Antidepresiv i djelovanje tradicionalne kineske biljke Cistanche na poboljšanje kognitivnih sposobnosti

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-pošta:audrey.hu@wecistanche.com

Dongfang Wang,1 Haizhen Wang,2 i Li Gu2

1. Uvod

Depresija i s njom povezani poremećaji raspoloženja, s procjenom da 12-17 posto stanovništva doživi barem jednu epizodu u životu, među vodećim su uzrocima mentalnih poteškoća i smatraju se jednim od najvećih svjetskih javnozdravstvenih problema [1]. Od posebne je važnosti da značajan dio pacijenata s depresijom pati od gubitka pamćenja, problema s koncentracijom, smanjene energije ili umora, gubitka interesa ili zadovoljstva u hobijima i aktivnostima, poteškoća sa spavanjem, ranog jutarnjeg buđenja ili prekomjernog spavanja. Iako su neuralni supstrati za abnormalnosti u depresiji i srodnim sindromima nejasni, općenito je prihvaćeno da oštećenje neuroplastičnosti i stanične otpornosti dovodi do patofiziologije depresije i uspješno liječenje može ovisiti o intervenciji na razini neurotransmitera [2]. Pristup liječenju depresije u osnovi se temelji na klasičnom monoaminskom sustavu

hipoteza, koja tvrdi da disregulacija monoamina, posebno serotonina (5-HT) i norepinefrina (NE), doprinosi patogenezi depresije, a intervencija neurotransmiterskog sustava s dopaminskim agonistima i dopamin-noradrenergičkim modulatorima ublažila bi simptome velike depresije poremećaj [3]. Iako se naširoko propisuju, kurativna učinkovitost antidepresiva je upitna, a nuspojava se ne može zanemariti jer značajan dio pacijenata ne reagira na manipulaciju monoaminskim sustavom [4]. Nedavno su nove teorije o patogenezi depresije pokazale da višestruki sustavi, uključujući upalne putove, put oksidativnog stresa, osovinu hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda (HPA), metabolički i bioenergetski sustav, neurotrofne putove, glutamatni sustav, opioidni sustav i kolinergički sustav, usko su povezani s pojavom depresije [3]. Dokazi pokazuju da je višestruka ciljna intervencija proizvela bolju učinkovitost od jedne pojedinačne ciljne intervencije [5]. Hitno su potrebne nove terapije temeljene na teoriji disregulacije višestrukih sustava.

Biljne proizvode navodno konzumira više od polovice stanovništva SAD-a [6]; interes i potražnja za biljkama ili biljnim proizvodima kao dopunskim načinom liječenja depresije raste diljem svijeta. Utvrđeno je da mnoge ljekovite biljke pokazuju blagotvoran učinak na ublažavanje depresije. Biljke za koje se navodi da imaju učinak suzbijanja depresije i poboljšanja kognitivnih funkcija uključuju morski trn [7], Ginkgo biloba [8], Piper nigrum [9], Hypericum perforatum [10], Griffonia simplicifolia [11]. Kombinirana primjena ferulinske kiseline i piperina pokazala je sinergistički učinak sličan antidepresivu kod miševa manipulirajući monoaminergičkim sustavom [7]. Albiflorin je karakteriziran visokim selektivnim afinitetom prema receptorima i transporterima neurotransmitera i značajno povećanim izvanstaničnim koncentracijama 5-HT i NE u hipotalamusu štakora koji se slobodno kreću [12]. Ljekovita biljka Melissa officinalis L. ublažila je depresivno ponašanje miševa utječući na razinu serotonergičkih neurotransmitera [13]. Ove biljke ili dekocije, razvijene kao alternativni lijekovi za depresiju, pomažu u ublažavanju simptoma depresije i predstavljaju novi izvor za razvoj antidepresiva.Biljka Cistanchevrste, rasprostranjene u sušnim zemljama i pustinjama sjevernog dijela Kine, biljke su tradicionalne kineske medicine i široko se koriste za liječenje raznih bolesti više od 1,{1}} godina u Kini. Višestruka učinkovitostbiljka Cistanchedekocija se kreće između afrodizijačkih [14], imunoloških [15], antioksidativnih [16] i hepatoprotektivnih [17] svojstava. Uvarak C. deserticola inducira testikularne steroidogene enzime [18], potiče erektilni odgovor penisa i skraćuje razdoblje latencije erektilne reakcije u kastriranih štakora [19].Biljka CistancheZabilježeno je da inhibira aktivnosti dopaminergičkih neurona reguliranjem inhibicijskih gena apoptoze i neurotrofnih čimbenika [20]. Uvarci C. tubulosa popravili su kognitivnu disfunkciju uzrokovanu A 1-42 putem blokiranja taloženja amiloida i oživjeli kolinergičku i hipokampalnu dopaminergičku neuronsku funkciju [21]. Neuroprotektivno svojstvobiljni Cistancheimplicira terapijski potencijal u kognitivnim bolestima. Depresija je uobičajeni mješoviti oblik emocionalnih reakcija sa zaboravnošću i kognitivnim padom kao uobičajenim simptomima [22].Biljka Cistancheobično se koristio kao tradicionalni kineski lijek za liječenje zaboravljivosti; štoviše, nedavno izvješće pokazuje da je davanje kukuruznog brašna s dodatkom C. tubulosa u ranoj odrasloj dobi korisno za promicanje dugovječnosti i učenje povezano s mirisom i poboljšanje pamćenja u modelu Drosophila bez kralježnjaka [23]. Ove činjenice ukazuju na svojstvo biljke Cistanche da poboljšava kognitivne funkcije; ovdje smo u ovom istraživanju po prvi put opisali svojstvo antidepresiva i njegov odnos s aktivnostima kognitivnog poboljšanja u modelu sisavaca regulacijom monoaminskog sustava i HPA osi. Rasvjetljavanje antidepresivnog svojstva i preliminarnog mehanizma biljke Cistanche moglo bi proširiti spektar primjenebiljka Cistanche, koji bi se mogao razviti kao alternativni lijek za depresiju.

2. Materijali i metode

2.1. Biljni materijal i priprema dekocija. C. deserticola YC

Ma je ​​dobiven iz autonomne regije Nei Mongol, Kina; C. tubulosa dobivena je iz autonomne regije Xinjiang Uygur, Kina. Prije dekokcije, biljka (C. deserticola YCMa ili C. tubulosa) je pregledana kako bi se otkrio sadržaj ehinakozida i verbaskozida pomoću HPLC-a (tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti) (Milford, MA, Waters, SAD), a odgovarajući proizvod (prema do farmakopeje Narodne Republike Kine) korišten je za pokuse na životinjama. Uvarak je dobiven na temelju metode isparavanja vode koju je razvio Istraživački centar za prehrambeni i zdravstveni inženjering Državnog ministarstva obrazovanja, Sveučilište Sun Yat-sen. Osušeni Cistanche deserticola YCMa od 125 g smrvljen je i prosijan pomoću 120-mrežastog sita, a zatim je prah otopljen u 3 L ultračiste vode, zagrijan

na 100∘C 2 h, zatim ohlađen na sobnu temperaturu i prosijan; supernatant je recikliran. Sediment je zatim otopljen u 2 L ultračiste vode i zatim zagrijavan 1,5 h i ohlađen kako je gore spomenuto da se reciklira supernatant; sediment je zatim korišten za recikliranje supernatanta. Sadržaj cjelokupnog supernatanta je obogaćen rotacijskim vakuumskim isparivačima na 60∘C; konačno je koncentracija sirovog lijeka postavljena na 0,5 g/ml i proizvod je pohranjen na -20∘C.

2.2. Određivanje ehinakozida i verbaskozida pomoću HPLC analize.

HPLC (tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti) korištena je za mjerenje kvalitativnog i kvantitativnog testa ehinakozida i verbaskozida; verbaskozid (čistoća > 93 posto) i ehinakozid (čistoća > 93 posto) kupljeni su od Nacionalnog instituta za kontrolu hrane i lijekova (Peking, Kina) i korišteni kao standardna kontrola.

2.3. Briga o životinjama i provođenje pokusa.

Subjekti su bili SPF (specifični patogeni bez) mužjaci Kunming miševa težine 21-25 grama, koje je isporučio Medicinski eksperimentalni centar za životinje provincije Guangdong. Životinje su bile smještene u plastičnim kavezima (deset po kavezu); postavljeni su sljedeći uvjeti okoline: vlažnost 40-70 posto, sobna temperatura 21 ± 1∘C i 12 h: 12 h svjetlo-tamno razdoblje. Sve pokuse na životinjama odobrio je Etički odbor za životinje Sveučilišta Sun Yat-sen.

2.4. Ispitivanje repnog ovjesa.

Test ovjesa repa je napravljen prema protokolu koji su opisali Cryan i sur. [24] sa skromnim izmjenama. Ukratko, 21. dana miševi su obješeni za rep pomoću metalnih vješala privezanih najlonskim kateterom, s glavom na visini od 50 mm od poda. Miševi su obješeni na udicu na ljepljivim trakama 10-20 mm od kraja repa i izolirani su zvučno i vizualno izolirani daskama. Pokreti tijela miša su zabilježeni, a respiratorni pokreti su zanemareni. Prije dana eksperimenta, miševi su suspendirani 8 minuta radi prilagodbe.

3. Rezultati

3.1. Određivanje sadržaja glavnih bioaktivnih sastojaka u uzorcima C. deserticola YCMa i C. tubulosa. Feniletanoidni glikozidi kao što su ehinakozid i verbaskozid općenito se smatraju glavnim bioaktivnim sastojcima; stoga je sadržaj ehinakozida i verbaskozida u uzorcima C. deserticola YCMa i C. tubulosa određen HPLC-om. HPLC kromatogrami prikazani su na slici 1, a rezultati pokazuju da je ukupni sadržaj feniletanoidnih glikozida iz C. deserticola YCMa bio približno dvostruko veći od C. tubulosa. Težina ehinakozida i verbaskozida iznosi 1,27 ± 0.009 posto i 0,52 ± 0.0{ {21}}3 posto praha pripremljenog od C. deserticola YCMa i 19,81 ± 0.66 posto i 2,45 ± 0.12 posto praha pripremljenog od C. tubulosa. Težina ehinakozida i verbaskozida čini 0,90 ± 0,001 posto i 0,20 ± 0,001 posto uvarka C. deserticola YCMa i 5,90 ± 0,12 posto i 0,54 ± 0,05 postotka praha pripremljenog iz C. tubulosa (Tablica 1).

3.2. Uvarak C. deserticola YCMa i C. tubulosa ublažio je stres i razinu depresije. Test ovjesa repa (TST) je brza i klasična metoda za procjenu antidepresivnog učinka lijekova u miševa [24]; u ovom istraživanju, nepokretan status, uzrokovan kratkotrajnim i neizbježnim stresom obješenog o rep, korišten je kao obilježje koje odražava razinu depresije kod miševa. Provjerili smo može li dekokcija C. deserticola YCMa i C. tubulosa preokrenuti nepokretnost i potaknuti pojavu ponašanja povezanog s bijegom. U usporedbi s kontrolnim skupinama, razdoblje nepokretnosti stresne skupine povećalo se za 27,4 posto; u usporedbi sa stresnim skupinama, skupine tretirane srednjom, visokom koncentracijom uvarka biljke C. deserticola YCMa pokazale su statistički značajno smanjenje razdoblja nepokretnosti za 44,1 posto i 56,1 posto; skupine tretirane srednjom, visokom koncentracijom

Uvarak biljke C. tubulosa pokazao je statistički značajno smanjenje razdoblja nepokretnosti za 41,9 posto i 47,7 posto (Slika 2). Ovi rezultati pokazuju da bi dekokcija C. deserticola YCMa i C. tubulosa mogla smanjiti razinu stresa i depresije kod miševa, a dekokcija C. deserticola YCMa pokazala je nešto veću učinkovitost od dekokcije C. tubulosa.

3.3. Uvarak C. deserticola YCMa i C. tubulosa poboljšao je prostorno učenje i pamćenje miševa. Ljudi (i adolescenti i odrasli) koji pate od depresije skloni su patiti od poteškoća u učenju [28]; dokazano je da uvarak C. deserticola YCMa i C. tubulosa ublažava stres i razinu depresije; zatim smo odlučili procijeniti može li dekokcija C. deserticola YCMa i C. tubulosa utjecati na prostorno učenje i pamćenje pomoću Morrisovog modela vodenog labirinta, koji se široko primjenjuje u procjeni prostornog učenja i funkcije pamćenja povezanog područja mozga [29] . Tragovi kretanja klasificirani su u četiri tijekom latencije pretraživanja; pravocrtna putanja pokazala je da su miševi točno odredili položaj platforme za spašavanje, tendencijska putanja pokazala je da su miševi pokazali u osnovi ispravnu orijentaciju, a oštra putanja pokazala je da su miševi ili bili u ranom razdoblju treniranja ili patili od demencije, pokušavajući locirajte ciljno mjesto na temelju instinkta; nasumična putanja pretraživanja pokazala je da miševi imaju nisku sposobnost pozicioniranja i da besciljno pretražuju ciljno mjesto. Podaci su prikupljeni prema kriterijima.

Učinak dekokcija C. deserticola YCMa i C. tubulosa na sposobnost učenja prostora i pamćenja miševa pod stresom sputavanja prikazan je na slici 3. Nakon testa ovjesa repa, miševi su pokazali značajno produljeno razdoblje latencije. U usporedbi sa stresnim skupinama, miševi tretirani umjerenim, visokim dozama C. deserticola YCMa i niskim, visokim dozama C. tubulosa decoction pokazali su skraćeno razdoblje latencije; učestalost kojom su miševi plivali skrivenom platformom bila je značajno povećana u skupinama liječenim umjerenim, visokim dozama izvarka C. deserticola YCMa. Ovi rezultati pokazuju da su miševi pod stresom imali koristi od primjene uvarka biljke Cistanche i da su pokazali poboljšanje prostornog učenja i pamćenja.

3.4. Uvarak C. deserticola YCMa i C. tubulosa smanjio je aktivnost monoaminooksidaze. MAO katalizira oksidativnu deaminaciju amina kao što su tiramin, kateholamin i 5-hidroksitriptamin (5-HT) u mozgu i perifernim tkivima; inhibicija aktivnosti MAO rezultira u djelotvornosti antidepresiva [30]. Nastojali smo objasniti antidepresivni učinak C. deserticola YCMa i C. tubulosa; zatim je određena aktivnost MAO u mozgu. Nakon testa ovjesa repa, aktivnost MAO je značajno povećana; aktivnost MAO u skupinama liječenim suspenzijom repa, a potom umjerenim, visokim dozama

uvarak iz C. deserticola YCMa pokazao je značajan pad za otprilike 13,9 posto ~12,3 posto; aktivnost MAO u skupinama liječenim suspenzijom repa, a zatim visokom dozom dekokcije iz C. tubulosa pokazala je značajan pad za oko 13,2 posto (Slika 4). Podaci su pokazali da dekocija iz C. deserticola YCMa i C. tubulosa može inhibirati aktivnost MAO i može doprinijeti antidepresivu

učinak, a dekokcija C. deserticola YCMa pokazala je jaču učinkovitost od one C. tubulosa.

3.5. Primjena dekokcija C. deserticola YCMa i C. tubulosa rezultirala je povećanjem središnje koncentracije dopamina i smanjenjem koncentracije serumskog kortikosterona. Razina DA i NE u

središnji živčani sustav je mjeren kako bi se odredila podražljivost živaca. Nakon 4 tjedna testa ovjesa repa, u usporedbi sa grupama koje su bile izložene stresu, razina DA u grupama koje su tretirane umjerenim dozama C. deserticola YCMa značajno se povećala, svaka za 43,5 posto; razina DA u skupinama liječenim umjerenim dozama C. tubulosa također je značajno povišena (Slika 5(a)). Razina NE bila je blago povišena u skupinama liječenim uvarkom obiju biljaka u usporedbi sa skupinama koje su bile izložene stresu, a nije pronađena statistička razlika (Slika 5(b)). Ovi rezultati mogu objasniti molekularni mehanizam antidepresivnog učinka biljke Cistanche.

Adrenokortikotropni hormon (ACTH), polipeptidni hormon koji proizvodi i izlučuje prednja hipofiza, potiče izlučivanje glukokortikosteroida djelovanjem na koru nadbubrežne žlijezde, zona fasciculata [31]; kortikosteron, steroidni hormon koji proizvodi kora nadbubrežnih žlijezda, uključen je u regulaciju fizioloških procesa poput podizanja energije, imunoloških reakcija i odgovora na stres [32], pa smo odlučili proučiti učinak biljnog uvarka na HPA os. Mjerena je koncentracija ACTH i kortikosterona u serumu. Nakon 4 tjedna testa ovjesa repa, koncentracija ACTH i kortikosterona u skupini pod stresom bila je značajno regulirana prema gore (Slika 6). Nisu primijećene značajne promjene u skupinama liječenim uvarkom biljke Cistanche u usporedbi sa grupom pod stresom (Slika 6(a)). U usporedbi sa grupom pod stresom, koncentracija kortikosterona u serumu skupina liječenih umjerenim, visokim dozama dekokta C. deserticola YCMa značajno je smanjena; koncentracija kortikosterona u skupinama liječenih visokim dozama C. tubulosa bila je regulirana naniže, ali ne do značajne statističke razlike. C. deserticola YCMa i C. tubulosa mogle bi smanjiti koncentraciju kortikosterona u serumu i mogle bi biti uključene u regulaciju HPA osi, a dekokcija C. deserticola YCMa pokazala je jaču učinkovitost od one C. tubulosa.

4. Rasprava

U ovom su istraživanju definirane antidepresivne aktivnosti i poboljšanje pamćenja i učenja biljke cistanche, što bi moglo baciti novo svjetlo na djelovanje biljke cistanche i dati naznake za proširenje terapeutskog raspona primjene. Prethodne studije pokazuju da je biljka Cistanche multifunkcionalni kineski lijek s biološkim djelovanjem protiv starenja, antioksidativnim, estrogenim, antiosteoporotskim, afrodizijačkim i protuupalnim učincima [33]. Biljka Cistanche prepoznata je kao lijek za nedostatak bubrega, neplodnost i kronični zatvor (Farmakopejski odbor Kine, 2010.). Uvarak biljke Cistanche sastoji se od hlapljivih ulja, nehlapljivih feniletanoidnih glikozida (PeG), iridoida, lignana, alditola, oligosaharida i polisaharida. Ehinakozid i verbaskozid općenito se smatraju glavnim bioaktivnim sastojcima [34]. Postoje četiri glavne vrste Cistanche uključujući C. deserticola YCMa, C. tubulosa, Cistanche Sinensis G. Beck i Cistanche salsa var. albiflorashi i sur. [35]; odabrali smo C. deserticola YCMa i C. tubulosa kao naš model za određivanje sadržaja PeG-a, a C. deserticola YCMa posjedovala je veći sadržaj PeG-a (Slika 1), što može objasniti veću učinkovitost C. deserticola YCMa. Rezultati pokazuju da sadržaj glavnih bioaktivnih sastojaka određuje učinkovitost biljke cistanče.

Prethodne studije pokazuju da su proizvodi od biljke Cistanche korisni u liječenju neurodegenerativnih poremećaja pojačanom regulacijom faktora rasta živaca (NGF) u hipokampusu miševa [36, 37], ali nije objavljeno istraživanje o antidepresivima i kognitivnim aktivnostima učenja biljke Cistanche u modeli sisavaca. U ovoj studiji dokazano je da je uvarak biljke Cistanche učinkovit u ublažavanju razine stresa i značajnom povećanju ponašanja preživljavanja u testu ovjesa repa (Slika 2) i poboljšanju prostornog učenja i kapaciteta pamćenja u modelu vodenog labirinta (Slika 3). Lin i sur. dokazali da je biljka Cistanche poboljšala pamćenje povezano s mirisom u modelu vinske mušice [23]; usredotočili smo naše istraživanje na učinak antidepresiva i usvojili drugačiji životinjski model; Ishod je pokazao da je biljka Cistanche poboljšala različitu vrstu kognitivne funkcije, naime, sposobnost prostornog učenja kod miševa. Prema teoriji monoamina, iskustvo stresa i depresije usko su povezani s razinom monoaminskih neurotransmitera u mozgu, kao što su DA, NE, 5-HT i epinefrin [38]. I otkrili smo da uvarak biljke Cistanche može potkopati aktivnost MAO (Slika 4) i povećati središnju koncentraciju DA (Slika 5(a)). Iznenađujuće, koncentracija središnje 5-HT je smanjena tretmanom uvarkom biljke Cistanche (podaci nisu prikazani), jer su prethodna istraživanja pokazala da je smanjena aktivnost središnje 5-HT povezana s depresijom [39]. Disregulacija osovine hipotalamus-hipofiza-nadbubrežna žlijezda često je povezana s depresijom [40], intervencija na sustavu glukokortikoidnog receptora (GR) uspješno je preokrenula depresivni fenotip u miševa [41], a otkrili smo da je biljka Cistanche značajno ublažila serumski

koncentracija CORT (Slika 6(b)). Modulacija monoaminskog sustava i HPA osi doprinosi antidepresivnom učinku biljke Cistanche. Ehinakozid je mogao slobodno prijeći krvno-moždanu barijeru i djelovati na središnji živčani sustav [42], što može objasniti zašto je uvarak biljke Cistanche imao antidepresivnu funkciju. Po prvi smo put opisali svojstvo antidepresiva i njegov odnos s aktivnostima kognitivnog poboljšanja u modelu miša, a istražen je preliminarni mehanizam. Ipak, mehanizam antidepresivnog svojstva Cistanche nije razjašnjen na molekularnoj razini, a potrebna su daljnja istraživanja kako bi se razjasnio sveobuhvatni antidepresivni mehanizam biljke Cistanche.

S obzirom na to da je uvarak od biljke cistanca mješavina spojeva, moglo bi postojati više načina na koje uvarak od biljke cistanče djeluje antidepresivno i pospješuje sposobnost učenja. Oksidativni stres utječe na mnoge stanične funkcije neurona, a prekomjerna proizvodnja reaktivnih kisikovih vrsta (ROS) uzrokuje oštećenje stanica, apoptozu i smrt [43]. Ehinakozid ekstrahiran iz stabljika C. salsa pokazuje neuroprotektivni učinak smanjenjem proizvodnje ROS-a i apoptoze posredovane mitohondrijima [44]; akteozid, izuzetno jak antioksidativni spoj, mogao bi biti djelomično odgovoran za neuroprotektivni učinak [45]. Osim tradicionalne metode dekokcije, primjena suvremenih farmaceutskih metoda kao što su kapsule glikozida s kontroliranim otpuštanjem mogla bi pojačati učinak dekokcije bilja jer bi se bioaktivni sastojci mogli probaviti i razgraditi u gastrointestinalnom traktu [37].

5. Zaključci

U ovoj smo studiji otkrili da dekokcije C. deserticola

YCMa i C. tubulosa pokazale su antidepresivni učinak i poboljšale sposobnost prostornog učenja i pamćenja u mišjem modelu, a dekokcije C. deserticola YCMa i C. tubulosa imale su značajan utjecaj na HPA os;

C. deserticola YCMa pokazala je jaču farmakološku funkciju. C. deserticola i C. tubulosa mogle bi imati potencijal razvoja kao alternativnih lijekova za terapiju depresije.

Reference

[1] RC Kessler, KA McGonagle, S. Zhao et al., "Životna i 12-mjesečna prevalencija DSM-III-R psihijatrijskih poremećaja u Sjedinjenim Državama: rezultati iz Nacionalnog istraživanja o komorbiditetu", Archives of General Psihijatrija, god. 51, br. 1, str. 8–19, 1994.

[2] HK Manji, GJ Moore, G. Rajkowska i G. Chen, "Neuroplastičnost i stanična otpornost kod poremećaja raspoloženja", Molecular Psychiatry, sv. 5, br. 6, str. 578–593, 2000.

[3] JD Rosenblat, RS McIntyre, GS Alves, KN ​​Fountoulakis i AF Carvalho, "Beyond monoamines-novel targets fortherapy-resistent depression: A opsežan pregled," Current Neuropharmacology, sv. 13, br. 5, str. 636-655, 2015.

[4] K. Wilson i P. Mottram, "Usporedba nuspojava selektivnih inhibitora ponovne pohrane serotonina i tricikličkih antidepresiva kod starijih pacijenata s depresijom: meta-analiza", International Journal of Geriatric Psychiatry, sv. 19, br. 8, str. 754–762, 2004.

[5] S. Vezmar, B. Miljković´, K. Vucˇic´evic´ et al., "Farmakokinetika i učinkovitost fluvoksamina i amitriptilina u depresiji", Journal of Pharmacological Sciences, sv. 110, br. 1, str. 98–104, 2009.

[6] CH Halsted, "Dodaci prehrani i funkcionalna hrana: 2 strane novčića?" American Journal of Clinical Nutrition, sv. 77, str. 1001S–1007S, 2003.

[7] J.-S. Tian, ​​C.-C. Liu, H. Xiang i sur., "Istraživanje antidepresivnog učinka ulja sjemenki pasjeg trna putem GC-MS-baziranog metabolomičkog pristupa u kombinaciji s multivarijatnom analizom," Food and Function, sv. 6, br. 11, str. 3585-3592, 2015.