Ciljanje katepsina B pomoću cikloastragenola pojačava antitumorski imunitet CD8 T stanica putem inhibicije razgradnje MHC-I, dio 2

CAG inhibira lizosomsku razgradnju MHC-I posredovanu CTSB-om

Glikozid cistanhe također može povećati aktivnost SOD-a u tkivima srca i jetre, te značajno smanjiti sadržaj lipofuscina i MDA u svakom tkivu, učinkovito čisteći različite reaktivne kisikove radikale (OH-, H₂O₂, itd.) i štiteći od oštećenja DNA uzrokovanog pomoću OH-radikala. Cistanche feniletanoidni glikozidi imaju jaku sposobnost hvatanja slobodnih radikala, veću reducirajuću sposobnost od vitamina C, poboljšavaju aktivnost SOD u suspenziji spermija, smanjuju sadržaj MDA i imaju određeni zaštitni učinak na funkciju membrane spermija. Cistanche polisaharidi mogu pojačati aktivnost SOD i GSH-Px u eritrocitima i tkivu pluća eksperimentalno starih miševa uzrokovanih D-galaktozom, kao i smanjiti sadržaj MDA i kolagena u plućima i plazmi, te povećati sadržaj elastina, imaju dobar učinak čišćenja na DPPH, produžiti vrijeme hipoksije u starim miševima, poboljšati aktivnost SOD u serumu i odgoditi fiziološku degeneraciju pluća u eksperimentalno starim miševima Uz stančnu morfološke degeneraciju, pokusi su pokazali da Cistanche ima dobru antioksidacijsku sposobnost i ima potencijal da bude lijek za prevenciju i liječenje bolesti starenja kože. U isto vrijeme, ehinakozid u Cistancheu ima značajnu sposobnost hvatanja slobodnih radikala DPPH i ima sposobnost hvatanja reaktivnih vrsta kisika i sprječavanja degradacije kolagena izazvane slobodnim radikalima, a također ima dobar učinak popravka na oštećenje aniona slobodnih radikala timina.

Kliknite na maca ginseng cistanche morski konjić

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Prethodne studije pokazale su da se MHC-I uglavnom razgrađuje u lizosomima tijekom progresije tumora, što dovodi do izbjegavanja imunološkog sustava tumora.12 13 Nagađamo može li CAG također regulirati ekspresiju MHC-I na staničnoj membrani putem svog ciljnog proteina CTSB . Prvo smo upotrijebili RNA interferenciju da srušimo ekspresiju CTSB u staničnoj liniji MC38, a rezultati su pokazali da su razine ekspresije gena i proteina H2-k1 povećane nakon utišavanja CTSB (slika 5A, B). Slično, nakon obaranja i prekomjerne ekspresije CTSB u ljudskoj HCT-116 staničnoj liniji, razine ekspresije mRNA ili proteina HLA-A porasle su (slika 5C, D), odnosno smanjile se (slika 5E, F). U isto vrijeme, otkrili smo da tumorske stanice s visokom ekspresijom CTSB izražavaju niže razine HLA-A, dok stanice nakon nokdauna CTSB povećavaju ekspresiju HLA-A (slika 5G). Ovi rezultati pokazuju da CTSB ima negativan regulatorni učinak na ekspresiju MHC-I. Zatim smo staničnu liniju MC38 tretirali s CAG-om i otkrili da CAG potiče ekspresiju MHC-I i nema učinka na CTSB (slika 5H, I), što je bilo u skladu s prethodnim rezultatima studija na tumorskim tkivima. Štoviše, otkrili smo da se nakon tretmana s CAG-om H2-Kd skuplja iz stanice na njezinu membranu (slika 5J), što dodatno potvrđuje našu pretpostavku da CAG može inhibirati razgradnju molekule MHC-I i natjerati je da se skupi na staničnu membranu, koju lakše hvataju imunološke stanice. Kako bismo dodatno potvrdili našu hipotezu, upotrijebili smo Co-IP eksperiment kako bismo istražili veže li se CTSB na MHC-I i dovodi li do njegove degradacije. Otkrili smo da CAG može inhibirati vezanje CTSB i MHC u mišjim MC38 stanicama (slika 5K), a ekspresija MHC-I također se značajno povećava. Također smo primijetili isti fenomen u ljudskim HCT116 stanicama (slika 5L). Zatim, kako bismo dodatno potvrdili potiče li CAG ekspresiju MHC-I i agregaciju stanične membrane putem CTSB-a, transficirali smo CTSB mutantni plazmid u ljudske HCT-116 stanice. Rezultati su pokazali da je nakon transfekcije Y75A, A77V i G198V mutantnih plazmida, CAG-ova funkcija pojačavanja ekspresije CD74 i HLA-A gena bila uništena (slika 5M), a molekule MHC-I agregirane od stanične membrane do lizosoma (slika 5N). Ovaj je rezultat pokazao da CAG inhibira razgradnju MHC-I u lizosomima posredovanu CTSB-om i potiče reagregaciju MHC-I na staničnu membranu.

Kombinacija CAG i PD{0}} antitijela učinkovito poboljšava sposobnost ubijanja tumora CD8 plus T stanica

Imunološki bijeg tumora uglavnom je uzrokovan gubitkom funkcije prezentacije antigena tumorskih stanica i inhibicijom imunoloških kontrolnih točaka. Prema našim rezultatima, nagađali smo može li se CAG koristiti u kombinaciji s PD{0}} antitijelom za ubijanje tumora, kako za rješavanje nedostataka u prezentaciji tumorskog antigena, tako i za rješavanje iscrpljenosti CD8 plus T stanica uzrokovane PD{ {2}}/ PD-L1 put. Stoga smo transplantirali MC38 stanice raka u C57BL/6 miševe i formirali kombinaciju skupine PD-1 antitijela i CAG. Rezultati su pokazali da kombinirana skupina CAG i PD-1 antitijela pokazuje bolje antitumorske učinke od CAG i PD-1 skupina (slika 6A-D). Štoviše, primijetili smo značajno povećanje broja infiltriranih H2-Kd plus stanica, CD45 plus stanica i CD8 plus stanica u tumorskim tkivima (slika 6E–G) i ekspresiju gena povezanih s prezentacijom antigena H2-K1, Psmb8 i B2m također su poboljšani (slika 6H–J). U međuvremenu, ekspresija Ifng i Tnf gena također je značajno pojačana (slika 6K, L), a imunohistokemijsko bojenje je pokazalo da je ekspresija H2-Kd značajno porasla (slika 6M).

Stoga je ova studija uglavnom razjasnila antitumorski mehanizam CAG-a, uglavnom inhibicijom razgradnje MHC-I posredovane CTSB-om, pospješujući agregaciju molekula MHC-I na staničnu membranu, a zatim povećavajući sposobnost prezentacije antigena stanica raka. Štoviše, u kombinaciji s PD-1 antitijelima, mogao bi vrlo učinkovito ubiti stanice raka (slika 6N).

CAG potiče ekspresiju MHC-I u organoidima raka debelog crijeva i poboljšava sposobnost ubijanja CD8 T stanica

Kako bi se dodatno istražilo može li se farmakološki učinak CAG-a klinički primijeniti, korišteni su ljudski organoidi raka debelog crijeva. Otkrili smo da organoidi inkubirani s CAG-om pojačavaju ekspresiju MHC-I (slika 7A), a ekspresija gena ANXA1, B2M i HLA-A koji predstavljaju antigen također se povećala (slika 7B). U prethodnim smo eksperimentima otkrili da je CAG pojačao učinak ubijanja CD8 T stanica promicanjem ekspresije prezentacije antigena tumorskih stanica, a učinak je bio bolji u kombinaciji s PD-1 antitijelom. Kako bismo dodatno provjerili ove rezultate, prikupili smo perifernu krv zdravih ljudi i izolirali CD8 T stanice, a zatim ih inkubirali s organoidima stimuliranim CAG-om 24 sata (slika 7C). Rezultati su pokazali da u usporedbi sa skupinom koja je primala DMSO, CD8 T stanice u tumorskim organoidima tretiranim CAG-om više nisu odlutale, već su bile više koncentrirane na površini organoida; u isto vrijeme, bilo je manje odmaknutih CD8 T stanica u CAG i PD-1 skupinama (slika 7D). Otkrili smo da je IFN-G koji izlučuju aktivirane CD8 T stanice odgovarajuće pojačan (slika 7E–H).

Do sada smo otkrili da CAG potiče ekspresiju tumora koja predstavlja antigen kako bi se pojačao antitumorski učinak CD8 T stanica, a kombinacija CAG i PD-1 antitijela imala je superioran antitumorski učinak. Štoviše, analizirali smo podatke o raku debelog crijeva u bazi podataka Cancer Genome Atlas (TCGA) i otkrili da geni povezani s prezentacijom antigena HLA-A, HLA-B, HLA-C, CD74 i B2M pokazuju niske razine ekspresije u tumorima, a stopa preživljavanja ovih gena s niskom ekspresijom bila je vrlo loša (slika 7I, J, slika 7A–H).

Stoga smo otkrili da je pojačana ekspresija HLA-A, CD74 i drugih gena pomoću CAG-a bila korisna za pacijente s tumorom. Nadalje, otkrili smo da su pacijenti s visokom ekspresijom HLA-A, kao i IFNG, imali veću stopu preživljenja (slika 7K); pacijenti s visokom ekspresijom HLA-A i niskom ekspresijom PDCD1 također su imali bolju stopu preživljenja (slika 7L). Svi ovi nalazi sugeriraju da bi CAG bio kandidat za lijek za liječenje raka debelog crijeva.

RASPRAVA

Imunološki bijeg kritičan je razlog za neuspjeh imunološkog sustava u kontroli rasta tumora, ali kako se varijante bježanja pojavljuju tijekom imunoterapije i dalje je slabo shvaćeno.34 Studije su pokazale da gubitak funkcije predstavljanja tumorskog antigena, epigenetske promjene, ekspresija antiapoptotskih proteini i imunosupresivni receptori usko su povezani s imunološkim bijegom tumora. 6 7 35–37 Posljednjih godina, iako je imunoterapija predstavljena PD{4}} antitijelima napravila veliki napredak, fenomen otpornosti na lijekove i nereagirajuće liječenje raka debelog crijeva doveli su do velikog nezadovoljstva.38 39 Stoga pronalaženje kemikalija koje mogu pospješiti prezentaciju tumorskog antigena i sinergizirati s PD-1 antitijelima može bolje spriječiti imunološki bijeg tumora.

Nedavne studije su otkrile da aktivne molekule iz tradicionalne kineske medicine igraju učinkovitu ulogu u liječenju bolesti, kao što je celastrol u liječenju metaboličkog sindroma,32 andrografolid kod kolitisa i raka,40 baicalin u snižavanju lipida i trifolirizin u kontroli tumora. 41 42 CAG je aktivna molekula u A. membranaceus i ima funkcije kardiovaskularnih bolesti, zaštite jetre, antibakterijske i liječenja aneurizme abdominalne aorte.18 43–45 Međutim, malo je istraživanja o tome u području kolorektalnog karcinoma. Stoga smo željeli istražiti da li i kako CAG inhibira rast raka debelog crijeva kod miševa

Razvoj tehnologija scRNA-seq i scATAC-seq uvelike je unaprijedio istraživanje bolesti.46-48 Stoga smo upotrijebili jednostaničnu multi-omics tehnologiju za analizu specifičnog antitumorskog mehanizma CAG-a. Utvrđeno je da CAG potiče funkciju predstavljanja antigena stanica raka, a funkcije CD8 plus T stanica, CD4 plus T stanica i NK stanica u limfocitima bile su pojačane u različitim stupnjevima. S druge strane, Spp1 plus TAM stanice u mijeloidnim stanicama bile su sklonije transformaciji upalnog odgovora, a signal hipoksije je značajno inhibiran nakon CAG tretmana. Ovi su rezultati u skladu s rezultatima prijavljenim u prethodnim studijama, inhibicija Spp1 plus TAM signala hipoksije i pojačanje upalnog odgovora mogu inhibirati rast tumora.49 Stoga smo nagađali da CAG potiče funkciju predstavljanja antigena stanica raka, pa odgovarajuće CD8 plus T stanice i makrofagi mogu učinkovito prepoznati i ubiti stanice raka. Svoju smo pretpostavku dodatno potvrdili in vitro eksperimentima. Analiza protočne citometrije također je pokazala da CAG povećava infiltraciju CD45 imunoloških stanica, uključujući CD8 plus T stanice i NK stanice. Dodatno, sposobnost IFN-a i GZMB-a koje izlučuju CD8 plus T stanice također je značajno poboljšana CAG-om. Kako bismo utvrdili igraju li CD8 T stanice ili makrofagi glavnu ulogu u antitumorskom eksperimentu CAG-a, testirali smo našu pretpostavku s transplantiranim tumorima u golim miševima. Zbog poremećaja razvoja T stanica uzrokovanog imunizacijom timusa u golih miševa dok funkcija makrofaga još postoji. Međutim, rezultati su pokazali da CAG ne može učinkovito ubiti transplantirane tumore u golih miševa. Ovi rezultati sugeriraju da CAG može pojačati učinak ubijanja CD8 plus T stanica na tumore promicanjem prezentacije antigena stanica raka.

Zatim smo istražili kako CAG potiče prezentaciju antigena stanica raka pomoću TRAP tehnologije kako bismo pronašli ciljni protein CAG-a kako bismo objasnili fenomen. CTSB je cistein hidrolaza, koja može stupiti u interakciju s drugim proteinima i razgraditi se u lizosomima.50 Nagađali smo da bi mogao stupiti u interakciju s proteinima povezanim s prezentacijom antigena i uzrokovati njegovu razgradnju. Također je objavljeno da se molekula MHC-I razgrađuje u lizosomima, što rezultira gubitkom funkcije predstavljanja antigena tumorskih stanica.13 Stoga smo sumnjali da bi se CTSB mogao vezati na molekulu MHC-I i uzrokovati njezinu razgradnju u lizosomima. Provjerili smo ovu hipotezu da CAG može spriječiti degradaciju MHC-I inhibiranjem interakcije CTSB i MHC-I. Organoidi su učinkovit model za proučavanje napredovanja tumorskih bolesti i imaju veliki značaj za promicanje liječenja pacijenata s kliničkim tumorima istražujući učinak lijekova na rast tumorskih organoida i specifični mehanizam.51 52 Kroz naše eksperimente, otkrili smo da u kombinaciji s CAG i PD-1 protutijelima imaju dobru sposobnost inhibicije rasta tumora bilo u mišjim transplantiranim tumorskim modelima ili ljudskim organoidima raka debelog crijeva. Nedostatak ove studije je ograničeni broj uzoraka ksenografta i organoida pacijenata. Iako postoje slični zaključci između mišjih modela i ljudskih organoida, potrebna su daljnja istraživanja.

Ovdje opisujemo specifični mehanizam kojim CAG inhibira rast raka debelog crijeva, uglavnom inhibicijom razgradnje MHC-I posredovane CTSB-om, kako bi se poboljšao antitumorski imunitet CD8 plus T stanica. S jedne strane, potiče prezentaciju antigena stanica raka, as druge strane, ublažava stanje iscrpljenosti CD8 plus T stanica. Eksperimentalni rezultati također su potvrdili da kombinacija CAG i PD-1 antitijela ima superioran antitumorski učinak.

Zaključno, prema našim saznanjima, ovi nalazi naglašavaju da smanjenje CTSB-a daje antitumorski imunitet. Naše je istraživanje također objasnilo specifični mehanizam CAG-a u inhibiciji rasta kolorektalnog raka. Vrijedno je spomenuti da CAG ima veliki potencijal kao zdravstveni proizvod na europskom i američkom tržištu. Naši rezultati istraživanja daju potencijalnog kandidata za lijek protiv raka.

Pripadnosti autora

1 Državni ključni laboratorij za farmaceutsku biotehnologiju, Inovacijski centar za kemiju i biomedicinu (ChemBIC), Odjel za biotehnologiju i farmaceutske znanosti, Škola prirodnih znanosti, Sveučilište Nanjing, Nanjing, Jiangsu, Kina

2 Bioinformatički odjel za prediktivnu medicinu, Institut za biomedicinsku informatiku, Laboratorij za prijenos staničnih signala, Fakultet temeljnih medicinskih znanosti, Sveučilište Henan, Kaifeng, Henan, Narodna Republika Kina

3 Jiangsu Collaborative Innovation Center of Traditional Chinese Medicine in Prevention and Treatment of Tumor, The First Clinical College, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, Jiangsu, Kina

4 Odjel za opću kirurgiju, Šesta narodna bolnica pridružena Sveučilištu Jiao Tong u Šangaju, Šangaj, Narodna Republika Kina

5 Jiangsu Provincial Key Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, State Key Laboratory of Natural Medicines, China Pharmaceutical University, Nanjing, Jiangsu, Kina

6 Genergy Bio-technology (Shanghai) Co. Ltd, Šangaj, Kina

7 Jiangsu Key Laboratory of New Drug Research and Clinical Pharmacy, Xuzhou Medical University, Xuzhou, Jiangsu, Kina

SuradniciYS, HC i DS su osmislili ovaj projekt i izradili studiju. GD, BW i XS izveli su eksperimente i analizirali podatke. LZ i HC analizirali su podatke scRNA-seq i scATAC-seq. DS i HC dali su metodološku podršku i konceptualne savjete. YS i GD napisali su rukopis. YS kao jamac snosi punu odgovornost za rad i/ili provedbu studije te ima pravo pristupa podacima i kontrolu odluke o puštanju.

FinanciranjeOvaj rad je podržan od strane Projekta nacionalnog ključnog istraživanja i razvoja (2017YFC1700602), Nacionalne zaklade za prirodne znanosti Kine (br. 81930117, 81872877, 82074318), Razvoja prioritetnog akademskog programa institucija visokog obrazovanja u Jiangsuu i Projekta talenata za planinarenje Sveučilišta Nanjing (N/A), Projekt Zaklade za prirodne znanosti iz Šangaja, Akcijski plan za znanstvene i tehnološke inovacije (br. 22ZR1447400).

Suprotstavljeni interesiNijedan deklariran.

Pristanak pacijenta za objavuNije primjenjivo.

Etičko odobrenjeStudiju organoida raka debelog crijeva kod ljudi odobrio je Istraživački i etički odbor pridružene bolnice Sveučilišta kineske medicine Nanjing i ona je u skladu sa svim relevantnim etičkim propisima (2020-NL-094- 02). Sudionici su dali informirani pristanak za sudjelovanje u studiji prije sudjelovanja

Podrijetlo i recenzijaNije pušten u rad; recenzirani izvana.

Izjava o dostupnosti podatakaSvi podaci relevantni za studiju uključeni su u članak ili učitani kao dodatne informacije na internetu.

Dopunski materijalOvaj sadržaj je osigurao autor(i). Nije ga provjerio BMJ Publishing Group Limited (BMJ) i možda nije bio recenziran. Sva mišljenja ili preporuke o kojima se govori isključivo su mišljenja ili preporuke autora i BMJ ih ne podržava. BMJ se odriče svake obveze i odgovornosti koja proizlazi iz bilo kakvog oslanjanja na sadržaj. Ako sadržaj uključuje bilo kakav prevedeni materijal, BMJ ne jamči za točnost i pouzdanost prijevoda (uključujući ali ne ograničavajući se na lokalne propise, kliničke smjernice, terminologiju, nazive lijekova i doze lijekova) i nije odgovoran za bilo kakvu pogrešku i/ ili propusti koji proizlaze iz prijevoda i adaptacije ili na drugi način.

Otvoreni pristupOvo je članak s otvorenim pristupom koji se distribuira prema licenci Creative Commons Attribution Non-Commercial (CC BY-NC 4.0), koja dopušta drugima da distribuiraju, remiksiraju, adaptiraju, nadograđuju ovo djelo nekomercijalno i licenciraju svoje izvedene radove pod različitim uvjetima, pod uvjetom da je izvorni rad ispravno citiran, da je navedeno odgovarajuće priznanje, da su navedene sve promjene i da je upotreba nekomercijalna.

REFERENCE

1 Siegel RL, Miller KD, Fuchs HE, et al. Statistika raka, 2022. CA A Cancer J Clinicians 2022;72:7–33.

2 Kuipers EJ, Grady WM, Lieberman D, et al. Rak debelog crijeva. Nat Rev Dis Primers 2015;1:15065.

3 Biller LH, Schrag D. Dijagnostika i liječenje metastatskog kolorektalnog karcinoma. JAMA 2021;325:669–85.

4 Oliveira AF, Bretes L, Furtado I. Pregled inhibitora PD-1/PD-L1 u metastatskom dMMR/MSI-H kolorektalnom karcinomu. Front Oncol 2019;9:396.

5 Das M, Zhu C, Kuchroo VK. Tim-3 i njegova uloga u regulaciji antitumorskog imuniteta. Immunol Rev 2017;276:97-111.

6 Jiang X, Wang J, Deng X, et al. Uloga mikrookruženja tumora u imunološkom bijegu tumora posredovanom PD-L1/PD-1-. Mol Rak 2019;18:10.

7 Dhatchinamoorthy K, Colbert JD, Rock KL. Imunološka evazija raka kroz gubitak prezentacije antigena MHC klase I. Front Immunol 2021;12:636568.

8 Zhu Y, Qian Y, Li Z, et al. Neoantigen-reaktivne T stanice: sve veća uloga u adaptivnoj staničnoj imunoterapiji. MedComm 2021; 2: 207–20.

9 Vries JE, Yssel H, Spits H. Interplay između TCR/CD3 kompleksa i CD4 ili CD8 u aktivaciji citotoksičnih T limfocita. Immunol Rev 1989;109:119-42.

10 Huang J, Meyer C, Zhu C. Prepoznavanje antigena T stanica na staničnoj membrani. Mol Immunol 2012;52:155-64.

11 Allison JP. Interakcije CD28-B7 u aktivaciji T-stanica. Curr Opin Immunol 1994;6:414–9.

12 Liu X, Bao X, Hu M, et al. Inhibicija PCSK9 potencira terapiju imunološke kontrolne točke za rak. Nature 2020; 588: 693–8.

13 Yamamoto K, Venida A, Yano J, et al. Autofagija potiče imunološku evaziju raka gušterače razgradnjom MHC-I. Nature 2020;581:100–5.

14 Chen X, Zhao Y, Luo W, et al. Celastrol inducira apoptozu posredovanu ROS-om putem izravnog ciljanja peroksiredoksina-2 u stanicama raka želuca. Theranostics 2020;10:10290–308.

15 Kong N, Chen X, Feng J, et al. Baicalin inducira feroptozu u stanicama raka mokraćnog mjehura snižavanjem FTH1. Acta Pharm Sin B 2021;11:4045–54.

16 Deng G, Chen W, Wang P, et al. Inhibicija piroptoze posredovane upalom NLRP3 u makrofagu pomoću cikloastragenola doprinosi ublažavanju upale kože slične psorijazi izazvane imikvimodom kod miševa. Int Immunopharmacol 2019;74:105682.

17 Li M, Li S-chun, Dou B-kai, et al. Cikloastragenol pojačava ekspresiju SIRT1, smanjuje apoptozu i suzbija neuroinflamaciju nakon ishemije mozga. Acta Pharmacol Sin 2020;41:1025–32.

18 Chen C, Ni Y, Jiang B, et al. Derivati ​​cikloastragenola protiv starenja proizvedeni biotransformacijom. Nat Prod Res 2021;35:2685–90.

19 Fauce SR, Jamieson BD, Chin AC, et al. Farmakološko poboljšanje antivirusne funkcije ljudskih CD8 plus T limfocita temeljeno na telomerazi. J Immunol 2008;181:7400-6.

20 Wang B, Wang Y, Sun X, et al. CXCR6 je potreban za antitumorsku učinkovitost intratumoralnih CD8 plus T stanica. J Immunother Cancer 2021; 9: e003100.

21 Butler A, Hoffman P, Smibert P, et al. Integracija transkriptomskih podataka jedne stanice u različitim uvjetima, tehnologijama i vrstama. Nat Biotechnol 2018;36:411–20.

22 Yu G, Wang LG, Han Y, et al. clusterProfiler: R paket za usporedbu bioloških tema među klasterima gena. OMICS: časopis za integrativnu biologiju 2012;16:284–7.

23 Stuart T, Butler A, Hoffman P, et al. Sveobuhvatna integracija podataka jedne ćelije. Cell 2019;177:1888-902.

24 Granja JM, Corces MR, Pierce SE, et al. ArchR je skalabilni softverski paket za integrativnu analizu pristupačnosti jednostaničnog kromatina. Nat Genet 2021; 53: 403–11.

25 Korsunsky I, Millard N, Fan J, et al. Brza, osjetljiva i točna integracija podataka jedne ćelije s harmonijom. Nat metode 2019;16:1289–96.

26 Trapnell C, Cacchiarelli D, Grimsby J, et al. Dinamika i regulatori odluka o staničnoj sudbini otkrivaju se pseudovremenskim uređenjem pojedinačnih stanica. Nat Biotechnol 2014;32:381–6.

27 Qiu X, Hill A, Packer J, et al. Kvantifikacija mRNA jedne stanice i diferencijalna analiza s cenzusom. Nat metode 2017;14:309–15.

28 Qiu X, Mao Q, Tang Y, et al. Ugrađivanje obrnutog grafa rješava složene putanje jedne ćelije. Nat metode 2017;14:979–82.

29 Patel AP, Tirosh I, Trombetta JJ, et al. Jednostanični RNA-seq naglašava intratumorsku heterogenost u primarnom glioblastomu. Znanost 2014;344:1396–401.

30 Subramanian A, Tamayo P, Mootha VK, et al. Analiza obogaćivanja skupa gena: pristup temeljen na znanju za tumačenje profila ekspresije na razini genoma. Proc Natl Acad Sci USA 2005;102:15545–50.

31 Tian Y, Wan N, Ding M. Kemoproteomika mapira neke glikolitičke mete u stanicama raka. bioRxiv 2020.

32 Zhu Y, Wan N, Shan X, et al. Celastrol cilja na protein 1 povezan s adenil ciklazom kako bi smanjio upalu posredovanu makrofagima i ublažio metabolički sindrom izazvan prehranom s visokim udjelom masti u miševa. Acta Pharm Sin B 2021;11:1200–12.

33 Driehuis E, Kretzschmar K, Clevers H. Uspostavljanje organoida karcinoma izvedenih od pacijenata za primjene u probiru lijekova. Nat Protoc 2020;15:3380–409.

34 Lin KY, Lu D, Hung CF, et al. Ektopična ekspresija vaskularne stanične adhezijske molekule-1 kao novi mehanizam za imunološku evaziju tumora. Cancer Res 2007;67:1832–41.

35 Kriegsman BA, Vangala P, Chen BJ, et al. Česti gubitak IRF2 kod karcinoma dovodi do izbjegavanja imunološkog sustava kroz smanjenu prezentaciju antigena MHC klase I i povećanu ekspresiju PD-L1. Ji 2019;203:1999–2010.

36 Gomez S, Tabernacki T, Kobyra J, et al. Kombinacija epigenetske i imunološke terapije za prevladavanje otpornosti raka. Semin Cancer Biol 2020;65:99–113.

37 Mandal R, Barrón JC, Kostova I. Caspase-8: dvosjekli mač. Biochim Biophys Acta Rev Cancer 1873;2020:188357.

38 Qin S, Xu L, Yi M, et al. Nove mete imunoloških kontrolnih točaka: prelazak s PD-1 i CTLA-4. Mol Cancer 2019;18:155.

39 Lizardo DY, Kuang C, Hao S, et al. Učinkovitost imunoterapije na kolorektalnom karcinomu s nedostatkom popravka mismatch-a: od klupe do kreveta. Biochim Biophys Acta Rev Cancer 2020;1874:188447.

40 Guo W, Sun Y, Liu W, et al. Inhibicija inflamasoma NLRP3 uzrokovana mitofagijom vođena malim molekulama odgovorna je za prevenciju raka povezanog s kolitisom. Autofagija 2014;10:972–85.

41 Dai J, Liang K, Zhao S, et al. Kemoproteomika otkriva da baicalin aktivira jetreni CPT1 kako bi ublažio pretilost uzrokovanu prehranom i steatozu jetre. Proc Natl Acad Sci USA 2018;115:E5896–905.

42 Sun D, ​​Tao W, Zhang F, et al. Trifolirizin inducira apoptozu ovisnu o autofagiji kod raka debelog crijeva putem AMPK/mTOR signalizacije. Sig Transduct Target Ther 2020; 5: 174.

43 Gu M, Zhang S, Zhao Y, et al. Cikloastragenol poboljšava steatozu jetre aktiviranjem signalizacije receptora farnezoida X. Farmakološka istraživanja 2017;121:22–32.

44 Wang J, Wu ML, Cao SP, et al. Cikloastragenol ublažava eksperimentalno oštećenje srca kod štakora potičući autofagiju miokarda putem inhibicije AKT1-RPS6KB1 signalizacije. Biomed Pharmacother 2018;107:1074–81.

45 Wang Y, Chen C, Wang Q, et al. Inhibicijski učinci cikloastragenola na aneurizmu trbušne aorte i s njom povezani mehanizmi. Br J Pharmacol 2019;176:282-96.

46 Lee JJ, Bernard V, Semaan A, et al. Elucidacija tumorsko-stromalne heterogenosti i interaktoma ligand-receptor jednostaničnom transkriptomikom u stvarnim biopsijama raka gušterače. Clin Cancer Res 2021;27:5912–21.

47 Zhang L, Li Z, Skrzypczynska KM, et al. Analize jedne stanice daju informacije o mehanizmima mijeloidno ciljanih terapija raka debelog crijeva. Cell 2020;181:442-59.

48 Gao J, Wu Z, Zhao M, et al. Alosterična inhibicija otkriva SHP2-posredovanu tumorsku imunosupresiju kod raka debelog crijeva pomoću jednostanične transkriptomije. Acta Pharm Sin B 2022;12:149–66.

49 Wei J, Chen Z, Hu M, et al. Karakterizacija međustanične komunikacije pan-raka otkriva SPP1 plus makrofag povezan s tumorom ekspandiran u hipoksiji i promicanje malignosti raka putem jednostaničnih RNA-Seq podataka. Front Cell Dev Biol 2021;9:749210.

50 Chen X, Yu C, Kang R, et al. Sustavi stanične degradacije u feroptozi. Stanična smrt Differ 2021;28:1135–48.

51 Puschhof J, Pleguezuelos-Manzano C, Martinez-Silgado A, et al. Intestinalne organoidne kokulture s mikrobima. Nat Protoc 2021; 16: 4633–49.

52 Lee SH, Hu W, Matulay JT, et al. Evolucija tumora i odgovor na lijekove u organoidnim modelima raka mokraćnog mjehura izvedenim od pacijenata. Cell 2018;173:515-28.

【Za više informacija:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】