Interleukin-22 izveden iz T stanica potiče ekspresiju CD155 u stanicama raka kako bi suzbio funkciju NK stanica i poticao metastaze
Oct 10, 2023
SAŽETAK
Iako T stanice mogu ispoljiti snažan antitumorski imunitet, podskup T pomoćnih (Th) stanica koje proizvode interleukin-22 (IL-22) u tumorima dojke i pluća povezan je s lošim ishodima pacijenata. Ovdje smo ispitali mehanizme pomoću kojih te T stanice pridonose bolesti. U mišjim modelima raka pluća i dojke, konstitucionalna delecija Il22 specifična za T stanice smanjila je metastaze bez utjecaja na rast primarnog tumora. Brisanje IL-22 receptora na stanicama raka smanjuje metastaze do stupnja sličnog onom viđenom kod miševa s nedostatkom IL-22-. IL-22 je inducirao visoku ekspresiju CD155, koji se vezao za aktivirajući receptor CD226 na NK stanicama. Pretjerana aktivacija dovela je do smanjenih količina CD226 i funkcionalno oštećenih NK stanica, što je povećalo metastatski teret. Signalizacija IL-22 također je bila povezana s ekspresijom CD155 u ljudskim skupovima podataka i s lošim ishodima pacijenata. Uzevši zajedno, naša otkrića otkrivaju imunosupresivni krug aktiviran IL-22 izvedenim iz T stanica koji potiče metastaze u plućima.
Prednosti cistanche tubulosa-Antitumor
UVOD
Glavno obilježje neoplastične progresije i primarni uzrok smrtnosti povezane s rakom je sposobnost stanica raka da se šire na sekundarna mjesta i stvaraju metastaze.1,2 Stvaranje metastaza može se spriječiti imunološkim nadzorom koji uključuje prirodne ubojice (NK), citotoksične , i T pomoćne (Th) 1 stanice.3,4 Nasuprot tome, regulatorne T stanice (Treg), cirkulirajući monociti i IL-17A izvedeni iz Th stanica tvore imunosupresivno mikrookruženje, omogućujući imunološki bijeg i potičući metastaze. 4–6 Stoga je ključno identificirati signalne kaskade koje definiraju funkciju pro-nas. antitumorogenih imunoloških stanica.7,8 Interleukin-22 (IL-22) je citokin kojeg proizvodi Th17 i, kod ljudi, također podskupinom Th1, za koju se zna da potiče rast stanica raka, pospješuje migraciju, štiti od apoptoze, inducira prijelaz epitela u mezenhim i održava matičnost malignih stanica.9-13 Također potiče ranu karcinogenezu, djelujući na prekursorskim lezijama ili nezrelim matičnim stanicama raka.14–18 Stanice koje proizvode IL-22-, uglavnom Th stanice, ali i gama delta (gd) T stanice, nepromjenjive prirodne stanice ubojice (iNKT) i urođene limfoidne stanice (ILC ), otkriveni su u primarnim lezijama karcinoma.19-24 IL-22 se izražava na biološki relevantnim razinama u karcinomu dojke, debelog crijeva, pluća, želuca i hepatocelularnom karcinomu.9,11,12,25,26 U većini studija , njegova je ekspresija povezana s lošom prognozom, višim stadijem bolesti i bržom progresijom tumora.13,22–24,27–29 IL-22 djeluje isključivo preko IL-22 receptora (IL{{40 }}R) sastoji se od dvije podjedinice, IL-22RA1 i IL-10RB.30,31 Djelovanje izlučenog IL-22 modulira inhibitor, IL{{47} } vezni protein (IL-22BP, IL-22RA2), homolog IL-22RA1, koji uglavnom proizvode mijeloidne stanice.32,33 U uvjetima ravnotežnog stanja, IL -22 je esencijalni homeostatski citokin na epitelnim barijerama kao što su crijeva, pluća i koža.34,35 Na tim mjestima, IL-22 potiče zaštitu, regeneraciju i popravak kako bi se održao integritet barijere,36, 37, a njegova odsutnost pogoršava karcinogenezu izazvanu upalom.13,38 Zajedno, ovi podaci ističu široke, kontekstno ovisne funkcije IL-22 u fiziološkim i patološkim stanjima. Nakon vezanja na receptor, IL-22 pokreće Janus kinaze Jak1 i Tyk2 da fosforiliraju STAT3, STAT1 ili STAT5, ali IL-22 može pokrenuti druge nizvodne puteve, uključujući kaskadu protein kinaza aktiviranih mitogenom (MAPK). ili PI3K-AktmTOR signaliziranje, ovisno o staničnom kontekstu.13,36,39–44 Ova raznolikost signalnih putova odražava se u mnoštvu fizioloških učinaka koji su povezani s IL-22 signaliziranjem, uključujući one gore opisane, kao i zaštitu od genotoksičnog oštećenja i indukciju antibakterijskih peptida, sluzi, pro- i protuupalnih citokina i kemokina.36,38,39,45,46 Stanice raka induciraju proizvodnju IL-22 iz Th stanica u bolesnika s rakom dojke i pluća. 12,47,48 NLRP3 inflamasomom pokretano otpuštanje IL-1b inducira proizvodnju IL-22 iz T stanica u tumoru, i oba IL-22+ Th stanice i potpis NLRP3-IL-1b mogu se pronaći u uzorcima tumora raka dojke i pluća.48,49 Ovdje smo krenuli ocrtati mehanizam kojim IL-22 potiče napredovanje raka dojke i pluća. Otkrili smo da IL-22 potiče širenje metastaza u pluća, otkrivajući krug u kojem IL-22 posreduje imunosupresijom u metastatskoj niši promicanjem ekspresije CD155 na stanicama raka, što je povezano sa smanjenom ekspresijom CD226 na NK stanice i smanjenu proizvodnju interferona-g (IFNg). Klinički podaci pokazuju da je aktivacija takvih putova povezana s ishodima pacijenata.
REZULTATI
koristi dodatka cistanche-povećavaju imunitet
IL-22 utječe na diseminirane stanice raka u singenim mišjim modelima karcinoma pluća i dojke
To understand the impact of the IL-22-IL-22R1 signaling axis on cancer progression, we analyzed syngeneic murine models of breast and lung carcinoma. As cancer patients mostly succumb to metastatic disease, we recapitulated this with phenotypically relevant models. We implanted either 4T1 breast cancer or Line-1 lung cancer cells subcutaneously (s.c.) in the right flank of wild-type mice (WT) and mice lacking IL-22 expression (Il22 / ) (Figure 1A). IL-22 did not impact the outgrowth of the primary tumors in either model (Figures 1B and 1C). Upon reaching pre-defined termination criteria (tumor >225 mm2 ili ulceracija), pluća su bila glavno metastatsko mjesto u našem modelu s povremenim metastazama pronađenim drugdje (nije prikazano). IL22 / miševi pokazali su smanjenu metastatsku diseminaciju Line-1 i 4T1 stanica u pluća u usporedbi s divljim tipom životinja neovisno o veličini primarnog tumora koristeći različite metode otkrivanja metastaza (slike 1B, 1C i S1A). Također smo primijetili sličan metastatski fenotip u ortotopskom modelu raka dojke, gdje su 4T1 stanice implantirane u masni jastučić dojke (Slika S2B). Sve korištene metode slijepog makroskopskog brojanja, klonogenih testova ili histologije pokazale su visoku dosljednost u otkrivanju nižeg metastatskog opterećenja kod Il22/životinje (slike 1B, 1C i S1C). Ovo implicira ključnu ulogu IL-22 u metastatskom procesu. Zatim smo forsirali metastaze putem intravenske injekcije stanica raka, koja zaobilazi potrebu za odvajanjem i invazijom tkiva (Slika 1D). Intravenozne (iv) injekcije obiju staničnih linija odražavale su fenotip u potkožnom modelu. Doista smo mogli potvrditi manje metastatsko opterećenje kod Il22/miševa (slike 1E i 1F). Ovi rezultati ukazuju na specifičnu ulogu IL-22 u diseminiranim stanicama u cirkulaciji. Kako bismo razlučili učinke specifične za soj, upotrijebili smo E0771 model raka dojke (Slika 1G).50,51 Intravenozna injekcija E0771- GFP stanica otkrila je smanjeni metastatski teret kod Il22 / životinja potvrđen protočnom citometrijom (Slike 1H i S1D). Slično tome, primijetili smo manji metastatski teret u jetri miševa kada su E0771-GFP stanice ubrizgane intrasplenično (slika S1E). Cijelo lijevo plućno krilo miševa kojima je ubrizgan E0771-GFP optički je očišćeno prema iDISCO protokolu za kvantificiranje metastaza pomoću svjetlosnog mikroskopa in situ (Slika 1I).52 Ovdje su Il22/miševi pokazali smanjenu sklonost razvoju metastaza , dok se veličina vizualiziranih metastaza nije razlikovala i nije imala specifičan obrazac njihove lokalizacije (Slika 1J). Ukratko, IL-22 je djelovao na diseminirane stanice raka, omogućujući metastaze raka dojke i pluća u pluća.
T stanice su relevantan izvor IL-22 u metastatskoj niši u plućima
Prethodno smo identificirali CD4+ T stanice kao glavni izvor IL-22 u primarnim ljudskim tumorima pluća i uzorcima bronhoalveolarnog ispiranja.12,47,48 Kako bismo odredili izvor IL-22 u pluća naših modela, intravenski smo ubrizgali E0771 stanice u Foxp3mRFP Il17aGFPIl22sgBFP reporterske životinje i kvantificirali IL-22+ stanice pomoću protočne citometrije (Slike 2A i S2A).53 Populacije su definirane kao CD4+ , CD{{15 }} i dvostruko negativne (DN) (CD4, CD8) ab T stanice (CD3+ gdTCR NK1.1), gd T stanice (CD3+ gdTCR+ NK1.1) i CD{{ 26}} NK1.1+ i CD3 NK1.1+ stanice (slike 2B i S2B). Uočili smo povećanje udjela CD4+, CD8+ T stanica i NK1.1+ stanica koje proizvode IL-22 u plućima životinja kojima je ubrizgan tumor ( Slike 2C, S2C i S2D). Ovdje su CD4+ i CD8+ T stanice činile većinu stanica koje proizvode IL-22- u miševa s tumorom (Slika 2C). Štoviše, utvrdili smo da takve CD4+ T stanice proizvode IL-22, ali ne i IL-17A (Slika 2D). Ove su stanice imale nisku ekspresiju CD44, potvrđujući njihov fenotip pamćenja u skladu s našim prethodnim opažanjima (Slika S2E).48 Kako bismo dodatno istražili ove nalaze na modelima, upotrijebili smo unutarstanično bojenje za procjenu proizvodnje IL-22 u liniji{ {56}} sc model, koji je dao slične rezultate osim smanjenog udjela proizvođača IL-22 CD8+ T stanica (slike S2F–S2I). Također smo mogli identificirati da stanice IL-22+ nisu koekspresirale IFNg, što izdvaja proizvođače mišjeg IL-22 od podskupa Th1 (Slika 2G).49 Nadalje, koristili smo konfokalnu mikroskopiju na preciznom rezu kriške pluća reporterskih životinja kako bi se ispitala njihova prostorna distribucija u plućima miševa kojima je ubrizgan tumor. Ovdje bismo mogli identificirati da se takvi proizvođači IL-22 i IL-17A lokaliziraju gotovo isključivo na metastatska žarišta (Slika 2E). Kao što je pokazano protočnom citometrijom, nismo pronašli korelaciju između proizvodnje IL-22 i IL-17A iz reporterskih stanica u metastatskim žarištima, što ukazuje da IL-22 i IL-17 doista proizvode dva različita stanična podskupa. Također smo potvrdili da su veliki dio stanica koje proizvode IL-22- CD4+ T stanice (Slika 2E). Kako su ovi podaci ukazivali na dominantnu ulogu T stanica u proizvodnji IL-22, generirali smo miša Il22floxCd4cre s uvjetnom delecijom Il22 u svim zrelim T stanicama (Slika 2F). Kada su izazvani E0771-GFP stanicama, miševi Il22floxCd4cre imali su smanjenu sklonost razvoju metastaza u plućima, što podsjeća na fenotip opažen kod globalnih Il22/životinja (Slika 2F). Međutim, mogli bismo također potvrditi da je cre-rekombinaza pod kontrolom CD4 promotora potpuno ukinula proizvodnju IL-22 ne samo u CD4+, već iu CD8+ T stanicama izoliranim iz slezene Il22floxCd4cre miševa, pa se stoga ovaj model nije mogao upotrijebiti za točno određivanje specifičnog izvora IL-22 (Slika S2J). Kako bismo potvrdili ulogu Th stanica kao ključnog izvora IL-22 u našem modelu, prenijeli smo divlji tip i Il22 / CD4+ T stanice u Rag1 / II22/ životinje koje su potom primile E{{ 104}} GFP stanice iv (Slika 2G). Ovdje bismo mogli potvrditi da je proizvodnja IL-22 usvojeno prenesenim CD4+ T stanicama dovoljna za poticanje plućnih metastaza u našem modelu, ali je ukinuta pri korištenju CD4+ T stanica izoliranih iz II22 / životinja (Slika 2G). Važno je da je na razlike u metastazama utjecalo presađivanje T stanica nakon prijenosa (slika S2K). Zaključno, identificirali smo Th stanice kao dovoljan izvor IL-22 koji pokreće metastaze u plućima miševa s tumorom, a zatim smo pokušali identificirati relevantnu ciljnu stanicu.
Slika 1. IL-22-nokaut smanjuje broj plućnih metastaza, ali ne utječe na rast tumora u singenim mišjim modelima karcinoma pluća i dojke
Slika 2. T stanice su primarni izvor IL-22 u plućima miševa koji nose tumor
Ekspresija IL-22RA1 na tumorskim stanicama neophodna je za stvaranje metastaza
Ekspresija IL-22RA1 ograničena je na nehematopoetske stanice i služi kao ograničavajući faktor za IL-22 signalizaciju. Kako bismo ispitali njegov utjecaj na metastatski fenotip, generirali smo stabilnu deleciju Il22ra1 u stanicama 4T1 i Line-1 (Slika 3A). U skladu s našim prethodnim otkrićima, tumorski rast stanica 4T1 Il22ra1 bio je uglavnom nepromijenjen u usporedbi s kontrolnim stanicama 4T1 (Slika 3B). Međutim, miševi kojima su ubrizgane stanice 4T1 Il22ra1 sc ili iv imali su manje makroskopskih i klonogenih metastaza u plućima u usporedbi s kontrolnim stanicama 4T1 (slike 3B i 3C). Kako bismo potvrdili da ovaj učinak ne ovisi o klonu, generirali smo i analizirali tri klona Line-1 Il22ra1 i testirali ih u odnosu na tri kontrolna klona, što je dalo slične rezultate (slike 3D i 3E). Ovo potvrđuje da su stanice raka koje eksprimiraju IL-22RA1- relevantna meta IL-22 u pokretanju metastaza u plućima. Kako bismo isključili neciljane učinke metodologije, upotrijebili smo IL-22BP za inhibiciju IL-22 signalizacije. Uspostavili smo stanične linije 4T1 i Line-1 koje konstitutivno luče IL-22BP (Il22ra2+ ) (Slika S3A). Kada su ubrizgane sc, stanice Line-1 Il22ra2+ rasle su usporedivo s kontrolom na mjestu implantacije, kao što je prethodno viđeno u modelima Il22ra1 i Il22/miševi, iako su stanice 4T1 Il22ra2+ rasle sporije (slika S3B). Ovdje su stanice 4T1 Il22ra2+ imale znatno smanjen broj metastaza kada su ubrizgane sc (Slika S3B i S3C). Unatoč većoj varijabilnosti, stanice Line-1 Il22ra2+ također su stvorile manje metastaza kada su ubrizgane sc ili iv (slika S3D i S3E). Stoga je neutralizacija IL-22 putem IL-22BP u velikoj mjeri oponašala fenotip opažen kod Il22ra1 stanica i Il22/miševa, potvrđujući relevantnost citokina za metastatski proces.
koristi dodatka cistanche-povećavaju imunitet
IL-22 kontrolira rast tumorskih stanica tijekom rane faze metastatskog presađivanja
To determine the role of IL-22 signaling during the dissemination process, we analyzed the kinetics of metastatic seeding in our models. For this, we injected 4T1-GFP cells i.v. and analyzed lungs at 12 and 48 h after injection (Figure S4A). We used confocal microscopy to quantify the numbers of GFP+ colonies (defined as cell clusters of >100 mm) i pojedinačne stanice po mm2 plućnog tkiva (Slika S4B). Nismo mogli otkriti razlike 12 sati nakon injekcije, što ukazuje da IL-22 možda neće u velikoj mjeri utjecati na sijanje (slike S4C i S4D). Međutim, u vremenskoj točki 48-h, broj GFP+ stanica i kolonija smanjio se u plućima Il22/miševa (slike S4C i S4D). To ukazuje na ulogu IL-22 u pokretanju ranih metastaza u plućima. Kako bismo procijenili stopu proliferacije, miševima smo zajedno ubrizgali 5-etinil-20 -deoksiuridin (EdU) 4 sata prije istraživanja 12, 24, 48 sati i 7 dana nakon injekcije tumora (Slika S4E) . Slično mikroskopskom brojanju, nismo otkrili razlike u broju GFP+ stanica prije 48 sati nakon injekcije (slike S4F-S4G). Nasuprot tome, mogli smo otkriti razlike u inkorporaciji EdU, što ukazuje na veći udio stanica koje se dijele tek 7. dana nakon injekcije (slika S4G). Stoga smatramo da su razlike u opterećenju tumora pluća pod utjecajem IL-22 uočene već nakon 48 sati posredovane mehanizmom neovisnim o proliferaciji.
Slika 3. Ekspresija IL-22RA1 na tumorskim stanicama neophodna je za stvaranje metastaza
IL-22 regulira ekspresiju CD155 na tumorskim stanicama i time potiče metastaze
Na temelju naših otkrića da IL-22 djeluje na IL-22ra1+ stanice raka kako bi pospješio metastaze, izveli smo skupno RNA sekvenciranje 4T1 stanica tretiranih s IL-22 kako bismo dodatno razgraničili temeljni mehanizam (GEO: GSE202314) (Slika 4A). Otkrili smo 147 gena koji su različito regulirani. Od toga, ekspresija 133 gena bila je povećana, a 14 smanjena nakon tretmana IL-22 (slike 4B i S5A). Potvrdili smo Pvr (receptor poliovirusa, Pvr) kao jednu od najznačajnijih povećanih meta koristeći qPCR (Slika S5B). Ovo je značajno jer je CD155, produkt Pvr, prekomjerno izražen u raznim vrstama raka i posjeduje svojstva poticanja tumora, uključujući metastaze.54-56 Kako bismo potvrdili naše nalaze, procijenili smo ekspresiju CD155 u IL-22-stimuliranom 4T1, Linija-1 i E0771 stanice protočnom citometrijom (Slika 4C). Otkrili smo povećanje ekspresije CD155 u svim staničnim linijama tijekom 72 h (slike 4D i 4E), ali taj je učinak izostao u stanicama bez IL-22RA1 (slika S5C). Zatim smo procijenili utjecaj IL-22 na ekspresiju CD155 u E0771-GFP stanicama iz pluća miševa s tumorom (Slika 4F). Ovdje možemo potvrditi da su stanice implantirane u miševe Il22 imale nižu ekspresiju CD155, što je u korelaciji s manjim udjelom E0771-GFP stanica otkrivenih protočnom citometrijom (slike 4G i 4H). Kako bismo potvrdili ulogu CD155 u metastazama, uspostavili smo Pvr liniju-1 i 4T1 stanične linije (slike 4I, S5D i S5G). Iako je to imalo mali učinak na njihovu sposobnost supkutanog rasta (slike S5E i S5F), ukinulo je sposobnost stvaranja metastaza u plućima (slike 4J i S5H). Mogli bismo preokrenuti ovaj proces konstitutivnom ekspresijom CD155 u Pvr stanicama neovisno o IL-22-induciranoj regulaciji (Pvr+).
Slika 4. IL-22 signalizacija povećava ekspresiju CD155 na površini tumorskih stanica i daje otpornost na kontrolu metastaza
U ovoj postavci, mogli bismo inducirati metastaze u plućima Il22 / miševa, naglašavajući vezu između ove dvije molekule i njihovu ulogu kao medijatora metastatskog procesa (slike 4K i S5I).
CD155 na tumorskim stanicama povezan je sa smanjenom ekspresijom CD226 na NK stanicama i smanjenom proizvodnjom IFNg
CD155 igra intrinzičnu ulogu u proliferaciji i adheziji u stanicama raka,54-57 između ostalog. Nismo otkrili nedostatke u proliferaciji Line-1 Pvr stanica in vitro (podaci nisu prikazani). Važno je da CD155 ima stanično ekstrinzičnu prometastatsku ulogu vezanjem na imunomodulatorne receptore CD96, CD226 ili TIGIT na površini NK i T stanica.54–56,58,59 Kako bismo točno odredili partnere vezanja CD155, analizirali smo antitumorske reakcije u plućima miševa koji sadrže 4T1-luciferazu+ stanice (4T1-Luc) (Slika 5A). Potvrdili smo korištenjem in vivo sustava za oslikavanje (IVIS) da divlji tip i Il22/miševi imaju slično nasađivanje tumorskih stanica do 5. dana nakon injekcije, a razlike u opterećenju tumorom povećavaju se tijekom dva tjedna (slike 5B i 5C) . Doista, nedostatak proizvodnje IFNg od strane NK stanica, ali ne i drugih tipova stanica, pokazao je gubitak humoralnih efektorskih mehanizama (Slike 5D, 5E i S6A) i korelirao s većim opterećenjem tumora (Slika S6B). Ovaj je učinak dosljedno pronađen u modelu Line-1 sc (slike S6C–S6E). Ispitano citometrijom na čipu, 60 uzoraka miševa s metastazama u plućima 4T1- pokazalo je povećanu ekspresiju CD155 u metastatskim žarištima kod WT, ali ne i kod Il22 / životinja (slike 5F i S6F). Pronašli smo veću infiltraciju NK stanica u metastatska žarišta Il22 / ali ne i WT životinja, što ukazuje na veću aktivaciju i potvrđuje ovisnost o NK stanicama kao antitumorskim efektorskim stanicama (Slika 5F). CD226, ali ne TIGIT ili CD96, različito su eksprimirali NK stanice i, u manjoj mjeri, CD8+ T stanice u plućima divljeg tipa i Il22 / životinja (slike 5G i S6G–S6H). CD226 je koreceptor bitan za aktivaciju efektorskih funkcija NK i CD8 T stanica. Stoga smo krenuli istraživati njegovu patofiziološku relevantnost u našem modelu.61-64
cistanche tubulosa-poboljšava imunološki sustav
Blokada CD226 poništava antimetastatski fenotip životinja s nedostatkom IL-22-
Prekomjerna CD{0}}posredovana signalizacija prisutna u tumorskom mikrookruženju može potaknuti internalizaciju i degradaciju CD226 u efektorskim stanicama.61,63 Kako bismo ocrtali ulogu prekomjerne ekspresije CD155 na CD226 i naknadni antitumorski odgovor, ubrizgali smo 4T1 kontrolu i Pvr+ stanice iv u Il22/ miševa, a dvije skupine također su primile anti-CD226 blokirajuće protutijelo (480.1) (Slika 6A). I Pvr+ stanice i blokada CD226 mogu na sličan način pospješiti metastaze u plućima kod Il22/miševa, a ti učinci nisu sinergizirali (Slika 6B). Slično našim prethodnim opažanjima kod životinja divljeg tipa, to je bilo dovoljno za inhibiciju proizvodnje IFNg od strane NK stanica (Slika 6C). Konačno, otkrili smo smanjenje ekspresije CD226 na NK stanicama u miševa kojima je ubrizgan Pvr+-u usporedbi s kontrolnim stanicama. To je u korelaciji sa smanjenim kapacitetom ovih NK stanica da proizvode IFNg (Slika 6D). Nadalje, ispitivali smo potencijal agonističkog TIGIT protutijela (IG9) da inhibira aktivaciju NK stanica kod Il22 / životinja i blokade CD96 (3.3) da spriječi inhibiciju funkcije NK stanica (Slika 6E). Niti agonist TIGIT niti antagonist CD96 nisu promijenili broj metastaza u usporedbi s Il22 / životinjama koje su primile kontrolne ili Pvr+ 4T1 stanice, redom (Slika 6F). Kada se aktivira, TIGIT može inhibirati proizvodnju IFNg iz CD8+ T, ali ne i NK stanica (Slika 6G). Stoga, IL-22- os CD155 pokreće smanjenu ekspresiju CD226 u NK stanicama i čini ih inertnima u mikrookruženju tumora.
Ekspresija CD155 nadopunjuje potpis gena IL-22 kod bolesnika s rakom dojke i pluća
Konačno, procijenili smo kliničku važnost CD155 u kontekstu osi IL-22-IL-22RA1. Sama ekspresija CD155 povezana je s nepovoljnom prognozom kod raznih entiteta raka.54 Analizirali smo podatke o sekvenciranju RNA iz atlasa genoma raka (TCGA) adenokarcinoma pluća (TCGA: LUAD, n=504) i HER2- pozitivni uzorci pacijenata iz skupova podataka o invazivnom karcinomu dojke (TCGA: BRCA, n=110). Usredotočili smo se na ključne gene povezane s IL-22-: IL22RA1, IL22RA2, IL10RB i PVR. Kako bismo stratificirali skupine pacijenata, upotrijebili smo aglomerativno grupiranje, metodu grupiranja bez nadzora, što je rezultiralo u tri glavna klastera (slike 7A i 7B). Ovo je otkrilo različite obrasce ekspresije gena: klaster 0 (IL22RA1hi, IL22RA2lo, IL10RBmed, PVRhi), klaster 1 (IL22RA1lo, IL22RA2hi, IL10RBhi, PVRlo) i klaster 2 (IL22RA1lo, IL22RA2lo, IL10RBlo, PVRmed) (Slika 7C). Ti su klasteri ravnomjerno raspoređeni u ove dvije skupine (Slika 7D). Bolesnici u grupi 0 i klasteru 2 skupa podataka LUAD imali su lošije preživljenje od pacijenata u grupi 1 (Slika 7E). Preživljenje klastera 1 i 2 nije se razlikovalo u obje kohorte (Slika 7E). Nadalje, izračunali smo ograničeno srednje vrijeme preživljavanja (RMST) za klastere 0 i 1 kako bismo kvantificirali razliku u očekivanom vremenu preživljavanja do pet godina praćenja, što je rezultiralo s 361,18 dana za LUAD i 93,23 dana za BRCA (Slika 7F). Klasteri 0 i 1 imali su razlike u učestalosti stadija patološke bolesti unutar njih u LUAD, ali ne i u BRCA kohorti (Slika 7G). Važno je da takve razlike u preživljavanju između klastera (IL22RA1hiPVRhi) i 1 (IL22RA1loPVRlo) uglavnom potječu od pacijenata kojima je dijagnoza dijagnosticirana u ranim (I i II), ali ne i u uznapredovalim stadijima bolesti (III i IV) (Slika S7A). Kako bismo procijenili utjecaj svakog gena na preživljavanje, upotrijebili smo Coxov model proporcionalnih opasnosti. I IL22RA1 (omjer rizika [HR]=1.23) i PVR (HR=1.28) utječu na preživljenje, dok IL22RA2 i IL10RB nisu promijenili rizik u kohorti LUAD (Slika S7B). Štoviše, samo je CD226 (p=0.06), ali ne i TIGIT ili CD96, imao trend utjecaja na preživljenje, u skladu s našim nalazima u pretkliničkim modelima (Slika S7B). Koristili smo algoritam dekonvolucije CIBERSORTx na kohorti LUAD kako bismo procijenili imaju li obrasci ekspresije gena naših klastera utjecaj na infiltraciju imunoloških stanica kod pacijenata.65 Zanimljivo je da postoji povećanje jedinica CIBERSORTx za aktivirane NK stanice u klasteru 1 u usporedbi s klasterima 0 i 2 u bolesnika s LUAD-om, dok nije bilo razlika u NK stanicama u mirovanju ili aktiviranim CD4+ memorijskim T stanicama (Slika S7C) sa sličnim trendom u skupini BRCA (Slika S7D). Zajedno, ovi rezultati kliničkih kohorti pokazuju važnost regulacijske veze između IL-22 izvedenog iz T stanica i CD155.
Slika 5. Ekspresija CD226 veća je na NK stanicama u Il22–/– miševa
RASPRAVA
U ovoj smo studiji otkrili mehanizam kojim T stanice proizvode IL-22 za poticanje metastaza na plućima u mišjim modelima raka pluća i dojke. Mehanički gledano, T stanice u metastatskim žarištima u plućima, pretežno CD4+, proizvode IL-22 koji signalizira izravno preko svog receptora izraženog u stanicama raka, promičući ekspresiju prometastatske molekule CD155.{{ 5}},58,59 Unatoč dobro proučenoj pan-kancerogeni ekspresiji CD155 i njegovim intrinzičnim i ekstrinzičnim ulogama u napredovanju raka,54 put odgovoran za regulaciju CD155 u malignim stanicama ostaje nedostižan.66-68 Pokazali smo da IL{{ 15}} povećao je ekspresiju CD155 u staničnim linijama raka pluća i dojke in vitro i in vivo, dok je njegova konstitutivna ekspresija omogućila metastaze u Il22 / miševa, u usporedbi s kontrolnim i deficijentnim stanicama. Povećana ekspresija CD155 u tumorskom mikrookruženju pluća dovela je do smanjenja kostimulacijske molekule CD226 na NK stanicama, smanjujući njihovu lokalizaciju na metastaze i proizvodnju IFNg, što je u korelaciji s većim tumorskim opterećenjem. U našim prethodnim studijama otkrili smo nakupljanje T stanica koje proizvode IL-22-u uzorcima tumora bolesnika s karcinomom pluća nemalih stanica (NSCLC).12,48 Pokazali smo da stanice raka pokreću NLRP3- ovisna sekrecija IL-1b koja inducira takvu proizvodnju IL-22 uglavnom iz Th stanica.18 Vrijedno je napomenuti da u ljudi, zbog razlika u profilima citokina Th stanica, IL{{ 31}} također se inducira u Th1 stanicama. Moguće je da bi to moglo oslabiti antitumorski imunološki odgovor. Važno je da takve Th1 varijante mogu djelomično objasniti hiperprogresiju raka nakon aktivacije T stanica nakon blokade kontrolne točke.69 U skladu s našim prethodnim opažanjima, potvrdili smo nakupljanje IL-22-koji proizvodi CD4+ i CD{{38} } T stanice, ali i NK1.1+ stanice, u metastatskoj niši u plućima životinja kojima je ubrizgan tumor. Važno je napomenuti da smo uočili razlike specifične za soj u akumulaciji takvih CD8+ T stanica koje proizvode IL-22- u našim modelima. Međutim, ukidanje proizvodnje IL-22 u ukupnim zrelim T stanicama bilo je dovoljno za rekapitulaciju učinka koji smo primijetili kod životinja s nedostatkom IL-22-.70 Također, usvojeni prijenos CD4+ T stanica u Rag / II22 / miševa bio je dovoljan za induciranje plućnih metastaza, ukazujući na glavnu ulogu Th stanica kao izvora IL-22. Suprotno tome, naša prethodna otkrića sugeriraju da je unatoč nakupljanju CD8+ T stanica u uzorcima tumora, njihov doprinos skupu IL-22 mali.48 U svakom slučaju, karakterizacija takvih CD{{53 }} T-stanice koje proizvode IL-22- ključne su za pažljivu procjenu njihovih pro- ili antitumorskih svojstava kako se pojavljuju novi podaci o ovoj subpopulaciji.71,72 Također, primarna uloga NK i NKT stanica u kontroli tumora nadmašuje njihovu potencijalni doprinos stvaranju metastaza kroz IL-22, što je uočeno u Rag / II22 / pokusu adaptivnog prijenosa uz korištenje životinja bez zrelih T stanica, ali koje imaju funkcionalne NK stanice.37 Ova hipoteza dodatno je podržana našim nalazima u metastatskim žarišta u kojima su NK stanice nađene u većoj količini od citotoksičnih T stanica, ističući NK stanice kao bitne igrače u kontroli tumora u nedostatku IL-22. Važno je napomenuti da smo se usredotočili na proizvođače IL-22 u metastatskim žarištima u plućima, ali nismo uzeli u obzir njihovo podrijetlo, klonalnost ili njihovu distribuciju u krvi ili limfoidnim organima. Štoviše, različiti izvori IL-22 potiču progresiju tumora na način ovisan o kontekstu posredovan pleiotropnim djelovanjem ovog citokina. U skladu s tim, slične stanice koje proizvode IL-22-u različitim odjeljcima (pluća naspram slezene naspram limfnih čvorova) mogle bi različito utjecati na protumorske fenotipove ili nemaju nikakvu funkciju ovisno o kontekstu, što će se morati dodatno istražiti. Studije o raku opetovano pokazuju da IL-22 utječe na razvoj i rast primarnih tumora i, naposljetku, na neoplastičnu progresiju.26,73-76 Ova ideja je uglavnom opravdana sposobnošću promicanja migracije, invazije i matičnosti stanica raka in vitro i tako potiču stvaranje metastaza.76,77 Važno je da ablacija IL-22 može ublažiti imunosupresivno mikrookruženje u Kras-mutantnom modelu karcinoma pluća.14 U trenutnoj studiji pokazali smo da je povećano metastatsko opterećenje izravan učinak IL-22 na diseminirane IL-22RA1+ tumorske stanice, što je rezultiralo povećanim rastom kolonija. Važno je da naši podaci službeno ne isključuju utjecaj na netumorske stanice. Kao takav, utjecaj IL-22 na diseminaciju tumorskih stanica kroz intrinzično djelovanje endogeno eksprimiranog IL-22R opširno su istaknuli Giannou i sur.78
Slika 6. CD226 signalizacija neophodna je za proizvodnju IFNg iz NK stanica
Pokazali smo da je Pvr jedan od gena s povećanom ekspresijom na stanicama raka nakon liječenja IL-22. U tom kontekstu, stanice s nedostatkom CD155- formirale su nekoliko metastaza, kako kod divljeg tipa tako i kod miševa Il22, i, što je važno, ponovno uvođenje CD155 omogućilo nam je rekonstituciju metastatskog fenotipa. Intrinzična uloga CD155 u stanicama raka dobro je proučena i poznato je da utječe na sijanje, proliferaciju tumorskih stanica i migraciju.56,57 Međutim, Pvr stanice nisu pokazale inhibiranu proliferaciju ili migraciju u našim rukama, a sijanje tumorskih stanica nije utjecao na Il22 / miševe. U početku identificiran na stanicama koje prezentiraju antigen, CD155 služi kao vanjski promotor progresije tumora koji potiskuje funkciju NK i T stanica vežući se za CD96 i TIGIT na njihovoj površini i inducira internalizaciju i nižu regulaciju CD226.56,61–64,79–85Due na njegovu imunosupresivnu funkciju, CD155 u stanicama raka i stanicama domaćina pokazuje prometastatska svojstva i predložen je kao cilj za blokadu inhibicije kontrolnih točaka.61,86 NK stanice primaju kostimulacijski signal od stanica koje prezentiraju antigen putem CD226. 87 Međutim, prekomjerna stimulacija CD226 u mikrookruženju tumora dovodi do internalizacije i degradacije.63 Ovo se obično suprotstavlja CD96 i TIGIT, koji vežu CD155 s višim afinitetom.58 Zanimljivo, poznato je da stanice 4T1 induciraju smanjenje CD226 u infiltraciji tumora limfocita i potiskuju proizvodnju IFNg.88 Ovdje smo pokazali da nedostatak IL-22 očuva ekspresiju CD226 na NK i CD8+ T stanicama. Međutim, samo su NK stanice imale dramatično veću sposobnost proizvodnje IFNg i bile su u obrnutoj korelaciji s metastatskim opterećenjem. Zanimljivo je da je aktivacija TIGIT signalizacije u našoj studiji inhibirala proizvodnju IFNg iz CD8+ T, ali ne i NK stanica i nije bila dovoljna za povećanje metastatskog opterećenja. Slično, drugi receptor za CD155, CD96, nije bio različito reguliran kod Il22/miševa niti je njegova inhibicija spriječila metastaze, što ukazuje da CD155 ne potiskuje NK stanice putem CD96 u našem modelu. Ovo naglašava regulaciju antitumorskih odgovora specifičnu za stanični tip CD155 i njegovih različitih partnera u vezivanju.
dobrobiti dodatka cistanche-kako ojačati imunološki sustav
Kliknite ovdje za pregled Cistanche proizvoda za jačanje imuniteta
【Tražite više】 E-pošta:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Utvrđen je utjecaj CD155 na prognozu i njegova uloga u patogenezi raka pluća, dojke, debelog crijeva i drugih vrsta raka.79-85 Postoji mnoštvo dokaza o prognostičkoj važnosti IL-22 i njemu srodnih gena u različitim entitetima raka.10,21,27,75,89–91 Međutim, neke studije ne pokazuju utjecaj ekspresije IL-22 na preživljenje.12 Iako bi ove razlike mogle biti posljedica heterogenosti u populacije pacijenata, pitanja uzorkovanja i prijavljivanja, mnoge od ovih studija usmjerene su na jedan gen povezan s IL-22 signalizacijom. Ovdje smo upotrijebili aglomerativno grupiranje kako bismo razlučili obrasce ekspresije IL22RA1, IL22RA2, IL10RB i PVR u kohortama LUAD i BRCA u TCGA i povezali ih s kliničkim podacima. Ovdje smo identificirali tri obrasca ekspresije ovih gena: obrazac 0 (IL22RA1hi, IL22RA2lo, PVRhi), obrazac 1 (IL22RA1lo, IL22RA2hi, PVRlo) i obrazac 2 (IL22RA1lo, IL22RA2lo, PVRmed). Identificirali smo da se visoka ekspresija IL22RA1 podudara s visokom ekspresijom PVR, što se također pretočilo u loše ukupne ishode preživljenja, osobito kod pacijenata kojima je dijagnosticiran rani (I i II), ali ne i uznapredovali (III i IV), patološki stadij, naglašavajući ulogu ovog mehanizma specifičnu za pozornicu. Nasuprot tome, visoka ekspresija IL22RA2, također poznata kao IL-22BP, bila je u korelaciji s nižom ekspresijom PVR i boljim preživljavanjem.18,34 Treći obrazac odgovarao je potpuno niskoj ekspresiji i predstavljao je imunološki hladne tumore.92 U skladu s tim , CIBERSORTx dekonvolucija je pokazala da klaster 1 karakteriziran visokom ekspresijom IL22RA2 ima genski potpis za aktivirane, ali ne i mirujuće, NK stanice u usporedbi s drugim klasterima. Pokazalo se da ekspresija CD226 stratificira pacijente prema ishodu u nekoliko kliničkih ispitivanja NSCLC.93 Međutim, zbog dvostrukog načina pre- i post-translacijske regulacije CD226, ekspresija se ne odražava uvijek u podacima o sekvenciranju mRNA.94 Stoga, studije koje se fokusiraju o posttranslacijskoj regulaciji CD226 procijeniti njegovu ekspresiju u kliničkim uzorcima pomoću bojenja antitijela.63 Ipak, kada se ispituje skup podataka TCGA koji se odnosi na odnos partnera koji se vežu na CD155 i preživljavanje, samo je CD226 imao tendenciju ka poboljšanju prognoze (log (HR) {{57 }}.24, str=0.06), dok TIGIT i CD96 nisu pokazali korelaciju s preživljenjem. Važno je da su tumorske stanice projektirane za lučenje IL-22BP stvorile manje metastaza, naglašavajući potencijal puta IL-22 za ciljanu terapijsku intervenciju. To bi moglo spriječiti prekomjernu ekspresiju tumorskog CD155, jer izravno ciljanje ostaje izazovno zbog složene mreže ko-receptora. Dalje treba napomenuti da su dugoročni učinci neutralizacije IL-22 na metastaze nepoznati, ali bi mogli imati izravan utjecaj na terapijsko razmatranje T stanica ili dati obrazloženje za neutralizaciju IL-22 korištenjem antitijela s koristan sigurnosni profil, kao što je fezakinumab (pokus NCT01941537) ili projektirani IL-22 sa strukturnim dizajnom.39,95 Ukratko, identificirali smo IL-22-induciranu prekomjernu ekspresiju CD155 na tumorskim stanicama kao mehanizam koji pogoduje metastatskom izrastanju. Ova ključna uloga u prognozi naglašava potencijal IL-22 kao terapeutske mete kod raka. Do sada se neutralizacija IL-22 predlaže uglavnom kao strategija za liječenje autoimunih bolesti.31,49 Naši podaci o IL-22BP kao neutralizatoru IL-22, koji su fenokopirali globalni nedostatak IL-22, potkrijepio je terapijski potencijal za ciljanje osi IL-22-IL-22R1 i trebalo bi ga dodatno istražiti u pretkliničkim i kliničkim studijama.
REFERENCE
1. Hanahan, D. i Weinberg, RA (2011). Obilježja raka: sljedeća generacija. Ćelija 144, 646–674. https://doi.org/10.1016/j.cell.2011. 02.013.
2. Massague´, J., i Obenauf, AC (2016). Metastatska kolonizacija cirkulirajućim tumorskim stanicama. Priroda 529, 298–306. https://doi.org/10.1038/nature17038.
3. Renner, P., Rovira, J., Klein, C., Schlitt, HJ, Geissler, EK, i Kroemer, A. (2014.). KLRG1(+) prirodne stanice ubojice štite od plućnih metastatskih bolesti imunološkim nadzorom. Onkoimunologija 3, e28328. https://doi.org/10.4161/onci.28328.
4. Mohme, M., Riethdorf, S. i Pantel, K. (2017). Cirkulirajuće i diseminirane tumorske stanice - mehanizmi imunološkog nadzora i bijega. Nat. Rev. Clin. Oncol. 14, 155–167. https://doi.org/10.1038/nrclinonc. 2016.144.
5. Briukhovetska, D., Do¨ rr, J., Endres, S., Libby, P., Dinarello, CA, i Kobold, S. (2021.). Interleukini u raku: od biologije do terapije. Nat. Rev. Cancer 21, 481–499. https://doi.org/10.1038/s41568-021-00363-z.
6. Kitamura, T., Qian, BZ, i Pollard, JW (2015.). Imunološke stanice potiču metastaze. Nat. Rev. Immunol. 15, 73–86. https://doi.org/10.1038/nri3789.
7. Galon, J. i Bruni, D. (2020). Imunologija tumora i evolucija tumora: isprepletene povijesti. Imunitet 52, 55–81. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.12.018.
8. Page`s, F., Mlečnik, B., Marliot, F., Bindea, G., Ou, FS, Bifulco, C., Lugli, A., Zlobec, I., Rau, TT, Berger, MD , et al. (2018). Međunarodna validacija konsenzusa Immunoscore za klasifikaciju raka debelog crijeva: studija prognostike i točnosti. Lancet 391, 2128–2139. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(18)30789-X.
9. Rui, J., Chunming, Z., Binbin, G., Na, S., Shengxi, W., i Wei, S. (2017.). IL-22 potiče napredovanje raka dojke reguliranjem HOXB-AS5. Oncotarget 8, 103601–103612. https://doi.org/10.18632/ oncotarget.22063.
10. Kryczek, I., Lin, Y., Nagarsheth, N., Peng, D., Zhao, L., Zhao, E., Vatan, L., Szeliga, W., Dou, Y., Owens, S ., et al. (2014). IL-22(+)CD4(+) T stanice promiču razvoj kolorektalnog karcinoma putem aktivacije transkripcijskog faktora STAT3 i indukcije metiltransferaze DOT1L. Imunitet 40, 772–784. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2014.03.010.
11. Jiang, R., Tan, Z., Deng, L., Chen, Y., Xia, Y., Gao, Y., Wang, X., i Sun, B. (2011.). Interleukin-22 potiče humani hepatocelularni karcinom aktivacijom STAT3. Hepatologija 54, 900–909. https://doi.org/10.1002/ hep.24486.
12. Kobold, S., Vo¨ lk, S., Clauditz, T., K€ upper, NJ, Minner, S., Tufman, A., D€ uwell, P., Lindner, M., Koch, I ., Heidegger, S., et al. (2013). Interleukin-22 se često izražava u raku pluća malih i velikih stanica i potiče rast stanica raka otpornih na kemoterapiju. J. Thorac. Oncol. 8, 1032–1042. https://doi.org/10.1097/JTO.0b013e31829923c8.
13. Hernandez, P., Gronke, K. i Diefenbach, A. (2018). Kvaka-22: interleukin-22 i rak. Eur. J. Immunol. 48, 15–31. https://doi.org/10. 1002/eji.201747183.
14. Khosravi, N., Caetano, MS, Cumpian, AM, Unver, N., De la Garza Ramos, C., Noble, O., Daliri, S., Hernandez, BJ, Gutierrez, BA, Evans, SE, et al. (2018). IL22 potiče Kras-mutantni rak pluća indukcijom protumorskog imunološkog odgovora i zaštitom svojstava stabljike. Cancer Immunol. Res. 6, 788–797. https://doi.org/10.1158/ 2326-6066.CIR-17-0655. 15. Li, H., Mou, Q., Li, P., Yang, Z., Wang, Z., Niu, J., Liu, Y., Sun, Z., Lv, S., Zhang, B ., i Yin, C. (2019). MiR-486-5p inhibira IL-22-induciranu epitelno-mezenhimsku tranziciju stanica raka dojke potiskivanjem Dock1. J. Rak 10, 4695–4706. https://doi.org/10.7150/jca.30596.
16. Kim, K., Kim, G., Kim, JY, Yun, HJ, Lim, SC, i Choi, HS (2014.). Interleukin-22 potiče transformaciju epitelnih stanica i tumorigenezu dojke putem aktivacije MAP3K8. Carcinogenesis 35, 1352–1361. https:// doi.org/10.1093/carcin/bgu044.
17. Katara, GK, Kulshrestha, A., Schneiderman, S., Riehl, V., Ibrahim, S., i Beaman, KD (2020.). Interleukin-22 potiče razvoj malignih lezija u mišjem modelu spontanog raka dojke. Mol. Oncol. 14, 211–224. https://doi.org/10.1002/1878-0261.12598.
18. Huber, S., Gagliani, N., Zenewicz, LA, Huber, FJ, Bosurgi, L., Hu, B., Hedl, M., Zhang, W., O'Connor, W., Jr. Murphy, AJ, i sur. (2012). IL-22BP reguliran je inflamasomom i modulira tumorigenezu u crijevima. Priroda 491, 259–263. https://doi.org/10.1038/nature11535.
19. Perez, LG, Kempski, J., McGee, HM, Pelzcar, P., Agalioti, T., Giannou, A., Konczalla, L., Brockmann, L., Wahib, R., Xu, H., et al. (2020). TGFbeta signalizacija u Th17 stanicama potiče proizvodnju IL-22 i rak debelog crijeva povezan s kolitisom. Nat. Komun. 11, 2608. https://doi.org/10.1038/ s41467-020-16363-w.
20. Meyer, A., Stark, M., Karstens, JH, Christiansen, H., i Bruns, F. (2012.). Histiocitoza Langerhansovih stanica baze lubanje: je li niska doza radioterapije učinkovita? Slučaj Rep. Oncol. Med. 2012, 789640. https:// doi.org/10.1155/2012/789640.
21. Zhuang, Y., Peng, LS, Zhao, YL, Shi, Y., Mao, XH, Guo, G., Chen, W., Liu, XF, Zhang, JY, Liu, T., et al. (2012). Povećana intratumorska IL-22-produkcija CD4(+) T stanica i Th22 stanica korelira s progresijom raka želuca i predviđa loše preživljavanje pacijenata. Cancer Immunol. Imunološki drugi. 61, 1965–1975. https://doi.org/10.1007/s00262-012- 1241-5.
22. Chen, X., Wang, Y., Wang, J., Wen, J., Jia, X., Wang, X., i Zhang, H. (2018.). Nakupljanje stanica T-helper 22, interleukina-22 i supresorskih stanica izvedenih iz mijeloida potiče napredovanje raka želuca u starijih bolesnika. Oncol. Lett. 16, 253–261. https://doi.org/10.3892/ol.2018.8612.
23. Doulabi, H., Rastin, M., Shabahangh, H., Maddah, G., Abdollahi, A., Nosratabadi, R., Esmaeili, SA, i Mahmoudi, M. (2018.). Analiza Th22, Th17 i CD4(+) stanica koje koproizvode IL-17/IL-22 u različitim stadijima ljudskog raka debelog crijeva. Biomed. Pharmacother. 103, 1101–1106. https://doi.org/10.1016/j.biopha.2018.04.147.
24. Zeng, H., Liu, Z., Wang, Z., Zhou, Q., Qi, Y., Chen, Y., Chen, L., Zhang, P., Wang, J., Chang, Y ., et al. (2020). Intratumoralne stanice koje proizvode IL22- definiraju imunoevazivni podtip mišićno-invazivnog raka mokraćnog mjehura (2017.). Zaštitna funkcija IL-22BP u ishemiji-reperfuziji i ozljedi jetre izazvanoj acetaminofenom. J. Immunol. 199, 4078–4090. https://doi. org/10.4049/jimmunol.1700587.
25. Jiang, R., Wang, H., Deng, L., Hou, J., Shi, R., Yao, M., Gao, Y., Yao, A., Wang, X., Yu, L ., i Sun, B. (2013). IL-22 je povezan s razvojem raka debelog crijeva kod ljudi aktivacijom STAT3. BMC Cancer 13, 59. https://doi.org/10.1186/1471-2407-13-59.
26. Fukui, H., Zhang, X., Sun, C., Hara, K., Kikuchi, S., Yamasaki, T., Kondo, T., Tomita, T., Oshima, T., Watari, J ., et al. (2014). IL-22 koji proizvode fibroblasti povezani s rakom potiče invaziju stanica raka želuca putem STAT3 i ERK signalizacije. Br. J. Rak 111, 763–771. https://doi.org/ 10.1038/bjc.2014.336.
27. Liu, T., Peng, L., Yu, P., Zhao, Y., Shi, Y., Mao, X., Chen, W., Cheng, P., Wang, T., Chen, N ., et al. (2012). Povećani broj cirkulirajućih Th22 i Th17 stanica povezan je s progresijom tumora i preživljavanjem pacijenata kod raka želuca kod ljudi. J. Clin. Immunol. 32, 1332–1339. https://doi.org/10.1007/ s10875-012-9718-8.
28. Niccolai, E., Taddei, A., Ricci, F., Rolla, S., D'Elios, MM, Benagiano, M., Bechi, P., Bencini, L., Ringressi, MN, Pini, A ., et al. (2016). Intratumorske Th22 stanice koje proizvode IFN-gama koreliraju s TNM stadijem i najgorim ishodima kod raka gušterače. Clin. Sci. 130, 247–258. https:// doi.org/10.1042/CS20150437.
29. Xu, X., Tang, Y., Guo, S., Zhang, Y., Tian, Y., Ni, B., i Wang, H. (2014.). Povećane intratumorske razine interleukina 22 i učestalosti CD4+ T stanica 22-koje proizvode interleukin koreliraju s progresijom raka gušterače. Gušterača 43, 470–477. https://doi.org/10.1097/MPA.000000000000 0055.
30. Kotenko, SV, Izotova, LS, Mirochnitchenko, OV, Esterova, E., Dickensheets, H., Donnelly, RP, i Pestka, S. (2001.). Identifikacija funkcionalnog receptorskog kompleksa interleukina-22 (IL-22): lanac IL-10R2 (IL-10Rbeta ) zajednički je lanac oba IL{{7 }} i IL-22 (IL- 10-povezani inducibilni faktor izveden iz T stanica, IL-TIF) receptorski kompleksi. J. Biol. Chem. 276, 2725-2732. https://doi.org/10.1074/jbc.M0078 37200.
31. Ouyang, W. i O'Garra, A. (2019). Citokini obitelji IL-10 IL-10 i IL- 22: od osnovnih znanosti do kliničkog prijevoda. Imunitet 50, 871–891. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.03.020.
32. Kempski, J., Giannou, AD, Riecken, K., Zhao, L., Steglich, B., L€ucke, J., Garcia-Perez, L., Karstens, KF, Wo¨ stemeier, A. , Nawrocki, M., et al. (2020). IL22BP posreduje u antitumorskim učincima limfotoksina protiv kolorektalnih tumora kod miševa i ljudi. Gastroenterologija 159, 1417– 1430.e3. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2020.06.033.
33. Kotenko, SV, Izotova, LS, Mirochnitchenko, OV, Esterova, E., Dickensheets, H., Donnelly, RP, i Pestka, S. (2001.). Identifikacija, kloniranje i karakterizacija novog topljivog receptora koji veže IL-22 i neutralizira njegovu aktivnost. J. Immunol. 166, 7096-7103. https://doi. org/10.4049/jimmunol.166.12.7096.
34. Dudakov, JA, Hanash, AM, i van den Brink, MRM (2015). Interleukin-22: imunobiologija i patologija. Annu. Rev. Immunol. 33, 747–785. https://doi.org/10.1146/annurev-immunol-032414-112123.
35. Wolk, K., Kunz, S., Witte, E., Friedrich, M., Asadullah, K., i Sabat, R. (2004.). IL-22 povećava urođeni imunitet tkiva. Imunitet 21, 241–254. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2004.07.007.
36. Sabat, R., Ouyang, W. i Wolk, K. (2014.). Terapijske mogućnosti sustava IL-22-IL-22R1. Nat. Rev. Drug Discov. 13, 21–38. https://doi. org/10.1038/nrd4176.
37. Zenewicz, LA, Yancopoulos, GD, Valenzuela, DM, Murphy, AJ, Stevens, S., i Flavell, RA (2008.). Urođeni i adaptivni interleukin-22 štiti miševe od upalne bolesti crijeva. Imunitet 29, 947–957. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2008.11.003.
38. Gronke, K., Herna´ ndez, PP, Zimmermann, J., Klose, CSN, Kofoed Branzk, M., Guendel, F., Witkowski, M., Tizian, C., Amann, L., Schumacher, F., et al. (2019). Interleukin-22 štiti crijevne matične stanice od genotoksičnog stresa. Priroda 566, 249–253. https://doi.org/10.1038/ s41586-019-0899-7.
39. Saxton, RA, Henneberg, LT, Calafiore, M., Su, L., Jude, KM, Hanash, AM, i Garcia, KC (2021.). Funkcije interleukina -22 za zaštitu tkiva mogu se odvojiti od proupalnih djelovanja kroz dizajn temeljen na strukturi. Imunitet 54, 660–672.e9. https://doi.org/10. 1016/j.immuni.2021.03.008.
40. Dumoutier, L., Louahed, J., i Renauld, JC (2000). Kloniranje i karakterizacija IL-10-inducibilnog faktora izvedenog iz T stanica (IL-TIF), novog citokina strukturno srodnog IL-10 i inducibilnog pomoću IL-9. J. Immunol. 164, 1814–1819. https://doi.org/10.4049/jimmunol.164. 4.1814.
41. Lejeune, D., Dumoutier, L., Constantinescu, S., Kruijer, W., Schuringa, JJ, i Renauld, JC (2002.). Interleukin-22 (IL-22) aktivira puteve JAK/STAT, ERK, JNK i p38 MAP kinaze u staničnoj liniji hepatoma štakora. Putovi koji su zajednički i različiti od IL-10. J. Biol. Chem. 277, 33676-33682. https://doi.org/10.1074/jbc.M204204200.
42. Nagalakshmi, ML, Rascle, A., Zurawski, S., Menon, S., i de Waal Malefyt, R. (2004.). Interleukin-22 aktivira STAT3 i inducira IL-10 epitelnim stanicama debelog crijeva. Int. Immunopharmacol. 4, 679–691. https://doi. org/10.1016/j.intimp.2004.01.008.
43. Mitra, A., Raychaudhuri, SK, i Raychaudhuri, SP (2012). Proliferacija stanica izazvana IL-22- regulirana je signalnom kaskadom PI3K/Akt/mTOR. Cytokine 60, 38-42. https://doi.org/10.1016/j.cyto.2012.06.316.
44. Bachmann, M., Ulziibat, S., H€ ardle, L., Pfeilschifter, J., i M€ uhl, H. (2013.). IFNalpha pretvara IL-22 u citokin koji učinkovito aktivira STAT1 i njegove nizvodne ciljeve. Biochem. Pharmacol. 85, 396–403. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2012.11.004.
45. Zheng, Y., Valdez, PA, Danilenko, DM, Hu, Y., Sa, SM, Gong, Q., Abbas, AR, Modrusan, Z., Ghilardi, N., de Sauvage, FJ, i Ouyang , W. (2008). Interleukin-22 posreduje u ranoj obrani domaćina protiv pričvršćivanja i uklanjanja bakterijskih patogena. Nat. Med. 14, 282–289. https://doi. org/10.1038/nm1720.
46. Andoh, A., Zhang, Z., Inatomi, O., Fujino, S., Deguchi, Y., Araki, Y., Tsujikawa, T., Kitoh, K., Kim-Mitsuyama, S., Takayanagi , A. i sur. (2005). Interleukin-22, član podobitelji IL-10, izaziva upalne odgovore u subepitelnim miofibroblastima debelog crijeva. Gastroenterologija 129, 969–984. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2005.06.071.
47. Tufman, A., Huber, RM, Vo¨ lk, S., Aigner, F., Edelmann, M., Gamarra, F., Kiefl, R., Kahnert, K., Tian, F., Boulesteix, AL, et al. (2016). Interleukin-22 je povišen u lavažu pacijenata s rakom pluća i drugim plućnim bolestima. BMC Cancer 16, 409. https://doi.org/10.1186/s12885-016- 2471-2.
48. Voigt, C., May, P., Gottschlich, A., Markota, A., Wenk, D., Gerlach, I., Voigt, S., Stathopoulos, GT, Arendt, KAM, Heise, C., et al. (2017). Stanice raka induciraju proizvodnju interleukina-22 iz memorijskih CD4(+) T stanica putem interleukina-1 za poticanje rasta tumora. Proc. Natl. Akad. Sci. SAD 114, 12994–12999. https://doi.org/10.1073/pnas.17051 65114.
49. Markota, A., Endres, S., i Kobold, S. (2018). Ciljanje interleukina-22 za terapiju raka. Pjevušiti. Cjepivo. Imunološki drugi. 14, 2012–2015. https:// doi.org/10.1080/21645515.2018.1461300.
50. Ewens, A., Mihich, E. i Ehrke, MJ (2005). Udaljene metastaze iz supkutano izraslog E0771 medularnog adenokarcinoma dojke. Anticancer Res. 25, 3905-3915.
51. Sugiura, K. i Stock, CC (1952). Studije u tumorskom spektru. I. Usporedba djelovanja metil bis (2-kloretil)amina i 3-bis(2-kloretil)aminometil-4-metoksimetil -5-hidroksi{{7} }metilpiridina na rast raznih tumora miševa i štakora. Rak 5, 382–402. https://doi.org/10.1002/1097-0142(195203)5:2<382::aidcncr2820050229>3.0.co;2-3.
52. Renier, N., Wu, Z., Simon, DJ, Yang, J., Ariel, P., i Tessier-Lavigne, M. (2014.). iDISCO: jednostavna, brza metoda za imunološko označavanje velikih uzoraka tkiva za volumensko snimanje. Ćelija 159, 896–910. https://doi.org/10. 1016/j.cell.2014.10.010.
53. Kleinschmidt, D., Giannou, AD, McGee, HM, Kempski, J., Steglich, B., Huber, FJ, Ernst, TM, Shiri, AM, Wegscheid, C., Tasika, E., et al.
54. O'Donnell, JS, Madore, J., Li, XY, i Smyth, MJ (2020.). Intrinzične i vanjske imunološke funkcije tumora CD1
55. Semin. Cancer Biol. 65, 189–196. https://doi.org/10.1016/j.semcancer.2019.11.013. 55. Molfetta, R., Zitti, B., Lecce, M., Milito, ND, Stabile, H., Fionda, C., Cippitelli, M., Gismondi, A., Santoni, A., i Paolini, R. (2020). CD155: multifunkcionalna molekula u progresiji tumora. Int. J. Mol. Sci. 21, 922. https://doi.org/10.3390/ijms21030922.
56. Gao, J., Zheng, Q., Xin, N., Wang, W., i Zhao, C. (2017.). CD155, onkoimunološka molekula u ljudskim tumorima. Cancer Sci. 108, 1934. – 1938. https://doi.org/10.1111/cas.13324.
57. Morimoto, K., Satoh-Yamaguchi, K., Hamaguchi, A., Inoue, Y., Takeuchi, M., Okada, M., Ikeda, W., Takai, Y., i Imai, T. ( 2008). Interakcija stanica raka s trombocitima posredovana Necl-5/receptorom poliovirusa pojačava metastaze stanica raka u pluća. Oncogene 27, 264–273. https://doi.org/10.1038/sj.onc.1210645.
58. Chan, CJ, Martinet, L., Gilfillan, S., Souza-Fonseca-Guimaraes, F., Chow, MT, Town, L., Ritchie, DS, Colonna, M., Andrews, DM, i Smyth, MJ (2014). Receptori CD96 i CD226 međusobno se suprotstavljaju u regulaciji funkcija prirodnih stanica ubojica. Nat. Immunol. 15, 431–438. https://doi.org/10.1038/ni.2850.
59. Fuchs, A., Cella, M., Giurisato, E., Shaw, AS, i Colonna, M. (2004.). Vrhunska oštrica: CD96 (taktilno) potiče prianjanje NK stanica na ciljnu stanicu interakcijom s poliovirusnim receptorom (CD155). J. Immunol. 172, 3994-3998. https://doi.org/10.4049/jimmunol.172.7.3994.
60. Jarosch, S., Ko¨ hlen, J., Wagner, S., D'Ippolito, E., i Busch, DH (2022.). ChipCytometry za multipleksno otkrivanje proteina i mRNA markera na uzorcima ljudskog FFPE tkiva. STAR Protoc. 3, 101374. https://doi.org/10.1016/j.xpro.2022.101374.
61. Chauvin, JM, Ka, M., Pagliano, O., Menna, C., Ding, Q., DeBlasio, R., Sanders, C., Hou, J., Li, XY, Ferrone, S., et al. (2020). Stimulacija IL15 s TIGIT blokadom poništava CD155-posredovanu disfunkciju NK stanica u melanomu. Clin. Cancer Res. 26, 5520-5533. https://doi.org/10.1158/ 1078-0432.CCR-20-0575.
62. Weulersse, M., Asrir, A., Pichler, AC, Lemaitre, L., Braun, M., Carrie´, N., Joubert, MV, Le Moine, M., Do Souto, L., Gaud, G. i sur. (2020). Gubitak koaktivirajućeg receptora CD226 ovisan o eomesu ograničava antitumorske funkcije CD8(+) T stanica i ograničava učinkovitost imunoterapije raka. Imunitet 53, 824–839.e10. https://doi.org/10.1016/j.immuni. 2020.09.06.
63. Braun, M., Aguilera, AR, Sundarrajan, A., Corvino, D., Stannard, K., Krumeich, S., Das, I., Lima, LG, Meza Guzman, LG, Li, K., et al. (2020). CD155 na tumorskim stanicama potiče otpornost na imunoterapiju inducirajući degradaciju aktivacijskog receptora CD226 u CD8(+) T stanicama. Imunitet 53, 805–823.e15. https://doi.org/10.1016/j.immuni. 10. rujna 2020.
64. Lepletier, A., Madore, J., O'Donnell, JS, Johnston, RL, Li, XY, McDonald, E., Ahern, E., Kuchel, A., Eastgate, M., Pearson, SA, et al. (2020). Ekspresija tumorskog CD155 povezana je s otpornošću na antiPD1 imunoterapiju kod metastatskog melanoma. Clin. Cancer Res. 26, 3671–3681. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-19-3925.
65. Newman, AM, Steen, CB, Liu, CL, Gentles, AJ, Chaudhuri, AA, Scherer, F., Khodadoust, MS, Esfahani, MS, Luca, BA, Steiner, D., et al. (2019). Određivanje obilja i ekspresije tipova stanica iz masovnih tkiva digitalnom citometrijom. Nat. biotehnologija. 37, 773–782. https://doi.org/10.1038/s41587-019-0114-2.
66. Soriani, A., Zingoni, A., Cerboni, C., Iannitto, ML, Ricciardi, MR, Di Gialleonardo, V., Cippitelli, M., Fionda, C., Petrucci, MT, Guarini, A., et al. (2009). ATM-ATR-ovisna pojačana regulacija DNAM-1 i NKG2D liganada na stanicama multiplog mijeloma pomoću terapijskih sredstava rezultira povećanom osjetljivošću NK-stanica i povezana je sa senescentnim fenotipom. Krv 113, 3503–3511. https://doi.org/10.1182/blood- 2008-08-173914.