski SOD, GSH-Px i interleukin-10 bili su značajno povišeno (P < 0,01 ili P < 0,05), dok su MDA i interleukin-1 bili sniženi (P < 0,01 ili P < 0,05). Histologija je pokazala da su ozljeda žlijezde prostate i infiltracija upalnih stanica poboljšani nakon liječenja Anemone tomentosa. Zaključak: IRAK1 može biti ključno čvorište koje posreduje u međusobnom razgovoru između oksidativnog stresa i IL-1 tijekom upale u EAP štakora. Protuupalni mehanizam Anemone tomentosa u EAP štakora može uključivati smanjenje oksidativnog stresa i IL-1 regulacijom signalnog puta TLR-4/IRAK1/NF-κB p65.
Dodaci biljci Cistanche
Ključne riječi
Kronični prostatitis; eksperimentalni autoimuni prostatitis (EAP); oksidativni stres; interleukin-1 (IL-1); IRAK1; TLR‑4/IRAK1/NF‑κB p65 signalni put; TRAVNJAK; GSH‑Px; MDA; ELISA; Western blot; Anemone tomentosa; Dahuocao (Zhuang lijek); Tradicionalna kineska medicina; TCM biljka za prostatitis; kineska etnomedicina; protuupalno; antioksidativna terapija
Kronični prostatitis (CP)jedna je od najčešćih bolesti u urologiji i andrologiji. U Kini, prijavljena prevalencija CP kreće se od 6,0% do 32,9% [1]. Klinički, uglavnom je karakterizirana kroničnom boli u zdjelici i može biti popraćena različitim stupnjevima urinarnih simptoma i seksualne disfunkcije, što ozbiljno utječe na kvalitetu života bolesnika. Prema izvješćima istraživanja [2], patogeneza CP može biti povezana s infekcijom patogenom, oksidativnim stresom, refluksom urina, promjenama u razinama spolnih hormona, neuroendokrinom neravnotežom i imunološkim upalnim odgovorima. Trenutne studije pokazuju da se u upalnom stanju prostate proizvodi velika količina reaktivnih kisikovih vrsta (ROS); mikrookruženje s visokim ROS-om izaziva oksidativni stres i sudjeluje u nastanku i razvoju CP [3]. Citokini su regulatorni proteinski polipeptidi koji imaju važnu ulogu u nastanku i razvoju CP; ozbiljnost bolesti korelira s razinom interleukina-1 (IL-1) u izlučevinama prostate [4], pružajući potencijalni terapijski pristup. S obzirom na složenu patofiziologiju, suvremeni medicinski tretmani za CP imaju određena ograničenja [5]. Posljednjih je godina tradicionalna kineska medicina (TCM) pokazala povoljnu učinkovitost u liječenju CP-a, ublažavanju bolova i urinarnih simptoma, te demonstrirajući karakteristične prednosti.
Iz perspektive TKM-a, etiologija i patogeneza ove bolesti uključuju nedostatak bubrega, vlažnu toplinu i zastoj krvi [6]. Zhuang etnomedicinska biljka Dahuocao (Anemone tomentosa; opor, blago gorak, neutralnog svojstva) ima funkciju čišćenja topline i raspršivanja vlage, pospješuje diurezu za ublažavanje strangurije, tonizira qi i jača bubreg [7]. Klinička opažanja sugeriraju da Dahuocao može poboljšati simptome CP [8] i regulirati upalnu sekreciju citokina u štakora modela CP [9]. Njegov mehanizam mogao bi biti povezan s putem mikroRNA-146a/toll-sličnog receptora-4 (TLR-4)/nuklearnog transkripcijskog faktora-κB (NF-κB) koji potječe iz prostate corpora amylacea [10]. Na temelju toga, ova je studija promatrala ulogu unakrsne interakcije između oksidativnog stresa i IL-1 u kroničnoj upali prostate u eksperimentalnom modelu štakora s autoimunim prostatitisom (EAP) i istraživala učinak intervencije uvarka Dahuocao.
Materijali
1.1 Pokusne životinje
Trideset mužjaka Wistar štakora kupljeno je od Changsha Tianqin Biotechnology Co., Ltd. (broj licence: SCXK2019‑0013), starosti 8 tjedana, tjelesne težine 200 ± 17 g. Etičko odobrenje za životinje br.: DW20220926-202, Sveučilište kineske medicine Guangxi. Životinje su bile smještene u Ključnom laboratoriju molekularne biologije za prevenciju i liječenje u TCM-u, Guangxi.
1.2 Glavni instrumenti i reagensi
Aparat za elektroforezu (Beijing Liuyi, DYCZ‑24DN), kvantifikator nukleinske kiseline/proteina (Denovix DS‑11), sustav polusuhog prijenosa (ATTO WSE‑4040, AE6675L). Potpuni Freundov adjuvans (Sigma-Aldrich, F5881). TLR-4 antitijelo (Afinitet, AF7017), interleukin-1 receptor-asociirana kinaza-1 (IRAK1) antitijelo (Afinitet, AF4742), fosfo-NF-κB p65 antitijelo (Afinitet, AF2006). GSH‑Px kit (Nanjing Jiancheng, A005-1), SOD kit (Nanjing Jiancheng, A001-1), MDA kit (Nanjing Jiancheng, A003-1). IL-1 ELISA (Lianke Bio, EK301BHS), IL-10 ELISA (Lianke Bio, EK310).
Metode
2.1 Priprema EAP štakorskog modela
Priprava pročišćenih proteina prostate štakora slijedila je prethodne metode [10]. Modeliranje imunizacije [10-11] provedeno je prema utvrđenim protokolima. Uspješno modeliranje pokazalo je nestanak mukoznih nabora unutar kanalića prostate, nepotpuni acini, stromalni edem i infiltracija upalnih stanica [12].
2.2 Priprema dekokta Dahuocao
Uvarak Dahuocao (Anemone tomentosa) pripremljen je prema prethodnim eksperimentalnim postupcima [10].
2.3 Grupiranje i primjena lijeka
Trideset štakora nasumično je dodijeljeno tablicom nasumičnog odabira u normalne, modelne te skupine s niskom, srednjom i visokom dozom Dahuocaoa (n=6 po skupini). Nakon uspješnog modeliranja, skupine s niskom, srednjom i visokom dozom primile su dekokciju Dahuocaoa gavažom u koncentracijama od 1,46 g/mL, 2,92 g/mL, odnosno 5,84 g/mL (4 mL/kg·d). Normalne i modelne skupine primale su fiziološku otopinu (4 mL/kg·d). Tretmani su primjenjivani jednom dnevno tijekom 4 tjedna.
2.4 Histopatologija prostate (H&E bojenje)
Tkiva prostate su fiksirana, ugrađena i presječena; rezovi su obojeni hematoksilinom-eozinom i pregledani svjetlosnim mikroskopom kako bi se procijenile acinarne strukturne promjene i infiltracija upalnih stanica.
2.5 Serumski markeri oksidativnog stresa: SOD, MDA, GSH‑Px
Razine SOD, MDA i GSH‑Px u serumu mjerene su strogo u skladu s odgovarajućim uputama za komplet.
2.6 ELISA detekcija IL-1 i IL-10 u serumu
Koncentracije IL-1 i IL-10 u serumu mjerene su strogo prema protokolima kompleta ELISA.
2.7 Western blot detekcija TLR-4, IRAK1 i pNF-κB p65 u prostati
Otprilike 50 mg tkiva prostate samljeveno je u fini prah u tekućem dušiku, alikvotirano i lizirano u RIPA puferu. Proteini su razdvojeni elektroforezom, prebačeni, blokirani, inkubirani s primarnim antitijelima, isprani, inkubirani sa sekundarnim antitijelima, isprani i snimljeni. Ekspresija proteina je kvantificirana kao ciljna/siva vrijednost traka za održavanje.
2.8 Statistička analiza
Podaci su analizirani pomoću SPSS 22.0. Normalno distribuirani podaci s homogenošću varijance prikazani su kao srednja vrijednost ± SD i analizirani jednosmjernom ANOVA s LSD-t post hoc testovima. Nenormalni ili heteroskedastični podaci prikazani su kao M (QR) i analizirani neparametrijskim testovima. Obostrani P < 0,05 smatran je statistički značajnim.
Rezultati (sažeta ponovna izjava radi jasnoće)
U usporedbi s normalnim: TLR‑4 prostate, IRAK1 i pNF‑κB p65↑ (P < 0,01); serumski SOD i GSH‑Px↓ (P < 0,01); MDA i IL‑1 ↑ (P < 0,01).
Nasuprot modelu: Anemone tomentosa (Dahuocao) smanjio je TLR-4/IRAK1/pNF-κB p65 (P < 0,01); povećani SOD, GSH-Px i IL-10 (P < 0,01 ili P < 0,05); smanjeni MDA i IL-1 (P < 0,01 ili P < 0,05). Histologija je pokazala ublaženu ozljedu žlijezde i upalnu infiltraciju.
Zaključak
IRAK1 može predstavljati središnji čvor u međusobnom povezivanju oksidativnog stresa i IL-1 tijekom kronične upale prostate u EAP štakora. Anemone tomentosa (Dahuocao), TCM/Zhuang etnomedicinska biljka za prostatitis, može inhibirati kroničnu upalu smanjenjem oksidativnog stresa i IL-1 kroz regulaciju signalnog puta TLR-4/IRAK1/NF-κB p65.
Bilješke o autoritetu i izvoru
Epidemiologija i biomedicinski kontekst temeljeni su na nacionalnoj urološkoj/androloškoj literaturi [1-6].
Identitet, svojstva i indikacije TCM-a Anemone tomentosa (Dahuocao) upućuju na zbornik kineske Materia Medica Državne uprave TCM [7], autoritativni izvor.
Klinička promatranja i mehaničke studije na životinjama o Dahuocaou za CP/CNP podupiru recenzirani kineski časopisi i standardizirane eksperimentalne smjernice [8-12], povećavajući vjerodostojnost upotrebe TCM biljke za prostatitis.
Reference
[1] Mi H, Chen K, Mo ZN. Epidemiološke karakteristike kroničnog prostatitisa u Kini. Chin J Androl. 2012;18(7):579-582.
[2] Zheng XT, Chen SH, Yao WL, et al. Napredak u etiologiji i patogenezi kroničnog prostatitisa. Moderna dijagnoza i liječenje. 2019;30(11):1810-1813.
[3] Paulis G. Upalni mehanizmi i oksidativni stres u prostatitisu: moguća uloga antioksidativne terapije. Res Rep Urol. 2018;10:75-87.
[4] Kang SW, Park JH, Seok H, et al. Učinci korejskog crvenog ginsenga na upalne citokine i apoptozu u štakorskom modelu kroničnog nebakterijskog prostatitisa. Biomed Res Int. 2019;2019:2462561.
[5] Xue Y, Duan Y, Gong X, et al. Tradicionalna kineska medicina za kronični prostatitis/sindrom kronične boli u zdjelici: sustavni pregled i meta-analiza. Medicina (Baltimore). 2019;98(26):e16136.
[6] Sun ZX, Li PC. TKM dijagnostičko i terapijsko razmišljanje za kronični prostatitis. Liaoning J Tradit Chin Med. 2019;46(2):268-269.
[7] Uredništvo kineske Materije Medice, Državna uprava TKM-a. Kineska Materia Medica. Šangaj: Shanghai Science and Technology Press; 1999:1768, 3166.
[8] Lu LX, Wu JY, Huang ZM, et al. Kliničko promatranje retencionog klistira s Dahuocaom (Zhuang lijek) u 60 slučajeva kroničnog prostatitisa. Hunan J Tradit Chin Med. 2019;35(6):55-56. doi:10.16808/j.cnki.issn1003‑7705.2019.06.024.
[9] Wang WJ, Shi H, Zhang J, et al. Dahuocao inhibira upalne reakcije u modelu štakora s nebakterijskim prostatitisom. Moderna imunologija. 2021;41(6):504-508. doi:10.35541/cjd.20201030.
[10] Lu LX, Shi H, Huang ZM, et al. Uloga miRNA‑146a/TLR‑4/NF‑κB puta prostate corpora amylacea u kroničnoj upali EAP štakora i intervencija Dahuocaoa. Chin Gen Pract. 2023;26(20):2518-2524.
[11] Qian Y, Qian XQ, Gong DW, et al. Intervencija resveratrola na citokine u tkivu prostate modela prostatitisa štakora. Chin J Androl. 2017;31(3):14-18.
[12] Stručno povjerenstvo za eksperimentalnu farmakologiju TCM-a, Kinesko udruženje kineske medicine. Nacrt specifikacije za pripremu životinjskih modela kroničnog prostatitisa. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 2018;24(19):10-14.
Neobavezne autorske ključne riječi za indeksiranje (za vidljivost)
Tradicionalna kineska medicina; Zhuang etnomedicina; Dahuocao; Anemone tomentosa Maxim.; prostatitis; sindrom kronične boli u zdjelici; TLR4; IRAK1; NF‑κB; oksidativni stres; antioksidativni enzimi; citokini; ELISA; Western blot; model štakora; EAP; biljni protuupalni; TCM biljka za prostatitis.
