Studija o terapeutskim učincima i mehanizmima monomera tradicionalne kineske medicine na štakorskom modelu hipogonadizma s kasnim početkom

 

Sažetak

Cilj
Za procjenu terapeutskih učinaka i mehanizama triju monomera tradicionalne kineske medicine (TCM) -icariin, verbaskozid, iginsenozid Rg1-nahipogonadizam s kasnim početkom (LOH)u modelu štakora i istražiti njihov potencijal kaoprirodne intervencije za smanjenje testosterona povezano sa starenjemkod sredovječnih muškaraca.

Metode
Model hipogonadizma s kasnim početkom (LOH) uspostavljen je kod muškaraca u starijoj dobiSprague-Dawley štakoriputem intraperitonealne injekcijeciklofosfamid, simulirajući nedostatak androgena. Tri monomera TCM-icariin, verbaskozid, iginsenozid Rg1-primjeni su oralno tijekom 60 dana.

Na kraju tretmana izmjerena je tjelesna težina i težina reproduktivnih organa (testisa, epididimisa, sjemenih mjehurića i dr.).Histopatološke promjeneu tkivu testisa procijenjeni su pomoćubojenje hematoksilin-eozinom (H&E).. Serumske razine odFSH, LH, itestosteronatestirani su putemELISA. Izrazandrogeni receptor (AR)protein i mRNA procijenjen je korištenjemWestern blotikvantitativni PCR u stvarnom vremenu (qRT-PCR).

 

 

 

Rezultati

Ginsenoside Rg1pokazala je najznačajnije poboljšanje utjelesne težineitežina reproduktivnih organa(P <0,01).

Icariinznačajno povećao težinutestisi, epididimis, isjemene mjehuriće(P <0,01).

verbaskozidumjereno poboljšana težina sjemenih mjehurića (P <0,05).

Sva tri TCM monomera učinkovitoreverzna degeneracija testisau LOH štakora, obnavljanje strukture sjemenih tubula i povećanje brojaspermatogene staniceizrele sperme.

Sve skupine monomera pokazale su sposobnost daniže razine FSH i LH u serumudokpodizanje serumskog testosterona. Thegrupa ikariinapokazala su najznačajnija endokrina poboljšanja (P < 0,01).

Razine izražavanjaandrogeni receptor (AR)i u proteinu i u mRNA bili su značajno pojačani u svim tretiranim skupinama. Učinak odicariinbio jeizraženiji od testosteron propionata, označavajući asnažan regulatorni učinak na AR signalizaciju.

 

Zaključak

Ova studija sugerira daginsenozid Rg1je najučinkovitiji u poboljšanjutežine tijela i organau LOH štakora, dokicariinpokazuje najjači učinak upoticanje proizvodnje testosteronaipojačavanje izražaja AR. Sva tri monomera-icariin, verbaskozid, iginsenozid Rg1- demonstriraozaštitni učinak protiv degeneracije testisaipodržava reproduktivnu endokrinu funkciju muškaraca, nudeći obećavajuće prirodne alternative za upravljanjehipogonadizam povezan sa starošću.

 

Ključne riječi

Kasni hipogonadizam (LOH); icariin; Verbascoside; Ginsenoside Rgl; Tradicionalna kineska medicina; Prirodni pojačivač testosterona; Muški sindrom starenja; Ekspresija androgenog receptora; Biljna terapija za muško zdravlje

Kliknite na sliku da saznate više o TCM biljci za seksualno zdravlje

 

 

Pozadina

Kasni hipogonadizam (LOH)u sredovječnih i starijih muškaraca usko je povezana spad razine androgena povezan s godinama, posebno testosteron. Epidemiološka studija temeljena na populaciji iz 2021. provedena u šest reprezentativnih provincija u Kini, uključujući6.296 muškaraca u dobi od 40–79 godina, otkrio je sljedeće stope prevalencije LOH-a:

3.2%kod muškaraca u 50-ima

11.2%u svojim 60-ima

24.0%u svojim 70-ima [1]

LOH karakterizirasmanjeni serumski testosteronzajedno sa zviježđem odsimptomi nedostatka androgenakao što su:

Nizak libido

Erektilna disfunkcija

Depresija i razdražljivost

Kognitivni pad i gubitak pamćenja

Ovi simptomi moguznačajno narušiti tjelesno i psihičko blagostanje, kao ikvaliteta života [2–3].

Trenutno,nadomjesna terapija testosteronom (TRT)je glavni tretman za LOH i može privremeno ublažiti simptome. Međutim, zabrinutost okokardiovaskularni rizik, zdravlje prostate, idugotrajna sigurnostostati [4]. Stoga raste interes za istraživanjemprirodne, sigurnije alternative, posebno odTradicionalna kineska medicina (TCM).

Ova studija ima za cilj procijenititerapijski učinci i mehanizmiod tri TCM monomera-icariin, verbaskozid, iginsenozid Rg1- pomoću aštakorski model LOH.

 

1. Materijali i metode

1.1 Pokusne životinje

Šezdeset15-mjesečni mužjaci Sprague-Dawley (SD) štakora(700–800 g) dobiveni su u siječnju 2022. iz Centra za pokuse na životinjama Kineskog sveučilišta Three Gorges. Brojevi licenci:

Potvrda za životinje: Ne. 42010200007997

Licenca za proizvodnju: SCXK (E) 2022-0012

Štakori su bili smješteni u kontroliranom okruženju (temperatura: 19-23 stupnja, relativna vlažnost: 55%-65%), s prirodnim ciklusom svjetlo-tama i slobodnim pristupom hrani i vodi. Nakon1 tjedan aklimatizacije, počeli su eksperimenti.

1.2 Reagensi i instrumenti

Ciklofosfamid(Nanjing Jiancheng)

Icariin(Nanjing Guangrun Biotech)

Ginsenoside Rg1(Shanghai Macklin)

verbaskozid(Shanghai Zhenzhun Biotech)

AR antitijela(Santa Cruz, SAD)

-protutijela na aktin(Sigma, SAD)

H&E setovi za bojenje(Shanghai Yiji Industrial)

ELISA setovi za FSH, LH, testosteron u serumu(Shanghai Meilian)

qRT-PCR reagensi (SYBR Green I)(Shanghai Julu Biotech)

instrumenti: Čitač termo mikroploča, Olympus optički mikroskop, LI-COR Odyssey sustav snimanja, ABI qRT-PCR stroj

 

1.3 Grupiranje životinja i indukcija modela LOH

Štakori su nasumično raspoređeni u6 grupa (n=10 po grupi):

Kontrolna skupina:

Intraperitonealna (ip) injekcija 0,9% fiziološke otopine tijekom 5 dana

Oralna fiziološka otopina (1 mL/100 g) tijekom 60 dana

Grupa modela:

ip ciklofosfamid 20 mg/kg/dan tijekom 5 dana

Nakon toga oralna fiziološka otopina tijekom 60 dana

Testosteron propionat (pozitivna kontrola):

ip ciklofosfamid (isto kao gore)

Subkutana injekcija testosteron propionata 5 mg/kg/dan tijekom 7 dana

Icariinska skupina:

ip ciklofosfamid (isto)

Oralno icariin 200 mg/kg/dan tijekom 60 dana

Skupina verbaskozida:

ip ciklofosfamid (isto)

Oralni verbaskozid 200 mg/kg/dan tijekom 60 dana

Grupa ginsenozida Rg1:

ip ciklofosfamid (isto)

Oralni ginsenoside Rg1 200 mg/kg/dan tijekom 60 dana

Svi tretmani primijenjeni su između8:00–11:30 sati. Izvršene su procjene24 sata nakon posljednje doze.

 

1.4 Tjelesna težina i indeks reproduktivnih organa

Nakon vaganja, štakori su eutanazirani dislokacijom cerviksa. Thetestise, epididimis i sjemene mjehurićesu secirani i izvagani.

Jedantestisa svakog štakorabio je učvršćen4% paraformaldehidatijekom 72 sata, dehidrirano stupnjevanim alkoholom, uklopljeno u parafin, razrezano (5 μm) i obojeno sHematoksilin-eozin (H&E). Morfološke promjene promatrane su svjetlosnim mikroskopom.

 

1.5 Testovi serumskih hormona

Štakori su anestezirani s3% natrijev pentobarbital, a krv je prikupljena putemsrčana punkcija. Serum je odvojen pomoćucentrifugiranje na 3000 okretaja u minuti 10 minuta na 4 stupnja. Za mjerenje su korišteni ELISA setoviFSH, LH i testosteronrazine prema protokolima proizvođača.

 

1.6 Ekspresija AR proteina (Western blot)

Tkivo testisa je lizirano i izmjerena je koncentracija proteina. Jednake količine proteina razriješene su10% SDS-PAGE, prebačen na PVDF membrane i inkubiran s primarnim antitijelima protivARi-aktin (1:1000)preko noći. Sekundarna inkubacija protutijela praćena je kemiluminescentnom detekcijom.SlikaJkorišten je za analizu.

 

1.7 Ekspresija AR mRNA (qRT-PCR)

Ukupna RNA ekstrahirana je iz tkiva testisa. cDNA je sintetizirana reverznom transkripcijom. qRT-PCR je proveden metodom SYBR Green.

AR početnice:

Naprijed: 5′-CAGGGACCA CGTTTTACCCA-3′

Naličje: 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTT-3′

-aktinske početnice (unutarnja kontrola):

Naprijed: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

Naličje: 5′-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3′

Toplinski ciklus: 95 stupnjeva tijekom 15 minuta (preddenaturacija), nakon čega slijedi 40 ciklusa od 95 stupnjeva tijekom 15 s i 60 stupnjeva tijekom 1 minute. Podaci su analizirani pomoću2^-ΔΔCtmetoda.

 

1.8 Statistička analiza

Podaci su analizirani pomoćuSPSS 26.0.

Rezultati su prikazani kaosrednja vrijednost ± standardna devijacija (x̄ ± s)

t-testkorišteno je za usporedbu dvije grupe

Jednosmjerna ANOVAkorišten je za usporedbu više grupa

P < 0,05se smatralo statistički značajnim